姜黄素和干扰素γ抑制慢性髓系白血病STATS基因表达的研究

目的 探讨姜黄素和干扰素γ（IFN-γ）对慢性髓系白血病（CML）K562细胞STAT5基因表达的抑制作用及其作用机制。方法 运用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖活性。运用逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）检测细胞STAT5 mRNA的变化。运用激光共聚焦显微镜和免疫印迹法检测STATS蛋白的表达。结果 ①姜黄索或IFN-γ作用K562细胞24h，K562细胞增殖活性明显受到抑制，STAT5 mRNA和STAT5蛋白表达降低。②姜黄素与IFN-γ联合干预K562细胞24h。细胞增殖活性、STAT5 mRNA和蛋白的表达均显著低于姜黄素组（均P％0．01）。结论 姜黄素和IFN-γ联用能明显抑制慢性髓系白血病细胞增殖以及STAT5基因表达。     

姜黄素诱导髓系白血病细胞凋亡的分子途径

目的研究姜黄素诱导白血病细胞系NB4、K562、THP1凋亡的分子途径。方法培养上述3种细胞系，用不同浓度的姜黄素（25，12．5，6．25，3．125，0μmol／L）作用24h和25umol／L姜黄素作用不同时间（0，12，24，48h），流式细胞仪测定细胞凋亡率及Fas抗原（CD95）表达，Western blot测定凋亡蛋白Caspase-8、Caspase-9的表达变化。结果①姜黄素以时间和浓度依赖的方式诱导白血病细胞系NB4、K562、THP-1凋亡，25μmol／L姜黄素作用48h凋亡细胞超过50％。②25μmol／L姜黄素作用24h后Fas抗原表达明显升高（P〈0．01）。③25μmol／L姜黄素作用24h后凋亡蛋白Caspase-8、Caspase-9的表达明显增高（P〈0．01）。结论姜黄素诱导白血病细胞凋亡涉及死亡受体参与的外源性途径和线粒体参与的内源性凋亡途径。     

慢性髓系白血病PDLIM4基因表达与其启动子甲基化水平的关系

目的:分析慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者PDLIM4(PDZ and LIM domain 4)基因转录本表达状况、启动子高甲基化改变及临床相关性。方法:应用实时定量PCR(RQ-PCR)及实时定量甲基化特异性PCR(RQ-MSP)技术分别检测CML患者PDLIM4基因转录本及启动子甲基化水平。结果:8/36例(22%)CML患者存在PDLIM4低表达,低表达率与21例对照组间差异有统计学意义(P=0.021);PDLIM4表达水平和CML患者bcr/abl融合基因转录本正相关(r=0.434,P=0.043)。13/59例(22%)CML患者出现PDLIM4启动子高甲基化改变,而24例对照未显示高甲基化,两组差异有统计学意义(P=0.016)。PDLIM4高甲基化与患者血液学相关参数无明显相关性。PDLIM4启动子高甲基化频率随疾病进展而增高,在慢性期、加速期及急变期中分别为16%(7/44)、33%(2/6)及44%(4/9)。结论:PDLIM4基因启动子甲基化改变可能与CML的疾病发展有关。     

不同药物对慢性髓系白血病细胞增殖的影响

目的 探讨氟马替尼、地西他滨、三氧化二砷以及维奈托克对人慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia, CML)K562细胞系增殖的影响,为CML新的治疗方案提供实验室依据。方法 利用不同浓度的氟马替尼、地西他滨、三氧化二砷、维奈托克分别单独及两药联合作用于K562细胞,采用CCK-8法测定细胞增殖活力,采用Compusyn软件计算两药联合作用的联合指数。结果 不同浓度的氟马替尼、三氧化二砷、地西他滨及维奈托克单药均可抑制K562细胞增殖,差异均有统计学意义(P＜0.01);氟马替尼、地西他滨、三氧化二砷分别两药联合可增强对K562细胞的抑制作用(P＜0.01),但分别与维奈托克联合后对K562细胞的抑制无明显增强(P＞0.05)。结论 氟马替尼、三氧化二砷、地西他滨、维奈托克单药均能抑制K562细胞的增殖,氟马替尼、地西他滨、三氧化二砷分别两药联合均有协同作用;而这3种药物分别与维奈托克联合无明显协同作用。     

