矿物药青礞石对PTZ点燃癫痫大鼠影响的脑组织代谢组学分析

目的 通过青礞石干预戊四氮（PTZ）点燃癫痫大鼠的脑组织代谢组学研究,探讨青礞石治疗癫痫可能的作用机制。方法 运用PTZ点燃法建立大鼠癫痫动物模型,实验分为空白组、模型组、卡马西平组、青礞石组。通过超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法（UPLC/Q-TOF-MS）技术检测脑组织样品,利用偏最小二乘法-判别分析（PLS-DA）和SPSS 18.0软件等方式对实验结果进行统计分析。结果 建立了大鼠脑组织代谢指纹图谱、代谢轮廓图,显示各组代谢轮廓发生了明显的变化,各组间均能很好地分开,并且青礞石组较卡马西平组有更靠近空白组的趋势。筛选出了7个差异代谢物,包括磷脂酰丝氨酸（PS）（18∶0/18∶0）,L-谷氨酸,二十二碳六烯酰基乙醇酰胺,花生四烯酸,葡糖鞘氨醇,胆甾烷-3,7,12,24,25-五醇,溶血磷脂酰胆碱（LysoPC）（P-18∶0）。除二十二碳六烯酰基乙醇酰胺和LysoPC（P-18∶0）外,青礞石对其他5个差异代谢物均有显著性干预调节作用。影响PTZ点燃大鼠发生代谢紊乱的可能代谢通路有12条,较为重要的代谢通路有3条,即D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢以及花生四烯酸代谢,其中又以D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢最为重要。结论 从脑组织代谢组学分析来看,青礞石对PTZ癫痫大鼠具有明确的干预作用,这可能与其干预以上差异代谢物含量及相关代谢通路有关,可减少兴奋性神经递质对脑组织神经元的毒性作用以及抑制脑组织炎症的发展以维持脑细胞的生物学功能而减缓癫痫发生。     

矿物药青礞石对戊四唑点燃癫痫大鼠肠道菌群的影响

目的研究青礞石对戊四唑(pentylenetetrazol,PTZ)点燃癫痫大鼠肠道菌群的影响,从肠道微生态环境视角探讨青礞石治疗癫痫疾病可能的作用机制。方法以青礞石粉末为研究对象,用PTZ点燃法建立大鼠癫痫动物模型,实验分为对照组、模型组、卡马西平组和青礞石组(高剂量组为临床用量的20倍、低剂量组为临床用量的5倍)。给药4周后,取各组大鼠结肠内容物,通过16Sr RNA测序对各组大鼠肠道菌群的多样性进行分析,利用UPARSE、SPSS18.0等对结果进行生物信息学及统计学分析。结果α多样性分析可知,模型组大鼠肠道菌群的Chao 1、Ace丰富度指数与对照组相比没有显著性变化;与对照组、模型组相比,青礞石组尤其是高剂量组对细菌群落丰富度有显著影响(P0.05)。Shannon、Simpson群落多样性指数分析结果显示,模型组与对照组无显著性差异;青礞石组对群落多样性干预不明显。青礞石主要干预肠道菌群的丰富度、卡马西平主要干预肠道菌群的多样性。β多样性各组层级聚类均能较好地分开,其中青礞石高剂量组与低剂量组部分样本不能明显分开,2组样本可归为一类,对照组、模型组可归为一类,卡马西平组单独归为一类。3D-主成分分析(3D-principal component analysis,3D-PCA)、3D-主坐标分析(3D-principal co-ordinates analysis,3D-PCoA)结果显示,各组菌群结构轮廓均能明显分开,青礞石低剂量组介于对照组和模型组之间,菌群结构轮廓部分与模型组、对照组有重合交叉,且有偏向对照组的明显趋势。非度量多维尺度(nonmetric multidimensional scaling,NMDS)分析结果显示,对照组、模型组、青礞石组集中在一个区域,青礞石组与模型组、对照组有重合交叉,青礞石高剂量组、低剂量组对肠道菌群结构有相似的干预效果。物种组成门水平分析可知,各组大鼠的优势菌群主要有厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、疣微菌门(Verrucomicrobia)、变形菌门(Proteobacteria)和放线菌门(Actinobacteria),其中厚壁菌门占比最大,其次是拟杆菌门。模型组疣微菌门相对丰度较对照组显著增加(P0.01),模型组变形菌门的相对丰度最高;青礞石干预后疣微菌门相对丰度下降,变形菌门相对丰度有不同程度降低。属水平分析可知,与对照组相比,模型组中norank_f__Muribaculaceae(P0.05)、Akkermansia菌属(P0.01)相对丰度显著增加,乳杆菌属显著减少(P0.05);青礞石干预后可降低Akkermansia菌属、升高乳杆菌属Lactobacillus的相对丰度。另外,线性判别分析效应大小(linear discriminant analysis effect size,LEfSe)分析可知厚壁菌门的瘤胃球菌科(Ruminococcaceae)在模型组中显著富集,给予青礞石干预后,瘤胃球菌科相对丰度显著降低。结论青礞石对PZT点燃癫痫大鼠肠道菌群物种组成的丰富度、多样性具有明显的调节作用,可有效干预肠道微生态的重建。     

