麝香保心丸对肝硬化大鼠心肌组织即早基因与结缔组织生长因子的影响

目的研究麝香保心丸对肝硬化致心肌重构的抑制作用及其机制。方法以sc体积分数40%CCl4橄榄油溶液3mL/kg,每周2次,共8周的方法制备大鼠肝纤维化模型,第2周末随机取5只大鼠肝组织作HE染色,观察肝纤维化程度,造模大鼠分别ig麝香保心丸22.5、45 mg/kg,共给药6周,第8周末分别取各组大鼠肝组织、左室心肌组织行组织病理学及透射电镜观察,观察各组大鼠肝脏、心肌组织病理及心肌组织超微结构改变;以RT-PCR和免疫组化染色分析心肌组织中c-fos和c-jun mRNA以及结缔组织生长因子(CTGF)、I型和III型胶原的表达变化。结果造模大鼠均存在不同程度的肝纤维化及心肌损伤。与模型组比较,低剂量麝香保心丸组大鼠肝纤维化程度无明显差异(P>0.05),但心肌损伤程度减轻,心肌组织中c-fos mRNA、c-jun mRNA、CTGF、I型和III型胶原表达明显降低(P<0.05、0.01)。高剂量麝香保心丸组大鼠肝纤维化及心肌损伤程度较低剂量组减轻(P<0.05),心肌组织中c-fos mRNA、c-jun mRNA、CTGF、I型和III型胶原表达均低于低剂量组(P<0.05、0.01)。结论肝硬化大鼠心肌组织心肌即早基因活化、诱导CTGF过度表达而致心肌重构,麝香保心丸可通过抑制心肌即早基因表达,降低心肌CTGF水平而发挥心肌保护作用,其效应呈剂量依赖性。     

槲皮素对血吸虫肝纤维化小鼠肝组织c-fos、c-jun mRNA和转化生长因子β1表达的抑制作用

目的研究槲皮素对小鼠血吸虫病肝纤维化的治疗作用及其机制,并与吡喹酮的作用进行对比。方法80只小鼠随机分为4组。其中3组小鼠于感染日本血吸虫8周后,分别以槲皮素30mg/(kg·d)治疗8周、以吡喹酮500mg/(kg·d)治疗2d及不作任何治疗(模型组),第4组小鼠作为正常组。应用HE染色法、RT-PCR及免疫组化染色,观察和分析槲皮素及吡喹酮治疗前后各组小鼠肝组织病理改变及c-fos和c-junmRNA、转化生长因子β1(TGF-β1)和、型胶原表达的变化。结果槲皮素治疗后小鼠肝纤维化程度减轻,与模型组相比,肝组织中c-fos、c-junmRNA以及TGF-β1和、型胶原表达均明显降低(P<0.01);与吡喹酮组相比,c-junmRNA、和型胶原表达明显降低(P<0.05),而c-fosmRNA和TGF-β1表达无显著改变。结论槲皮素对小鼠血吸虫病肝纤维化具有较好的治疗作用,其远期抗肝纤维化效果优于吡喹酮。     

糖心乐对糖尿病心肌病大鼠心肌转化生长因子β1的影响

目的观察糖心乐（TXT）对链脲佐菌素（STZ）实验性糖尿病心肌病大鼠心肌转化生长因子β_1（TGF-β_1）的影响。方法 SD大鼠腹腔注射STZ建立糖尿病模型,成模后分组,造模后八周分别给予TXT大剂量、TXT小剂量、达美康灌胃治疗,模型对照组灌生理盐水。连续四周,免疫组化法检测TGF-β_1表达情况。结果与正常对照组比较。模型组大鼠心肌组织中TGF-β_1明显升高（P〈0.01）;与模型组比较,TXL大剂量组和达美康组大鼠心肌组织中TGF-β_1明显降低（P〈0.01）;TXL大剂量组和达美康组对大鼠心肌组织中TGF-β_1的影响无明显差异（P〉0.05）。结论 TXT对DM大鼠有一定的降血糖的作用,能明显改善DCMP早期心肌重构,机制可能与下调TGF-β_1在心肌中的表达,减缓心肌组织纤维化有关。     

大豆异黄酮对成骨细胞转化生长因子-β1及其受体Ⅰ、Ⅱ的影响

目的:探讨大豆异黄酮对成骨细胞的TGF-β信号转导系统的影响.方法:制作新生大鼠颅骨成骨细胞体外培养模型,在第三代成骨细胞培养液中添加大豆异黄酮,通过免疫组化方法观察大豆异黄酮对成骨细胞中转化生长因子-β1及其受体Ⅰ、Ⅱ表达的影响.用HPIAS000图像分析仪对各组表达进行定量分析.结果:免疫组织化学染色显示,大豆异黄酮培养的大鼠第三代成骨细胞中转化生长因子-β1及其受体Ⅰ、Ⅱ呈阳性表达,阳性细胞胞浆出现棕黄色颗粒.图像分析显示大豆异黄酮组的TGF-β1、TGF-βR1、TGF-βR2平均光密度都显著高于阴性对照组(P＜0.05).结论:在成骨细胞形成中,大豆异黄酮对TGF-β1及其TGF-βR1、TGF-βR2受体信号传导系统有显著促进作用.     