慢性髓系白血病来源的树突状细胞生物学特性的研究

目的:体外诱导慢性髓系白血病(CML)原代细胞分化生成树突状细胞(Dendritic cells DCs),并研究其生物学特性和功能.方法: 分离初诊13例CML患者的骨髓单个核细胞和5例正常人外周血的单个核细胞,用rhGM -CSF 1 000 U/ml、rhIL-4 500 U/ml和TNF-α50 U/ml联合培养10 d;形态学(Wright染色、倒置显微镜、透射电镜),免疫学(CD80、CD86、CD83、CD 1a、HLA-DR)鉴定,荧光原位杂交(FISH)进行细胞遗传学分析,ELISA检测分泌IL- 12的能力和混合淋巴细胞反应(MLR)检测抗原递呈功能.结果:慢性白血病细胞体外诱导后,大部分细胞呈现树突状细胞的典型形态,而且有免疫标记的明显上调(CD 86 24.49±25.87 vs 61.73±28.54;CD1a 10.41±9.52 vs 47.26±3 5.60,P<0.05);FISH证实这类DC还携带有白血病克隆,并且具有分泌IL-12和刺激T淋巴细胞增殖的能力.结论:在体外可成功地将CML细胞诱导分化成树突状细胞 ,这类DC与正常DC无论在形态学和免疫学表达方面均相似,但是功能较弱.     

慢性髓系白血病急变期与急性白血病免疫表型的比较研究

目的比较慢性髓系白血病急变期（CML-BC）与急性白血病（AL）的免疫表型特征。方法采用一组单克隆抗体和四色流式细胞术对58例成人CML-BC及同期420例AL患者骨髓标本进行免疫表型分析。结果58例CML-BC中。CML-AML占77．6％，CML-ALL占13．8％，CML-MAL（混合性白血病）占5．2％；AL中，AML占66．2％。ALL占32．9％，MAL占1．0％。CML-AML中，CD7及CD34表达高于AML；CML-BC和CML-AML中CD7与CD34共阳性表达分别高于AL和AML（P〈0．05）。276例AML中，纯型占62．3％，变异型占37．7％；130例ALL中，纯型占44．6％，变异型占55．4％；42例CML-AML中。纯型占59．5％，变异型占40．5％；8例CML-ALL中，纯型与变异型各占50．0％。结论CML-BC中干祖细胞阶段的抗原较AL高表达，变异型CML-BC与AL比例相当。     

SHP-1与c-kit基因在慢性髓系白血病中表达水平的研究

目的探讨造血细胞磷酸酶（SHP-1）基因、c-kit基因在慢性髓系白血病患者中的表达及其与白血病转化和预后的关系。方法用半定量逆转录-聚合酶链反应法检测SHP-1 mRNA、c-kit mRNA分别在慢性髓系白血病慢性期、急变期及正常对照组中的表达。结果慢性期和急变期SHP-1 mRNA的表达均低于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,慢性期和急变期比较差异无统计学意义（P〉0.05）。慢性期和急变期c-kit mRNA的表达均高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,急变期c-kit mRNA的表达均高于慢性期,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 SHP-1基因与c-kit基因可作为判断慢性髓系白血病患者转归及预后的指标。     

小剂量阿糖胞苷联合干扰素治疗慢性髓细胞白血病的疗效研究

目的:研究分析小剂量阿糖胞苷联合干扰素治疗慢性髓细胞白血病的疗效。方法:将60例慢性髓细胞白血病随机分为对照组与观察组,各30例。给予对照组使用干扰素治疗,观察组使用小剂量阿糖胞苷联合干扰素治疗,对比两组患者治疗后细胞遗传学与血液学缓解的时间与情况。结果:治疗后,观察组患者的细胞遗传学与血液学缓解时间均快于对照组,且细胞遗传学与血液学完全缓解率分别为20.00%、83.33%,高于对照组的0.00%、60.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:使用小剂量阿糖胞苷联合干扰素治疗慢性髓细胞白血病,可有效缓解细胞遗传学与血液学的情况,抑制患者体内不成熟白细胞,阻止患者病情恶化,有助于延长患者生命。     

