解郁祛痰化浊方干预高脂饮食大鼠肠道菌群多样性的探讨

[目的]探讨解郁祛痰化浊方干预高脂饮食大鼠肠道菌群的多样性及对血脂、体质量的影响.[方法]将70只雄性SPF级别Wistar大鼠随机分为正常组,模型组,血脂康组,立普妥组,解郁祛痰化浊方低剂量组,中剂量组,高剂量组.每组10只.正常组喂养正常饲料,模型组喂养高脂饲料.连续灌胃给药8周后收集粪便,进行16S rRNA基因...     

基于16S rRNA测序的肠道菌群探讨化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠脑-肠轴的影响

目的:研究化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠肠道菌群的影响,探讨中药调控肠道微生物群进而恢复脑-肠轴平衡的机制.方法:将50只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,化浊解毒活血通络方高(25.0 g·kg-1),中(12.5 g·kg-1),低(6.25 g·kg-1)剂量组,每组10只.参照Longa法...     

基于16S rDNA高通量测序研究电针对腹泻型肠易激综合征大鼠肠道菌群的调节作用

目的 采用16S rDNA高通量测序技术,分析电针足三里对腹泻型肠易激综合征(irritable bowel syndrome-diarrhea, IBS-D)大鼠肠道菌群物种相对丰度和多样性的影响,探讨电针对IBS-D的作用机制。方法 将SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组。采用束缚联合番泻叶煎剂灌胃法造模,电针组采用电针双侧足三里干预,空白组与模型组不做干预处理。干预结束后,检测大鼠内脏敏感性,并取大鼠粪便进行16S rDNA高通量测序技术检测大鼠肠道菌群。结果 (1)与空白组比较,模型组大鼠腹壁回撤反射评分明显升高(P<0.05);经过电针治疗后,在20 mmHg压力下的腹壁回撤反射评分明显降低(P<0.05)。(2)与空白组相比,模型组OTU数目明显降低,电针组接近于空白组。(3)与空白组相比,模型组芽孢杆菌纲、乳杆菌属、真杆菌属等丰度明显降低,拟杆菌纲、梭菌纲、δ-变形杆菌纲、毛螺菌属等丰度明显升高,而电针组上述菌纲/属丰度均有所改善。(4)三组的Beta多样性分析结果显示,模型组与空白组的样本明显被区分开,而电针组则在两组之间。结论 IBS-D与内脏高敏感性以...     

基于16S rDNA测序分析启脾益肺方对艰难梭菌相关性腹泻小鼠肠道菌群的影响

目的 通过16S rDNA测序探讨启脾益肺方对艰难梭菌相关性腹泻(Clostridium difficile associated diarrhea,CDAD)小鼠肠道菌群的影响.方法 用艰难梭菌菌株VPI10463感染C57BL/6小鼠,建立CDAD小鼠模型,随机分为CDAD模型组和启脾益肺中药组,另设正常对照组.正...     

基于16S rDNA测序技术探讨参苓白术散对溃疡性结肠炎大鼠肠道菌群的影响

目的 探讨参苓白术散通过调节肠道微生物的组成改善溃疡性结肠炎（UC）的作用及其机制。方法 采用连续灌胃5%聚糖硫酸钠（DSS）制备UC大鼠模型，将造模成功的12只大鼠按随机数字表法分为模型组（n=6）、参苓白术散组（n=6），另设正常对照组（n=7）。正常对照组、模型组大鼠灌胃灭菌纯净水（2 mL/d），参苓白术散组灌胃去离子水超声溶解的参苓白术散，剂量为每千克大鼠1.89 g/d，药液浓度为0.125 g/mL，给药30天。观察大鼠的体重、疾病活动指数（DAI）变化，检测各组大鼠血清中的C反应蛋白（CRP）、血清降钙素（PCT）以及诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）水平，并通过16S rDNA技术探讨大鼠经参苓白术散干预后肠道微生物结构的变化。结果 与正常对照组比较，模型组体重逐渐下降（P<0.05）,iNOS水平亦下降（P<0.01）,CRP、PCT水平及DAI评分升高（P<0.01）；与模型组比较，参苓白术散组大鼠血清CRP、PCT水平下降（P<0.05,P<0.01）。Alpha多样性指数显示：与正常对照组比较，UC模型组Shannon、Chao指数...     

