不同寄主植物桑寄生水提物对斑马鱼胚胎心脏发育毒性及机制研究

目的 研究不同寄主植物桑寄生Taxilli Herba水提物对斑马鱼胚胎心脏发育毒性及其机制,为桑寄生用药安全提供理论依据。方法 以受精后6 h(6 h post fertilization,6 hpf)正常发育的斑马鱼胚胎为动物模型,将桑树Morus alba、柳树Salix babylonica、油茶Camellia oleifera、夹竹桃Nerium indicum、苦楝Melia azedarach和漆树Toxicodendron trichocarpum 6种寄主植物桑寄生水提物各设置低、中、高3个药物浓度,分别处理斑马鱼胚胎,检测72 hpf孵化仔鱼的心脏形态、心率、心包面积、静脉窦(sinus venosus,SV)和动脉球(bulbus arteriosus,BA)间距、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)活性、心肌细胞的凋亡情况以及氧化应激相关酶基因［SOD1、CAT、谷胱甘肽S-转移酶2(glutathione S-transferase 2,GSTP2)]、心脏发育相关基因[GATA结合蛋白5(GATA binding protein 5,GATA5)、NK2同源框5(NK2 homeobox 5,NKX2.5)、肌球蛋白重链6(Myosin,heavy chain 6,MYH6)]及心肌细胞凋亡相关基因[B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)]的表达水平。结果 与空白组比较,除桑树寄主桑寄生外,其他5种桑寄生水提物处理的斑马鱼胚胎均出现不同程度的心包水肿、心率降低、心包面积和SV-BA间距增大(P＜0.05、0.01),SOD和CAT活性降低(P＜0.05、0.01),SOD1、CAT、GSTP2、GATA5、NKX2.5、MYH6的表达表现出明显的上调或下调(P＜0.05、0.01)。夹竹桃、苦楝和漆树3种寄主桑寄生还观察到心肌细胞凋亡,Bcl-2表达和Bcl-2/Bax值明显降低(P＜0.05、0.01)。结论 桑寄生对斑马鱼胚胎心脏发育毒性具有明显的寄主相关性,除桑树寄主桑寄生外,其他5种寄主桑寄生均表现出不同程度的心脏发育毒性,寄主植物不同,毒性机制也不同。     

寄主对桑寄生药材质量的影响

桑寄生是一种具有广泛寄主的半寄生性植物药材,具有祛风湿、补肝肾、强筋骨、安胎元等功效。现代研究表明,寄主对桑寄生药材质量影响显著。本文通过查阅国内外公开发表的有关研究论文,对历代本草桑寄生的使用,以及不同寄主对桑寄生药材化学成分、毒性及药理作用等方面的影响进行总结,从寄主对桑寄生药材质量影响层面,对如何做好桑寄生药材的质量控制提出相关工作思路,为开展桑寄生药材质量控制提供参考。     

基于斑马鱼模型的补骨脂不同炮制品水提物急性毒性及肝毒性差异比较

目的 根据历代医籍和本草记载的炮制方法,对比补骨脂Psoraleae Fructus不同炮制品水提物的急性毒性和肝毒性差异,为补骨脂的炮制方法使用提供参考。方法 采用超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱和标准曲线法对补骨脂生品和补骨脂不同炮制品水提物进行补骨脂素和异补骨脂素的含量测定,并以AB野生型斑马鱼、Tg(lfabp:EGFP)肝脏细胞绿色荧光标记转基因斑马鱼和Tg(lysc:DsRed2)中性粒细胞红色荧光标记转基因斑马鱼为实验动物模型,给予补骨脂生品和补骨脂不同炮制品的水提物通过观察补骨脂不同炮制品对斑马鱼的半数致死浓度（median lethal concentration,LC50）、最小致死浓度（minimum lethal concentration,LC1）、斑马鱼形态变化、畸形评分等的影响,比较补骨脂不同炮制品的急性毒性差异。通过观察不同给药组对斑马鱼肝脏荧光强度、肝脏面积和体积、肝脏病理切片情况、肝脏区域中性粒细胞数量的影响,以及检测炎症相关基因的m RNA水平变化情况,综合评价补骨脂不同炮制品的肝毒性差异。结果 补骨脂不同炮制品水提物中补骨脂素和异补骨脂素含量存...     