矿物药青礞石对戊四氮点燃癫痫大鼠血清中IL-1β和IL-2等细胞因子水平的影响

目的 研究青礞石对戊四氮（pentylenetetrazol,PTZ）点燃癫痫大鼠血清中炎症细胞因子表达水平的影响。方法 利用PTZ腹腔注射制备慢性癫痫大鼠模型,实验分为对照组、模型组、阳性药卡马西平组、青礞石低剂量组和青礞石高剂量组。大鼠腹主动脉取血,采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清中白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-2、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、γ-干扰素（IFN-γ）、高迁移率族蛋白B-1（HMGB-1）及超敏C反应蛋白（hs-CRP）水平,并对各细胞因子之间及其与PTZ点燃癫痫大鼠结肠肠道微生物的相关性进行分析,利用SPSS 18.0对结果进行统计学分析。结果 与对照组比较,模型组大鼠血清中IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-α及hs-CRP水平均显著升高（P<0.01）。与模型组比较,青礞石高、低剂量给药组大鼠血清中各细胞因子水平显著下降（P<0.05,P<0.01）。细胞因子相关性分析结果表明,IL-2与IL-6呈显著正相关（P<0.05）,IL-6与TNF-α、hs-CRP呈显著正相关（P<0.05,P<0.01）,TNF-α与hs-CRP呈显著正相关（P<0.01）,IFN-γ与HMGB-1呈显著正相关（P<0.05）。细胞因子与肠道菌群相关性分析结果表明,疣微菌门、Akkermansia菌属与炎症因子IL-6、TNF-α、hs-CRP间呈显著相关性（P<0.05）。青礞石可通过影响细胞因子（IL-6、TNF-α、hs-CRP）、Akkermansia菌属对PTZ点燃癫痫大鼠起到干预作用。结论 青礞石干预PTZ点燃癫痫可能与影响IL-1β、IL-2等细胞因子,从而降低体内炎性反应有关。     

矿物药青礞石对PTZ点燃癫痫大鼠海马差异蛋白表达的影响

目的:研究矿物药青礞石对PTZ点燃癫痫大鼠海马差异蛋白的影响。方法:采用标记定量(TMT)蛋白质组学技术分析大鼠海马中蛋白的差异表达,以模型组与正常对照组之间大鼠海马蛋白表比较筛选出差异达蛋白,以同样方法筛选了青礞石组与模型组之间差异表达蛋白。结果:本研究采用了3次生物重复,模型组和正常对照组之间共有29个差异表达蛋白,鉴定出28个差异表达蛋白。结论:通过有效的比较分析,得到青礞石治疗癫痫的差异表达蛋白,其中Mbp等蛋白有可能是其作用靶点。     

银杏叶提取物对戊四氮诱导大鼠癫痫发作和Cav3．2表达的影响

目的探讨银杏叶提取物（GBE）对戊四氮（PTZ）慢性致痫大鼠模型癫痫发作的影响及脑保护作用。方法健康成年雄性SD大鼠40只,随机分为4组：PTZ致痫组、PTZ＋丙戊酸（VPA）组、PTZ＋VPA＋GBE组、生理盐水（NS）对照组,每组10只,观察各组大鼠的行为学、脑电图（EEG）、电迷宫正确率和颞叶海马T型ca2＋通道Car3．2表达变化。结果PTZ＋VPA组、PTZ＋VPA＋GBE组和NS组发作级别为0-Ⅱ级,EEG正常或少量棘慢波,EEG总功率差值及颞叶海马Cav3．2水平较PIE组显著降低,差别有统计学意义（P〈0．05）;相比于PTZ＋VPA组,PTZ＋VPA＋GBE组颞叶海马Cav3．2表达明显减少,差别有统计学意义（P〈0．05）。结论GBE能降低Car3．2水平,显著降低癫痫大鼠发作级别、减少脑部异常放电和改善认知功能,有辅助抗癫痫和脑保护作用。     

