基于NLRP3/Caspase-1信号通路探讨黄连温胆汤改善HepG2细胞胰岛素抵抗的作用机制

目的 探究黄连温胆汤含药血清对胰岛素抵抗体外模型细胞焦亡的作用及机制。方法 设置黄连温胆汤含药血清组和空白血清组，将SD大鼠随机分为2组，按照体表面积换算分别予7.8 g·kg^-1·d^-1的黄连温胆汤药液和同体积的生理盐水灌胃，提取并配制空白血清及不同浓度的含药血清；采用棕榈酸钠处理HepG2细胞构建胰岛素抵抗模型，随机分为空白组、模型组、盐酸二甲双胍组、空白血清组、黄连温胆汤含药血清高剂量组、黄连温胆汤含药血清中剂量组、黄连温胆汤含药血清低剂量组，培养24 h后应用1×10^-7 mol·L^-1胰岛素处理各组细胞15 min，收集细胞上清，采用葡萄糖氧化酶（GOD-POD）法测定各组细胞葡萄糖的含量，并计算葡萄糖消耗量及抑制率，噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖情况，筛选黄连温胆汤含药血清最佳剂量。将HepG2细胞随机分为空白组、模型组、黄连温胆汤含药血清组，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组细胞白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-18）的含量，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组NOD样受体蛋白3（NLRP3） mRNA和蛋白的表达情况。机制部分将HepG2细胞随机分为空白组、空载体组、NLRP3过表达组、空载体+IR组、空载体+IR+黄连温胆汤含药血清组、NLRP3过表达+IR组、NLRP3过表达+IR+黄连温胆汤含药血清组，GOD-POD法测定各组细胞葡萄糖的含量，并计算葡萄糖消耗量。ELISA检测各组细胞IL-1β、IL-18释放水平；Real-time PCR、Western blot技术检测各组细胞胱天蛋白酶-1（Caspase-1）、消皮素D（GSDMD）及NLRP3 mRNA及蛋白的表达；免疫荧光技术检测NLRP3、GSDMD和Caspase-1的表达。结果 与空白组比较，模型组葡萄糖消耗量显著下降（P<0.01）；与模型组比较，黄连温胆汤含药血清高剂量组葡萄糖消耗量升高最为显著（P<0.01）。与空白组比较，IR-HepG2细胞IL-1β、IL-18释放水平和NLRP3 mRNA与蛋白表达明显升高（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，黄连温胆汤含药血清可明显降低IR-HepG2细胞上清IL-1β、IL-18、NLRP3 mRNA与蛋白的表达（P<0.05，P<0.01）。与空白组、空载体组比较，NLRP3过表达可显著降低细胞葡萄糖消耗量（P<0.01）；与空载体+IR组比较，NLRP3过表达可明显上调IL-1β、IL-18水平和NLRP3、Caspase-1、GSDMD的mRNA及蛋白水平（P<0.05，P<0.01）；与NLRP3+IR组比较，黄连温胆汤含药血清可明显逆转上述指标（P<0.05，P<0.01）。结论 高脂诱导IR-HepG2细胞的胰岛素敏感性与炎症及NLRP3表达密切相关。黄连温胆汤含药血清通过靶向抑制NLRP3/Caspase-1信号通路改善IR-HepG2细胞焦亡，为胰岛素抵抗及2型糖尿病的预防与治疗提供新靶点。     

半夏泻心汤含药肠吸收液对胃癌微环境中PMN-MDSCs凋亡的影响

目的 观察半夏泻心汤含药肠吸收液对胃癌微环境中多形核髓系来源抑制细胞（PMN-MDSCs）凋亡的影响。方法 制备半夏泻心汤含药肠吸收液,以Transwell小室将胃癌细胞与PMN-MDSCs非接触共培养建立胃癌微环境模型,采用细胞增殖与活性检测-8（CCK-8）法筛选0.63 g·mL^-1复溶液制备而成的0~100%半夏泻心汤含药肠吸收液的最佳干预浓度及时间,分为空白组、模型组、奥沙利铂组（10 mg·L^-1）及半夏泻心汤组（26%、18%、10%含药肠吸收液）,采用CCK-8法检测PMN-MDSCs的增殖,流式细胞术检测PMN-MDSCs的凋亡,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测PMN-MDSCs胃癌微环境凋亡相关蛋白,B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）蛋白表达水平。结果 作用24、48 h,与空白组比较,5%、50%、75%、100%半夏泻心汤含药肠吸收液对PMN-MDSCs的抑制率均有升高（（P<0.05,P<0.01）,作用72 h,除50%半夏泻心汤含药肠吸收液对PMN-MDSCs的抑制率低于48 h（P<0.01）,其余浓度各自抑制率差异无统计学意义,且48 h半数抑制浓度（IC₅₀）为18.40%,说明18%半夏泻心汤含药肠吸收液在48 h为最佳干预浓度及时间。与空白组比较,模型组PMN-MDSCs的存活率明显升高（P<0.05）,凋亡率明显下降（P<0.05）;与模型组比较,半夏泻心汤组PMN-MDSCs存活率均明显降低（P<0.05）,凋亡率明显升高（P<0.05）,以半夏泻心汤组（26%含药肠吸收液）最为明显（P<0.05）。与空白组比较,模型组PMN-MDSCs促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达明显降低（P<0.05）,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显上升（P<0.05）。与模型组比较,奥沙利铂组、半夏泻心汤组PMN-MDSCs Caspase-3蛋白表达升高（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达明显降低（P<0.05）,奥沙利铂组、半夏泻心汤组（10%含药肠吸收液）Bax蛋白表达升高（P<0.05）。结论 半夏泻心汤含药肠吸收液能通过调控胃癌微环境PMN-MDSCs凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3及Bcl-2的表达,诱导PMN-MDSCs凋亡。     