基于16S rDNA分析大承气汤对过敏性哮喘小鼠肠道菌群的影响

目的 通过16S rDNA测序探讨大承气汤对过敏性哮喘小鼠肠道菌群的影响.方法 SPF级C57BL/6雌性小鼠,随机分为对照组、模型组、大承气汤组和地塞米松组.采用卵清蛋白-氢氧化铝法制备过敏性哮喘小鼠模型,成模后进行肺组织病理切片PAS染色,取粪便提取DNA进行高通量16S rDNA测序分析及菌群选择性培养、菌落计数...     

基于16SrDNA高通量测序技术分析加味温胆汤对抑郁模型大鼠肠道菌群的影响

目的 探讨加味温胆汤对抑郁模型大鼠肠道细菌丰度及构成的影响.方法 采用孤养结合慢性不可预见性温和应激(CUMS)法复制抑郁模型大鼠,通过应用旷场实验、糖水消耗实验,检测各组大鼠情绪变化,评估抑郁模型是否成功复制及加味温胆汤抗抑郁效应;应用16s rDNA高通量测序分析技术,研究加味温胆汤对肠道细菌丰度及构成的调控作用....     

基于16S rDNA测序研究当归拈痛汤对风湿热痹佐剂性关节炎大鼠肠道菌群的影响

目的：从肠道菌群变化研究当归拈痛汤治疗风湿热痹佐剂性关节炎（AA）大鼠的作用机制。方法：将60只SD大鼠随机分为6组：正常组、风湿热痹模型组（FSR组）、当归拈痛汤（DGNTT）低、中、高剂量组（5.67、11.34、22.68 g·kg-1）,甲氨蝶呤组（MTX,1.35 mg·kg-1）,每组10只,除正常组外,其余各组均注射灭活结核分支杆菌（Mtb）佐剂进行免疫,置于风湿热环境的人工气候箱中进行64 h干预造模。初次免疫当天起,给予大鼠灌胃给药,连续灌胃28 d。对大鼠进行关节炎指数（AI）检测,使用足趾容积测量仪检测大鼠足趾容积变化及苏木素-伊红（HE）染色观察膝关节滑膜组织形态改变,并且采用16S rDNA高通量基因测序法分析给药治疗前后大鼠的肠道菌群变化。结果：当归拈痛汤能够减轻风湿热痹证AA大鼠滑膜组织增生和炎症程度及血管翳形成,并且16S rDNA测序结果显示,与正常组比较,FSR组厚壁菌门、乳酸杆菌属、普雷沃氏菌属9、拟普雷沃氏菌属的相对丰度明显降低（P<0.05,P<0.01）,拟杆菌门、拟杆菌属的相对丰度显著升高（P<0.01）;与FSR组比较,...     

