消岩汤介导TNKS抑制肺腺癌细胞生长的初步探讨

[目的] 探讨端锚聚合酶（TNKS）在消岩汤抗肺腺癌细胞作用中的表达及意义。[方法] 采用免疫组织化学检测37例肺腺癌患者癌及癌旁组织中TNKS的表达情况。实时荧光定量聚合酶联反应（qRT-PCR）检测梯度浓度消岩汤处理肺腺癌A549细胞后,TNKSmRNA水平的表达;CCK-8法、γ-H2AX细胞免疫荧光、DNA修复试验分别检测各组A549细胞的增殖、DNA损伤及DNA修复能力,划痕实验及Transwell小室分别检测各组A549细胞的迁移及侵袭能力。[结果] 1）TNKS蛋白在肺腺癌组织中的阳性表达率为63.00%,在癌旁组织中阳性表达率为18.92%,差异有统计学意义（P<0.05）。2）随消岩汤浓度升高,A549细胞中TNKSmRNA水平的表达降低。3）当TNKS被下调时,A549细胞增殖活性降低,γ-H2AX表达增强,细胞DNA修复能力、迁移和侵袭能力受抑制,同样给予消岩汤处理细胞后,结果与TNKS下调组一致。[结论] TNKS与肺腺癌细胞的增殖、DNA损伤修复、迁移和侵袭密切相关,消岩汤抗肿瘤作用可能与下调TNKS的表达有关。     

白藜芦醇对氧糖剥夺过程中 H9C2 细胞的保护机制

〔摘 要〕 目的：白藜芦醇是一种具有生物活性的多酚类物质,生物学功能目前尚不清楚。本研究旨在探讨白藜芦醇对 氧糖剥夺（OGD）过程中心肌细胞损伤的保护机制。方法：采用大鼠心肌细胞 H9C2 细胞,建立 OGD 模型;经白藜芦醇干 预后,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的表达量,细胞活性检测试剂盒（CCK8） 检测细胞活性,Westernbolt、免疫荧光检测铁死亡相关蛋白的变化情况。结果：白藜芦醇能增强 OGD 诱导 H9C2 细胞中 SOD 的表达水平,降低 MDA 的表达,增强细胞活性,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）;同时白藜芦醇也能够显著提高 铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶 4（GPX4）和铁蛋白重链 1（FTH1）的表达,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。结论： 白藜芦醇通过降低氧化应激水平和减轻铁死亡来保护 OGD 条件下心肌细胞损伤。白藜芦醇可以作为一种预防心肌缺血 / 再 灌注（I/R）损伤的潜在药物。     

基于ceRNA探讨白藜芦醇干预肾透明细胞癌的有效机制

目的 利用从肾透明细胞癌（ccRCC）数据集中筛选的差异表达基因、差异lncRNA及其上游miRNA，探索白藜芦醇可能的作用靶点，构建ccRCC的ceRNA网络。方法 从基因表达综合数据（GEO）及转录组数据库（TCGA）中检索并筛选ccRCC基因及lncRNA表达数据集，对差异表达基因（DEGs）进行富集和功能注释，使用在线数据库预测miRNA及长链非编码RNA（lncRNA），通过加权基因共表达网络分析（WGCNA）鉴定该机制中可能的lncRNA，建立竞争性内源性RNA（ceRNAs）调控网络，并通过网络药理学分析确定白藜芦醇的药物靶点，探索白藜芦醇治疗ccRCC的分子作用机制。结果 构建了AL136040.1、SNHG17与上游hsa-miR-25-3p、hsa-miR-23a-3p及COL1A2、HRG的ceRNA调控网络，白藜芦醇与两个mRNA均显示良好的对接打分。结论 可能存在AL136040.1、SNHG17两个lncRNA与hsa-miR-25-3p、hsa-miR-23a-3p竞争性调控COL1A2、HRG，进一步影响ccRCC预后，可能是白藜芦醇治疗ccRCC的潜在机制。     