不同寄主上的桑寄生药材毒性的比较研究

目的： 比较研究不同寄主来源的桑寄生（Taxillus sutchuenensis）药材的毒性。方法： 对6种不同寄主上的桑寄生药材进行急性毒性实验,测定半数致死量（LD₅₀）或最大耐受量（MTD）。并根据寄主来源不同,将98只昆明种小鼠随机分为对照组、沙梨组、李树组、白杨组、柞木组、夹竹桃组和漆树组,除对照组,其余各组小鼠每日ig 7.5 g·kg^-1水提物1次,共4周。测定血清中天冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）及肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）含量,并观察肝、肾组织病理改变。结果： 夹竹桃上的桑寄生、漆树上的桑寄生毒性明显,LD₅₀及95%可信限分别为109.276 （96.837~122.645） g·kg^-1和77.286（66.891~89.296）g·kg^-1;其余4种寄主上的桑寄生药材未出现死亡。与对照组比较,夹竹桃上的桑寄生能引起Cr指标的升高,并对小鼠肾组织影响较明显;而其他各寄主上的桑寄生组肝、肾功能检测指标差异不明显,对小鼠肝、肾组织损伤也较轻。结论： 寄主为夹竹桃、漆树有毒木类的桑寄生药材有明显的毒性。     

两种不同寄主桑寄生的化学成分预试验

目的:初步比较两种不同寄主(白蜡树和柚子树)来源的桑寄生所含化学成分的类型。方法:通过试管反应法和滤纸反应法,分别对两种不同寄主(白蜡树和柚子树)来源的桑寄生提取液进行化学成分预试。结果:两者均含有糖苷类、鞣质、有机酸、黄酮及酚类成分,均不含有香豆素、生物碱、强心苷类成分。结论:不同寄主上的桑寄生所含化学成分的类型有所区别。     

桑寄生在广西的分布及其寄主状况调查

目的:调查桑寄生在广西境内的分布及其寄主种类。方法:深入广西各县区进行野外调查,现场查定。结果:桑寄生在广西境内主要分布于桂南、桂中、桂东地区,常见于海拔800米以下的平原、丘陵以及低山地区。桑寄生的主要寄主植物有36个科150多种。结论:桑寄生在广西境内分布广泛,寄主植物复杂。     

不同寄主桑寄生药材对原发性高血压大鼠降压作用的影响

目的观察桑树、柳树、板栗树、枫香树、油茶树、夹竹桃树6种不同寄主来源桑寄生药材对原发性高血压大鼠(SHR)降压作用的影响。方法将SHR随机分为14组,卡托普利阳性组(20 mg/kg)、模型组、6种寄主桑寄生药材高剂量组(5.9 g/kg)和低剂量组(1.48 g/kg),另设WKY为空白组,每组8只,均连续灌胃给药20 d。采用尾动脉无创测压法测定给药前、给药10 d、给药20 d的尾动脉收缩压(SBP),末次给药后12 h麻醉取血,检测血清中一氧化氮(NO)含有量及超氧化物歧化酶(SOD)活性变化,血浆中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、内皮素-1(ET-1)含有量。结果与给药前相比,在给药10 d时,各组SHR大鼠SBP均有所下降,其中桑树寄主桑寄生高剂量组降压效果非常明显(P0.01);在给药20 d时,柳树、枫香树和油茶树寄主桑寄生高、低剂量与桑树寄主桑寄生高剂量和板栗树寄主桑寄生低剂量组对SHR大鼠SBP有明显降低作用(P0.01);与模型组相比,在给药10 d时,桑寄生药材各给药组SHR大鼠SBP未见显著差异,在给药20 d时,桑寄生药材各给药组除夹竹桃寄主桑寄生高、低剂量、桑树寄主桑寄生低剂量、板栗树寄主桑寄生高剂量对SHR大鼠没有表现明显降压作用,其余各组寄主桑寄生药材对降低SHR大鼠SBP均有明显作用(P0.05)。与模型组相比,桑树和柳树寄主桑寄生高剂量对降低SHR血浆中AngⅡ及ET-1含有量有显著作用(P0.01);桑树、柳树、枫香树寄主桑寄生高剂量均可以明显升高SHR血清中NO释放量(P0.01),并能显著提升SOD活性(P0.01)。结论 6种不同寄主来源桑寄生药材除了夹竹桃寄主桑寄生外,各寄主来源桑寄生均具有降压作用,寄主对桑寄生的降血压作用存在影响。     

