温阳、解郁及温阳解郁方对LPS“二次应激”诱发的抑郁样行为小鼠海马小胶质细胞的影响

目的 观察母婴分离（MS）联合脂多糖（LPS）应激后抑郁样行为小鼠海马区小胶质细胞活化及炎症因子的表达情况,从温阳、解郁及温阳解郁二方合用的角度探讨温阳解郁法抗抑郁的可能机制。方法 将70只仔鼠随机分为正常组（10只）、LPS应激组（LPS,10只）和造模组（MS,50只）,造模组小鼠在产后第5天（PD₅）-PD₁₄进行8 h·d^-1的母婴分离,后将造模组分为母婴分离+脂多糖应激组（MS+LPS）,温阳组（WY）,解郁组（JY）,温阳解郁组（WYJY）及氟西汀组（FLU）,每组10只。将仔鼠出生日期记为PD₀,正常,LPS及MS+LPS组小鼠于PD₂₁-PD₉₀饲喂正常饲料,其余各组给予对应的药混饲料喂养,且于PD₉₁给予脂多糖腹腔注射7 d,建立抑郁症小鼠模型。采用旷场,O迷宫和社会交互实验检测各组小鼠抑郁样行为;免疫组化法观察海马组织小胶质细胞钙结合蛋白-1（Iba-1）蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应法检测白细胞介素-1β（IL-1β）,白细胞介素-6（IL-6）,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,Iba-1及糖皮质激素受体（GR） mRNA表达量。结果 与正常组比较,LPS组小鼠5 min中心区停留时间有减少趋势、运动总路程显著减少（P<0.01）,活动总路程显著减少（P<0.01）,MS+LPS组小鼠开放臂活动时间及活动总路程明显减少（P<0.05,P<0.01）,训练、辨别探查时间显著升高（P<0.01）,LPS,MS+LPS组小鼠海马CA1区Iba-1表达显著升高（P<0.01）;与LPS组比较,MS+LPS组小鼠5 min运动总路程明显增长（P<0.05）,训练、辨别探查时间明显升高（P<0.05,P<0.01）,海马CA1区Iba-1表达显著升高（P<0.01）;与MS+LPS组比较,各给药组小鼠5 min运动总路程均明显减少（P<0.01）,训练探查时间均显著降低（P<0.05,P<0.01）,JY,WYJY,FLU组小鼠辨别探查时间均显著降低（P<0.01）,各给药组小鼠海马CA1区Iba-1表达显著降低（P<0.01）。结论 温阳解郁法可能通过抑制抑郁症小鼠海马区小胶质细胞的激活,降低IL-1β,IL-6,TNF-α等炎症因子的表达,进而抑制抑郁症发生及发展。     