基于Wnt/β-catenin调控EMT探讨氧化苦参碱联合贝伐珠单抗抗乳腺癌的体外活性机制

目的 观察氧化苦参碱（OM）联合贝伐珠单抗（BV）对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移的作用,并基于分泌型糖蛋白（Wnt）/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路对OM调控BV引起的上皮间质转化（EMT）的机制进行探讨。方法 采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）实验观察OM（0,0.5,1.0,2.0,4.0,8.0,16.0 mmol·L^-1）及BV（0,0.25×10^-4,0.50×10^-4,1.00×10^-4,2.00×10^-4,4.00×10^-4,8.00×10^-4 mmol·L^-1）联合后对MCF-7细胞增殖的影响;通过侵袭小室法（transwell）和划痕损伤修复实验观察OM（4.0 mmol·L^-1）与BV（2.00×10^-4 mmol·L^-1）联合后对MCF-7细胞侵袭与迁移能力的影响;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）观察OM（4.0 mmol·L^-1）与BV（2.00×10^-4 mmol·L^-1）联合后对MCF-7细胞增殖相关蛋白的影响,并对Wnt/β-catenin信号通路及EMT相关蛋白的表达水平进行检测。结果 与空白组比较,OM（2.0,4.0,8.0,16.0 mmol·L^-1）可呈浓度依赖性地抑制MCF-7细胞的增殖（P<0.05,P<0.01）,而BV未表现出抑制MCF-7细胞增殖的作用,两药联合对MCF-7细胞增殖的抑制作用与OM比较差异无统计学意义。与空白组比较,OM可显著减少MCF-7细胞的迁移距离和侵袭细胞数目（P<0.01）,BV可明显增加MCF-7细胞的迁移距离和侵袭细胞数目（P<0.05,P<0.01）。与BV比较,联合后OM可显著抑制BV引起的MCF-7细胞的侵袭和迁移（P<0.01）。与空白组比较,OM及两药联用可明显抑制MCF-7细胞中与细胞增殖相关蛋白激酶B（Akt）和细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）蛋白的磷酸化（P<0.01）;OM及两药联用后显著降低Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin,原癌基因（c-Myc）,CD44,G₁/S-特异性周期蛋白-D₁（cyclin D₁）蛋白表达（P<0.05,P<0.01）;OM及两药联用可显著降低EMT中钙离子依赖的细胞N-钙黏蛋白（N-cadherin）,波形蛋白（Vimentin）蛋白表达,增加钙离子依赖的细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达水平（P<0.01）,BV组上述相关蛋白的表达相反（P<0.05,P<0.01）。结论 OM与BV联合后OM可通过有效抑制BV引起的Wnt/β-catenin通路激活逆转EMT机制发挥抗乳腺癌的作用。     