荷包牡丹碱诱导人肺腺癌细胞A549凋亡及其机制初探

 目的 探讨荷包牡丹碱对人肺腺癌细胞A549的增殖抑制作用并对其作用机制进行研究。方法 MTT比色法检测荷包牡丹碱在不同浓度及不同时间对人肺癌细胞A549的增殖抑制作用。利用TUNEL法探讨荷包牡丹碱诱导人肺腺癌细胞A549的凋亡效果;流式细胞术（FMC）测定荷包牡丹碱对A549肿瘤细胞周期的分布;比色法测定荷包牡丹碱对半胱天冬酶（caspase）-3蛋白活性的影响。结果 荷包牡丹碱对人肺腺癌细胞A549增殖抑制作用随着药物浓度的升高和作用时间的延长而增强;荷包牡丹碱对A549肿瘤细胞具有明显的凋亡效应;荷包牡丹碱与A549肿瘤细胞作用后,发生S期阻滞（P<0.05);荷包牡丹碱促使caspase-3蛋白活化(P<0.05)。结论 荷包牡丹碱能有效抑制人肺腺癌细胞A549的生长,使细胞周期阻滞在S期,进一步诱导其凋亡,并使caspase-3蛋白活化。caspase-3蛋白的激活可能在荷包牡丹碱诱导A549细胞凋亡过程中起重要作用。     

重楼皂苷Ⅰ激活Hippo信号诱导结直肠癌细胞凋亡及自噬的作用机制

目的 研究重楼皂苷Ⅰ（PPI）抑制结直肠癌细胞生长的作用及其分子机制。方法 培养RKO细胞，分为空白组和浓度为0.6、0.8、1.0 μmol·L^-1的PPI组，培养HRT18细胞，分为空白组，浓度为1.2、1.4、1.6 μmol·L^-1的PPI组，细胞增殖抑制实验、平板克隆形成实验及共聚焦高内涵细胞成像分析系统检测PPI对结直肠癌增殖及形态的影响；流式细胞术检测结直肠癌细胞凋亡率；pQCXIP-GFP-LC3质粒转染实验检测PPI处理后，结直肠癌细胞自噬体的形成情况；蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白胱天蛋白酶（Caspase）-3、Caspase-8和多腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）的表达、自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）的表达及Hippo信号通路蛋白大肿瘤抑制激酶1（LATS1）、Yes相关蛋白（YAP）的表达及磷酸化水平；plvx-Flag-YAP质粒转染实验，过表达YAP后，用PPI处理，细胞增殖毒性实验检测结直肠癌细胞增殖，蛋白免疫印迹法检测结直肠癌细胞LC3Ⅱ、PARP的表达；对SwissADME预测PPI的药代动力学参数。结果 与空白组比较，PPI组的结直肠癌细胞的存活率及克隆形成能力显著降低（P<0.01），并且PPI组的结直肠癌细胞的细胞面积显著降低，圆度显著升高（P<0.01）；与空白组比较，PPI组的结直肠癌细胞凋亡率显著增加（P<0.01），并且PPI组的结直肠癌细胞中凋亡蛋白Caspase-3及Caspase-8蛋白前体的表达降低，PARP切割显著增加（P<0.01）；与空白组比较，PPI组的结直肠癌细胞中自噬相关蛋白LC3Ⅱ的表达水平明显增加，并且促进自噬体的形成（P<0.01）；与空白组比较，PPI组的结直肠癌细胞中YAP蛋白的表达明显降低，并且磷酸化LATS1、YAP的表达显著升高（P<0.01）；与空白组比较，过表达YAP能显著拮抗PPI对结直肠癌细胞的凋亡自噬活化作用及增殖抑制作用（P<0.01）；SwissADME模拟结果显示PPI具有较好的类药活性。结论 PPI能通过靶向激活Hippo信号通路诱导结直肠癌细胞发生凋亡和自噬，进而抑制其增殖。     

重楼皂苷Ⅰ诱导G2/M期阻滞及干扰微管结构抗结肠癌HCT116细胞作用机制

目的：探讨重楼皂苷Ⅰ（PPI）对人结肠癌HCT116细胞周期的影响,并研究其作用机制。方法：采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测PPI对HCT116细胞的体外抑制活性;采用Hoechst33258染色法观察PPI对HCT116细胞核数量的影响;采用流式细胞仪检测PPI对HCT116细胞周期的影响;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶（CDC2）和细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C（CDC25C）蛋白的表达和活性,利用细胞免疫荧光和激光扫描共聚焦显微镜检测PPI对HCT116细胞微管的影响。结果：PPI以剂量-时间依赖的方式抑制HCT116的体外增殖,Hoechst 33258染色发现PPI处理组双核细胞数量明显增加（P<0.05,P<0.01）;将其细胞周期阻滞于G₂/M期;PPI未能抑制G₂/M期相关蛋白CDC2,CDC25C的表达和活性,却有促进作用;PPI可导致细胞微管结构紊乱。结论：PPI会导致HCT116细胞阻滞在G₂/M期,其作用机制与干扰细胞内微管结构有关。     

