汉防己甲素对TGF-β1诱导的MRC-5细胞中Col-I及FN表达的影响

目的:探讨汉防己甲素(Tet)对人转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的人胚肺成纤维细胞MRC-5的影响。方法:不同质量浓度的TGF-β1(0,2. 5,5,10,20,40μg·L~(-1))作用于MRC-5细胞,应用细胞增殖与毒性检测法(CCK-8)检测TGF-β1对MRC-5细胞的增殖毒性,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测MRC-5细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及波形蛋白(Vimentin)表达水平的变化,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测MRC-5细胞上清液中I型胶原(Col-I)及纤维黏连蛋白(FN)表达水平的变化,以筛选出TGF-β1活化MRC-5细胞的适宜浓度。结合筛选出的TGF-β1的浓度条件,与不同浓度的Tet(0,2. 5,5,10,20,40μmol·L~(-1))共同作用于MRC-5细胞,再次应用CCK-8法筛选TGF-β1及Tet共培养对MRC-5细胞的安全浓度,Western blot检测MRC-5细胞中α-SMA及Vimentin表达水平的变化,ELISA检测MRC-5细胞上清液中Col-I及FN表达水平的变化。结果:与空白组比较,给药24 h时,20μg·L~(-1)及40μg·L~(-1)的TGF-β1对MRC-5细胞有毒性作用(P0. 05),给药48 h时,10,20,40μg·L~(-1)的TGF-β1对MRC-5细胞有毒性作用(P0. 05);加入Tet培养24 h时,对MRC-5细胞的半数抑制浓度(IC50)值为14. 07μmol·L~(-1),培养48 h时,IC50值为7. 51μmol·L~(-1);与空白组比较,5μg·L~(-1)的TGF-β1刺激MRC-5细胞时,细胞中α-SMA,FN及Col-I的相对含量明显升高(P0. 05),Vimentin相对含量显著升高(P0. 01),10μg·L~(-1)组细胞中α-SMA,Vimentin,FN及Col-I的相对含量显著升高(P0. 01);10μg·L~(-1)的TGF-β1与不同浓度的Tet共培养,与TGF-β1组比较,Tet 5μmol·L~(-1)组,细胞中α-SMA,Vimentin及FN相对含量显著降低(P0. 01),Col-I相对含量明显降低(P0. 05),Tet 10μmol·L~(-1)组,细胞中α-SMA,Vimentin,FN及Col-I的相对含量均显著降低(P0. 01)。结论:TGF-β1能够升高MRC-5细胞中Col-I,FN等细胞外基质的水平,而Tet可以有效抑制这种变化的发生,提示Tet可能对肺纤维化的形成中,成纤维细胞大量分泌细胞外基质的过程有抑制作用。     

淫羊藿素对雌激素依赖性乳腺癌MCF-7细胞作用的影响

目的:探讨淫羊藿素(ICT)对雌激素依赖性乳腺癌MCF-7细胞的作用.方法::以在37℃、5％ CO2培养箱培养的人乳腺癌MCF-7为研究对象,用不同浓度的淫羊藿素单独作用及与雌二醇联合作用,测定人乳腺癌MCF-7细胞的增殖率,并检测该过程中雌激素受体ERα的表达情况.结果:当ICT浓度大于1×10-10mol·L-1时单独使用能促进ERα阳性人乳腺癌MCF-7细胞增殖,能诱导ERα基因的表达;淫羊藿素与雌二醇联合作用抑制MCF-7细胞增殖,抑制ERα的表达.结论:淫羊藿素与雌二醇联合作用具有抑制E2诱导的人乳腺癌MCF-7细胞增殖作用;淫羊藿素与雌二醇联合作用可抑制ERα基因的表达.     

化纤煎冻干粉溶液对TGF-β1诱导人胚肺成纤维细胞增殖和分化的影响

目的:观察化纤煎冻干粉溶液对人胚肺成纤维细胞增殖、活化、分泌细胞外基质的影响,并观察其对TNF-α细胞因子和NF-κB信号通路的调控,探讨化纤煎治疗特发性肺纤维化(IPF)的作用机制。方法:采用TGF-β_1诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5增殖、活化,化纤煎冻干粉溶液进行干预,CCK8法检测化纤煎冻干粉溶液对MRC-5细胞增殖的影响。qRT-PCR法检测α-SMA mRNA、Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA,观察成纤维细胞向肌成纤维细胞转化、分泌细胞外基质情况。qRT-PCR法检测TNF-αmRNA、NF-κB p65 mRNA、IκBαmRNA、IKKβmRNA,Western Blot检测NF-κB p65蛋白,观察化纤煎对炎症反应因子TNF-α与炎症信号通路NF-κB的作用。结果:与空白对照组比较,模型对照组的细胞增殖水平显著增加(P0.01),与模型对照组比较,化纤煎中、高剂量组MRC-5细胞增殖水平均明显下降(P0.01)。模型对照组α-SMA mRNA、Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA、TNF-αmRNA和NF-κB p65 mRNA表达水平显著高于空白对照组(P0.05或P0.01),IκBαmRNA、IKKβmRNA表达水平显著低于空白对照组(P0.01)。与模型对照组比较,化纤煎低、中、高剂量组α-SMA mRNA、Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA、TNF-αmRNA和NF-κB p65 mRNA表达均下降,差异有统计学意义(P0.05或P0.01),IκBαmRNA、IKKβmRNA表达水平均上升(P0.05或P0.01)。模型对照组NF-κB p65蛋白表达水平显著高于空白对照组(P0.01),与模型对照组比较,化纤煎低、中、高剂量组NF-κB p65蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P0.01)。结论:化纤煎冻干粉溶液可能通过抑制炎症因子TNF-α分泌和NF-κB炎症信号通路活化,从而发挥抗纤维化作用。     