基于内质网应激探讨扶正解毒方联合5-Fu对胃癌荷瘤小鼠术后复发及转移的影响

目的 研究扶正解毒方联合5-氟尿嘧啶（5-Fu）对胃癌荷瘤小鼠术后复发转移的抑制作用，并通过肿瘤微环境中CD4⁺ T细胞，CD8⁺ T细胞，调节性T（Treg）细胞含量的改变，内质网应激途径及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路，探讨其可能的分子机制。方法 40只615小鼠随机分为模型组，扶正解毒方（25 g·kg^-1）组，5-Fu（25 mg·kg^-1）组，联合组（扶正解毒方25 g·kg^-1+5-Fu 25 mg·kg^-1），每组各10只，将小鼠前胃癌细胞（MFC细胞）接种于左后肢内侧爪垫下，通过手术切除移植瘤建立术后复发模型。苏木素-伊红（HE）染色法观察术后复发胃癌荷瘤小鼠肺转移病理形态的改变；流式细胞术检测复发瘤中CD4⁺/CD8⁺ T值及脾脏中Treg细胞［CD4⁺，CD25⁺，叉头框蛋白P3（FOXP3）⁺细胞］的含量；蛋白免疫印迹法（Western blot）及免疫组化法（IHC）检测内质网应激相关蛋白［葡萄糖调节蛋白78（GRP78），肌醇需求酶1α（IRE1α），激活转录因子6（ATF6），蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）］含量，以及PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白表达。结果 与模型组比较，联合组复发抑制率明显升高（P<0.05）；各治疗组复发瘤重均明显降低（P<0.05）；各治疗组肺转移数均降低，转移率均有所降低，联合组肺转移总数最少，转移率最低，但差异无统计学意义；扶正解毒方组、联合组CD4⁺/CD8⁺ T值明显升高（P<0.05），Treg细胞含量明显降低（P<0.05）；5-Fu组Treg细胞含量明显升高（P<0.05）。IHC结果显示，与模型组比较，各治疗组ATF6蛋白表达明显下降（P<0.05，P<0.01），IRE1α表达明显下降（P<0.05），Akt表达显著下降（P<0.01）；5-Fu组及联合组mTOR表达明显下降（P<0.05）。Western blot结果显示，与模型组比较5-Fu组GRP78表达明显下降（P<0.05），5-Fu组及联合组PI3K，磷酸化Akt（p-Akt），mTOR表达明显下降（P<0.05）。结论 扶正解毒方联合5-Fu可以抑制荷瘤小鼠术后复发转移，机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR的信号通路，下调内质网应激，改善肿瘤免疫抑制微环境有关。     

肺岩宁方调控EMT逆转非小细胞肺癌顺铂耐药

目的 观察肺岩宁方（肺岩宁）对非小细胞肺癌顺铂耐药的影响，并探究其可能存在的机制。方法 细胞增殖与活性检测（CCK-8）法观察顺铂（0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mg?L^-1）对A549和A549/DDP（顺铂耐药）细胞细胞增殖能力的影响，肺岩宁（0、100、200、300、400、500、600 mg?L^-1）对A549/DDP细胞增殖能力影响；免疫荧光染色、蛋白免疫印迹法（WB）观察A549和A549/DDP组上皮间质转化（EMT）相关蛋白表达；将A549/DDP细胞分为空白组、肺岩宁组（200 mg?L^-1）、顺铂组（6.0 mg?L^-1）和联合用药组［肺岩宁（200 mg?L^-1）+顺铂（6.0 mg?L^-1）］，并进行相应处理，侵袭小室（transwell）实验比较各组侵袭能力；WB检测各组EMT相关蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和免疫荧光染色分别检测各组耐药因子mRNA和蛋白表达。结果 与A549组比较，A549/DDP组对顺铂耐药性显著增高（P<0.01）；E-钙黏蛋白（E-cadherin）蛋白表达降低，波形蛋白（Vimentin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、锌指转录因子（Snail）蛋白表达升高（P<0.05，P<0.01）。经肺岩宁、顺铂处理后，与空白组比较，肺岩宁可浓度依赖性抑制A549/DDP细胞增殖（P<0.01）；肺岩宁组、顺铂组、联合用药组侵袭能力降低（P<0.01）；与顺铂组比较，联合用药组侵袭能力显著降低（P<0.01）。与空白组比较，肺岩宁组E-cadherin蛋白表达升高，N-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达降低（P<0.01），顺铂组E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低，Snail蛋白表达升高（P<0.05，P<0.01）；联合用药组E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达降低（P<0.01）；与顺铂组比较，联合用药组E-cadherin蛋白表达升高，N-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达降低（P<0.01）。与空白组比较，肺岩宁组肺耐药相关蛋白（LRP）、多药耐药因子1（MDR1）蛋白和mRNA表达降低，拓扑异构酶Ⅱα （TOPO Ⅱα）蛋白和mRNA表达升高（P<0.01）；顺铂组LRP、MDR1、TOPO Ⅱα蛋白和mRNA表达升高（P<0.01）；联合用药组LRP蛋白和mRNA表达无明显改变，MDR1、TOPO Ⅱα蛋白和mRNA表达升高（P<0.01）；与顺铂组比较，肺岩宁组、联合用药组LRP、MDR1蛋白和mRNA表达降低，TOPO Ⅱα蛋白和mRNA表达升高（P<0.01）；与肺岩宁组比较，联合用药组LRP、MDR1、TOPO Ⅱα蛋白和mRNA表达升高（P<0.01）。结论 肺岩宁方能够逆转非小细胞肺癌顺铂耐药，其机制可能与调控EMT进程相关。     