温阳、解郁及温阳解郁方对母婴分离结合慢性神经疼痛应激小鼠疼痛敏感性及抑郁样行为的调节作用

目的 观察母婴分离小鼠给予慢性神经疼痛应激后的行为、痛阈改变,以及血清和中枢抑郁、疼痛相关指标的变化,以温阳方、解郁方、及温阳解郁方进行干预探讨温阳解郁法抗抑郁、改善疼痛敏感的可能机制。方法 以小鼠出生日为PD0,小鼠在出生后随机分为对空白组和母婴分离组,母婴分离组在PD5~14进行8 h·d^-1的母婴分离,离乳后将其分为母婴分离组、温阳组、解郁组、温阳解郁组和氟西汀组,每组15只,同时以15只未经母婴分离的同期雄性仔鼠作为空白组。空白组、母婴分离组小鼠于PD21~90以普通发育饲料喂养,余组分别以温阳方二仙汤、解郁方逍遥散、温阳解郁方及氟西汀药混饲料喂养（用药剂量分别为5.84、12.00、16.68 g·kg^-1及2.60 mg·kg^-1）。于PD91行坐骨神经结扎手术,建立母婴分离+慢性神经病理性疼痛模型。采用旷场实验观察各组小鼠抑郁样行为,测量机械痛阈和温度痛阈检测各组小鼠疼痛敏感性,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清皮质酮（CORT）、P物质及β-内啡肽（β-EP）含量,免疫组化检测杏仁核糖皮质激素受体（GR）和下丘脑β-EP蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测杏仁核糖皮质激素受体基因（Nr3c1）、FK506结合蛋白5基因（FKBP5）、代谢型谷氨酸受体5基因（GRM5）及脑源性神经营养因子（BDNF）mRNA的表达量。结果 与空白组比较,母婴分离组小鼠5 min旷场中心停留时间和运动总距离均显著减少（P<0.01）,机械痛阈显著降低（P<0.01）。血清CORT和β-EP均显著上升（P<0.01）,FKBP5 mRNA表达显著下降（P<0.01）。下丘脑β-EP表达上升,差异具有明显统计学意义（P<0.05）。与母婴分离组比较,各给药组5 min旷场中心停留时间均明显增加（P<0.05,P<0.01）,温阳组、温阳解郁组和氟西汀组小鼠在5 min旷场运动总距离明显增加（P<0.05,P<0.01）,各给药组痛阈均不同程度上调。解郁组小鼠血清CORT显著下降（P<0.01）,β-EP明显下降,但差异无统计学意义;BDNF mRNA显著上升（P<0.01）。温阳组小鼠Nr3c1及GRM5 mRNA均明显下降（P<0.05,P<0.01）。温阳解郁组小鼠血清CORT明显下降（P<0.05）,Nr3c1、GRM5及BDNF mRNA均下降（P<0.05,P<0.01）,差异具有明显统计学意义,各给药组下丘脑β-EP表达水平均有不同程度提升,但差异无统计学意义。温阳组、解郁组和温阳解郁组小鼠杏仁核GR表达水平均明显上升,差异具有明显统计学意义（P<0.05）。结论 温阳解郁方可通过增强杏仁核GR表达、抑制杏仁核区神经可塑性及兴奋性达到抑制中枢疼痛敏化和调节下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴功能,缓解抑郁行为和改善躯体疼痛过敏的作用。     

慢性束缚应激大鼠海马BDNF TrkB NT3的变化及逍遥散对其影响

目的：观察慢性束缚应激时大鼠海马BDNF、TrkB、NT，的变化及逍遥散对其影响。方法：用束缚的方法建立了应激模型。用心脏灌流的方法固定海马，切片后用免疫组织化学结合图像分析的方法观察了海马CA1区BDNF、TrkB、NT，变化情况。结果：发现海马中BDNF和NT3的阳性细胞数和积分光密度下降，TrkB阳性细胞数和积分光密度明显上升。逍遥散能不同程度的抑制海马中BDNF和NR阳性细胞数和积分光密度的下降以及TrkB阳性细胞数和积分光密度的上升。结论：BDNF、TrkB、NT3在慢性应激中发挥了重要作用，逍遥散可能正是通过它们的变化，作用于HPA轴引起机体免疫功能变化的。     

慢性束缚应激大鼠海马BDNF TrkB NT3的变化及逍遥散对其影响

目的:观察慢性束缚应激时大鼠海马BDNF、TrkB、NT3的变化及逍遥散对其影响.方法:用束缚的方法建立了应激模型,用心脏灌流的方法固定海马,切片后用免疫组织化学结合图像分析的方法观察了海马CA1区BDNF、TrkB、NT3变化情况.结果:发现海马中BDNF和NT3的阳性细胞数和积分光密度下降,TrkB阳性细胞数和积分光密度明显上升.逍遥散能不同程度的抑制海马中BDNF和NT3阳性细胞数和积分光密度的下降以及TrkB阳性细胞数和积分光密度的上升.结论:BDNF、TrkB、NT3在慢性应激中发挥了重要作用,逍遥散可能正是通过它们的变化,作用于HPA轴引起机体免疫功能变化的.     