基于加权基因共表达网络分析（WGCNA）探讨龙葵抗肺腺癌功能基因模块及生物标记识别研究

目的 采用加权基因共表达网络分析（WGCNA）法探讨龙葵抗肺腺癌的潜在生物靶标。方法 基于中药系统药理学技术平台（TCMSP）及文献检索,以口服利用度（OB）、类药性（DL）构建龙葵活性成分数据库,采用DRAR-CPI服务器反向模拟分子-靶蛋白对接龙葵预测成分可能的作用靶标,并结合WGCNA挖掘在美国国立生物技术信息中心（NCBI）的GEO数据库中的GSE10072数据集得到共表达基因模块,并与龙葵预测靶标匹配映射,得到龙葵潜在抗肺腺癌靶点。将预测靶标与抗肺腺癌基因分别利用生物学信息注释数据库（Metascape）进行GO生物学过程富集分析和KEGG通路富集分析,并用STRING数据库结合Cytoscape软件可视化龙葵潜在抗肺腺癌靶点蛋白相互作用网络并进行网络拓扑学分析,同时构建龙葵活性成分-抗癌靶点-通路网络,探讨龙葵抗癌作用的机制。并通过UALCAN及Kaplan Meier plotter数据库分析关键基因在肺腺癌组织中转录水平的变化,通过KM plotter分析关键基因与肺腺癌患者预后的关系。结果 共收集龙葵活性成分9个,包括皮树脂醇、谷甾醇、薯蓣皂苷元、辣茄碱、槲皮素、α-茄碱、澳洲茄碱、澳洲茄边碱、澳洲茄胺,预测成分作用靶标271个,筛选龙葵潜在抗癌靶点41个,其潜在调控通路包括癌症通路、PI3K-Akt信号通路、化学物致癌作用、癌症的中心碳代谢等通路。由蛋白互作网络分析可得关键基因为EGFR、CASP8、HPGDS、FYN,且证实高表达的EGFR和CASP8、低表达的HPGDS及FYN与肺腺癌患者不良预后紧密相关。结论 龙葵抗肺腺癌具有多成分、多靶点、多途径作用的特点,为其抗癌物质基础及作用机制的阐明提供了科学依据。     

基于网络药理学和实验验证探讨缩泉丸用于小儿遗尿的作用机制

目的 采用网络药理学方法全面系统筛选缩泉丸治疗小儿遗尿的作用靶点及相关信号通路,并通过动物实验进一步明确其作用机制。方法 利用中药系统药理学数据库TCMSP筛选缩泉丸的有效化学成分,整合多种系统生物数据库构建“活性成分-疾病-靶点”网络关系,对共有蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络基因进行功能富集分析,对核心靶点进行动物实验验证。结果 缩泉丸包含32个活性成分,包括波尔定碱、去甲波尔定、乌药醇、谷甾醇等,这些活性成分与遗尿症相关的131个潜在靶点蛋白发生相互作用,其中包含14个核心靶点基因,抗利尿激素2型受体V2R（AVPR2）,神经营养酪氨酸受体激酶1（NTRK1）,多巴胺D2受体（DRD2）,μ阿片受体（OPRM1）,5-羟色胺受体1A（HTR1A）,5-羟色胺受体1B（HTR1B）,5-羟色胺转运体蛋白基因（SLC6A4）,α2A肾上腺素能受体（ADRA2A）,前列腺素内过氧化物合酶2（PTGS2）,胆碱能毒蕈碱M2受体（CHRM2）,多巴胺转运体蛋白基因（SLC6A3）,5-羟色胺受体6（HTR6）,去甲肾上腺素转运体基因（SLC6A2）和细胞色素P450 2C19（CYP2C19）等。富集分析主要涉及G蛋白偶联受体信号通路、跨突触信号调节、神经递质转运调节、神经活性配体-受体相互作用。实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹分析结果显示,缩泉丸能显著增强大鼠肾脏内AVPR2 mRNA和蛋白的表达,而减弱肾上腺组织中DRD2 mRNA和蛋白的表达。结论 缩泉丸中主要化学成分可能通过调节AVPR2,DRD2等关键基因,参与G蛋白偶联受体信号通路、跨突触信号调节、神经递质转运等生物过程来改善小儿遗尿。     

