风湿祛痛胶囊对VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的:观察风湿祛痛胶囊对血管内皮细胞生长因子(VEGF)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖、迁移、黏附、侵袭和管腔形成能力的影响,以及对VEGF受体2(VEGFR2)的干预作用。方法:VEGF体外诱导HUVEC,加入风湿祛痛胶囊低、中、高质量浓度(0. 02,0. 1,0. 5μg·L-1)作用后,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法、转移小室(transwell)法、黏附实验、细胞侵袭及管腔形成实验检测HUVEC的增殖活性、迁移、黏附、侵袭及管腔形成能力,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中VEGFR2磷酸化水平和蛋白含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测VEGFR2 mRNA表达水平。结果:与正常组比较,VEGF诱导24,48 h后均能显著升高HUVEC的增殖活性(P 0. 01),诱导24 h能明显升高HUVEC的迁移、黏附、侵袭和管腔形成能力(P 0. 01),显著升高HUVEC中VEGFR2磷酸化及蛋白和mRNA表达水平(P 0. 01);与VEGF组比较,风湿祛痛胶囊低、中、高质量浓度组作用48 h均能明显抑制HUVEC增殖活性(P 0. 05,P 0. 01),作用24 h对VEGF诱导的HUVEC迁移、黏附、侵袭和管腔形成能力有明显抑制作用(P 0. 05),也能下调VEGFR2磷酸化及蛋白和mRNA表达水平(P 0. 05)。结论:风湿祛痛胶囊能降低VEGF诱导的HUVEC细胞增殖、迁移、黏附、侵袭及管腔形成能力,这一作用可能与其抑制VEGFR2的磷酸化、蛋白和mRNA表达水平有关。     

防己黄芪汤对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞功能的影响

目的 探讨防己黄芪汤(Fangji Huangqi Decoction,FHD)对体外滑膜成纤维细胞MH7A增殖、迁移、侵袭、黏附以及分泌炎症因子功能的影响.方法 通过MTT比色法,观察不同浓度防己黄芪汤(0.25,0.5,1g·L-1)对MH7A细胞增殖的影响,后续使用TNF-α体外诱导MH7A细胞,通过划痕修复、T...     

益气除痰方对缺氧人脐静脉内皮细胞迁移和侵袭能力的影响

目的探讨益气除痰方(YQCTF)对缺氧人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法采用氯化钴(Co Cl2)化学诱导建立细胞缺氧模型,加入不同浓度YQCTF干预,设HUVEC常氧(Norm)组,缺氧造模(Hyp)组,缺氧+YQCTF低、中、高剂量(L、M、H)组。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测HUVE活力;流式细胞术检测细胞周期;划痕实验测定细胞修复迁移能力;Transwell小室实验测定细胞侵袭能力;Western Blot法检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、粘着斑激酶(FAK)、p-ERK、p-FAK的蛋白水平;qPCR法检测HIF-1α、GRP78、ERK1、ERK2、FAK的mRNA表达水平。结果 Norm组与Hyp组比较,Hyp组HUVEC无明显细胞增殖(P0.05),但细胞迁移和侵袭能力增强(P0.05),上调HIF-1α、GRP78、ERK、FAK蛋白表达(P0.05,P0.01)及基因mRNA表达(P0.01),ERK、FAK磷酸化水平增强(P0.01);与Hyp组比较,YQCTF可明显抑制缺氧HUVEC增殖(P0.01,P0.05),抑制细胞周期有丝分裂(P0.05,P0.01),降低细胞迁移和侵袭能力(P0.01),并可下调HIF-1α、GRP78、ERK、FAK蛋白和基因mRNA表达水平(P0.05,P0.01),降低ERK、FAK磷酸化水平(P0.05,P0.01),并呈剂量依赖性。结论 YQCTF可抑制缺氧诱导的HUVEC迁移和侵袭,可能与其调控HIF-1α、GRP78、ERK、FAK的蛋白和基因mRNA表达水平有关。     