柴胡加龙骨牡蛎汤对PTZ点燃型癫痫大鼠脑内氨基酸含量的影响

为了研究柴胡加龙骨牡蛎汤抗癫痫的作用机理,本实验观察戊四唑(PTZ)点燃型癫痫大鼠,服用柴胡加龙骨牡蛎汤治疗后,脑内氨基酸含量的变化。结果表明:PTZ点燃型癫痫大鼠脑内兴奋性氨基酸谷氨酸(GlU)天冬氨酸(ASP)及抑制性氨基酸甘氨酸(Gly)显著升高;而抑制性氨基酸γ-氨基丁酸(GABA)、丙氨酸(Ala)显著降低。经柴胡加龙骨牡蛎汤治疗后γ-氨基丁酸(GABA)、丙氨酸(Ala)含量明显升高,而Glu、ASP、Gly降低不显著,提示癫痫的发作及柴胡加龙骨牡蛎汤抗癫痫的作用可能与脑内ASP、Gln及Gly、GABA、Ala的变化有关。     

矿物药青礞石对AECOPD痰热证大鼠肺组织NF-κB表达及血清中相关因子的干预作用

目的研究矿物药青礞石对慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)痰热证模型大鼠肺组织核因子-κB(NF-κB)表达及血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)等因子的影响。方法采用烟熏复合细菌感染及风热刺激的方法制备AECOPD痰热证大鼠模型,分别给予青礞石药材、水煎液及水煎液药渣连续治疗15 d。苏木素-伊红(HE)染色病理切片评价大鼠肺部病理情况。免疫组化法检测肺组织中NF-κB蛋白表达,酶联免疫吸附法测定血清中白细胞三烯B4(LTB4)、MMP-9、TIMP-1的水平。结果青礞石药材高剂量、水煎液高剂量及药渣高剂量均能显著降低模型组大鼠血清中LTB4、MMP-9、TIMP-1水平及肺组织中NF-κB蛋白的表达,青礞石药材高剂量能显著降低血清中MMP-9/TIMP-1值。结论青礞石药材、水煎液、水煎药渣均能抑制AECOPD痰热证大鼠体内多种炎症因子的表达,促进气道修复,最终起到良好的干预作用。     

抗痫灵对癫痫大鼠脑内nNOS活性影响的实验研究

目的:观察中药抗痫灵对戊四氮点燃癫痫大鼠模型的影响,进一步探讨从调节一氧化氮合酶(nNOS)的nNOS(神经元型)亚型代谢的角度探讨抗痫灵的抗癫痫作用机制。方法:动物模型采用戊四氮点燃大鼠模型。免疫印迹(Western blot)方法观察实验各组大鼠大脑海马nNOS的活性变化。结果:抗痫灵组、丙戊酸钠组、模型组阳性细胞表达与正常对照组相比,有显著性差异(P0.05),模型组较正常对照组大鼠脑nNOS内活性显著升高(P0.01),中药组显著低于模型组(P0.01)。结论:抗痫灵对戊四氮点燃大鼠癫痫发作有显著对抗作用,其作用机制可能与其降低模型大鼠脑内nNOS活性有关。     

调理脾胃复方对PTZ点燃大鼠神经肽含量的作用

采用放免法观察大鼠ＰＴＺ点燃以及服用调理脾胃复方治疗后，脑内神经肽ＳＳ、ＳＰ、ＡＶＰ含量的变化。结果发现，ＰＴＺ点燃大鼠海马内ＡＶＰ明显降低，ＳＳ、ＳＰ无明显变化；大脑皮层内ＳＳ显著升高，ＡＶＰ、ＳＰ明显减少。调理脾胃复方治疗后，上述脑区ＡＶＰ显著增加；大脑皮层内ＳＳ明显减少，ＳＰ明显增加。提示癫痫发作及调理脾胃复方抗痫机制可能与脑内ＳＳ、ＳＰ、ＡＶＰ等的变化有关。     