基于16S rDNA测序研究当归拈痛汤对膝骨关节炎小鼠肠道菌群的影响

目的 本研究旨在通过16S rDNA探讨当归拈痛汤调控肠道菌群进而治疗膝骨关节炎（KOA）的潜在作用机制。方法 将36只C57BL/6J小鼠采用前交叉韧带切断（ACLT）的方法构建膝骨关节炎疾病模型,并随机分为假手术组、模型组、当归拈痛汤低剂量组（0.819 g·kg^-1）、当归拈痛汤中剂量组（1.638 g·kg^-1）、当归拈痛汤高剂量组（3.276 g·kg^-1）、美洛昔康组（0.975 mg·kg^-1）,每组6只。除给药组外,假手术组与模型组均予生理盐水灌胃,连续干预4周后,分别收取小鼠粪便和完整膝关节,苏木素-伊红（HE）和番红O-固绿染色观察膝关节组织形态的病理改变;采用16S rDNA测序分析给药前后肠道微生物丰度、多样性变化及相对应的功能预测。结果 高剂量当归拈痛汤和美洛昔康可以明显缓解KOA小鼠的疼痛症状,改善关节结构的紊乱,维持膝关节软骨的完整性,提高关节软骨Ⅱ型胶原a1（Col2a1）表达,降低关节软骨基质金属蛋白酶-13（MMP-13）表达。16S rDNA结果显示,高剂量当归拈痛汤可调整肠道菌群物种丰富度与菌群结构,与假手术组比较,模型组中变形菌门（Proteobacteria）、放线菌门（Actinobacteria）、瘤胃球菌属（Ruminococcus）、拟杆菌属（Bacteroides）丰度显著提高（P<0.05）,与模型组比较,当归拈痛汤组中这4种菌群丰富度显著降低;与假手术组比较,模型组疣微菌门（Verrucomicrobia）、颤螺菌属（Oscillospira）和阿克曼氏菌属（Akkermansia）丰度明显降低（P<0.05）,与模型组比较,当归拈痛汤组中这三类菌群丰度明显升高（P<0.05）。对差异菌属进行功能学通路预测发现,各组间差异物种涉及到丰度较高的代谢通路主要涉及到生物合成及前体代谢物和能量的产生,包括氨基酸生物合成、核苷和核苷酸生物合成、辅因子、假体基团、电子载体和维生素生物合成。结论 当归拈痛汤能够有效保护关节软骨,延缓KOA疾病进展,可能是通过调节肠道菌群结构、促进益生菌、抑制有害致病菌生长实现的。     

基于16S rDNA测序探讨大黄䗪虫丸调控肠道菌群抑制大鼠肾纤维化的作用机制

目的 从肠道菌群角度研究大黄?虫丸（DHZCW）对腺嘌呤诱导的肾纤维化大鼠的作用及机制。方法 将36只SD大鼠随机分为6组：空白组、模型组、大黄?虫丸高、中、低剂量组（0.168、0.084、0.042 g·kg^-1）、吡非尼酮组（200 mg·kg^-1）,每组6只。除空白组外,其余各组用腺嘌呤混悬液250 mg·kg^-1灌胃造模28 d,再进行药物干预4周,在代谢笼中收集大鼠尿液,测定肾功能指标尿素氮（BUN）、尿素（Urea）、尿肌酐（Crea）、胱抑素C（Cys C）、24小时尿蛋白（24 h TP）。收集肾脏样本并对其苏木素-伊红（HE）染色、马松（Masson）染色,观察各组大鼠肾组织病理变化,采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测关键效应蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原（ColⅠ）、Ⅲ型胶原（ColⅢ）蛋白的表达量。收集大鼠粪便运用高通量测序16S rDNA技术对大鼠菌群进行物种差异性分析。结果 与空白组比较,模型组BUN、Urea、Crea、Cys C、24 h TP含量显著升高（P<0.01）,与模型组比较,DHZCW高、中、低剂量组和吡非尼酮组BUN、Urea、Crea、Cys C、24 h TP均显著降低（P<0.01）。与空白组比较,模型组肾组织中出现明显纤维化改变,α-SMA、ColⅠ、ColⅢ蛋白含量也显著升高（P<0.01）;与模型组比较,DHZCW高剂量组和吡非尼酮组组织结构基本正常,未见明显病理损伤改变,DHZCW中、低剂量组可见纤维化改变,低剂量组较为明显;DHZCW高、中、低剂量组和吡非尼酮组中的α-SMA、ColⅠ、ColⅢ蛋白含量显著降低（P<0.01）,说明DHZCW能有效减少胶原异常沉积而抑制肾纤维化。肠道菌群来看,门水平上,与空白组比较,模型组中厚壁菌门（Firmicutes）的丰度明显增加,拟杆菌门（Bacteroidetes）丰度减少,二者比例明显失调。科水平上,模型组降低了毛螺菌科（Lachnospiraceae）、前蹄菌科（Prevotellaceae）、未分类拟杆菌科（Bacteroidota_unclassified）,增加了瘤胃球菌科（Ruminococcaceae）、乳杆菌科（Lactobacillaceae）、颤螺旋菌科（Oscillospiraceae）菌群的丰度。属水平上,模型组的未分类厚壁菌（Firmicutes_unclassified）、未分类拟杆菌属（Bacteroidota_unclassified）、普雷沃氏菌属_UCG-001（Prevotellaceae_UCG-001）等菌群丰度显著降低,UCG-005、梭状芽孢杆菌（Clostridia_UCG-014_unclassified）等菌群丰度增加。与模型组比较,DHZCW能降低潜在致病菌而升高有益菌丰度,调节肠道菌群。结论 DHZCW能有效改善肾功能和抑制肾纤维化,其作用机制可能与调节肠道菌群有关。     

