用Ⅲ型胶原口服液预防烧伤急性胃粘膜病变出血

用Ⅲ型胶原口服液预防烧伤急性胃粘膜病变出血唐洪泰，陈玉林，王韦，陈积民急性胃粘膜病变是烧伤后常见并发症之一，预防其发生为临床治疗的一个重点。我们从１９９０年开始用Ⅲ型胶原口服液防治大面积烧伤患者急性胃粘膜病变出血，取得较好效果。现将应用结果总结如下。...     

致敏大鼠成肌纤维细胞与Ⅲ型、Ⅴ型胶原表达关系的研究

目的 探讨致敏大鼠气道壁中成肌纤维细胞与Ⅲ型、V型胶原的表达及成肌纤维细胞(MF)在气道重建中的作用。方法 Wistar大鼠32只，随机分为对照4周组、8周组，致敏4周组、8周组，每组8只，并用卵白蛋白(OVA)致敏并激发，制备致敏大鼠模型。对照组用生理盐水对照和激发。分别于激发4周和8周时取肺组织，用免疫组化法测定气道壁中Ⅲ型、V型胶原和成肌纤维细胞、TGF—β1的表达。结果 ①致敏4周组和8周组Ⅲ型胶原、V型胶原和成肌纤维细胞的表达与对照4周组和8周组比较，差异均有显著性(P均＜0．01)；②致敏各组Ⅲ型、V型胶原的表达与成肌纤维细胞的表达均呈显著正相关(P均＜0．01)；③致敏8周组与4周组比较，Ⅲ型、V型胶原含量和成肌纤维细胞的表达显著增加，差异均有显著性(P均＜0．01)。结论 哮喘气道重建过程中，有Ⅲ型、V型胶原增生，成肌纤维细胞的过度表达，表明成肌纤维细胞促进了细胞外基质的形成，在气道置建过程中起了重要作用。     

Ⅲ型胶原与骨关节炎

Ⅲ型胶原是一种细胞外的结构蛋白,属于胶原家族的一种,广泛存在于机体组织器官中,其在骨关节炎关节软骨中的表达较正常关节软骨高。骨关节炎时关节软骨以Ⅲ型胶原沉积为主的纤维化改变可影响关节局部的细胞代谢及生物力学特性,本文拟通过对近年来关于Ⅲ型胶原的研究进行综述,总结Ⅲ型胶原在骨关节炎关节软骨中的表达及代谢特点。     

活血止痛膏对兔骨骼肌急性钝挫伤后Ⅱb型MHC、Ⅰ型及Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的:观察活血止痛膏剂对兔骨骼肌钝挫伤后内源性IIb型肌球蛋白重链(MHC)、Ⅰ型及III型胶原mRNA表达的影响。方法:63只大白兔随机分为活血止痛膏高、中、低剂量组与青鹏膏对照组、外伤对照组,每组12只。另取3只为正常对照组。各实验组采用"重物自由落体打击法"制作大白兔骨骼肌急性钝挫伤模型。受伤第1天即于伤处贴敷相应药物。各组伤后3、10、20、27天各处死大白兔3只,取腓肠肌标本,共6个。RT-PCR技术检测内源性Ⅱb型MHC、Ⅰ型及Ⅲ型胶原mRNA。结果:①伤后第3、10、20天活血止痛膏高、中剂量组和青鹏膏组内源性Ⅱb型MHCmRNA表达量高于外伤组和低剂量组(P<0.05);第10、20天活血止痛膏高剂量组内源性IIb型MHCmRNA表达高于中剂量组(P<0.05);②内源性I型胶原mRNA表达量:第3天各组比较无统计学意义(P>0.05);第10、20天活血止痛膏高、中剂量组和青鹏膏组表达量低于外伤组、低剂量组(P<0.05);第10、20天中剂量组高于高剂量组(P<0.05)。③内源性Ⅲ型胶原mRNA表达量:第3、10、20天活血止痛膏高、中剂量组和青鹏膏组内源性Ⅲ型胶原mRNA表达低于外伤组和低剂量组(P<0.05);第3、10、20天高剂量组和青鹏膏组表达量明显少于中剂量组(P<0.05)。三个检测指标各个时间点青鹏膏组和高剂量组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:活血止痛膏可有效促进骨骼肌急性钝挫伤后Ⅱb型MHCmRNA表达,减少Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达,其作用与青鹏膏相当。     