糖心乐对糖尿病心肌病大鼠心肌转化生长因子β1的影响

目的观察糖心乐（TXT）对链脲佐菌素（STZ）实验性糖尿病心肌病大鼠心肌转化生长因子β₁（TGF-β₁）的影响。方法 SD大鼠腹腔注射STZ建立糖尿病模型,成模后分组,造模后八周分别给予TXT大剂量、TXT小剂量、达美康灌胃治疗,模型对照组灌生理盐水。连续四周,免疫组化法检测TGF-β₁表达情况。结果与正常对照组比较。模型组大鼠心肌组织中TGF-β₁明显升高（P<0.01）;与模型组比较,TXL大剂量组和达美康组大鼠心肌组织中TGF-β₁明显降低（P<0.01）;TXL大剂量组和达美康组对大鼠心肌组织中TGF-β₁的影响无明显差异（P>0.05）。结论 TXT对DM大鼠有一定的降血糖的作用,能明显改善DCMP早期心肌重构,机制可能与下调TGF-β₁在心肌中的表达,减缓心肌组织纤维化有关。     

痔愈喷剂对大鼠创面TGF-β1表达的影响

目的:探讨痔愈喷剂对大鼠术后创面愈合的作用机制。方法:30只SD大鼠随机分为痔愈喷剂组、空白对照组、湿润烧伤膏组。按照制备大鼠皮肤创伤模型,分别于造模后第7、14、21天,取创伤周围少量皮肤组织。采用免疫组织化学技术观察创面肉芽组织中TGF-β1表达的变化。结果:造模术后第7、14、21天痔愈喷剂组TGF-β1含量明显高于空白对照组(P0.05),与湿润烧伤膏组相比无明显差异。结论:痔愈喷剂可增加术后创面TGF-β1表达量,促进创面愈合的作用。     

清化瘀毒方对酒精性大鼠肝纤维化转化生长因子-β1表达的影响

目的：通过观察清化瘀毒方对酒精性大鼠肝纤维化转化生长因子-β1表达的影响,探讨清化瘀毒方抗酒精性肝纤维化的作用机制。方法：选择成年雄性Wistar大鼠,SPF级65只,随机分成正常对照组10、只,造模组55只;按照复合因素制作酒精性大鼠肝纤维化模型,造模成功后,造模组采用随机分成3组,分别为复方鳖甲软肝片组10只,清化瘀毒方组10只和模型空白组10只;于第20周末次给药后禁食,全部处死取出肝脏进行HE染色及MASSON染色,免疫组化法检测肝脏组织TGF-β1表达。结果：实验性大鼠肝组织炎症活动度及肝纤维化程度：经清化瘀毒方治疗后,计分均明显降低,与模型空白组比较,差异有显著性意义（P〈0．05）。免疫组化法检测酒精性大鼠肝脏TGF-β1的表达：与模型空白组比较,清化瘀毒方组明显降低,差异有显著性意义（P〈0．05）。结论：清化瘀毒方能够显著减轻酒精性肝纤维化大鼠肝组织炎症活动度及纤维化程度,并能够降低酒精性肝纤维化大鼠肝组织中TGF-β1表达。     

“内关”穴埋针对心肌缺血小型猪心肌组织转化生长因子-β3 mRNA和蛋白表达的影响

目的:研究"内关"穴位埋针对心肌缺血损伤小型猪心肌转化生长因子(TGF)-β3 mRNA和蛋白表达的影响,探讨穴位埋针抗心肌缺血的可能机制。方法:32只小型猪随机分为假手术组、模型组、内关组和膈俞组,采用左冠状动脉前降支结扎建立心肌缺血模型,内关组和膈俞组分别进行"内关""膈俞"穴埋针治疗,用realtime PCR和Western blot方法检测TGF-β3 mRNA和蛋白表达水平。结果:假手术组有少量TGF-β3 mRNA和蛋白表达,模型组TGF-β3 mRNA和蛋白表达量比假手术组升高(P0.05),"内关"及"膈俞"穴位埋针治疗可上调TGF-β3 mRNA和蛋白表达量,与模型组比较差异有统计学意义(P0.01),且在上调TGF-β3 mRNA和蛋白表达量方面"内关"优于"膈俞"(P0.05)。结论:"内关"穴位埋针可能通过上调TGF-β3 mRNA和蛋白表达,刺激内皮细胞增殖,促进侧支循环建立,增加缺血心肌血流,实现对心肌组织的保护作用。     