脾虚一号方对脾虚型功能性消化不良大鼠胃组织线粒体呼吸链复合物IV亚单位的影响

目的：探讨脾虚型功能性消化不良（FD）大鼠胃组织线粒体呼吸链复合物IV亚单位（COX VA）蛋白和mRNA表达及脾虚一号方对其的干预作用。方法： 70只7 d龄雄性SD大鼠随机分为正常组,FD模型组（单模型组）,脾虚型FD模型组（双模型组）,多潘立酮组,脾虚一号方低、中、高剂量组,每组10只。FD模型组、脾虚证FD模型组给予0.1%蔗糖碘乙酰胺蔗糖溶液灌胃,连续6 d。脾虚证FD模型组正常饲料喂养至6周龄后叠加改良小平台站立,连续14 d。造模结束后分别给予蒸馏水10 mL·kg^-1·d^-1,多潘立酮3.125 mg·kg^-1·d^-1,脾虚一号方1.275,2.55,5.1 g·kg^-1·d^-1,灌胃14 d。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）,蛋白质免疫印迹（Western blot）和免疫组化法检测胃窦组织COX VA mRNA与蛋白表达量。结果：与正常组比较,脾虚一号方高剂量组COX VA蛋白平均积分吸光度升高（P<0.05）;多潘立酮组、脾虚一号方低、中剂量组COX VA蛋白表达量均有不同程度降低（P<0.01）,而脾虚一号方高剂量组COX VA蛋白表达量则升高（P<0.01）;单模型组COX VA mRNA表达量升高最明显（P<0.01）。与双模型组比较,多潘立酮组、脾虚一号方低、中剂量组COX VA蛋白表达量均有不同程度降低（P<0.01）,多潘立酮组、脾虚一号方低、中剂量组COX VA mRNA表达量均有不同程度降低,而脾虚一号方高剂量组、单模型组则升高,差异均无统计学意义。结论：脾虚型FD大鼠存在COX VA蛋白的表达量降低,脾虚一号方能够增加COX VA蛋白的表达量,改善能量代谢。     

基于系统药理学的骨碎补治疗骨质疏松的通路及靶标探讨

[目的]通过系统药理学相关生物信息学分析方法探讨中药材骨碎补治疗骨质疏松的的生物学通路及靶标。[方法]通过中药系统药理学分析平台（TCMSP）数据库提取骨碎补的活性成分和有关的靶标蛋白。通过运用软件Cytoscape 3.5.1构筑骨碎补有效成分与靶标关系网络进行拓扑学分析。使用STRING数据库进行蛋白之间相互作用（PPI）网络的构筑与分析。借助David数据库进行KEGG通路功能富集分析。[结果]表明骨碎补的核心化合物有柚皮苷、圣草酚、山奈酚等,重要的靶标有前列腺素G/H合成酶2（Prostaglandin G/H synthase 2）、Heat shock protein HSP 90、Caspase-3等,骨碎补发挥生物学效应作用于骨质疏松症的关键蛋白主要有JUN、TP53、MAPK1、白介素-6（IL-6）、雌激素受体1（ESR1）等。KEGG结果表明骨碎补主要作用于TNF signaling pathway、T cell receptor signaling pathway、HIF-1 signaling pathway、PI3K-Akt signaling pathway、Estrogen signaling pathway等相关信号通路。[结论]骨碎补主要通过多种途径,多种信号通路作用于多种靶点发挥抗骨质疏松的生物学效用。     

基于网络药理学和实验验证探讨雷公藤红素抗血管重塑的作用机制

目的 基于网络药理学和实验验证探讨雷公藤红素抗血管重塑的潜在靶点和作用机制。方法 通过SwissTargetPrediction、PharmMapper数据库筛选出雷公藤红素作用靶点。采用NCBI Gene、GeneCards及OMIM数据库预测血管重塑相关靶点,聚焦共同靶标,借助Cytoscape 3.8.1及STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用（protein-protein interaction,PPI）并筛选核心靶点。通过构建体外血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）增殖模型和小鼠股动脉拉伤模型,考察雷公藤红素对VSMCs增殖、促炎细胞因子水平及关键靶点表达的影响。结果 共获得雷公藤红素靶点56个,血管重塑靶点737个,药物疾病共同靶点20个,核心靶点有细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、原癌基因c-Myc、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3）等。体外细胞实验表明,雷公藤红素显著抑制A7r5血管平滑肌细胞增殖能力（P<0.01）,显著下调cyclin D1、c-Myc、NLRP3和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（cystein-asparate protease-1,Caspase-1）的蛋白表达（P<0.05、0.01）。动物实验结果显示,雷公藤红素显著抑制股动脉拉伤小鼠模型股动脉NLRP3和Caspase-1的蛋白表达水平（P<0.01、0.001）,降低血清中白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）和IL-1β水平（P<0.01、0.001）。结论 雷公藤红素可抑制VSMCs增殖,减轻损伤血管的重塑,其作用机制可能与改善血管炎症有关。     