人脐静脉内皮细胞与成骨细胞共培养对成骨细胞功能的影响

目的:建立人脐静脉内皮细胞与人成骨细胞共育系,观察人脐静脉内皮细胞在共育系中对人成骨细胞功能的影响,进一步探讨人脐静脉内皮细胞对成骨细胞骨形成能力的影响。方法:采用二维共培养模型建立人内皮细胞/成骨细胞(1∶1)共育系,运用噻唑蓝比色法(MTT),分别在1d、3d、5d、7d时观察人脐静脉内皮细胞与成骨细胞单体培养以及共育系中的增殖情况;同时,运用蛋白免疫印迹方法(In cell western blot)分别测定人成骨细胞单体培养和共育系中骨保护素/破骨细胞分化因子配体(OPG/RANKL)蛋白的表达情况。采用方差分析比较不同状态下细胞增殖能力和蛋白表达的差异性。结果:从第3天开始,共育系中人成骨细胞的增殖能力明显优于成骨细胞单体培养;两者比较差异有统计学意义(P<0.05);于细胞培养第8天时分别测定人成骨细胞单体培养组和共育系中OPG/RANKL蛋白的表达,观察到共育系中(10.82±1.08)OPG蛋白表达量明显优于人成骨细胞单体培养组(6.65±0.43),两者比较差异有统计学意义(P<0.05);而共育系中(7.33±0.22)RANKL蛋白的表达含量与人成骨细胞单体培养(7.37±0.85)时表达无差异。结论:人脐静脉内皮细胞与人成骨细胞具有良好的相容性,两种细胞之间具有相互协同效应;人脐静脉内皮细胞可能通过促进OPG蛋白的表达来促进成骨细胞骨形成的作用。     

不同剂量黄芪组方的防己黄芪汤对正常小鼠免疫功能的影响

用MTT比色分析法、YC花环法、EA花环法和称重法研究了不同比例量黄芪（6％、18％、54％）组方的防己黄芪汤对正常小鼠腹腔MΦ吞噬功能、T细胞功能和体重的影响。结果显示防己黄芪汤可增强腹腔MΦ吞噬活性、腹腔MΦ－C3b受体和MΦ－Fc受体活性，提高ConA诱导的T细胞转化率，减轻小鼠的体重；18％黄芪含量（原方）免疫调节作用最强。     

黄芪多糖对高血压病血瘀证患者血清损伤的人脐静脉内皮细胞形态学、活性的影响

目的:观察黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)对高血压病血瘀证患者血清损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)形态学、活性的影响。方法:将培养的高血压病血瘀证患者血清损伤的HUVEC-C分别用不同浓度的APS含药血清干预后,倒置显微镜下观察其形态学变化,MTT法检测其活性。结果:APS呈剂量依赖性升高损伤的细胞OD值,且随着药物组浓度的增加,细胞的形态趋向正常细胞。结论:APS能够抵抗高血压病血瘀证患者血清中有害因子对HUVEC-C的损伤作用,能增强细胞的活性和维持细胞的形态结构,并呈剂量依赖性。     

益气除痰方对缺氧人脐静脉内皮细胞迁移和侵袭能力的影响北大核心CSCD

目的探讨益气除痰方(YQCTF)对缺氧人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法采用氯化钴(Co Cl2)化学诱导建立细胞缺氧模型,加入不同浓度YQCTF干预,设HUVEC常氧(Norm)组,缺氧造模(Hyp)组,缺氧+YQCTF低、中、高剂量(L、M、H)组。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测HUVE活力;流式细胞术检测细胞周期;划痕实验测定细胞修复迁移能力;Transwell小室实验测定细胞侵袭能力;Western Blot法检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、粘着斑激酶(FAK)、p-ERK、p-FAK的蛋白水平;qPCR法检测HIF-1α、GRP78、ERK1、ERK2、FAK的mRNA表达水平。结果 Norm组与Hyp组比较,Hyp组HUVEC无明显细胞增殖(P>0.05),但细胞迁移和侵袭能力增强(P<0.05),上调HIF-1α、GRP78、ERK、FAK蛋白表达(P<0.05,P<0.01)及基因mRNA表达(P<0.01),ERK、FAK磷酸化水平增强(P<0.01);与Hyp组比较,YQCTF可明显抑制缺氧HUVEC增殖(P<0.01,P<0.05),抑制细胞周期有丝分裂(P<0.05,P<0.01),降低细胞迁移和侵袭能力(P<0.01),并可下调HIF-1α、GRP78、ERK、FAK蛋白和基因mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01),降低ERK、FAK磷酸化水平(P<0.05,P<0.01),并呈剂量依赖性。结论 YQCTF可抑制缺氧诱导的HUVEC迁移和侵袭,可能与其调控HIF-1α、GRP78、ERK、FAK的蛋白和基因mRNA表达水平有关。     