不同寄主植物桑寄生总黄酮含量研究

目的 考察不同寄主植物的桑寄生总黄酮含量.方法 采用分光光度法测定寄生在16种不同寄主植物的桑寄生样品的总黄酮含量,并用正交实验的方法研究比较了不同提取条件对桑寄生总黄酮提取率的影响.结果 不同寄主植物的桑寄生茎枝的总黄酮含量为4.10～7.82 mg/g,其中以桑树为寄主的人工种植的桑寄生茎枝的总黄酮含量为最高;桑寄生叶总黄酮含量为18.33～32.08 mg/g,其中以夹竹桃为寄主的桑寄生叶的总黄酮含量最高.正交实验结果优选的提取条件茎枝是A_1B_2C_2D_3,即桑寄生茎枝0.5 g,乙醇浓度为60%,超声提取时间为30 min,超声提取温度为45℃,料液比1∶25;叶是A_2B_1C_2D_3,即桑寄生叶0.5 g,乙醇浓度为70%,超声提取时间为20 min,超声提取温度为45℃,料液比1∶25.结论 桑寄生总黄酮含量因寄主植物不同,其总黄酮含量表现出一定的差异性.优选的提取方法稳定、可靠、简洁,提取效率高.     

垂盆草水提物的急性毒性实验和保肝作用研究

目的:观察垂盆草水提物(ESB)的急性毒性反应及其对乙醇致小鼠肝损伤动物模型的保护作用。方法:经预实验,垂盆草水提物以最大浓度及最大给药体积的药液连续给小鼠灌胃2次,间隔7 h,继续观察14天,记录小鼠毒副反应情况,计算最大耐受量及耐受量倍数;采用乙醇灌胃造成乙醇型肝损伤小鼠模型。取垂盆草加水煎煮得水煎液分得水提高、低剂量两组,以联苯双酯为阳性对照,连续灌胃给药10天,分别测定各组小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性及肝匀浆中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:垂盆草水提物的MTD为206.892 g/kg.d-1,该剂量相当于人体推荐服用量344.82倍;垂盆草水提物能抑制乙醇所致的ALT及AST活性的升高,降低乙醇所致的MDA含量的升高(P0.01),扭转乙醇所致的小鼠肝脏SOD活性的降低。结论:垂盆草提取物无明显毒性,临床常用量安全,并对乙醇致小鼠急性肝损伤有保护作用。     

黄根片对急性肝损伤小鼠的影响及急性毒性研究

目的 观察黄根片D-氨基半乳糖引起的急性肝损伤的作用及其急性毒性.方法 采用D-半乳糖胺盐酸盐ip建立小鼠急性肝损伤模型,用比色分析法测定小鼠血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）的活性;并测定黄根片小鼠灌服给药的急性毒性.结果 黄根片能显著降低因D-氨基半乳糖所致急性肝损伤小鼠血清ALT,AST的升高（P〈0.01或P〈0.05）;小鼠以最大给药量为含生药933.24 g/kg灌服黄根片,未观察到明显毒性反应.结论 黄根片对D-半乳糖所致小鼠急性肝损伤有保护作用,且小鼠最大给药量为含生药933.24 g/kg,相当于黄根片临床用量的777.7倍.     