芹菜素通过PI3K/Akt和MAPK信号通路诱导人大肠癌CL187细胞凋亡

目的 观察芹菜素对人大肠癌CL187细胞增殖和凋亡的作用及相关机制。方法 选择人大肠癌CL187细胞，利用芹菜素（0、30、45、60 mg·L^-1）进行干预后，采用噻唑蓝（MTT）比色法和克隆形成实验检测芹菜素对CL187细胞的增殖作用；Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测芹菜素对CL187细胞胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）观察芹菜素对细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路中Akt、磷酸化（p）-Akt及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路中细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）、p-ERK1/2、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、p-JNK、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达的影响。结果 与空白组比较，芹菜素组细胞存活率显著降低，细胞增殖抑制率显著升高（P<0.01）；与空白组比较，芹菜素组细胞克隆数和克隆形成率显著降低，克隆形成抑制率显著升高（P<0.01）；不同浓度芹菜素干预CL187细胞48 h，与空白组比较，在荧光显微镜下可观察到细胞核固缩，染色质凝聚，细胞荧光反应增强等典型的细胞凋亡特征；与空白组比较，芹菜素组（45、60 mg·L^-1）抑凋亡基因Bcl-2 mRNA表达水平显著降低（P<0.01），芹菜素组促凋亡基因Bax和Caspase-3 mRNA表达明显升高（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，芹菜素组促凋亡蛋白Caspase-3蛋白表达水平明显上调（P<0.05，P<0.01），芹菜素组（45、60 mg·L^-1）促凋亡蛋白Bax蛋白表达显著上调（P<0.01），芹菜素组抑凋亡蛋白Bcl-2表达水平明显下调（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，芹菜素组（60 mg·L^-1）Akt蛋白表达显著下调（P<0.01），芹菜素组（45、60 mg·L^-1）p-Akt、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达显著下调（P<0.01），芹菜素组JNK、p-JNK蛋白表达明显上调（P<0.05，P<0.01），芹菜素组（60 mg·L^-1） p38 MAPK蛋白表达明显上调（P<0.05），芹菜素组p-p38 MAPK蛋白表达显著上调（P<0.01），芹菜素组p-Akt/Akt明显降低（P<0.05，P<0.01），芹菜素组p-ERK1/2/ERK1/2显著降低（P<0.01），芹菜素组（45、60 mg·L^-1）p-JNK/JNK明显升高（P<0.05，P<0.01），芹菜素组p-p38 MAPK/p38 MAPK显著升高（P<0.05，P<0.01）。结论 芹菜素可抑制大肠癌CL187细胞增殖并促进细胞凋亡，其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路和调控MAPK信号通路相关蛋白的表达有关。     

消癌解毒方含药血清增强NK细胞杀伤结肠癌的作用及机制

目的 探讨消癌解毒方含药血清对自然杀伤（NK）细胞杀伤结肠癌细胞的增强作用及分子机制。方法 消癌解毒方含药血清（0.1%、0.5%、1%、5%、10%）处理HCT-116细胞、NK-92MI细胞24 h，噻唑蓝（MTT）比色法检测其对细胞增殖的影响。选取低体积分数（0.1%、0.5%、1%）含药血清处理共培养的HCT-116细胞、NK-92MI细胞24 h，钙黄绿素-乙酰甲酯/碘化丙啶（Calcein-AM/PI）双染检测NK细胞对结肠癌细胞杀伤作用；流式细胞仪检测结肠癌细胞凋亡；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测凋亡、信号传导及转录激活蛋白4（STAT4）通路相关蛋白表达；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测干扰素（IFN）-γ分泌。结果 MTT比色法显示，与空白组比较，消癌解毒方含药血清（5%、10%）能有效抑制HCT-116、NK-92MI细胞增殖（P<0.01），但消癌解毒方含药血清（0.1%、0.5%、1%）对细胞增殖无明显影响。与空白组比较，消癌解毒方含药血清（0.1%、0.5%、1%）呈浓度依赖性的增强NK细胞对结肠癌细胞的杀伤活性，并诱导结肠癌细胞凋亡（P<0.01）。Western blot显示，与空白组比较，消癌解毒方含药血清能下调B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关xl蛋白（Bcl-xl）表达，上调Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达（P<0.05，P<0.01）；与共培养组比较，消癌解毒方含药血清（0.1%、0.5%、1%）能激活p-STAT4磷酸化，促进IFN-γ表达（P<0.05）。ELISA显示，与空白组比较，消癌解毒方含药血清（0.1%、0.5%、1%）能提高IFN-γ分泌量（P<0.01）。结论 消癌解毒方含药血清增强NK细胞杀伤结肠癌细胞活性的机制可能与激活STAT4通路，增加NK细胞IFN-γ分泌量，下调Bcl-xl、Bcl-2表达，上调Bax表达，进而促进结肠癌细胞凋亡相关。     