苦参碱对肝纤维化大鼠转化生长因子β1表达的影响

目的：通过研究苦参碱对CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝脏转化生长因子β1表达的影响,探讨苦参碱对肝纤维化的抑制作用。方法：CCl4诱导大鼠肝纤维化动物模型,免疫组化方法观察苦参碱对肝纤维化大鼠肝脏转化生长因子β1表达的变化,并分别检测血清学及肝脏组织学变化。结果：与肝纤维化模型组相比,苦参碱组大鼠血清谷草转氨酶、丙氨酸转氨酶水平明显降低（P＜0.05）,HE染色未见假小叶形成,在汇管区周围,免疫组化染色显示部分肝细胞胞浆及纤维间隔区及炎性细胞浸润区转化生长因子β1的表达明显减少（P＜0.05）。结论：苦参碱可以抑制纤维化的肝组织转化生长因子β1的表达,明显改善肝纤维化大鼠的肝组织结构,抑制肝纤维化的进展。     

骨碎补对骨折愈合中TGF-β_1表达的影响

目的 :骨碎补是骨伤科常用的一味中药 ,为了进一步探讨其促进骨折愈合的机理 ,设计了该实验以期为临床运用骨碎补提供理论依据。方法 :将 3 6只 SD大鼠随机分成三组 :生理盐水组 (A)、骨碎补组 (B)、伤科接骨片组 (C)。按标准骨折模型方法造模 ,不作任何外固定 ,分笼饲养。从手术后第二天开始灌胃给药 ,骨碎补组每天以骨碎补水煎液分早晚 2次灌胃 ,伤科接骨片组每天给药 2次 ,对照组同时给予等量生理盐水。于术后第 7天、1 4天、2 1天每组分别处死动物 4只 ,取出骨标本。骨标本制成切片测量骨痂厚度及 TGF-β1 免疫组化染色。结果 :骨碎补组骨痂组织形成丰富 ,厚度明显优于对照组 (P<0 .0 1 ) ;骨碎补组骨痂组织中 TGF-β1表达量及阳性定位与伤科接骨片组相同 ,均明显强于对照组。结论 :实验结果表明骨碎补能增加骨痂厚度 ,提高骨折愈合质量。增加 TGF-β1 在骨痂组织中的表达 ,可能是骨碎补促进骨折愈合的机制之一。     

红芪多糖对db/db小鼠糖尿病心肌病心肌组织TGF-β1与Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

目的:通过研究红芪多糖对db/db小鼠糖尿病心肌病心肌组织中TGF-β1与Collagen Ⅰ表达的影响,探讨其对db/db小鼠心肌纤维化的作用。方法:将60只6周龄雄性db/db小鼠随机分为5组:模型组、红芪多糖200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg剂量组和罗格列酮4mg/kg组;正常组为12只同周龄同背景的非转基因雄性db/m小鼠。连续灌胃干预8周,于给药前及给药后第2、4、6、8周末检测各组小鼠空腹血糖及体重;Masson染色观察小鼠左心室心肌胶原纤维化程度;Western blot、RT-PCR法检测心肌组织TGF-β1与Collagen I的蛋白和m RNA表达。结果:干预治疗8周后,红芪多糖200mg/kg、100mg/kg剂量组和罗格列酮4mg/kg组血糖较模型组明显下降;Masson染色可见亮绿色胶原纤维在模型组心肌细胞间及血管周围较正常组明显增多且呈堆积状分布;模型组TGF-β1与Collagen I蛋白及m RNA表达水平与红芪多糖50mg/kg剂量组无显著差异,其余各治疗组较模型组明显降低,其中红芪多糖200mg/kg剂量组和罗格列酮4mg/kg组改善更明显。结论:红芪多糖对db/db小鼠心肌纤维化具有保护作用,其作用机制可能是通过抑制TGF-β1的异常表达而降低Collagen I降解实现的。     