肺浸润性腺癌与肺微浸润性腺癌的 CT 诊断价值及影像学特征

〔摘 要〕 目的：探析肺浸润性腺癌与肺微浸润性腺癌采用计算机断层扫描（CT）的诊断价值及影像学特征。方法：选取 2020 年 1 月至 2022 年 6 月漳浦县医院收治的 138 例肺腺癌患者作为研究对象，按腺癌浸润程度的不同， 分为浸润组（68 例，肺浸润性腺癌患者）和微浸润组（70 例，肺微浸润性腺癌患者），均接受 CT 检查。观察 138 例 肺腺癌患者的检出情况及两组患者的 CT 征象。结果： CT 检查对肺腺癌不同浸润程度的诊断准确度为 97.83 %、灵敏 度为 97.06 %、特异度为 98.57 %、阳性预测值为 98.51 %、阴性预测值为 97.18 %。两组患者的边界、空泡、胸膜凹 陷检出情况比较，差异均无统计学意义（P ＞ 0.05）；浸润组 CT 检查性质呈混合性玻璃样（mGGO）、不规则形态、 有分叶、有毛刺的人数占比均高于微浸润组，差异均具有统计学意义（P ＜ 0.05）。结论：采用 CT 检查对肺浸润性腺癌、 肺微浸润性腺癌进行鉴别诊断的效果较好，两种疾病的影像学特征存在显著差异。     

温肾养血方调控PI3K/Akt/FoxO3A信号通路改善高龄雌鼠子宫内膜容受性的作用机制

目的 基于网络药理学和实验验证,探讨温肾养血方提高高龄雌鼠子宫内膜容受性的有效成分、作用靶点及可能的作用机制。方法 基于BATMAN-TCM和整合药理学平台对温肾养血方中的中药成分及药物靶标进行检索;以“anovulatory sterility”和“anovulatory infertility”为关键词,通过人类孟德尔遗传数据库（OMIM）和GeneCards数据库,对排卵障碍性不孕症靶标进行搜集;基于STRING数据库中的蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）数据库,并通过Cytoscape构建温肾养血方成分靶标及排卵障碍性不孕症靶标核心网络;基于DAVID数据库中基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）对共有靶标进行功能和通路分析,并建立“中药-成分-靶标-通路”分子网络,对核心靶点进行动物实验验证。结果 共获得化学成分253个,药物靶标326个,疾病靶标819个,共有靶标74个。GO和KEGG对共有靶标进行功能和通路分析结果显示,共有靶标主要参与了一氧化氮生物合成过程的正调控、细胞增殖的正调控、对雌二醇的反应、老化、氧化应激反应、血管生成等生物学过程。对GO过程中氧化应激反应以及KEGG前20中的5个重要通路进行分析,通过构建“中药-成分-靶标-生物学过程/通路”多维网络发现,共20种中药41种化学成分,这些成分通过影响35个靶标参与了低氧诱导因子-1（HIF-1）信号通路,肿瘤坏死因子（TNF）信号通路,叉头框蛋白O（FOXO）信号通路,Toll样受体（TLR）信号通路,磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路。动物实验结果显示,温肾养血方可提高高龄雌性ICR小鼠子宫磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）,磷酸化（p）-PI3K,Akt,p-Akt,叉头框蛋白O3A（FoxO3A）和p-FoxO3A的表达量。结论 温肾养血方通过影响Akt1,双氧化酶-2（DUOX2）,表皮生长因子受体（EGFR）,血红素加氧酶-1（HMOX1）,髓过氧化物酶（MPO）等靶标干预氧化应激及PI3K/Akt/FoxO3A信号通路提高高龄雌鼠子宫内膜容受性。     