血清Ⅲ型前胶原及Ⅳ型胶原在原发性肝癌中的临床意义

目的探讨患者血清PCⅢ及Ⅳ-C升高在肝硬化及原发性肝癌诊断中的意义。方法用免疫放射的方法检测76例肝硬化及43例原发性肝癌患者血清的PCⅢ及Ⅳ-C。结果肝硬化组血清PCⅢ126.09(±46.36)μg/L;Ⅳ-C61.09(±28.50)μg/L。与对照组相比P<0.001。单纯型原发性肝癌PCⅢ128.67(±38.25)μg/L;Ⅳ-C69.47(±24.61)μg/L,与对照组相比P<0.001。硬化型原发性肝癌PCⅢ146.4(±45.88)μg/L;Ⅳ-C107.50(±73.39)与对照组相比P<0.001。结论肝硬化及原发性肝癌PCⅢ、Ⅳ-C在患者血清中升高。这两个指标分别与AFP联用诊断原发必肝癌,其敏感性优于单用AFP,但特异性较差。     

Ⅰ型胶原对Ⅲ型胶原基因在切口疝病人培养的成纤维细胞中的表达

目的 探索细胞外基质在疝组织改变或由于成纤维细胞转彔缺陷导致切口疝发生过程中培养的成纤维细胞中Ⅰ型胶原Mrna和Ⅲ型胶原Mrna表达.方法 成纤维细胞来自切口疝病人和复发性切口疝病人,对照组来自正常健康组织而没有经过手术皮肤病人和虽有切口癍痕但无临床表现切口疝病人.用RT-PCR和Northern Blotting确定Ⅰ型胶原Mrna对Ⅲ型胶原Mrna比率.结果 RT-PCR结果表明了Ⅰ型胶原Mrna在切口疝病人(0.90±0.04)和复发性切口疝病人(1.19±0.04)组中,标相应地在癍痕组织(0.54±0.02)和健康组织(0.43±0.01).然而Ⅲ型胶原Mrna在切口疝病人显著增加至4.13±0.04和复发性切口疝病人增加至6.02±0.03,而在癍痕组织2.29±0.04,在健康组织中为1.72±0.03.疝病人的成纤维细胞Ⅰ型胶原Mrna对Ⅲ型胶原Mrna比率显著减少(P＜0.01).结论 在培养的皮肤成纤维细胞中Ⅰ型胶原Mrna对Ⅲ型胶原Mrna的比率减少,表明在切口疝病人存在胶原蛋白代谢紊乱.因此一个损伤的伤口愈合过程可能解释临床缝合修补疝组织不尽满意结果的原因.     

胶原在胎兔、成兔正常发育及创伤愈合过程中的变化

目的：为了探索胎兔及成兔在正常发育及创伤愈合过程中胶原合成特点，分析胎儿型及成年型创伤愈合差别的原因．方法：用胃蛋白酶对胎兔及成兔皮肤的胶原进行提取，用酸水解法使胶原水解，采用氯胺T法进行羟脯氨酸(HP)测定．结果：①正常成兔的HP含量明显高于正常胎兔，而正常胎兔不同孕期之间却无差别．②胎兔皮肤创伤后(1-6d)与对应的正常胎兔相比，只表现出第1d HP显增高．③成兔皮肤创伤后与正常成兔相比，除第1日无差别外，后5dHP显增高．④胎兔皮肤创伤后HP动态变化呈现线性下降趋势，而成兔呈现线性上升趋势．结论：成兔皮肤合成胶原的能力高于胎兔皮肤；创伤后，胎兔及成兔均表现出胶原合成增加，而前持续短暂，预示着愈合迅速；而后持续增高，表现出愈合缓慢及瘢痕的形成。     

血清Ⅲ型前胶原及IV型胶原在原发性肝癌中的临床意义

目的：探讨患者血清PCⅢ及Ⅳ-C升高在肝硬化及原发性肝癌诊断中的意义。方法：用免疫放射的方法检测76例肝硬化及43例原发性肝癌患者血清的PCⅢ及Ⅳ-C。结果：肝硬化组血清PCⅢ126.09(±46.36)μg/L;Ⅳ-C61.09(±28.50)μg/L。与对照组相比P<0.001。单纯型原发性肝癌PCⅢ128.67(±38.25)μg/L;Ⅳ-C69.47(±24.61)μg/L,与对照组相比P<0.001。硬化型原发性肝癌PCⅢ146.4(±45.88)μg/L;Ⅳ-C107.50(±73.39)与对照组相比P<0.001。结论：肝硬化及原发性肝癌PCⅢ、Ⅳ-C在患者血清中升高。这两个指标分别与AFP联用诊断原发必肝癌,其敏感性优于单用AFP,但特异性较差。     