慢性粒细胞白血病smac和survivin基因表达及意义

目的检测慢性粒细胞白血病（CML）病人smac和survivin mRNA的表达情况,以探讨其在CML病情进展及预后中的意义。方法应用半定量RT-PCR技术检测71例CML病人和10名健康者上述基因的表达。结果smac和survivin mRNA在CML病人的阳性表达率分别为90.1%、63.4%,均明显高于正常对照组（χ2=22.176、6.773,P〈0.01、0.05）,二者在CML的加速期、急变期的表达水平明显高于慢性期（t=10.708-16.725,P〈0.01）,且二者在CML病人的表达水平呈正相关（r=0.833,P〈0.01）。结论smac和survivin基因与CML的病情进展密切相关,是监测CML病情进展及判断预后的有价值的分子标记物。     

姜黄素联合阿扎胞苷对急性髓系白血病细胞增殖的影响及机制研究

目的 探讨姜黄素联合阿扎胞苷对急性髓系白血病细胞系KG-1α增殖的影响及其可能机制。方法 姜黄素和阿扎胞苷单独或联合处理KG-1α细胞,CCK-8法检测各组细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot检测细胞周期和凋亡相关蛋白以及p-AKT蛋白表达水平。结果 CCK-8结果显示,单用姜黄素和阿扎胞苷均对KG-1α细胞增殖有抑制作用,呈时间浓度依赖性,联合用药组细胞增殖抑制率明显增加;流式细胞术结果显示,联合用药组细胞明显阻滞于S期,凋亡率明显高于对照组和各单药组（P<0.05）;Western blot结果显示,与对照组相比,联合用药组p-AKT、CDK2蛋白表达水平显著降低,p27 KIP1、Caspase-3和γH2A.X蛋白表达水平显著上调(P<0.05)。结论 姜黄素联合阿扎胞苷可明显抑制KG-1α细胞增殖,其机制可能与下调AKT磷酸化水平有关     

慢性粒细胞白血病smac和survivin基因表达及意义

目的 检测慢性粒细胞白血病(CML)病人smac和survivin mRNA的表达情况,以探讨其在CML病情进展及预后中的意义.方法 应用半定量RT-PCR技术检测71例CML病人和10名健康者上述基因的表达.结果 smac和survivin mRNA在CML病人的阳性表达率分别为90.1%、63.4%,均明显高于正常对照组(χ2=22.176、6.773,P＜0.01、0.05),二者在CML的加速期、急变期的表达水平明显高于慢性期(t=10.708～16.725,P＜0.01),且二者在CML病人的表达水平呈正相关(r=0.833,P＜0.01).结论 smac和survivin基因与CML的病情进展密切相关,是监测CML病情进展及判断预后的有价值的分子标记物.     

干扰素a－2b治疗慢性髓性白血病

应用干扰素ａ－２ｂ治疗慢性髓性白血病２５例，重点探讨（１）小剂量治疗是否有效；（２）疗效与慢性髓性白血病病期的关系；（３）能否诱导细胞遗传学或基因的缓解；（４）单用或联合用药疗效比较。结果提示，干扰素ａ－２ｂ应用於慢性期有较理想的疗效、完全血液学缓解达２６．３％，部分血液学缓解７３．７％，加速期疗效较差，与羟基脲或马利兰配合用药可提高疗效，我们近期观察２５例中，无一例达完全缓解，有待进一步观察和探索合理的治疗方案。     

慢性髓系白血病靶向治疗的研究进展

酪氨酸抑制剂的应用革命性地改变了慢性髓系白血病（CML）患者的生存及预后,当前CML治疗已发生了新的改变,越来越多的患者追求更深层次分子学缓解,以减少耐药复发,追求无治疗缓解和功能性治愈。目前获批上市的各种TKI均各有优劣,并且不断有新型TKI药物研发以及进行临床试验,现对各种TKI药物治疗CML患者进行综述。     

姜黄素与 STI571对慢性粒细胞白血病细胞株K562作用的体外研究

目的 研究姜黄素（Cur）、STI571以及二者联合应用对慢性粒细胞白血病细胞株K562的影响,探索两药的不同效果及联合应用机制.方法 锥虫蓝排染法计算K562细胞增殖抑制率;Western blot方法检测Cur、STI571以及二者联合应用对K562细胞P210bcr/abl蛋白含量及其下游信号蛋白激酶C（PKC）的影响;用金氏公式评价两药的协同效果.结果 Cur和STI571联合应用对K562细胞呈剂量依赖性的抑制作用,协同指数Q值均＞0.85;Western blot显示,Cur和STI571联合应用对P210bcr/abl及PKC的下调呈明显增强作用.结论 Cur与低剂量（0.1,0.15μmol/L）的STI571联合应用对抑制K562细胞增殖呈单独相加;而较大剂量则可明显协同下调P210bcr/abl和PKC的表达水平.     