基于Nrf2/HO-1通路抑制铁死亡探究甘草含药血清对LPS诱导的Caco2细胞炎症的影响

目的 探讨甘草含药血清激活核因子E₂相关因子2（Nrf2）/血红素加氧酶-1（HO-1）通路抑制铁死亡对脂多糖（LPS）诱导的人结肠上皮腺癌细胞（Caco2）炎症的影响。方法 将Caco2细胞分为正常组、模型组（LPS,200 μg·L^-1）、甘草含药血清低、中、高浓度组（5%、10%、20%）、铁死亡抑制剂组（3-氨基-4-环己基氨基苯甲酸乙酯,Fer-1,10 μmol·L^-1）。正常组细胞正常培养,其他组建立炎症模型,甘草含药血清低、中、高浓度组分别加入5%、10%、20%含药血清处理24 h,铁死亡抑制剂组给予Fer-1处理24 h。透射电镜观察各组线粒体形态;流式细胞术检测细胞内Fe²⁺水平;微板法检测超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Nrf2、HO-1、铁蛋白重链1（FTH1）、谷胱甘肽过氧化物酶4（GSH-Px4）蛋白的表达水平。运用小干扰核糖核酸（siRNA）的方式来观察Nrf2在铁死亡调控中的作用。将干扰后细胞分为空载体组（NC）、Si-Nrf2组、含药血清（20%）+Si-Nrf2组、含药血清（20%）+NC组。微板法检测MDA、SOD、GSH-Px水平;Western blot检测Nrf2、HO-1、FTH1、GSH-Px4蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组线粒体固缩,线粒体膜增厚,线粒体形态变小;模型组Fe²⁺含量显著增加（P<0.01）;SOD活性显著降低（P<0.01）,GSH-Px表达显著下降（P<0.01）,MDA含量显著增高（P<0.01）;Nrf2、HO-1表达降低（P<0.05）,FTH1表达显著性下降（P<0.01）,GSH-Px4表达显著降低（P<0.01）。甘草含药血清处理组,中、高浓度组Fe²⁺含量显著降低（P<0.01）,SOD活性和GSH-Px活性显著升高（P<0.01）,MDA水平显著降低（P<0.01）;高浓度组Nrf2表达明显升高（P<0.05）,中浓度组HO-1与GSH-Px4蛋白的表达有所增高（P<0.05）,低、中、高浓度组FTH1水平皆显著增加（P<0.01）。机制研究发现,与NC组比较,转染Nrf2 siRNA的细胞中MDA含量增加（P<0.01）,SOD活性下降（P<0.01）,GSH-Px活性减少（P<0.01）;Nrf2、HO-1表达下降（P<0.01）,FTH1和GSH-Px4蛋白含量降低（P<0.01）;与Si-Nrf2组比较,在甘草含药血清干预后,细胞内MDA含量降低（P<0.01）,SOD活性提高（P<0.01）,GSH-Px活性上升（P<0.01）;Nrf2、FTH1蛋白表达增加（P<0.05）,HO-1和GSH-Px4蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。结论 甘草含药血清可降低LPS诱导的Caco2细胞炎症因子及氧化应激水平,其机制与促进Nrf2/HO-1信号通路的表达,减轻细胞内脂质过氧化从而抑制铁死亡的发生有关。     