乙型肝炎病毒感染者血清透明质酸、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原测定的临床意义

目的 :探讨乙型肝炎病毒 (HBV)感染者血清透明质酸 (HA)、Ⅲ型前胶原 (PCⅢ )和Ⅳ型胶原 (CⅣ )水平的临床意义。方法 :用ELISA法对 2 9例中度慢性乙肝、37例重度慢性乙肝、2 1例重症乙型肝炎、32例失代偿性乙型肝炎肝硬化、2 6例代偿性乙型肝炎肝硬化、11例乙型肝炎肝癌、32例乙型肝炎病毒表面抗原 (HBsAg)携带者和 30例正常健康体检者血清HA、PCⅢ、CⅣ进行定量测定。结果 :肝硬化、重度慢性乙肝、重症乙肝和肝癌患者血清HA、PCⅢ、CⅣ水平均明显高于健康对照组 (P <0 0 1) ,中度慢性乙肝和HBsAg携带者虽比健康对照组高 ,但无统计学差异 (P >0 0 5 )。经治疗后 ,随着肝功能恢复 ,血清HA和CⅣ水平随之下降 ,但肝癌和肝硬化患者血清HA和CⅣ含量无显著变化 (P >0 0 5 )。结论 :动态监测HBV感染者血清HA、PCⅢ和CⅣ水平 ,有助于临床肝病的鉴别诊断、分型、病情发展及预后判断     

梗阻性肾病患者血清中Ⅲ型前胶原及Ⅲ型前胶原氨基末端肽与肾脏纤维化的相关性

目的：探讨梗阻性肾病患者血清中PCⅢ及PCⅢ氨基末端肽浓度的变化与肾组织纤维化的相关性。方法：选取2012年1月至2017年12月在我院就诊的78例梗阻性肾病患者和30名健康体检者对照进行研究。采用放射免疫法测定血清Ⅲ型前胶原（PCⅢ）及Ⅲ型前胶原氨基末端肽（PⅢNP）水平,取得肾组织标本进行HE和Masson染色,光镜下观察肾纤维化程度;Spearman分析PCⅢ及PⅢNP与肾组织纤维化的相关性;建立logistic回归模型根据PCⅢ和PⅢNP水平探讨肾纤维化的危险因素。ROC曲线预测PCⅢ及PⅢNP在Ⅱ度肾纤维化的诊断灵敏度和特异度。结果：随着肾纤维化程度的升高,患者PCⅢ和PⅢNP的水平逐渐升高（P＜0.01）。PCⅢ和PⅢNP水平与肾纤维化程度均有良好的相关性（rs=0.82０,P=0.000;rs=0.806,P=0.000）。PCⅢ对Ⅱ度肾纤维化预测的灵敏度和特异性分别为95.45%、83.93%,ROC曲线下面积0.96,95%CI=0.890~0.991;PⅢNP预测的灵敏度和特异性分别为86.36%、92.86%,ROC曲线下面积0.93,95%CI=0.849~0.976;两者均有较高的预测价值。PCⅢ：OR值为1.151（95%CI=1.035～1.280,P=0.009）;PⅢNP：OR值为1.198（95%CI=1.039～1.380,P=0.013）。结论：血清中PCⅢ及PⅢNP水平与肾脏纤维化程度呈正相关,两者对重度肾纤维化有良好的预测价值,具有临床推广价值。     

转染Smad 7基因的大鼠肾小球系膜细胞对Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的改变

 [摘要] 目的 探讨Smad 7基因对大鼠肾小球系膜细胞（MsC）Ⅰ、Ⅲ型胶原（ColⅠ、Col Ⅲ）表达的影响,为试图运用Smad 7对肾纤维化进行基因治疗提供实验依据。方法 经脂质体介导将含有Smad 7重组表达质粒转染大鼠MsC，用G418筛选及Northern blot、Western blot法鉴定；又分别采用RT-PCR和Western blot法，检测转染阳性MsC克隆ColⅠ、Col Ⅲ表达改变。结果 成功建立稳定高表达Smad 7的阳性MsC克隆（S-22与S-26），并证实两阳性MsC克隆ColⅠ及Col Ⅲ mRNA及蛋白的表达均被明显抑制, 其中S-22克隆ColⅠ及Col Ⅲ mRNA表达分别降低47 %和56 ％，其蛋白表达分别降低65 %和54 ％。结论 Smad 7可能通过抑制组织内ColⅠ及Col Ⅲ的生成而起到减轻肾纤维化进展的作用。     