地黄饮子对海马神经元损伤即早基因c-jun和c-fos表达的影响

目的:探讨古方地黄饮子对β淀粉蛋白(Aβ25-35)所致离体海马神经元损伤时即早基因c-iun和c-fos表达的调控作用.方法:把体外培养的大鼠海马神经细胞分为正常组、模型组、VitE脑脊液对照组、地黄饮子脑脊液低、中、高剂量组,6组分别加入正常培养液、正常脑脊液、VitE脑脊液、中药脑脊液低、中、高剂量,继续孵育2h.然后除正常组加入等量培养液外,其他各组加入经老化处理的Aβ25～35(终浓度为10μmol/L)共同孵育1h,胰蛋白酶消化,离心收集细胞,提取总RNA.应用RT-PCR和琼脂糖凝胶电泳方法测定c-iun和c-fos基因的表达.结果:地黄饮子脑脊液能剂量依赖性地降低受损海马神经元c-iun和c-fos基因的表达.结论:地黄饮子脑脊液能有效降低海马神经元受到神经毒损伤时的应激反应,降低c-jun、c-fos基因对神经元的损伤作用.     

汉丹肝乐对免疫性肝纤维化模型大鼠转化生长因子-β_1的影响

目的:探讨汉丹肝乐对大鼠免疫性肝纤维化形成中转化生长因子-β_1(TGF-β_1)的影响。方法:猪血清腹腔内注射复制大鼠免疫性肝纤维化模型,造模开始给予汉丹肝乐治疗,秋水仙碱作为对照药(共12周),免疫组化观测肝内 TGF-β_1及Ⅰ、Ⅲ型胶原形成变化、肝内间质胶原酶活性。结果:造模第12周模型组大鼠形成典型肝纤维化,纤维隔中 TGF-β_1强阳性染色,汉丹肝乐治疗组则多呈弱阳性或阳性染色,与Ⅰ、Ⅲ型胶原形成变化一致,与间质胶原酶活性变化呈负相关。结论:汉丹肝乐能显著抑制 TGF-β_1的形成,抗大鼠免疫性肝纤维化。     

黄连碱对软骨细胞增殖及转化生长因子β1 mRNA基因的表达的影响

目的：观察黄连碱对Sprague Dawley大鼠关节软骨细胞体外增殖及转化生长因子β1mRNA基因表达的影响,探讨其治疗骨关节炎的作用及可能机制。方法取SD大鼠关节软骨,剪碎后,采用酶消化法原代分离培养软骨细胞,取处于对数生长期第3代细胞随机分组,实验组加入含10μm黄连碱的培养基,对照组仅加入普通培养基。培养48小时后在倒置显微镜下观察软骨细胞形态,MTT法检测黄连碱在1,3,5,7天对软骨细胞增殖影响,实时荧光定量PCR分别检测培养7天后实验组和对照组细胞转化生长因子β1mRNA表达。结果培养48小时后实验组软骨细胞生长密集程度明显优于对照组;MTT检测也显示实验组细胞增殖情况优于对照组;培养7天后实验组转化生长因子β1mRNA表达显著高于对照组。结论黄连碱能促大鼠软骨细胞增殖,并提高转化生长因子β1mRNA的表达,提示这可能是其治疗骨关节炎的可能机制之一。     

高浓度吡喹酮溶液的透皮吸收及对日本血吸虫病鼠的治疗试验

 目的制备高浓度吡喹酮溶液,初步考察其透皮吸收及对日本血吸虫病鼠的试验治疗效果。方法由试验考察了高浓度吡喹酮溶液的稳定性。用紫外可见分光光度计测定了吡喹酮在指定溶媒中不同温度下的溶解度。高效液相色谱法测定透皮到家兔血液中吡喹酮的浓度。用70,150,200 g·L^-1的吡喹酮溶液对人工感染日本血吸虫病鼠进行治疗试验。结果高浓度吡喹酮溶液具有很好的稳定性。在35～40℃之间,吡喹酮在指定溶媒中的溶解度迅速提高(由284 g·L^-1猛增到456 g·L^-1)。透皮给药比灌胃给药吸收速度快,AUC及ρ_max分别为灌胃的2.1和4.0倍。高浓度吡喹酮溶液透皮给药对日本血吸虫病鼠的治疗效果良好,减虫率可达100%。结论高浓度吡喹酮溶液有望成为吡喹酮的新型透皮给药制剂。     

补肝散对四氯化碳诱导急性肝损伤小鼠TGF-β_1表达的影响

目的观察补肝散对急性肝损伤的保护作用及对转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法 60只雄性昆明种小鼠随机分为正常组,模型组,联苯双酯组,补肝散大、中、小剂量组(45,22.5,11.25 g/mL)。用50%CCl4花生油溶液腹腔注射诱导小鼠急性肝损伤动物模型。补肝散组予补肝散灌胃给药,联苯双脂组采用联苯二酯灌胃给药,测血清谷丙转氨酶水平、肝组织丙二醛含量,备肝脏病理标本,原位杂交法测TGF-β1表达。结果与模型组相比较,补肝散大、中剂量组血清谷丙转氨酶水平及肝脏丙二醛含量明显降低,补肝散大剂量组TGF-β1表达显著降低。结论补肝散对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤有明显的保护作用。     