基于MEK/ERK信号通路探讨阳和汤含药血清对乳腺癌4T1细胞的影响

目的 通过阳和汤含药血清干预小鼠乳腺癌4T1细胞,探索阳和汤对乳腺癌4T1细胞及其内丝裂原活化蛋白激酶（MEK）/细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路的影响。方法 制备阳和汤SD大鼠含药血清。将其随机分组为空白组、阳和汤低、中、高剂量组（5.8、11.6、23.2 g·kg^-1）,空白组用生理盐水代替。各组按10%含药血清和90% RMPI 1640完全培养基均匀混合,干预细胞。采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法分别在24、48、72 h检测阳和汤含药血清对4T1细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测4T1细胞的凋亡情况;采用划痕实验检测4T1细胞迁移情况;采用Transwell实验检测细胞侵袭能力;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测MEK1/2、磷酸化（p）-MEK1/2、ERK1/2、p-ERK1/2、大鼠肉瘤病毒（RAS）蛋白的表达水平。结果 与空白组比较,阳和汤干预24、48、72 h,阳和汤含药血清低、中、高剂量组对4T1细胞增殖具有明显抑制作用（P<0.05,P<0.01）;阳和汤干预48 h,阳和汤含药血清低、中、高剂量组细胞凋亡率显著升高（P<0.01）;阳和汤含药血清低、中、高剂量组在24、48 h的细胞划痕愈合能力显著降低（P<0.01）;阳和汤含药血清低、中、高剂量组细胞侵袭能力显著降低（P<0.01）;阳和汤含药血清低、中、高剂量组细胞内MEK1/2、ERK1/2表达差异无统计学意义,p-MEK1/2、p-ERK1/2、RAS蛋白表达显著降低（P<0.01）。结论 阳和汤可抑制乳腺癌细胞4T1增殖、迁移、侵袭,促进其凋亡。其凋亡机制与MEK/ERK信号通路受抑制,p-MEK1/2、p-ERK1/2、RAS蛋白表达下调有关。     

水蛭素对大鼠NRK-52E细胞尿酸盐转运体表达的影响＊

目的 探讨金边蚂蟥活性成分水蛭素对大鼠NRK-52E细胞尿酸盐转运体表达的影响。方法 采用不同浓度（0、0.01、0.1、1、5和10 mg·mL^-1）水蛭素处理大鼠NRK-52E细胞，细胞计数试剂盒-8（Cell counting kit-8，CCK8）检测水蛭素对细胞的毒性作用。将细胞分为正常组、黄嘌呤组（200 μmol·L^-1）、水蛭素低（0.01 mg·mL^-1）、中（0.1 mg·mL^-1）、高浓度组（5 mg·mL^-1），培养24 h后，Hoechst33258染色观察细胞形态，实时荧光定量PCR（Real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞中葡萄糖转运蛋白9（Glucose transporter 9， GLUT9）、有机阴离子运输蛋白（Organic anion transporter 1，OAT1）和尿酸盐转运体1（Urate transporter 1，URAT1）mRNA及蛋白表达水平。结果 水蛭素对大鼠NRK-52E细胞毒性作用较小。与正常组比较，黄嘌呤组细胞碎片增多，细胞中GLUT9和URAT1 mRNA及蛋白表达均显著升高（P < 0.05），而OAT1 mRNA和蛋白表达均显著降低（P < 0.05）。与黄嘌呤组比较，水蛭素组细胞碎片减少，GLUT9和URAT1表达显著降低（P < 0.05），OAT1表达显著升高（P < 0.05），且高浓度组比低浓度组更明显（P < 0.05）。结论 水蛭素可能通过调节肾细胞尿酸盐转运体（GLUT9、URAT1、OAT1）的表达对尿酸排泄的发挥作用。     

Auraptene and its Effects on the Re‐emergence of Colon Cancer Stem Cells

Recent studies indicate that auraptene (7‐geranyloxycoumarin, AUR), a geranyloxycoumarin extracted from fruits of edible plants belonging to the Rutaceae family, may represent a novel lead compound for dietary colon cancer chemoprevention in rodents. As a continuation of studies aimed to better depict the pharmacological effects and mechanism of action of the title natural compound, the current investigation was undertaken to determine whether AUR would be able to prevent the growth and sphere (surrogate tumors) formation of FOLFOX‐resistant colon cancer cells that are highly enriched in cancer stem cells (CSCs). Our results demonstrate that AUR at a concentration of 10 μM was able to inhibit the growth and formation of colonospheres of FOLFOX‐resistant colon cancer HT‐29 cells in vitro. The corresponding parental cells were also similarly affected by AUR at the same concentration level. The reduction in the growth and colonospheres formation in FOLFOX‐resistant HT‐29 was also associated with a concomitant decrease in phospho‐epidermal growth factor receptor. These findings suggest that AUR could prevent the re‐emergence of CSCs. Copyright © 2012 John Wiley & Sons, Ltd.     