不同寄主来源的桑寄生药材槲皮苷与槲皮素含量分析

目的了解不同寄主植物来源的桑寄生药材槲皮苷与槲皮素含量。方法采用RP-HPLC法对桑寄生槲皮苷与槲皮素含量进行测定,槲皮苷采用甲醇超声提取,用Agilent Eclipse XDB-C18柱,乙腈-水(18:82)为流动相,流速1.0ml/min,检测波长254 nm;槲皮素采用甲醇-盐酸(4:1)回流提取,用Agilent Eclipse XDB-C18柱,甲醇-0.05%磷酸溶液(45:55)为流动相,流速1.0 ml/min,检测波长254 nm。结果槲皮苷与槲皮素的线性范围0.35～3.5μg(r=0.999 9)与0.41～4.1μg(r=0.999 9),平均回收率分别为101.2%与100.4%,寄主植物不同,桑寄生药材茎枝槲皮苷与槲皮素含量为0～0.14 mg/g与0～0.85 mg/g不等,药材叶槲皮苷与槲皮素含量为0.41～2.48 mg/g与2.42～6.89 mg/g不等。结论寄主植物不同桑寄生药材槲皮苷与槲皮素的含量明显不同,药材的槲皮苷与槲皮素主要存在于药材叶中,茎枝中的含量较低,有的寄主的桑寄生茎枝中甚至检测不到槲皮苷与槲皮素。     

醋甘遂不同提取物对斑马鱼幼鱼的毒性

目的:研究非致死剂量醋甘遂对斑马鱼幼鱼的毒性及毒性可逆性,并验证斑马鱼模型用于中药毒性快速评价的可行性。方法:用索氏提取器以不同极性溶剂依次提取样品,制备不同提取物。将健康斑马鱼成鱼配对产卵,以正常发育受精后3 d的斑马鱼幼鱼为模型,用醋甘遂不同极性提取物处理斑马鱼幼鱼,统计给药72 h死亡率,对毒性最强的提取部位观察评价其对斑马鱼心血管系统、肝脏、神经系统、胃肠道系统、肾脏及其他脏器系统的毒性特征及可逆性。结果:醋甘遂不同溶剂提取物毒性顺序依次为石油醚提取物二氯甲烷提取物乙酸乙酯提取物乙醇提取物,与空白组比较,石油醚提取部位处理后的幼鱼给药组肝区相对光强度随给药浓度的升高而降低,肝脏颜色变暗(P0.01);肝脏经苏木精-伊红染色后,在石油醚提取部位0.054 mg·L~(-1)给药组中有轻微的肝损伤,在恢复组中肝损伤明显好转。与空白组和石油醚提取部位0.004 mg·L~(-1)组比较,肠道尼罗红排泄实验显示残留率在石油醚提取部位0.012,0.036,0.054 mg·L~(-1)组中显著下降(P0.01),胃肠道被促进排空。其他系统毒性特征不明显,差异均无统计学意义。结论:醋甘遂的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和乙醇提取物中,石油醚提取物毒性最大,且主要毒性为肝毒性和胃肠道刺激性,肝毒性造成肝变性,具有可逆性。斑马鱼模型快速评价中药毒性具有较好的应用前景。     

柿树寄主的桑寄生科7 种不同属种桑寄生药用植物中槲皮苷含量分析

目的：测定柿树寄主的桑寄生科7 种不同属种的桑寄生药用植物中槲皮苷含量。方法：采用HPLC 法对柿树寄主的桑寄生科7 种不同属种桑寄生药用植物槲皮苷含量进行测定,样品采用甲醇超声提取方法制备,用Inertsil ODS-SP 色谱柱（150 mmx4.6 mm,5 μm）,甲醇-0.1%磷酸溶液（52:48）为流动相,流速1.0 mL·min-1,检测波长254 nm。结果：槲皮苷的线性范围0.21~350.00 mg·L-1 （r = 0.999 9）,平均回收率为98.86%,RSD=2.31%。桑寄生科7 种不同属种药用植物茎枝中槲皮苷含量为0.358 9~3.677 0 mg·g-1,叶中槲皮苷含量为5.009 1~76.381 3 mg·g-1。结论：桑寄生科不同属种桑寄生药用植物槲皮苷的含量各不相同,主要存在于叶中,而茎枝中的含量较低。     