中药复方益糖康对db/db小鼠认知障碍的改善及铁死亡的作用＊

目的 探讨中药复方益糖康对db/db小鼠认知缺陷的改善以及可能的机制。方法 选取24只db/db小鼠和8只db/m小鼠，随机分为四组：正常对照组（db/m组）、模型组（db/db组）、益糖康组（YTK组）以及西药（选用利拉鲁肽Liraglutide）对照组（LIRA组）。首先对小鼠空腹血糖（FBG）、血清胰岛素水平（FINS）和胰岛素抵抗指数（HOMA-RI）进行观察；通过Morris水迷宫任务和旷场实验对小鼠进行行为学检测；采用Nissl染色观察海马神经元Nissl小体数量，western blot检测突触后致密物质95（PSD 95）、突触素（SYN）以及脑源性神经营养因子（BDNF）蛋白观察海马的突触可塑性；通过透射电镜观察线粒体超微形态，免疫双标共染Cox1/Cox4观察线粒体功能变化，同时免疫荧光和western blot检测海马GPX 4、SLC7A11及Nrf 2蛋白的表达观察铁死亡。结果 与db/m组相比，db/db组小鼠FBG、FINS和HOMA-RI明显升高；水迷宫和旷场实验等行为学功能显著下降，Nissl小体形态及数量异常，同时PSD 95、SYN及BDNF蛋白表达量明显降低；海马神经元线粒体结构异常，Cox1、GPX 4、SLC7A11及Nrf 2表达明显下降，Cox4表达上升。与db/db组相比，LIRA组及YTK组FBG、FINS和HOMA-RI明显下降；两组水迷宫均有明显改善，YTK组旷场实验改善更为明显，同时两组小鼠Nissl小体及PSD 95、SYN和BDNF蛋白表达均有回升；两组小鼠海马神经元线粒体结构均有改善，Cox1、GPX 4、SLC7A11及表达明显上升，Cox4表达下降，YTK组Nrf 2表达升高，但LIRA组Nrf 2表达无统计学意义。结论 中药复方益糖康可以改善神经和突触可塑性损伤，保护认知功能，其机制可能是通过上调Nrf 2提高SLC7A11和GPX 4表达，改善线粒体结构和功能，抑制铁死亡。     

基于生物信息学和动物实验探讨泄浊解毒方调控铁死亡治疗溃疡性结肠炎的作用机制

目的 运用生物信息学的方法,筛选与溃疡性结肠炎（UC）密切相关的铁死亡差异基因（FRGs）,通过动物实验验证泄浊解毒方治疗UC的作用机制是否与调控细胞铁死亡相关。方法 从GEO数据库中获取UC患者结肠黏膜组织差异表达基因,与铁死亡基因取交集,获取FRGs,通过聚类分析、最小绝对收缩和选取算子（LASSO）回归和接收者操作特征曲线（ROC）曲线分析获取核心FRGs。动物实验采用2.5%的葡聚糖硫酸钠（DSS）自由饮方式制备UC小鼠模型,泄浊解毒方及美沙拉嗪灌胃7 d,苏木素-伊红（HE）染色观察结肠黏膜炎性浸润情况,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）方法检测结肠组织中E3泛素连接酶（FBXW7）、锌指蛋白（ZFP36）、溶质载体家族7成员11（SLC7A11）、Toll样受体4（TLR4）mRNA表达量;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织中FBXW7、ZFP36、SLC7A11、TLR4蛋白表达量。结果 从GEO数据库筛选出数据集GSE87466,与铁死亡基因取交集,得到21个FRGs,经过聚类分析及LASSO回归和ROC曲线分析后得到核心FRGs（FBXW7、ZFP36、SLC7A11、TLR4）,免疫浸润分析结果显示初始B细胞、M1型巨噬细胞、浆细胞、M2型巨噬细胞在UC小鼠结肠黏膜组织中表达差异具有统计学意义,核心FRGs与此类免疫细胞同样存在显著相关性。进一步通过动物实验发现,模型组小鼠结肠黏膜组织结构紊乱,大量炎性细胞浸润,经泄浊解毒方及美沙拉嗪治疗后各组小鼠结肠黏膜组织炎症反应情况均出现不同程度的缓解,泄浊解毒方高剂量组小鼠结肠黏膜几乎无炎症改变。与正常组比较,模型组FBXW7、ZFP36、SLC7A11、TLR4蛋白和mRNA的表达量显著升高（P<0.01）,经泄浊解毒方及美沙拉嗪治疗后,各组小鼠结肠黏膜中核心FRGs表达均显著下调（P<0.01）。结论 FBXW7、ZFP36、SLC7A11、TLR4是与UC发病密切相关的铁死亡基因,泄浊解毒方可通过下调铁死亡核心基因明显缓解小鼠结肠黏膜炎症反应。     