奇智方对人脐静脉内皮细胞ICAM-1和ICAM-1mRNA表达的影响

目的采用人脐静脉内皮细胞（HUVEC-304）进行细胞间黏附分子-1（ICAM-1）及其转录水平（ICAM-1mRNA）表达的离体实验研究,观察奇智方对血管内皮功能的作用。方法应用ELISA方法检测ICAM-1;用原位杂交的方法检测ICAM-1 mRNA。结果中药治疗组和阳性对照组与生理盐水组比较,ICAM-1蛋白分子表达均有统计学意义（P〈0．01）;中药治疗组和阳性对照组均能明显使缺氧／复氧后细胞ICAM-1 mRNA下调,与缺氧组比较有统计学意义（P〈0．01）。结论奇智方抑制缺氧／复氧后血管内皮细胞表达ICAM-1和ICAM-1 mRNA,从而保护血管内皮细胞的屏障完整和功能正常,可能是其免疫抑制机理的分子基础之一。     

四妙勇安汤对缺氧人脐静脉内皮细胞的影响

目的观察四妙勇安汤对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧损伤模型的影响。方法实验分为3组,即正常组、模型组、四妙勇安汤组,后2组建立体外细胞缺氧模型,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验观察四妙勇安汤对缺氧内皮细胞存活率的影响,测定四妙勇安汤对缺氧内皮细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量的影响,并用免疫荧光法检测细胞中血管内皮生长因子(VEGF)生成量的表达。结果四妙勇安汤能显著增加MTT实验中各孔吸光度值,降低LDH漏出量,增加VEGF的生成量。结论四妙勇安汤具有保护缺氧的HUVEC损伤的作用,其作用机制与增加细胞活性、降低缺氧造成的细胞毒性、增加VEGF的表达、促进血管新生的作用有关。     

黄芪对晚期糖基化终末产物作用下人脐静脉内皮细胞的影响

目的:研究黄芪对晚期糖基化终末产物(AGEs)作用下人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和损伤的影响。方法:采用MTT比色法,观察黄芪对体外AGEs培养的人脐静脉内皮细胞增殖的影响;以内皮细胞膜与Alcain Blue(AB,阿利新蓝)结合量为指标,观察黄芪对AGEs导致的人脐静脉内皮细胞损伤的影响;利用AO/EB染料诱导AGEs作用下的人脐静脉内皮细胞,并利用荧光显微镜观察黄芪的抑制作用。结果:黄芪对人脐静脉内皮细胞增殖有抑制作用,可对抗AGEs导致的内皮细胞膜负电荷减少,并且对抗AGEs诱导凋亡的作用,对内皮细胞有保护作用。结论:黄芪是晚期糖基化终末产物的拮抗剂,可有效抑制人脐静脉内皮细胞增殖并有细胞保护作用。     

痰瘀同治方药物血清对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的影响

目的观察痰瘀同治方对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的影响,探讨其促血管生成作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞模型,大鼠连续5 d灌胃不同剂量的痰瘀同治方(78.0、39.0、19.5 g/kg)制备各剂量药物血清,采用MTT法检测细胞活力来反应其增殖能力,用细胞划痕实验观察给药后细胞迁移能力。结果与正常组比较,490 nm处吸光度痰瘀同治方高、中剂量组内皮细胞增殖能力明显增强(P0.01),增殖率分别为49.78%、33.92%;内皮细胞迁移能力也有提高,划痕区相对距离明显减少(P0.01),细胞迁移率分别增加11.36%、11.62%。结论痰瘀同治方对人脐静脉内皮细胞有促进增殖和迁移的作用。     

蛇毒三肽pENW对LPS诱导人脐静脉内皮细胞中NOS表达的影响

目的:探讨焦谷氨酸-天冬酰胺-色氨酸(蛇毒三肽p ENW)对体外脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护机制。方法:采用LPS(1 mg·L-1)模拟人脐静脉内皮细胞炎症损伤模型,实验分为空白组、LPS模型组、蛇毒三肽p ENW高、中、低剂量组(10-4,10-5,10-6mol·L-1)、N-甲基-L-精氨酸组(L-NMMA,5×10-4mol·L-1);除空白组外,其余各试验组加入LPS,蛇毒三肽p ENW高、中、低剂量组和L-NMMA组同时给予不同浓度的药物,孵育24 h后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测人脐静脉内皮细胞活力;Griess Reagent法用于检测一氧化氮(NO)的含量;比色法测定一氧化氮合酶(NOS)分型的活力;Western blot分析内皮型一氧化氮合酶(e NOS),诱导型一氧化氮合酶(i NOS)蛋白表达的变化。结果:与空白组比较,模型组LPS显著性损伤人脐静脉内皮细胞并诱导NO大量释放,t NOS,i NOS的活性明显增强(P0.01),i NOS蛋白表达显著上调(P0.01),e NOS的活性和蛋白表达并无差异;与模型组比较,蛇毒三肽p ENW高、中、低剂量能够剂量依赖性的抑制LPS对人脐静脉内皮细胞的损伤,并且能够明显降低NO的释放,同时,蛇毒三肽p ENW高、中、低剂量能够降低LPS诱导人脐静脉内皮细胞中的t NOS,i NOS的活性及i NOS的蛋白表达(P0.05,P0.01),与L-NMMA组作用一致,但蛇毒三肽p ENW对人脐静脉内皮细胞中e NOS的活性及蛋白表达无显著性影响。结论:蛇毒三肽p ENW可降低LPS对人脐静脉内皮细胞的损伤作用,其保护机制可能与逆转LPS诱导的i NOS蛋白表达上调及NO的释放相关。     

芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的 研究芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的增殖作用。方法 采用血清药理学和体外培养HUVEC的方法,通过倒置显微镜观察、MTT法和流式细胞术（FCM）检测芎芍胶囊高、中、低3个浓度含药血清对HUVEC增殖的影响。结果 MTT法检测结果显示高、中、低剂量的芎芍胶囊含药血清均有促进HUVEC增殖的作用,增殖率分别为54．14％、54．98％、33．77％;FCM法检测发现高、中、低剂量芎芍胶囊含药血清均可增加S期细胞比例,分别为52．14％、42．65％、37．08％;显微镜观察结果也显示各含药血清具有促进HUVEC增殖的作用。结论 芎芍胶囊能促进HUVEC的增殖,其促进细胞增殖的作用与浓度有一定的关系;提示芎芍胶囊的促血管新生作用可能是通过促进血管内皮细胞的增殖。     

通络宁心方对人脐静脉内皮细胞保护作用的实验研究

目的观察通络宁心方对人脐静脉内皮细胞分泌作用的影响。方法体外培养人脐带静脉内皮细胞;分别制备通络宁心方煎剂、复方丹参滴丸含药动物血清,随机分为正常组、模型组、治疗组(大、中、小剂量)、对照组(大、中、小剂量)8组。除正常组外,其余7组予H2O2造模,治疗组、对照组分别予大、中、小剂量含药血清,分别检测一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、P-选择素(Ps)指标。结果模型组NO含量显著低于正常组、治疗及对照大、中、小剂量组;模型组ET-1含量显著高于治疗及对照大、中、小剂量组;模型组Ps含量显著高于正常组,治疗中、小剂量组,对照大、中剂量组,与治疗大剂量、对照小剂量组比较,无显著性差异。结论通络宁心方对血管内皮细胞分泌作用的影响与复方丹参滴丸有同一性,均能对抗H2O2对血管内皮细胞的损伤。     

葛根素对氧自由基培养的人脐静脉内皮细胞非对称型二甲精氨酸代谢的影响

目的:观察氧自由基(OFR)对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)产生内源性一氧化氮合酶抑制剂——非对称型二甲基精氨酸(ADMA)的影响及葛根素的干预作用。方法:以黄嘌呤氧化酶作用于次黄嘌呤产生的 OFR 作用于培养的 HUVECs;并加用葛根素进行干预,以高效液相色谱法(HPLC)和经流式细胞仪检测细胞培养液中 ADMA、L-arg 和细胞内游离钙水平,并测定一氧化氮(NO)及内皮素(ET)的含量。结果:OFR 使培养液中 ADMA、ET 含量显著增加,而 NO 水平则降低,并使胞质内[Ca~(2+)]i 浓度升高;加用葛根素后,ADMA 明显减少,NO 合成增加,细胞内[Ca~(2+)]i 显著降低。结论:OFR 能通过增加 ADMA 使NO 合成减少,葛根素能通过减少 ADMA 而抑制 OFR 导致的内皮细胞功能障碍。     