草果知母汤在阻断PTZ点燃癫痫模型中对大鼠脑内c-fos、c-junmRNA表达的影响

目的：探讨草果知母汤抗痫作用的分析生物学机制。方法：选用ＳＤ大鼠以戊四唑（ＰＴＺ）诱导产生癫痫动物模型，应用分子原位杂交技术观察草果知母汤对ＰＴＺ点燃癫痫大鼠脑内ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ基因表达的影响。结果：ＰＴＺ点燃癫痫大鼠脑内ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ基因表达明显增强，草果知母汤能明显阻断其表达，并显示出良好的抗痫作用。结论：草果知母汤的抗痫作用机制可能与降低脑内ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ基因表达水平有     

矿物药金礞石、青礞石的红外光谱分析

目的:寻找能够鉴别金礞石、青礞石的新方法.方法:利用傅立叶变换红外光谱仪测定不同来源的样品,对所获得的指纹图谱进行特征性指认.结果:不同来源的金礞石、青礞石的红外吸收光谱存在较大差异,并且有各自的特征峰.结论:运用傅立叶变换红外光谱技术可以对不同来源的金礞石、青礞石进行直接、快速、准确分析,为此类矿物药的鉴别和质量控制提供可靠的依据.     

青礞石的本草考证及现代研究

通过查阅相关本草文献,同时结合现代研究及当今市场、临床应用调研,考证矿物药青礞石的品种。查阅青礞石相关的古今文献22篇。结果表明古代本草文献中所记载的青礞石与现代商品及临床应用基本一致。临床应用的青礞石药材应来源于黑云母片岩或绿泥石化云母碳酸盐片岩。目前临床应用的多为黑云母片岩,与2010年版《中国药典》收载的青礞石来源相吻合。此外,作者对青礞石的化学成分、理化性质、光学性质等现代研究进行了总结。     

康痫丸对致痫大鼠氨基酸递质的影响

目的 从脑内氨基酸类递质角度探讨康痫丸治疗原发性癫痫的作用机制.方法 将40只SD大鼠随机分为正常对照组、癫痫模型组、丙戊酸钠组、康痈丸组,每组10只.用戊四氮(PTZ)亚惊厥剂量造模.通过免疫组化观察药物处理后致痫大鼠海马CA1、CA3、齿状回和顶叶大脑皮层的γ-氨基丁酸((GABA)、谷氨酸(Glu)表达强度.结果 PTZ致痫后,大鼠海马及皮层GABA阳性细胞数及光密度减少,而Glu阳性细胞数及光密度增加,提示PTZ同时影响脑内GABA和Glu的代谢,证实了GABA及Glu与癫痫的相互关系.采用康痫丸抗癫痫,动物海马、皮层GABA阳性细胞数及光密度增加.而Glu阳性细胞数及光密度减少.结论 康痫丸降低脑内Glu,升高GABA水平可能是其发挥抗癫痫作用的机制之一.     

同病异治复方对戊四氮慢性点燃大鼠痫性发作的影响

目的:研究癫痫"从肝论治"、"从痰论治"的复方柴胡疏肝汤及定痫丸对戊四氮(PTZ)慢性点燃大鼠痫性发作的影响。方法:建立大鼠PTZ慢性点燃的癫痫模型,选取完全点燃大鼠随机分为4组,即生理盐水组(A组)、丙戊酸钠组(B组)、定痫丸组(C组)、柴胡疏肝汤组(D组),连续灌胃给药28天,于给药第7、14、21及28天观察大鼠阵发性痉挛发作潜伏期、痫性发作级别以及强直性惊厥发生率。结果:C组与D组在各用药时间点均能不同程度延长PTZ慢性点燃大鼠的阵发性痉挛发作潜伏期,与A组相比有显著性差异(P0.05或P0.01),与B组作用相当(P0.05),而C组与D组无显著性差异(P0.05)。结论:癫痫"从肝论治"的复方柴胡疏肝汤、"从痰论治"的复方定痫丸均能明显抑制PTZ致痫大鼠的痫性发作,有明显的抗癫痫作用,但两复方在时效关系中可能存在差异。     