慢性束缚应激大鼠脑区BDNF的变化及逍遥散对其调节作用

目的:研究慢性束缚应激时大鼠海马与杏仁体BDNF的变化,以及逍遥散对其影响。方法:以慢性束缚应激塑造肝郁证候模型,运用免疫组织化学、Western blot分析及RT-PCR等方法,从蛋白和基因水平,定位与定量相结合,检测BDNF表达水平。结果:在慢性束缚应激条件下,BDNF的表达发生变化,海马和杏仁核往往结果相反。结论:可能是它们由不同的机制控制所引起,而逍遥散对其有一定程度的逆转作用。     

慢性束缚应激大鼠海马CA1区L-ENK的变化及逍遥散的调节作用

目的：研究慢性束缚应激时大鼠海马CA1区L-ENK的变化以及逍遥散的调节作用.方法：用特制束缚架连续束缚7d与21d,每天3h的方法制作大鼠束缚应激模型,用免疫组织化学方法结合图像分析检测中枢（海马CA1区、齿状回、大脑皮层）L-ENK的变化.结果：大鼠海马CA1区L-ENK免疫反应阳性细胞的平均光密度、积分光密度、平均总面积、面密度和数密度等在造模7d时都有不同程度的增强,到造模21d时大鼠海马CA1区L-ENK有极显著性增强;7d与21d两模型组、四君子汤组及金匮肾气丸组大鼠CA1区L-ENK免疫反应积分光密度与逍遥散组比较显著增强,而逍遥散组和正常对照组相比则没有明显差异;可见逍遥散组对大鼠海马CA1区L-ENK的积分光密度有显著的影响.结论：逍遥散、四君子汤和金匮肾气丸对慢性束缚应激时海马CA1区有不同程度的调节作用,而以逍遥散作用为优.     

应激与胶质细胞功能的关系及中医药的调节作用

本文对各胶质细胞暴露在应激环境中的形态功能变化以及中医药对应激中各胶质细胞功能变化 的调节作用进行了总结,为开展以便为开展应激致病机制,及其中医药对应激致病的调节机制研究提供新的思路。     

慢性束缚应激大鼠海马CA1区L-ENK的变化及逍遥散的调节作用

目的:研究慢性束缚应激时大鼠海马CA1区L-ENK的变化以及逍遥散的调节作用。方法:用特制束缚架连续束缚7d与21d,每天3h的方法制作大鼠束缚应激模型,用免疫组织化学方法结合图像分析检测中枢（海马CA1区、齿状回、大脑皮层）L-ENK的变化。结果:大鼠海马CA1区L-ENK免疫反应阳性细胞的平均光密度、积分光密度、平均总面积、面密度和数密度等在造模7d时都有不同程度的增强,到造模21d时大鼠海马CA1区L-ENK有极显著性增强;7d与21d两模型组、四君子汤组及金匮肾气丸组大鼠CA1区L-ENK免疫反应积分光密度与逍遥散组比较显著增强,而逍遥散组和正常对照组相比则没有明显差异;可见逍遥散组对大鼠海马CA1区L-ENK的积分光密度有显著的影响。结论:逍遥散、四君子汤和金匮肾气丸对慢性束缚应激时海马CA1区有不同程度的调节作用,而以逍遥散作用为优。     

白芍总苷对母婴分离小鼠行为学与相关脑区小胶质细胞的影响

目的:通过观察行为学与相关脑区小胶质细胞标志物离子钙接头蛋白(ionized calcium-binding adaptor molecule,Iba)-1的表达情况,探讨白芍总苷(total glucosides of paeony,TGP)对母婴分离小鼠的影响.方法:选用出生后经过连续10 d、每天8 h母婴分离的...     

强心一号复方对脓毒症模型小鼠海马区小胶质细胞极化相关基因表达的影响

目的 探讨强心一号复方治疗脓毒症的可能作用机制.方法 36只雄性C57 BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、强心组,每组12只.假手术组不结扎穿刺.模型组和强心组采取盲肠结扎打孔法制备脓毒症模型.于造模后2h开始强心组小鼠给予1 g/(kg·d)强心一号复方灌胃,模型组和假手术组给予1 ml生理盐水灌胃,均每日1次,...     