慢性髓系白血病粘附相关分子整合素β1及局部粘附激酶的研究

目的 研究整合素β1及局部粘附激酶(FAK)在慢性髓系白血病(CML)进展过程中的变化及干扰素治疗对FAK的可能作用。方法 (1)应用流式细胞仪检测正常对照组、CML慢性期组及CML急变组骨髓CD34^ 细胞的胞膜表面CD29及胞质FAK表达量；(2)将正常对照及CML慢性期骨髓单个核细胞分为IFN处理组及非处理组培养48h后提取总蛋白，应用Western blotting检测FAK含量变化。结果 (1)CML慢性期骨髓CD34^ 细胞表面CD29的表达与对照组无显著差异，而胞内FAK含量则下降；(2)CML急变期骨髓CD34^ 细胞表面CD29的表达较慢性期明显升高而胞内FAK含量则较慢性期进一步下降；(3)IFN处理前后正常骨髓单个核细胞FAK的含量无明显差异；(4)IFN处理后CML骨髓单个核细胞FAK含量较未处理组明显上升。结论 整合素β1及FAK表达变化可能是CML进展恶化的原因之一，而IFN-α可能通过恢复FAK含量来改善β1受体介导的粘附信号通路的缺陷。     

三氧化二砷诱导慢性髓系白血病细胞G2/M周期停滞及其机理

目的 研究三氧化二砷对慢性髓系白血病细胞的体外作用特点及其机理。方法 将三氧化二砷与慢性髓性白血病细胞系K562作用后，测定细胞的生长曲线及活性，流式细胞测量术检测细胞凋亡和细胞周期分布的改变；同时，采用RT-PCR方法检测药物作用前后细胞周期相关基因表达的变化。结果 ①三氧化二砷明显抑制K562细胞的生长，其作用呈时间和浓度依赖性；②三氧化二砷诱导K562细胞凋亡的作用较弱，但可明显诱导K562细胞在G2／M期停滞，此效应也呈时间和浓度依赖性；③三氧化二砷作用后，细胞周期抑制基因p57表达明显上调，而细胞周期促进基因cyclinB的表达受到抑制。结论 三氧化二砷能有效抑制慢性髓系白血病细胞的生长，其机理主要为诱导细胞G2／M期周期停滞；该效应与细胞周期相关基因的表达变化有关。     

慢性髓系白血病BCR/ABL融合基因的异质性及其与临床表现的关系

慢性髓系白血病(CML)是一组异质性疾病群，其基本特征是具有Ph染色体和由此形成的BCR／ABL融合基因。不同患者可有不同结构的BCR／ABL融合基因，并可引起患者不同的临床血液学表现，作者对此作一综述。     

α-干扰素联合脂多糖在体外抑制急性髓系白血病细胞株U937和HL60增殖的效应

目的 探讨α-干扰素联合脂多糖在体外对髓系白血病(AML)细胞系U937、HL60细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 用四甲基偶氮唑蓝法检测α-干扰素和(或)脂多糖对U937、HL60细胞增殖作用的影响;流式细胞仪检测α-干扰素和(或)脂多糖对U937、HL60细胞的凋亡率和细胞周期的影响.结果 (1)单用α-干扰素或脂多糖组较对照组能显著地抑制U937、HL60细胞的增殖、增加细胞的凋亡率和增加G1期细胞(P＜0.05).(2)α-干扰素联合脂多糖组较单用α-干扰素或脂多糖组及对照组均能显著地抑制U937、HL60细胞的增殖、增加细胞的凋亡率和增加G1期细胞(P＜0.05).结论 α-干扰素联合脂多糖对白血病细胞增殖抑制及凋亡促进有协同增强作用.     

婴儿慢性髓系细胞白血病3例报告并文献复习

目的：了解婴儿慢性髓系细胞白血病临床特点.方法：对1989年-2004年我科收治的3例婴儿慢性髓系细胞白血病的临床表现、实验室检查进行分析并复习相关文献.结果：3例均为男婴,发病较急,表现为贫血、出血、肝脾中等程度增大.2例进行了ph1染色体及免疫分型检查.3例中有2例为婴儿慢性粒细胞白血病,且1例发生了慢粒急淋变;1例为慢性粒-单细胞白血病.结论：婴儿慢性髓系白血病罕见,临床特点与成人型显著不同.