人Ⅰ,Ⅲ型胶原的提取及其抗血清的制备

以限制性胃蛋白酶消化，分步盐析法从人盘中提取Ⅰ型和Ⅲ型胶原，用淋巴结微量注射法免疫家兔，制备抗ＣｏｌⅠ和ＣｏｌⅢ的血清。抗血清经亲和层析免疫吸附后，ＥＬＩＳＡ和免疫组化检测证实扬是的抗ＣｏｌⅠ和ＣｏｌⅢ的抗体是单一特异的。它们的制备成功为组织学原位研究ＣｏｌⅢ的变化提供了可能。     

转染Smad2基因的大鼠肾系膜细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的改变

肾小球硬化是以细胞外基质 (extracellularmatrix ,ECM)包括胶原 (Col)、纤连蛋白 (FN)和糖胺聚糖等大量沉积为特征。经研究表明 ,转化生长因子 β(transforminggrowthfac tor β ,TGF β)是介导这一病理过程的重要细胞因子[1] ,其机制可能与其改变基质降解酶系统的表达 ,从而促进肾小球MsCECM的合成有关[2 ] 。近年来 ,经实验研究证实 ,TGF β是在与其受体 (Tβ R)结合后 ,经磷酸化激活丝 /苏氨酸激酶受体信号转导分子Smad(果蝇Mad和C .elegansSma基因产物的同类物 ) ,如Smad2、Smad3,后两者与胞质内同家族分子Smad4形成异聚体…     

人肌腱与皮肤组织及其细胞中Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达的比较研究

目的探讨利用皮肤成纤维细胞作为肌腱构建种子细胞的可行性.方法取外伤病人术中修剪的多余肌腱和皮肤组织,一部分用于石蜡包埋做组织学检测,一部分用酶消化法培养细胞,取第2代细胞进行细胞学检测.本实验采用偏光显微镜、免疫组织化学技术对人正常肌腱组织和皮肤组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达进行比较;采用免疫细胞化学、免疫细胞荧光、RT-PCR 技术从蛋白水平、RNA水平比较第2代人肌腱细胞和皮肤成纤维细胞合成Ⅰ、Ⅲ型胶原的情况.结果偏光显微镜下可见肌腱组织中以粗大的Ⅰ型胶原为主,而皮肤组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原交错排列.免疫组织化学和显示石蜡包埋的肌腱组织和皮肤组织的Ⅰ型胶原染色均为强阳性,肌腱组织Ⅲ型胶原染色阴性,皮肤组织Ⅲ型胶原染色阳性.免疫细胞化学和免疫细胞荧光显示第2代肌腱细胞和皮肤成纤维细胞Ⅰ、m型胶原染色均为阳性.RT-PCR灰度分析结果示肌腱组织和皮肤组织Ⅰ型胶原灰度比值为1.25±0.03,Ⅲ型胶原肌腱组织不表达.第2代肌腱细胞与皮肤成纤维细胞Ⅰ型胶原灰度比值为1.09±0.05,Ⅲ型胶原灰度比值为0.93 ±0.08.结论人正常肌腱组织和皮肤组织中在胶原组成上均以Ⅰ型胶原为主.第2代人肌腱细胞和皮肤成纤维细胞的生物学特性相近,均合成Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原.皮肤成纤维细胞很有可能成为肌腱组织工程新的种子细胞.     

糖尿病肾病患者血清透明质酸、Ⅳ型胶原、Ⅲ型前胶原测定的临床意义

目的 观察糖尿病肾病患者血清透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、Ⅱ型前胶原(PCⅡ)检测值的变化，探讨其临床意义。方法 选择50例2型糖尿病患者和30例健康成人。50例2型糖尿病患者分别按其空腹血糖水平和尿中自蛋白含量分成血糖控制不良组、血糖控制较好组，尿白蛋白正常组、尿白蛋白微量组、尿白蛋白大量组，检测其血清HA、CⅣ、PCⅡ含量。结果 2型糖尿病患者血清HA、CⅣ、PCⅡ水平显著高于对照组(P＜0．01，P＜0．01，P＜0．05)，血糖控制不良组糖尿病患者血清三项指标分别显著高于血糖控制较好组(P＜0．01，P＜0．05，P＜0．01)；尿白蛋白大量组其三项指标高于尿白蛋白微量组，而尿白蛋白微量组三者水平高于尿白蛋白正常组(P＜0．01)。结论 2型糖尿病患者血清HA、CⅣ、PCⅡ水平较正常组显著升高，并与血糖水平的控制密切相关，反映了糖尿病肾病的进展。     