从温阳解郁方研究谈抑郁症治疗用药思路

抑郁症是一种复杂的情感性精神障碍,中医临床治疗抑郁症多采用疏肝解郁的方法。课题组提出抑郁症存在阳气不足、气机不畅的病机,与早年创伤造成神经心理变化关系密切,治疗需温补阳气、行气解郁,并拟定了温阳解郁方。该方由温阳的二仙汤和解郁的逍遥散合方而成,通过选择母婴分离抑郁小鼠模型模拟早年创伤,并与温阳的二仙汤、解郁的逍遥散对比,发现温阳解郁方能够显著提高小鼠的活动性和环境探测能力,减少强迫游泳和悬尾实验中的不动时间,缓解趋暗和场景恐惧行为,增强社会交互和社会认知能力,改变趋向与回避决择反应的偏向,改善抑郁样行为和决择行为模式;降低小鼠血清皮质醇水平,抑制地塞米松/促肾上腺皮质激素释放激素（Dex/CRH）实验中皮质醇的高涨反应,上调海马区盐皮质激素受体（MR）和11β-羟基类固醇脱氢酶（11β-HSD2）表达,下调糖皮质激素受体（GR）和促肾上腺皮质激素释放激素受体1(CRHR1)表达,降低GR exon1甲基化程度和甲基化转移酶1(DNMT1)表达,恢复下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴功能和负反馈机制;上调海马区脑源性神经营养因子（BDNF）表达,增加突触后致密蛋白95(PSD95)和突触素...     

温阳解郁汤对皮质酮诱导的抑郁大鼠海马神经可塑性的影响

目的:通过建立肾阳虚型抑郁症大鼠模型,观察温阳解郁汤对大鼠海马组织结构的干预作用.方法:将105只SD大鼠随机分为正常组,模型组,氟西汀组(4.17 mg·kg-1),逍遥散组(1.88 g·kg-1)及温阳解郁汤低、中、高剂量组(1.25,2.50,5.00 g·kg-1),每组15只,除正常组外其他各组采用皮下注射...     

温阳解郁汤对抑郁模型大鼠的影响

目的:研究温阳解郁汤对慢性应激抑郁模型大鼠抑郁行为的影响。方法:选取120只雄性Wistar大鼠,随机分为6组:正常组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、温阳解郁汤高,中,低剂量组(8,6,4g·kg-1)和氟西汀组(3.33mg·kg-1)。所有大鼠ig给药,ig容量均为20mL·kg-1。同时,除正常组外,其余各组接受慢性不可预知温和刺激(CUMS)并孤养21d,在实验21d采用旷场实验(OFT)、强迫游泳实验(FST)和悬尾实验(TST)对大鼠行为进行评价,并于21d检测大鼠血清皮质酮(CORT),促肾上腺皮质激素(ACTH)水平。结果:模型组大鼠强迫游泳、悬尾不动时间(94±10),(90±9)s和穿格次数(11.4±3.5)次较正常组(19±5),(28±6)s,(48±10)次有明显改变(P<0.05)。与模型组比较,高、中剂量(8,6g·kg-1)温阳解郁汤组大鼠强迫游泳、悬尾实验不动时间减少(53±8),(47±7)s;(58±9),(50±9)s,(P<0.05);高剂量温阳解郁汤组大鼠旷场实验中穿格数增多(28.6±7.6)次,(P<0.05),血CORT和ACTH水平(246±21)μg·L-1,(234±19)ng·L-1较模型组(290±19)μg·L-1,(279±20)ng·L-1降低(P<0.05)。结论:温阳解郁汤具有改善CUMS大鼠抑郁行为的作用;温阳解郁汤能够降低抑郁模型大鼠升高的血皮质酮和促肾上腺皮质激素水平。     