基于16S rDNA高通量测序研究针灸对克罗恩病大鼠肠道菌群的调节作用

目的：采用16S rDNA高通量测序技术分析针灸对克罗恩病（CD）大鼠肠道菌群物种相对丰度和多样性的影响,探讨针灸对克罗恩病的作用机制。方法：将40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、隔药饼灸组、电针组和西药组,每组8只。采用2,4,6-三硝基苯磺酸溶液灌肠4周构建CD大鼠模型,隔药饼灸组和电针组选取天枢（双侧）、气海穴进行干预,西药组采用柳氮磺吡啶溶液灌胃干预。干预结束后取结肠组织进行HE染色,收取大鼠粪便进行16S rDNA高通量测序并对进行物种相对丰度、alpha多样性和基因功能代谢预测分析等。结果：隔药饼灸组和电针组大鼠结肠组织病理学评分显著低于模型组（P<0.01）。与正常组比较,模型组拟杆菌门、放线菌门、拟杆菌纲、拟杆菌目、紫单胞菌科、普雷沃菌科、拟杆菌科、普雷沃菌属等的相对丰度升高,厚壁菌门、变形菌门、梭菌纲、梭菌目、毛螺菌科、瘤胃菌科、乳酸杆菌属等的相对丰度降低;在经过隔药饼灸和电针治疗后,上述大多数微生物相对丰度均有不同程度改善。与正常组比较,模型组肠道菌群的Chao1、Observed species、Shannon、Simpson等alpha多样性指数均显著下降（P<0.05）;与模型组比较,隔药饼灸组和电针组上述指数均显著升高（P<0.05）。功能预测分析发现隔药饼灸和电针均能调节参与碳水化合物代谢、氨基酸代谢等的功能基因。结论：CD与肠道菌群结构变化有关,针灸能够调节CD大鼠肠道菌群物种相对丰度和菌群多样性。     

抑郁症模型大鼠皮质、海马cAMP通路的信号表达及颐脑解郁方的干预作用

目的: 观察抑郁大鼠模型脑内环磷酸腺苷(cAMP)通路的表达及中药颐脑解郁方的干预作用。方法: Wistar大鼠分为正常组、模型组、中药颐脑解郁方组、西药氟西汀组。模型组、中药颐脑解郁方组、西药氟西汀组在 21 d内采用慢性不可预见的温和性应激加孤养法(method of chronic unpredictable mild stress with isolated support)建立抑郁状态大鼠模型,模型组ig双蒸水,中药治疗组、西药对照组分别ig中药颐脑解郁方(6.2 g ·kg^-1)、西药氟西汀(剂量2.33 mg ·kg^-1),采用RT-PCR实验方法,测定PDE4(3',5'-cyclic-nucleotide phosphodiesterase)、CREB(cAMP response element binding protein)在抑郁模型大鼠脑内左前额叶皮质、海马的表达。结果: 模型组大鼠大脑额叶皮质及海马PDE4表达增强(P<0.05),CREB表达明显低于正常组(P <0.05,P<0.01);中药颐脑解郁方及西药氟西汀干预后,额叶前侧皮质及海马PDE4的表达较模型组有明显的降低(P<0.05,P<0.01)。CREB表达明显增高(P <0.05,P<0.01)。结论: 中药颐脑解郁方干预后可明显调节PDE4及CREB在抑郁大鼠脑内的表达,提示中药颐脑解郁方的抗抑郁作用可能与调节cAMP信号转导通路有关。     