山药提取物联合DC-CIK细胞疗法对结肠癌HT29干细胞荷瘤裸鼠的体内抗肿瘤研究

目的观察山药提取物联合树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞(DC-CIK)疗法对结肠癌HT29细胞干细胞荷瘤裸鼠的治疗效果。方法建立Balb/c裸鼠结肠癌干细胞荷瘤模型,随机分为4组,对照组、DC-CIK组、山药提取物组、山药提取物联合DC-CIK组(联合治疗组),每组10只。其中DC-CIK组、联合治疗组裸鼠在肿瘤干细胞接种第4天后通过尾iv 1×106个DC-CIK细胞给予治疗,每周2次,共3周;山药提取物组和联合治疗组,按山药提取物125 mg/kg给药,每天ig给药1次,共3周;对照组以等体积生理盐水代替。各组裸鼠在治疗3周期间每2天测量瘤体大小及裸鼠体质量,治疗结束后处死裸鼠,取出瘤体称质量,并计算抑瘤率,RT-PCR法检测瘤组织中信号通路关键基因的表达水平。结果治疗结束后,山药提取物组、DC-CIK组、联合治疗组的瘤体质量明显低于对照组,其中,联合治疗组抑瘤率为51.26%。在信号通路关键基因的表达水平变化方面,联合治疗组与DC-CIK组、山药提取物组相比,PI3K/Akt通路中关键基因PI3KR1,Wnt/β-catenin通路中关键基因Wnt1,Notch通路中关键基因Notch1的m RNA表达均有所下调,DC-CIK组和山药提取物组相比,各基因m RNA表达变化差异不显著。结论对结肠癌HT29细胞干细胞荷瘤裸鼠模型,山药提取物联合DC-CIK抑瘤效果最佳。     

乏氧环境下川芎嗪对肺癌干细胞样细胞血管生成拟态的作用

目的：探讨乏氧状态下,川芎嗪(TMP)对非小细胞肺癌A549干细胞样细胞(CSLCs)血管生成拟态(VM)的作用,及TMP对肝细胞生长因子(HGF)/肝细胞生长因子受体(c-Met)蛋白表达的影响。方法：应用无血清成球培养法分离富集A549 CSLCs,流式细胞术检测A549 CSLCs干细胞标志物CD44⁺/CD24^-/low表达水平,使用CoCl₂化学诱导乏氧模型。细胞活性与增殖检测(CCK-8)法检测(100、200、400、800、1 600、3 200μmol·L^-1)TMP对A549 CSLCs细胞活力的作用,选择对A549CSLCs细胞活力无明显影响的低、中、高浓度(100、200、400μmol·L^-1)进行后续实验。小管形成实验检测不同浓度TMP对乏氧状态A549 CSLCs VM形成的作用,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测不同浓度TMP对乏氧状态CSLCs HGF/c-Met蛋白表达的影响。结果：流式细胞术检测所分离富集CSLCs CD44     

理冲生髓饮对卵巢癌SKOV3细胞周期和凋亡影响

目的:探讨理冲生髓饮对卵巢癌SKOV3细胞周期和凋亡影响。方法:以卵巢癌SKOV3细胞为研究对象,采用CCK-8法检测不同浓度顺铂对SKOV3细胞抑制作用,Annexin V-FITC法检测SKOV3细胞凋亡情况,细胞周期与细胞凋亡检测试剂测定SKOV3细胞周期变化,流式细胞术检测SKOV3细胞中CD44~+CD117~+细胞比例。结果:与空白组比较,24 h和48 h顺铂组SKOV3细胞凋亡率明显增加,G0/G1期细胞比例降低,S期细胞比例升高,CD44~+CD117~+细胞比例明显增加,与顺铂组比较,24 h和48 h理冲生髓饮联合顺铂组SKOV3细胞凋亡率明显增加,G1期细胞比例降低,S期细胞比例升高,CD44~+CD117~+细胞比例明显降低,其中理冲生髓饮中剂量组联合顺铂组作用效果最强。结论:理冲生髓饮具有抗肿瘤作用,其机制可能是增加顺铂对卵巢癌SKOV3细胞凋亡,调控细胞周期阻滞,降低卵巢癌SKOV3细胞中干细胞数量。     

去甲斑蝥素诱导肿瘤干细胞凋亡作用研究

目的探究去甲斑蝥素(NCTD)对肿瘤干细胞促凋亡作用。方法分别以UMUC-3膀胱癌和Hep G2肝癌细胞为研究对象,通过无血清、低吸附、单克隆的方法筛选肿瘤干细胞(CSC),实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测CSC干性标志物表达变化,MTS法检测NCTD及紫杉醇(PTX)对CSC的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 2种细胞经筛选获得成球生长细胞克隆,其干性基因NANOG、OCT4、ABCG2、CD133、CD34表达明显升高,释放入含血清培养基后干性基因表达下调。经筛选所得的CSC对PTX高度耐药,但对NCTD耐药性低。NCTD可诱导CSC凋亡,但对干性基因表达没有显著影响。结论 NCTD诱导凋亡杀伤CSC,但对CSC分化没有显著影响。     

Genistein inhibits nasopharyngeal cancer stem cells through sonic hedgehog signaling