抑郁症模型大鼠皮质、海马cAMP通路的信号表达及颐脑解郁方的干预作用

目的: 观察抑郁大鼠模型脑内环磷酸腺苷(cAMP)通路的表达及中药颐脑解郁方的干预作用。方法: Wistar大鼠分为正常组、模型组、中药颐脑解郁方组、西药氟西汀组。模型组、中药颐脑解郁方组、西药氟西汀组在 21 d内采用慢性不可预见的温和性应激加孤养法(method of chronic unpredictable mild stress with isolated support)建立抑郁状态大鼠模型,模型组ig双蒸水,中药治疗组、西药对照组分别ig中药颐脑解郁方(6.2 g ·kg^-1)、西药氟西汀(剂量2.33 mg ·kg^-1),采用RT-PCR实验方法,测定PDE4(3',5'-cyclic-nucleotide phosphodiesterase)、CREB(cAMP response element binding protein)在抑郁模型大鼠脑内左前额叶皮质、海马的表达。结果: 模型组大鼠大脑额叶皮质及海马PDE4表达增强(P<0.05),CREB表达明显低于正常组(P <0.05,P<0.01);中药颐脑解郁方及西药氟西汀干预后,额叶前侧皮质及海马PDE4的表达较模型组有明显的降低(P<0.05,P<0.01)。CREB表达明显增高(P <0.05,P<0.01)。结论: 中药颐脑解郁方干预后可明显调节PDE4及CREB在抑郁大鼠脑内的表达,提示中药颐脑解郁方的抗抑郁作用可能与调节cAMP信号转导通路有关。     

奔豚汤对慢性束缚应激小鼠焦虑的影响

目的:实验观察奔豚汤对慢性束缚应激诱导小鼠焦虑模型的影响,从中枢神经递质角度阐述奔豚汤抗焦虑的可能机制。方法:72只小鼠随机分为6组,分别为正常组,模型组,奔豚汤低、中、高剂量组(3.51,10.53,31.59 g·kg~(-1))和阳性药地西泮组(4 mg·kg~(-1)),各组均采用灌胃给药30 d。通过慢性束缚应激建立小鼠焦虑模型;自主活动检测、旷场实验、明暗箱实验和高架十字迷宫实验从行为学分析奔豚汤对焦虑小鼠行为学的保护作用;高效液相结合荧光检测器检测海马谷氨酸(Glu)和γ-氨基丁酸(GABA)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马内γ-氨基丁酸受体(GABAa-Rα5),GABA转运体-1(GAT-1)和GAT-3蛋白表达。结果:与模型组比较,奔豚汤高剂量可以明显提高旷场中央区域的时间(P0.05),增加在高架十字迷宫开臂停留时间和进入次数(P0.05),提高海马内GABA水平(P0.05),降低Glu水平(P0.05),且能够明显降低GAT-1和GAT-3蛋白表达(P0.05)。结论:奔豚汤能够改善慢性束缚应激诱导小鼠焦虑行为,可能是通过下调海马区GAT-1和GAT-3蛋白表达,进而调节中枢神经系统氨基酸类神经递质的含量。     

逍遥丸对慢性束缚应激小鼠行为学和神经递质含量的影响

目的:考察逍遥丸对慢性束缚应激小鼠行为学和脑内神经递质含量的影响。方法:采用每天束缚小鼠8 h,连续10 d,制备慢性束缚应激小鼠模型,正常组和模型组ig给予等体积蒸馏水,药物组给予逍遥丸按人临床用量换算成小鼠等效剂量1.365 g.kg-1的混悬液,均在束缚前1 h ig给药,连续12 d,于第11 d采用旷场实验测定小鼠的自发活动,第12 d采用酶联免疫法测定小鼠不同脑区神经递质含量。结果:小鼠每天束缚8 h连续10 d后,穿格次数和直立次数显著减少(P<0.05),同时,海马5-羟色胺(5-HT)、前脑去甲肾上腺素(NE)、加压素(AVP)含量和下丘脑组胺含量非常显著增加(P<0.01)。连续ig给予逍遥丸,可显著增加模型小鼠的穿格次数(P<0.05),显著减少模型小鼠脑内的5-HT,NE,AVP含量(P<0.01)及组胺含量(P<0.05)。结论:逍遥丸明显改善慢性束缚引起的小鼠行为学异常,下调脑内单胺类神经递质和AVP含量变化。     