参附益心方对缺氧条件下大鼠原代心肌细胞线粒体DNA相关基因表达的影响＊

目的 研究参附益心方（SF）对缺氧条件下大鼠原代心肌细胞线粒体DNA相关基因表达的影响。方法 取1~3 d SD新生大鼠，分离、培养、鉴定原代心肌细胞。CCK-8检测SF、辅酶Q10（Coenzyme Q10）最适浓度。实验分为Normal（正常）组、Model（缺氧）组、SFL（参附益心方低剂量）组、SFH（参附益心方高剂量）组、Coenzyme Q10组，后三组在缺氧模型基础上分别给予SF 0.25 mg/ml、SF 0.5 mg/ml、Coenzyme Q10 10 1 × 10^-4 mol/L对细胞进行干预，收集细胞并用相关试剂盒检测ATP含量及乳酸脱氢酶（LDH）含量，RT-PCR检测ND-1、ND-2、COX、tfam基因的表达。结果 与Normal组相比，Model组心肌细胞ATP含量显著下降，LDH含量显著升高，ND-1、ND-2、COX、tfam基因表达显著降低，差异具有统计学意义(P ＜ 0.05)。与Model相比，SFL组LDH含量下降，ND-2、COX基因表达升高，差异具有统计学意义(P ＜ 0.05)；SFH组ATP含量升高，LDH含量下降，ND-1、ND-2、COX基因表达升高，差异具有统计学意义(P ＜ 0.05)。结论 参附益心方可上调原代心肌细胞线粒体DNA相关基因COX、ND1、ND2的表达，提高心肌ATP的含量，降低LDH含量，并呈剂量依赖性。     

氧化苦参碱通过调控RhoA/ROCK1/COX2/PGIS信号通路抑制野百合碱诱导的大鼠右心室心肌肥厚的作用＊

目的 本文探讨氧化苦参碱通过调控RhoA/ROCK/COX/PGIS信号通路对野百合碱致肺动脉高压大鼠右心室心肌肥厚抑制作用。方法 将50只雄性大鼠随机分为正常对照组、野百合碱组、氧化苦参碱组（25、50、100 mg·kg^-1）。野百合碱组及各用药组单次皮下注射野百合碱（60 mg·kg^-1），正常对照组给予等量的生理盐水，氧化苦参碱灌胃给药均在皮下注射野百合碱1 h后。4周后，分离大鼠右心室（RV）、左心室+室间隔（LV+S）并称重，计算RV/（LV+S）的比值；HE染色观察心肌病理变化；Western blot检测右心室组织中RhoA、ROCK1、ROCK2、COX1、COX2、PGIS蛋白的表达。结果 与正常组比较，野百合碱组大鼠终末体重显著降低，大鼠心脏肥厚指数显著增加；与野百合碱组相比，氧化苦参碱给药4周后能明显减小RV/（LV+S）的比值，增加终末体重，改善右心室病理变化，明显降低右心室组织中RhoA、ROCK1、COX2、PGIS的表达水平。结论 氧化苦参能够抑制野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠右心室重构，其机制与抑制RohA/ ROCK1/COX2/PGIS通路有关。     

补阳还五汤对特发性肺纤维化大鼠Keap1/Nrf2/HO-1抗氧化信号通路的影响

目的 观察补阳还五汤对特发性肺纤维化（IPF）大鼠Kelch样ECH相关蛋白1（Keap1）/核因子E₂相关因子2（Nrf2）/血红素氧合酶-1（HO-1）抗氧化信号通路的影响，探讨该方干预IPF的作用机制。方法 将40只SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法分为假手术组、模型组、补阳还五汤组、尼达尼布组，每组10只。除假手术组外，其余各组气管内滴注博来霉素（0.005 g·kg^-1）制备IPF大鼠模型。补阳还五汤组灌服补阳还五汤煎液（14.84 g·kg^-1），尼达尼布组灌服尼达尼布混悬液（0.1 g·kg^-1），假手术组、模型组灌服等容积生理盐水，共28 d。肺功能检测后，取血清及肺组织。苏木素-伊红（HE）染色和马松（Masson）染色观察肺组织病理改变并行半定量分析；检测肺组织羟脯氨酸（HYP）含量；测定血清和肺组织丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）活性；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）、免疫组化和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测Keap1、Nrf2、HO-1 mRNA与蛋白表达情况。结果 与假手术组比较，模型组大鼠呼吸系统阻力和弹力增高，顺应性显著降低（P<0.01）；肺指数和病理评分、HYP含量显著升高（P<0.01）；血清和肺组织MDA含量增加，SOD、GSH-Px、CAT活性显著降低（P<0.01）；肺组织Keap1 mRNA与蛋白表达降低，Nrf2、HO-1 mRNA与蛋白表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较，补阳还五汤组大鼠呼吸系统阻力和弹力下降，顺应性显著升高（P<0.01）；肺指数、病理评分、肺组织HYP含量显著降低（P<0.01）；血清和肺组织MDA含量下降、SOD、GSH-Px、CAT活性显著升高（P<0.01）；肺组织Keap1表达降低，Nrf2、HO-1表达升高（P<0.05，P<0.01）。结论 补阳还五汤可启动Keap1/Nrf2/HO-1介导的抗氧化效应，增强机体抗氧化能力，延缓IPF大鼠病理进程。     