Genistein, a soy derived isoflavanoid compound, exerts anticancer effects in various cancers. Nasopharyngeal cancer stem cells (NCSCs) are a small subpopulation of cancer cells which are responsible for initiation, progression, metastasis, and recurrence of nasopharyngeal cancer. The present study aimed to investigate the suppressive effects of genistein on NCSCs and its underlying mechanism. NCSCs were enriched from human nasopharyngeal cancer cell lines CNE2 and HONE1 through tumorsphere‐forming assay. It was shown that genistein inhibited the tumorsphere formation capacity, decreased the number of EpCAM⁺ cells, downregulated the expression of NCSCs markers, suppressed cell proliferation, and induced apoptosis of NCSCs. Genistein suppressed the activity of Sonic hedgehog (SHH) signaling, which was important for the maintenance of NCSCs, while activation of SHH signaling by purmorphamine diminished the inhibitory effects of genistein on NCSCs. Our data suggested that genistein inhibited NCSCs through the suppression of SHH signaling. These findings support the use of genistein for targeting NCSCs.     

基于肿瘤干细胞的西黄丸抗结肠癌作用研究

[目的]探讨西黄丸对结肠癌肿瘤干细胞增殖、迁移及浸润能力的影响并研究其对肿瘤干细胞多能干基因表达的影响。[方法]小鼠CT26结肠癌细胞荷瘤Balb/C小鼠,原代培养肿瘤干细胞,噻唑蓝(MTT)细胞毒性实验分别检测西黄丸对肿瘤干细胞及肿瘤细胞增殖能力的影响;Transwell实验检测西黄丸对肿瘤干细胞浸润及迁移能力的影响;定量逆转录-聚合酶链反应(q RT-PCR)检测西黄丸对肿瘤干细胞多能干基因表达的影响。[结果]西黄丸能有效抑制肿瘤干细胞及肿瘤细胞的增殖,其抑制作用呈剂量依赖性;与肿瘤细胞相比,西黄丸对肿瘤干细胞的直接毒作用更强,其IC_(50)浓度更低;西黄丸还能抑制肿瘤干细胞浸润及迁移,显著下调多能干基因Sox2、Oct4及Nanog的表达。[结论]西黄丸能有效抑制结肠癌肿瘤干细胞的增殖、迁移及浸润,并显著下调多能性基因的表达。西黄丸对肿瘤干细胞的抑制作用可能是其抗结肠癌的基础。     

试析植物干细胞与动物干细胞的异同

植物干细胞与动物干细胞的比较研究可以深入认识干细胞生物学的核心问题。植物干细胞与动物干细胞在细胞特征、功能、信号传导、研究方法等方面均有所不同。但是近年来对argonaute（AGO）与polycomb group proteins（PcG）蛋白研究表明动、植物干细胞行为之间有着某种分子相似性。     

Yin-yang balance therapy on regulating cancer stem cells

Researches have shown that cancer stem cells, regulated by the niche where they reside, are the roots of oncogenesis, relapse and metastasis. To date, very few treatments have targeted on cancer stem cells. The authors study that the regulated factors in the niche share the characteristics of yin-yang in the theory of traditional Chinese medicine, which has confirmed its therapeutic effects in the prevention and treatment of cancer. So the authors presume that the mechanisms of traditional Chinese medicine on the prevention and treatment of cancer may be related to the yin-yang balance of the niche of cancer stem cells.     

熊果酸对卵巢癌干细胞荷瘤裸鼠耐药的逆转作用

目的探讨熊果酸对于卵巢癌干细胞荷瘤裸鼠耐药的逆转作用。方法选用人卵巢癌Skov3细胞通过无血清悬浮培养法富集干细胞,接种于裸鼠皮下,建立裸鼠人卵巢癌干细胞皮下移植瘤耐药模型。随机分为Skov3贴壁细胞组、干细胞组,熊果酸高、中、低剂量组,顺铂组,顺铂联合熊果酸组。连续给药14天,空白组给予0.9%Na Cl溶液。每天测量瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率。给药结束后,取肿瘤组织,HE染色观察肿瘤细胞形态、结构,免疫组化检测ABCG2的表达,TUNEL法检测凋亡细胞。结果熊果酸可以抑制肿瘤组织生长,并且抑瘤率随剂量增加而上升,熊果酸与顺铂联用明显优于顺铂(P0.01)。不同剂量的熊果酸干预后,ABCG2的表达下调,肿瘤干细胞凋亡增多,均具有剂量依赖性。并且熊果酸联合顺铂组较单用顺铂组,ABCG2的表达明显被抑制,细胞凋亡数明显升高。结论熊果酸可以抑制卵巢癌干细胞荷瘤裸鼠的瘤体生长,通过下调耐药指标ABCG2,促进细胞凋亡,提高顺铂诱导的细胞凋亡来达到逆转耐药的作用。