氧化苦参碱对转化生长因子 β1 诱导大鼠心肌成纤维细胞增殖与分化的抑制作用

目的:观察氧化苦参碱(Oxymatrine,OM)干预对转化生长因子β1 (Transforming growth factor-β1,TGF-β1)刺激的SD大鼠心肌成纤维细胞(Cardialfibroblasts,CFs)增殖、分化的抑制作用,并探讨其作用机制。方法:体外培养新生大鼠CFs,分离纯化后分为对照组(使用无血清DMEM培养)、TGF-β1组(单纯TGF-β1诱导)和观察组(使用TGF-β1加OM干预) 3组。MTT法检测CFs增殖情况,ELISA法检测Ⅰ型胶原(Collagen-Ⅰ,CoL-Ⅰ)和Ⅲ型胶原(Collagen-Ⅲ,CoL-Ⅲ)含量,RT-PCR法检测Smad2 mRNA表达,Westorn blot法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Smad2及Smad3蛋白表达情况。结果:与对照组比较,TGF-β1组CFs增殖水平、CoL-Ⅰ、CoL-Ⅲ、PCNA、α-SMA、Smad2 mRNA及Smad2/3蛋白表达均明显升高(P 0.05);与TGF-β1组比较,观察组上述指标均降低(P 0.05),除CoL-Ⅰ外,差异均有统计学意义(P 0.05)。结论:OM能够明显抑制TGF-β1诱导CFs增殖、分化水平,降低胶原蛋白的合成水平,作用机制与其能够干预Smad2及Smad3蛋白表达有关,具有临床应用价值。     

转化生长因子-β1对淋巴瘤细胞生长及c-myc基因表达的影响

目的利用Burk itt淋巴瘤细胞株-Jiyoye细胞探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对淋巴瘤细胞生长的抑制作用和c-myc基因的影响。方法利用MTT及RT-PCR方法检测细胞生存率、c-myc基因的表达水平。结果不同浓度的TGF-β1作用于Jiyoye细胞24,48 h和72 h后,细胞生存率随浓度的升高和时间的延长而逐渐降低。实验组各时间段的生存率与对照组相比显著降低(P<0.01),同时,实验组各组间均有显著性差异(P<0.01)。实验组中c-myc基因的表达24 h开始下降,48 h和72 h时明显受抑制,与对照组相比有显著性差异(P<0.01)。结论TGF-β1可在浓度和时间依赖性抑制Jiyoye细胞株生长的同时抑制c-myc基因的表达。     

芪参益气滴丸抑制大鼠心肌梗死后心肌纤维化及对TGF-β1/Smads通路表达的影响

目的观察芪参益气滴丸对大鼠心肌梗死（简称心梗）后心肌纤维化（myocardial fibrosis,MF）的影响,并基于TGF-β1/Smads通路表达探讨其作用机制。方法结扎雄性Wistar大鼠左冠状动脉前降支制作心梗模型,模型成功后随机分为模型组,芪参益气滴丸常规剂量组（QSYQ-N）,芪参益气滴丸高剂量组（QSYQ-H）,卡托普利组,另设假手术组,每组10只。干预4周后对大鼠心脏行HE和Masson染色,并计算心肌胶原容积分数 （collagen volume fraction,CVF）。采用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测心脏组织中转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）、Smad2、Smad7 mRNA和蛋白表达情况。结果HE染色显示模型组室壁可见大面积结缔组织形成,室壁明显变薄,心肌细胞明显水肿及大量炎细胞浸润。各治疗组可见室壁结缔组织面积减少,细胞水肿及炎细胞减轻。Masson染色显示造模后各组大鼠出现心肌纤维化。与模型组比较,各治疗组CVF均明显降低（P<0.01）。与假手术组比较,模型组TGF-β1、Smad2 mRNA及蛋白表达均明显增加,Smad7明显下降（P<0.05, P<0.01）;与模型组比较,QSYQ-H、卡托普利组TGF-β1、Smad2 mRNA及蛋白表达下调,Smad7表达上调（P<0.05, P<0.01）。结论芪参益气滴丸可以抑制大鼠心梗后心肌纤维化,其作用机制可能与调控TGF-β1/Smads通路相关因子的基因与蛋白表达有关。