鸦胆子苦醇通过Nrf2/HO-1通路诱导细胞铁死亡抑制胃癌细胞HGC-27增殖

目的 观察鸦胆子苦醇对人胃癌HGC-27细胞增殖的影响及其作用机制。方法 采用细胞增殖与活性检测法（CCK-8）检测不同浓度鸦胆子苦醇对HGC-27细胞增殖的影响;鸦胆子苦醇（7.5、15、30 μmol·L^-1）作用于HGC-27细胞24 h,分析细胞克隆形成情况;活性氧荧光探针（DCFH-DA）检测细胞内活性氧（ROS）水平,脂质过氧化荧光探针（C11-BODIPY）检测细胞内脂质过氧化水平,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测胱氨酸/谷氨酸逆向转运蛋白溶质载体家族7成员11（SLC7A11）、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、胱氨酸/谷氨酸逆向转运蛋白溶质载体家族40成员1（SLC40A1）、转铁蛋白（TRF）、核因子E₂相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶-1（HO-1） mRNA水平和蛋白表达情况。结果 与空白组比较,随鸦胆子苦醇药物浓度增大,HGC-27细胞存活率逐渐降低,其半数抑制浓度（IC₅₀）为15.34 μmol·L^-1;鸦胆子苦醇组（7.5、15、30 μmol·L^-1）细胞克隆形成明显减少（P<0.05,P<0.01）,呈现浓度依赖性。与空白组比较,鸦胆子苦醇组（7.5、15、30 μmol·L^-1）细胞内ROS,脂质过氧化水平,细胞内铁离子浓度及细胞乳酸脱氢酶（LDH）泄漏均明显升高（P<0.05,P<0.01）,呈现浓度依赖性。与空白组比较,鸦胆子苦醇组（15、30 μmol·L^-1）SLC7A11、GPX4、SLC40A1的mRNA水平和蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,TRF mRNA水平及蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）,且呈浓度依赖性。与空白组比较,鸦胆子苦醇组（15、30 μmol·L^-1）Nrf2和HO-1 mRNA水平和蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,且呈浓度依赖性。结论 鸦胆子苦醇可能通过抑制Nrf2/HO-1通路诱导铁死亡抑制HGC-27细胞增殖。     

消岩汤通过WNT通路抑制肺腺癌A549细胞增殖、促进细胞凋亡的机制研究

[目的] 探讨扶正祛瘀解毒法经典用药消岩汤抑制人肺腺癌A549细胞增殖、促进细胞凋亡的可能机制。[方法] 体外培养A549细胞,乳酸脱氢酶（LDH）、CCK8、流式细胞术检测对照组、消岩汤组、消岩汤加WNT通路激动剂组、WNT通路抑制剂XAV939组、单独WNT通路激动剂组细胞毒性、存活率和凋亡率。通过聚合酶链式反应（RT-PCR）测定对照组、消岩汤组和WNT通路抑制剂XAV939组中WNT通路相关基因β-catenin、c-myc,凋亡相关基因Bcl-2、Caspase-3表达情况;通过荧光素酶报告基因检测反应WNT通路活性。[结果] 消岩汤可以抑制A549细胞的增殖,促进细胞凋亡,而消岩汤加WNT通路激动剂组可以减弱以上作用;同时消岩汤可以显著降低A549细胞中β-catenin、c-myc的表达水平,抑制WNT通路活性,并通过降低Bcl-2表达、增强Caspase-3表达来促进了肿瘤细胞凋亡。[结论] 扶正祛瘀解毒法消岩汤可以抑制A549细胞的增殖、促进凋亡,其作用机制可能是抑制WNT通路活性。