基于16S rRNA测序比较探讨气虚证患者与健康人的肠道菌群的结构特征＊

目的 采用16S rRNA测序技术，检测比较气虚患者和健康人群的肠道菌群多样性、相对丰度及分布的差异。方法 选取在湖北省中医院就诊的气虚证患者20例为观察对象，以及同期健康志愿者10名作为对照。采用粪便基因组DNA提取试剂盒抽提HG和QD粪便样本中DNA，对V3-V4区进行PCR扩增，再进行文库构建和Illumina MiSeq测序。最后对数据进行生物信息学分析，探索气虚证人群肠道菌群的结构组成特征。结果 本研究共得到534个OTU。物种累积曲线表明本研究所收集的样本量充足。HG和QD两组alpha指数不存在明显差异（P＞0.05）。通过beta多样性分析可见，HG和QD两组肠道菌群构成存在一定差异。此外，QD组的Firmicutes/Bacteroides比值较健康人群升高。相较于HG，g_Odoribacter、蓝藻菌门、g_Anaerotruncus、c_Chloroplast、s_Clostridium_Methylpentosum和o_Streptophyta在QD中显著富集（P < 0.05）。结论 气虚证患者肠道菌群的组成结构与健康人群存在一定差异。在气虚证的发生发展中，肠道菌群的改变可能起到了重要作用。     

兰茵凤扬化浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠免疫调控机制的影响

目的:观察兰茵凤扬化浊解毒方对溃疡性结肠炎(UC)大鼠CD4-T淋巴细胞(CD4+)/CD29-T淋巴细胞(CD29+)、白细胞介素-8(IL-8)及白细胞介素-10(IL-10)表达的影响,以探讨其作用机制。方法:将60只雄性Wistar大鼠随机分为5组,每组12只,分别为正常组、模型组、兰茵凤扬化浊解毒方高剂量组、低剂量组(20.0,5.0 g·kg-1)、柳氮磺胺吡啶对照组(SPAP 0.3 g·kg-1组)。采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇法诱导溃疡性结肠炎模型,造模成功后分别ig给予相应的药物,连续14 d,观察各组大鼠一般情况以及疾病活动指数(DAI)评分、组织病理学、CD4+CD29+,IL-8,IL-10变化情况。结果:DAI评分:与正常组比较,其余各组均升高;与模型组比较,兰茵凤扬高、低剂量组均减低,结果均有统计学意义(P<0.05)。CD4+,CD29+:与模型组相比,对照组、中药高、低剂量组均降低,结果有统计学意义(P<0.05)。IL-8:与模型组相比,对照组、中药高、低剂量组均减低(P<0.05),而中药低剂量组与对照组比较无差异。IL-10:与模型组相比,中药高、低剂量组、对照组均升高(P<0.05)。结论:兰茵凤扬化浊解毒方可上调抑炎症因子、下调促炎症因子和抑制CD4+/CD29+的表达。     

基于微生物-脑-肠轴探讨益气解毒方抗缺血性脑卒中作用机制

目的：从微生物-脑-肠轴(MGBA)角度探讨益气解毒方(YQ)治疗缺血性脑卒中(IS)的可能作用机制。方法：将大鼠随机分为5组,每组6只,分别为假手术组、模型组、YQ低、中、高剂量组(1、5、25 mg˙kg^-1),除假手术组外,其余各组采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型。首先采用神经行为学评分判断是否建模成功并对YQ的缺血性脑卒中保护作用进行评价,再通过16S rDNA测序技术比较大鼠MCAO造模前后及YQ给药后肠道菌群的变化,并分析该方作用可能相关的生物学通路。最后通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17A(IL-17A)和白细胞介素-10(IL-10)的表达,通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测紧密连接蛋白ZO-1和Occludin在脑和肠组织中的表达,苏木素-伊红(HE)染色观察脑皮层区和结肠的病理变化,对可能的作用机制进行验证。结果：YQ显著提高了MCAO大鼠的神经行为学评分(P<0.01),对在急性期由于富集病原体和机会致病菌引发的肠道微生物紊乱起到了较好调节作...     

基于高通量测序技术的脾虚腹泻型肠易激综合征小鼠与健康小鼠肠道菌群的差异研究

目的:研究探讨基于16S rDNA基因测序技术的脾虚腹泻型肠易激综合征(Diarrhea-predominant irritable bowel syndrome,IBS-D)小鼠肠道菌群的变化情况.方法:选择20只清洁级幼龄ICR小鼠随机分为空白组(CK)与模型组(IBS-D)并建立脾虚型IBS-D小鼠模型,对2组小...