人肌腱与皮肤组织及其细胞中Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达的比较研究

目的探讨利用皮肤成纤维细胞作为肌腱构建种子细胞的可行性.方法取外伤病人术中修剪的多余肌腱和皮肤组织,一部分用于石蜡包埋做组织学检测,一部分用酶消化法培养细胞,取第2代细胞进行细胞学检测.本实验采用偏光显微镜、免疫组织化学技术对人正常肌腱组织和皮肤组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达进行比较;采用免疫细胞化学、免疫细胞荧光、RT-PCR 技术从蛋白水平、RNA水平比较第2代人肌腱细胞和皮肤成纤维细胞合成Ⅰ、Ⅲ型胶原的情况.结果偏光显微镜下可见肌腱组织中以粗大的Ⅰ型胶原为主,而皮肤组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原交错排列.免疫组织化学和显示石蜡包埋的肌腱组织和皮肤组织的Ⅰ型胶原染色均为强阳性,肌腱组织Ⅲ型胶原染色阴性,皮肤组织Ⅲ型胶原染色阳性.免疫细胞化学和免疫细胞荧光显示第2代肌腱细胞和皮肤成纤维细胞Ⅰ、m型胶原染色均为阳性.RT-PCR灰度分析结果示肌腱组织和皮肤组织Ⅰ型胶原灰度比值为1.25±0.03,Ⅲ型胶原肌腱组织不表达.第2代肌腱细胞与皮肤成纤维细胞Ⅰ型胶原灰度比值为1.09±0.05,Ⅲ型胶原灰度比值为0.93 ±0.08.结论人正常肌腱组织和皮肤组织中在胶原组成上均以Ⅰ型胶原为主.第2代人肌腱细胞和皮肤成纤维细胞的生物学特性相近,均合成Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原.皮肤成纤维细胞很有可能成为肌腱组织工程新的种子细胞.     

抗人Ⅲ型前胶原单克隆抗体杂交瘤的建立

用人工流产胎皮提取人Ⅲ型前胶原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，成功地得到抗ｈＰＣⅢ单抗２株即ＭＡ１和ＭＨ１８。杂交瘤连续培养半年，冻存５年复苏后仍能分泌抗体。经免疫组化检测显示成人血管壁，纤维间质和中国仓鼠成纤维反应。ＭＨ８与牛Ⅰ型、Ⅲ型胶原有交叉，与角度蛋白无交叉。     

兔胎肺Ⅱ型细胞发育与表面活性物质蛋白基因表达的关系及其调节

目的　探讨兔胎肺Ⅱ细胞发育程度与表面活性物质蛋白 (surfactantproteins ,SPs)mRNA表达的关系以及地塞米松 (Dex)、TRH、EGF等药物对其的调节作用。方法　在孕兔妊娠 2 2～ 2 4d或 2 4～ 2 6d静脉分别给予生理盐水 (对照 )、Dex、EGF、TRH处理 ,于妊娠 2 5d及 2 7d取胎肺 ,通过电镜观察兔胎肺Ⅱ型细胞发育程度 ,采用RT PCR和Southernblot检测胎肺SP A、SP B及SP C的mRNA水平。结果　在妊娠 2 7d ,Dex、EGF及TRH处理组胎肺Ⅱ细胞比对照组更成熟 ,板层体数量明显多于对照组 ,糖原含量比对照组少 ,同时 ,各处理组 2 7d胎肺SP BmRNA水平显著高于对照组 ,但SP A和SP C的mRNA水平在各组间无明显差异。在妊娠 2 5d ,除Dex组胎肺的个别Ⅱ细胞内可见少量未成熟板层体外 ,对照组和其余处理组胎肺Ⅱ细胞内均未见板层体 ,相反 ,所有胎肺均可见大量糖原颗粒。此外 ,2 5d胎肺的SP BmRNA在对照组、EGF和TRH处理组均无明显表达 ,仅Dex处理组的部分胎肺可见低水平表达 ,而SP A和SP CmRNA在各组胎肺均有较高水平表达。结论　SP A、SP B和SP CmRNA在兔胎肺表达的时间并不一致 ,胎肺SP A和SP CmRNA的表达和升高早于SP BmRNA ,其水平在妊娠后期的一定时间内相对稳定。SP BmRNA的检出晚于SP A和SP CmRNA ,其在胎肺的表达和升