桑寄生及其寄主植物桑树1-脱氧野尻霉素含量相关性研究

目的:考察桑寄生及其寄主植物桑树1-脱氧野尻霉素( DNJ)含量的关系.方法:采用RP-HPLC测定寄生在桑树和非桑树寄主植物上的桑寄生及其寄主植物DNJ含量,样品DNJ采用0.05 mol·L-盐酸溶液提取,在pH 8.0的硼酸盐缓冲溶液条件下,用芴甲氧羰酰氯(FMOC-Cl)与DNJ反应生成荧光产物,然后用高效液相-荧光检测器测定.色谱条件Agilent C18色谱柱(4.6 mm× 250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%醋酸(51:49),流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,荧光检测器激发光254nm,发射光322 nm.结果:DNJ的线性范围3.72 ～37.2 mg·L-1(r =0.999),加样回收率为96.42%,桑树寄主及其桑寄生DNJ含量分别为1.39～ 10.16 mg·g-1和0.46 ～2.72 mg·g-1不等,非桑树寄主及其桑寄生不含DNJ,桑寄生DNJ含量最高可达到其桑树寄主DNJ含量的48.0%.结论:桑寄生以一定量的形式累积其寄主植物桑树DNJ特征性成分,本方法可作为对以桑树为寄主植物的桑寄生药材的质量控制方法.     

柿树及其11种寄生植物的齐墩果酸、熊果酸含量相关性

目的:考察柿树及其11种寄生植物齐墩果酸、熊果酸含量的关系。方法:采用RP-HPLC对桑寄生药材及其寄主植物齐墩果酸、熊果酸含量进行测定,齐墩果酸、熊果酸采用乙醇超声提取30 min,采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱,流动相甲醇-乙腈-0.05%乙酸铵水溶液(12∶67∶21),流速1.0 m L·min-1,检测波长210 nm。结果:齐墩果酸和熊果酸的线性范围分别为2.34~375(r=0.999 9),5.21~834 mg·L-1(r=0.999 9),与峰面积呈良好线性关系,平均加样回收率依次为99.57%,99.72%;柿树枝齐墩果酸质量分数为0.382 6~0.541 1 mg·g-1,熊果酸质量分数为0.649 0~1.625 8 mg·g-1,柿树叶齐墩果酸质量分数为1.773 6~4.274 6 mg·g-1,熊果酸质量分数为6.023 7~9.398 0 mg·g-1;瘤果槲寄生枝齐墩果酸质量分数为1.221 4 mg·g-1,熊果酸质量分数为0,瘤果槲寄生叶齐墩果酸质量分数为10.815 8 mg·g-1,熊果酸质量分数为0;棱枝槲寄生齐墩果酸质量分数为7.158 9 mg·g-1,熊果酸质量分数为0;余下9种寄生齐墩果酸和熊果酸质量分数均为0。结论:柿树枝叶均含齐墩果酸、熊果酸。鞘花、三色鞘花、离瓣寄生、油茶离瓣寄生、五蕊寄生、红花寄生、小红花寄生(变种)、广寄生和大苞寄生9种寄生不含齐墩果酸、熊果酸。瘤果槲寄生和棱枝槲寄生含齐墩果酸,不含熊果酸。     

桑寄生总黄酮对大鼠佐剂关节炎模型的影响

目的:观察桑寄生总黄酮(TFHT)对佐剂性关节炎大鼠的药理作用。方法:雄性SD大鼠,测量1次/7 d足趾肿胀度及进行1次关节评分。第22天给药后将大鼠处死,取左后足踝关节(除正常给药组大鼠外)做病理切片观察;酶联免疫吸附测定法测定血清中TNF-α、IL-10、IL-6的含量。结果:TFHT高、中剂量组能够明显改善佐剂性关节炎组大鼠足趾肿胀程度及大鼠全身症状;降低免疫器官系数;降低血清中IL-6、TNF-α的含量,升高IL-10的含量;病理切片显示踝关节软骨破坏明显减轻,渗出物及血管翳生成减少或无;提示桑寄生总黄酮具有显著的祛风湿和逆转骨关节破坏的作用。结论:桑寄生总黄酮具有明显的祛风湿作用,其作用机制与降低血清中IL-6、TNF-α的含量,升高IL-10的含量有关。     