母婴分离/社会击败应激抑郁症小鼠行为学与中枢神经递质的变化及温阳解郁复方的干预作用

目的:建立与验证母婴分离/社会击败应激抑郁症小鼠模型,并研究温阳解郁不同组方对抑郁症的干预效果。方法:用母婴分离与社会击败应激相结合的方法建立小鼠抑郁症模型,并用温阳解郁不同组方进行干预治疗。通过行为学实验(强迫游泳、鼠尾悬挂实验)验证模型,高效液相色谱法检测不同脑区单胺类神经递质的含量。结果:行为学实验结果表明,母婴分离/社会击败小鼠在强迫游泳与鼠尾悬挂实验中不动时间均明显延长。模型小鼠腹侧被盖核(VTA)区去甲肾上腺素(NE)水平明显上升,但未达到显著水平。温阳解郁不同组方均有不同程度的调整作用。结论:从行为学实验的结果看,母婴分离/社会击败模型存在着焦虑、抑郁状态,符合抑郁症模型标准。该模型并不存在神经递质含量的变化,这可能与模型本身的特点有关。     

龙牡皮炎方对特应性皮炎小鼠氧化应激的干预作用

目的：本研究观察龙牡皮炎方对2,4-二硝基氯苯(DNCB)诱导特应性皮炎(AD)的BALB/c小鼠模型氧化应激的干预作用并探讨其机制。方法：采用BALB/c小鼠背部皮肤DNCB致敏的方法建立AD模型。雄性BALB/c小鼠40只,随机分为空白组、模型组、维生素C组(0.5×10^-3 g·kg^-1)及龙牡皮炎方组(26 g·kg^-1)。除空白组外,模型组、维生素C组和龙牡皮炎方组小鼠分别采用背部外涂不同浓度DNCB致敏的方法诱导AD,空白组予基质外涂。分别于2%DNCB致敏后7 d及0.2%DNCB致敏后24 d开始灌胃给药,连续21 d。实验结束后直接观察各组小鼠皮损变化;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组小鼠血清中白细胞介素(IL)-4,肿瘤坏死因子(TNF)-α、免疫球蛋白E(Ig E)、活性氧(ROS)的水平;总抗氧化能力测定试剂盒-微量法(ABTS法)测定血清抗氧化能力(TAOC)的水平;采用苏木素-伊红(HE)染色观察皮损部位病理形态学改变;免疫组化法检测皮损部位胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)表达;...     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马Bcl-2,Bax,Caspase 8蛋白表达的影响

目的:探讨左归降糖解郁方(ZJJF)对糖尿病并发抑郁症(diabetes mellitus with depression,DD)大鼠海马B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱-天冬氨酸蛋白酶8(Caspase 8)蛋白表达的影响。方法:采用高脂乳剂灌胃、尾静脉注射链脲佐菌素(STZ,38 mg·kg-1)与慢性应激联合的方法复制DD模型,并随机分为3组:模型组,阳性药(二甲双胍0.18 g·kg-1+氟西汀0.0018 g·kg-1)组,ZJJF(32.82 g·kg-1)组,ig给药4周后,采用旷场实验(OFT)实验,观察各组大鼠行为学改变;采用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测模型大鼠海马Bcl-2,Bax,Caspase 8蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠OFT实验中活动总数明显减少(P0.01);与模型组比较,阳性药和ZJJF(32.82 g·kg-1)组大鼠自主活动次数明显增多(P0.01)。与正常组比较,模型组大鼠海马Bcl-2蛋白表达下降(P0.05),Bax,Caspase8蛋白表达显著升高(P0.01)。与模型组比较,阳性药组海马Bcl-2蛋白表达升高(P0.05),Bax,Caspase 8蛋白表达显著降低(P0.01)。与模型组比较,ZJJF(32.82 g·kg-1)组海马Bcl-2表达升高(P0.05),Bax,Caspase 8表达降低(P0.05,P0.01)。结论:ZJJF可改善糖尿病并发抑郁症大鼠抑郁行为异常,该作用可能与抑制神经细胞凋亡,保护海马有关。