导痰汤对人脐静脉内皮细胞细胞间黏附分子1和p53表达的影响

目的:通过研究导痰汤干预细胞间黏附分子1(ICAM-1)与p53的表达,分析导痰汤治疗动脉粥样硬化的机制。方法:人脐静脉内皮细胞(HUVEC),传代培养1～3代用于实验。含药血清的制备为将导痰汤按照0.9 g.kg-1.d-1剂量给SD大鼠ig 10 d后,经腹主动脉采血,分离血清。实验共分7组:正常HUVEC为空白对照组,不含药血清处理HUVEC为空白血清对照组,肿瘤坏死因子α(TNF-α,200 U.mL-1)预处理HUVEC为TNF-α诱导组,先采用5%(0.015 g.mL-1),10%(0.03 g.mL-1),20%(0.06 g.mL-1)含药血清预处理HUVEC,再与TNF-α共培养为5%,10%,20%导痰汤组,使用p53特异性阻滞剂PFT-α(0.009 g.mL-1)处理HUVEC为PFT-α阻滞组。通过PCR和Western blot等方法,观察导痰汤对TNF-α刺激脐静脉内皮细胞培养内皮细胞ICAM-1 mRNA的表达和p53表达的影响。结果:①TNF-α诱导组ICAM-1 mRNA和p53 mRNA的表达显著高于正常对照组和导痰汤对照组(P<0.01);使用导痰汤含药血清或PFT-α处理后,ICAM-1和p53 mRNA的表达显著下降(P<0.05);②TNF-α诱导组ICAM-与p53蛋白显著高于正常对照组和导痰汤对照组(P<0.01)。使用导痰汤含药血清或PFT-α处理后,ICAM-1与p53表达显著下降(P<0.05);③p53 mRNA与ICAM-1 mRNA表达水平呈显著正相关(r=0.981,P<0.01);p53活性与ICAM-1水平呈显著正相关(r=0.854,P<0.01)。结论:导痰汤可以通过调节p53表达而抑制TNF-α刺激所致的脐静脉内皮细胞ICAM-1 mRNA的表达,故能起到治疗动脉粥样硬化的作用。     

葛根总黄酮对氧化应激损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用及其机制

目的:研究葛根总黄酮对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化应激损伤的影响,并探讨其相关的作用机制。方法:以HUVECs为研究对象,实验分为空白组、模型组、阳性药组(10μmol·L~(-1)依达拉奉)和葛根总黄酮10,20,40,80,160 mg·L~(-1)组;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测葛根总黄酮对HUVECs的保护作用,采用分光光度法测定细胞培养上清液中细胞内超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)及NO含量;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清液中内皮素-1(ET-1)含量;采用二氯荧光乙酰乙酸盐(DCFH-DA)法检测活性氧(ROS)水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测内皮型一氧化氮合酶(e NOS)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的表达。结果:与正常组比较,模型组细胞存活率显著降低(P0.01),SOD活性,NO水平和e NOS蛋白表达显著降低(P0.01),MDA,ET-1水平,细胞ROS水平和VCAM-1蛋白表达显著升高(P0.01);与模型组比较,葛根总黄酮(40,80,160 mg·L~(-1))可以显著提高氧化应激损伤的HUVECs的存活率(P0.05,P0.01),葛根总黄酮(20,40,80 mg·L~(-1))可显著增加SOD活性,升高NO水平,显著降低MDA,ET-1水平,显著降低细胞ROS水平,显著升高e NOS,降低VCAM-1的表达(P0.05,P0.01)。结论:葛根总黄酮对H2O2诱导HUVECs氧化应激损伤有保护作用,其作用机制可能与调节SOD,MDA,ET-1,NO氧化应激相关因子,调控内皮细胞功能相关蛋白e NOS,VCAM-1的表达有关。     

淫羊藿素抑制人脐静脉内皮细胞血管生成及其机制

目的:探讨淫羊藿素对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血管生成的抑制作用及其机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,分别观察淫羊藿素对其增殖、迁移及其小管形成的影响。采用酶联免疫吸附法检测血管内皮细胞生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)的含量。结果:经淫羊藿素作用48 h后,未见对内皮细胞增殖有影响。淫羊藿素高浓度组(ICT1 10-6mol/L)、中浓度组(ICT2 10-7mol/L)、低浓度组(ICT3 10-8mol/L)和沙利度胺(TLD)组HUVEC细胞迁移数目(4.67±1.26)、(10.48±3.15)、(21.06±6.83)和(19.15±6.03)个,明显低于空白对照(Control)组(41.38±7.78)个(P0.01)。ICT1、ICT2、ICT3及TLD组小管形成的面积分别为(5 867.45±925.36)、(1 627.33±288.56)、(735.73±325.65)和(2 933.24±741.43)μm2/视野,均低于Control组(7 883.69±1 034.85)μm2/视野(P0.01)。经淫羊藿素处理后,HUVEC细胞分泌VEGF功能明显下降,而分泌PEDF功能明显升高。结论:体外实验结果表明淫羊藿素具有抑制HUVEC细胞血管生成的作用,这种效应与血管内皮细胞VEGF的活性降低及其合成受到抑制,同时对PEDF活性升高及其合成受到促进作用有关。