基于数据挖掘的国医大师颜正华含桑寄生处方用药规律分析

目的:探讨国医大师颜正华教授含桑寄生处方用药规律。方法:在收集颜正华教授含桑寄生处方的基础上,基于中医传承辅助系统构建数据库,进而以关联规则Apriori算法为主要数据挖掘方法,分析、获取含桑寄生处方中单味药物频次、药物组合频次、关联规则与核心药物组合等。结果:含桑寄生处方常用于治疗眩晕、痹证、腰痛等病证,高频次药物包括赤芍、牛膝、白芍、丹参、续断等,高频次药物组合包括"赤芍、桑寄生","牛膝、桑寄生","白芍、桑寄生"等,置信度≥0.9的关联规则包括"牛膝-桑寄生","茯苓-桑寄生","桑枝-桑寄生","炒酸枣仁-桑寄生"等。结论:颜正华教授含桑寄生处方所用药物多具补益肝肾、活血化瘀止痛、祛风湿强筋骨之功,用药较为集中,组方法度清晰。     

RP-HPLC测定桑寄生及其寄主植物黄皮树盐酸小檗碱的含量

目的:测定桑寄生及其寄主植物中盐酸小檗碱的含量,研究寄主植物对桑寄生药材质量的影响。方法:采用甲醇-盐酸(100∶1)溶液超声提取样品中的盐酸小檗碱,并采用RP-HPLC法进行含量测定,选用Agilent C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈:水:磷酸:三乙胺(72∶28∶0.01∶0.05),流速:1.0 mL.min-1,柱温:室温,检测波长:284 nm。结果:不同寄主植物黄皮树及其桑寄生中盐酸小檗碱含量范围分别为0.14~7.58 mg.g-1和0.11~1.35 mg.g-1,桑寄生盐酸小檗碱含量最高可达到其寄主植物黄皮树盐酸小檗碱含量的132.10%。结论:寄主植物是影响桑寄生药材质量的关键,寄主植物不同桑寄生药材化学成分含量也不同。     

Effect of Total Flavonoids of Herba Taxilli on Osteoporotic Rats Induced by Retinoic Acid

Objective: The objective was to study the effect of total flavonoids of Herba Taxilli (TFHT) on osteoporotic (OP) rats induced by retinoic acid (RA) and explore its mechanism. Methods: Three-month-old female Sprague Dawley rats were randomly divided into six groups, each with ten rats, i.e. normal control group, model group, and positive control group and three TFHT groups (at high?, middle?, and low?doses). Except the normal control group, rats of all the other groups were administered RA by gavage (70 mg/kg/day) every morning for 14 days to establish an OP model; at the same time, all the rats were given Corresponding therapeutic drug by gavage for 28 days: rats in the three TFHT groups were given TFHT (400, 200, and 100 mg/kg/day, respectively) and rats in the positive control group were given Long mu Zhuang gu Granule 300 mg/kg/day. Rats in the model group and normal group were given an equal volume of 1% sodium carboxymethyl cellulose sodium suspension. After the experiment, blood was taken to measure the levels of serum calcium (Ca2+), alkaline phosphatase (ALP), and tartrate?resistant acid phosphatase (TRAP); the spleen, uterus, and ovary were dissected to determine the organ coefficient; the left hind limb femur was dissected to determine bone mineral density (BMD), bone dry weight (BDW), bone wet weight (BWW), bone diameter (BD), bone length (BL), bone dry weight/rat weight (BDW/W), bone wet weight/rat weight (BWW/W), bone dry weight/bone wet weight (BDW/ BWW), bone dry weight/bone length (BDW/L), and bone wet weight/bone diameter (BWW/D); and the right hind limb femur was dissected to observe the bone path morphological changes. Results: Compared with the model group, the serum Ca2+ content, uterus plus ovary coefficient, BMD, BDW, BDW/W, BWW/W, BDW/BWW, BDW/L, and BWW/D in the TFHT groups increased, whereas the spleen coefficient, ALP, and TRAP decreased in the TFHT groups, and the differences were statistically significant (P < 0.05 or P < 0.01). Conclusion: TFHT was found effective in treating OP in rats induced by RA; the main mechanisms were increasing the serum Ca2+ content and reducing the level of ALP and TRAP.