长春丹对老年大鼠脑和血浆中去甲肾上腺素水平的影响

用放射酶法测定青年组、老年组和服药老年组大鼠下丘脑和血浆去甲肾上腺素(NA)水平的变化;用组织化学方法观察蓝斑核内 NA 荧光强度的变化。结果发现长春丹可使老年大鼠下丘脑 NA 含量下降,血浆 NA 含量有上升趋势;而对蓝斑核内 NA 的荧光强度无明显作用。从上述中枢与外周 NA 的变化分析了补肾益气药长春丹对老年机体交感神经系统和内分泌功能的作用。     

养阴益气活血冲剂拮抗小鼠脑缺血时血中肾上腺素水平增高的作用

目的：观察自制的养阴益气活血冲剂对小鼠脑缺血时血中儿茶酚胺水平的影响。方法：健康ICR小鼠灌服不同剂量阴益气活血冲剂和尼莫地平1h后，在水合氯醛麻醉下，结扎双侧颈总动脉和迷走神经8min造成脑缺血，取血后用高效液相色谱－－电化学联合检测法测定各组动物血浆中儿茶酚胺水平。结果：缺血小鼠血浆中去甲肾上腺素和肾上腺素浓度显著增加（P＜0．01），养阴益气活血冲剂各组和尼莫地平组血浆中肾上腺素水平与正常组相比无显著差异（P＞0．05），结论：小鼠结扎双人侧带迷走神经的颈总动脉可致血中去甲肾上腺素和肾上腺素释放增加，自制的养阴敢活血冲剂可阻止血浆肾上腺素升高。     

百会、大椎、足三里对癫痫大鼠神经保护机制的影响研究

目的:研究百会、大椎、足三里对不同机能大鼠海马组织中细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、IL-18的表达差异,探讨该针刺方法对海马组织神经保护机制的影响。方法:按随机数字表法将60只雄性SD大鼠平均分为6组:正常空白组、正常经穴组、正常对照组、模型空白组、模型经穴组、模型对照组,每组10只。模型组均采用腹腔注射氯化锂-匹鲁卡品癫痫模型,正常组腹腔注射等量的生理盐水。每组大鼠治疗期间每日固定1次,每次30 min。正常空白组和模型空白组不予针刺只行固定;正常经穴组和模型经穴组,针刺处方为:百会、大椎、足三里;正常对照组和模型对照组,针刺处方为环跳、外关、手三里。治疗10 d后均处死取脑。结果:(1)与正常空白组比较,正常经穴组和正常对照组各细胞因子的指标虽略有差异,但无统计学意义(P0.05);模型空白组IL-6、IL-18的表达显著上升(P0.05),IL-1β、IL-2、IL-4、IL-10、IL-17表达无明显差异(P0.05)。(2)与模型空白组比较,模型经穴组IL-10、IL-18的表达量下降(P0.05),IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-17的表达差异无统计学意义(P0.05);模型对照组各组细胞因子的表达无明显差异(P0.05)。(3)与正常经穴组比较,模型经穴组IL-1β、IL-2、IL-6、IL-18表达量上升(P0.05), IL-4、IL-10、IL-17的表达无明显差异(P0.05)。结论:(1)百会、大椎、足三里可能是通过调控癫痫大鼠体内IL-10和IL-18的表达,对癫痫疾病神经机制起到保护作用。(2)百会、大椎、足三里可能是通过影响IL-1β、IL-2、IL-6、IL-18的表达,对不同机能大鼠发挥其双向调节作用。     

定痫丸对戊四唑点燃癫痫大鼠脑内神经递质含量及海马c-fos表达的影响

目的:通过观察定痫丸对癫痫大鼠神经递质谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)和海马c-fos表达的影响来探讨该方治疗癫痫的机理。方法:采用腹腔注射戊四唑3.2mg/100g,连续给予4周造成大鼠癫痫模型,造模同时给予定痫丸、丙戊酸钠和定痫丸加丙戊酸钠治疗,连续4周。结果:采用戊四唑造模后,模型组大鼠脑组织中谷氨酸含量升高而γ-氨基丁酸含量明显降低,c-fos阳性细胞数明显增多,与正常组比较有显著性差异(P<0.05)。定痫丸组、丙戊酸钠组和中西药合用组均可明显降低谷氨酸含量,升高γ-氨基丁酸含量,减少c-fos阳性细胞数,与模型组比较具有显著性差异(P<0.05)。结论:定痫丸可对抗戊四唑致大鼠癫痫的作用,作用机理与降低脑内神经递质谷氨酸含量、升高γ-氨基丁酸含量以及阻断脑内c-fos蛋白的表达有关。