青藤碱对肺癌细胞A549增殖及α7 nAChR表达的影响

目的研究青藤碱对肺癌细胞增殖的影响及与α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nAChR)表达的相关性。方法体外培养人肺癌细胞系A549细胞,采用CCK-8法检测24,48h不同浓度青藤碱及4-甲基亚硝氨基-3-吡啶-1-丁酮(NNK)对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡情况;RT-PCR法检测A549细胞中α7 nAChR表达。结果0.1,0.25,0.5,1,2,3,4mmol·L-1青藤碱作用于A549细胞后,细胞增殖率随青藤碱剂量增加而降低。NNK能促进细胞增殖,降低细胞早期凋亡比例,并明显增加α7 nAChR的表达;青藤碱可明显抑制NNK的促细胞增殖作用,并提高细胞早期凋亡比例,降低α7 nAChR的表达。结论青藤碱能抑制A549细胞增殖,可能与降低α7 nAChR的表达相关。     

含当归芍药散简方脑脊液对神经细胞的保护作用

目的:探讨含当归芍药散简方脑脊液的神经保护作用及其可能的机制.方法:采用FeSO4和H202作用产生自由基的方法诱导建立PC12细胞氧化损伤模型,分别用当归芍药散简方(0.135 g·mL-1)ig家兔(1.5 g·kg-1),于1,14 d时取脑脊液添加于培养液中(每组分5％,10％,20％3个体积分数)处理PC12细胞,MTT法铡定细胞活性,硫代巴比妥酸(TBA)比色法测定丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活力,甲基百里香酚蓝(MTB)比色法测定细胞内Ca1+水平,免疫细胞化学法测定α7烟碱型乙酰胆碱受体(nAchR)阳性表达,BCA蛋白定量及斑点印迹法测定α7nAchR亚单位水平.结果:含20％当归芍药散简方脑脊液对PC12细胞活性(以吸光度表示,A)1 d组(1.241±0.117)和14d组(1.297±0.213)与损伤组(0.986±0.051)比较能明显增加PC12细胞活性(P＜0.05,P＜0.01)、显著提高SOD活力(19.48±0.34),(19.52±0.33)U·mL-1对(18.18±0.12)U·mL-1(P＜0.01),有效降低MDA含量及细胞内Ca2+水平均降低,与损伤组比较P＜0.01;明显上调α7nAChR的表达,14 d组与1d组比较有显著性差异(P＜0.05).结论:当归芍药散简方对FeSO4和H2O2诱导建立PC12细胞氧化损伤模型具有保护作用,其机制与保护α7nAchR有关.     

芪归方有效组分治疗特发性肺纤维化的实验研究

目的：基于Smurf2串话TGF-β1/Smad信号通路研究芪归方有效组分对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5的影响及机制。方法：体外予以10 ng/mL TGF-β1培养MRC-5细胞，PCR仪检测α-SMA的mRNA水平判断模型是否成功。设立正常对照组、模型组（10 ng/mL TGF-β1处理）、泼尼松处理组、芪归方有效组分高剂量组、中剂量组、低剂量组，采用CCK-8法检测MRC-5的增殖情况，Western blot检测各组细胞Smad7、SnoN蛋白的表达水平，RT-PCR检测各组细胞Smurf2的mRNA水平。结果：与正常对照组比较，48 h模型组细胞增殖明显，α-SMA的mRNA水平增加（P<0.01），造模成功。经10 ng/mL TGF-β1处理细胞MRC-5，与正常对照组比较，Smad7、SnoN蛋白水平显著降低，Smurf2蛋白mRNA水平升高（P<0.01或P<0.05）。不同浓度芪归方有效成分处理组细胞增殖降低，可逆转以上各指标的改变，呈一定的量效关系。结论：芪归方有效组分能抑制MRC-5细胞增殖，可通过减少MRC-5细胞中Smurf2所介导的Smad7、SnoN的泛素化，恢复Smad7、SnoN蛋白的表达，从而调节肺纤维化的发生发展。     

α7尼古丁受体参与100Hz电针调节小鼠NK细胞活性

目的探讨α7尼古丁受体(α7nAChR)是否参与100 Hz电针调节小鼠免疫功能的作用。方法应用MTT法测定NK细胞活性,免疫荧光方法观察α7尼古丁受体在的定位。结果连续给予3 d 100 Hz电针,1次/d,小鼠脾脏的NK细胞活性明显下降(P<0.05)。α7nAChR可在小鼠的巨噬细胞上表达。此外,给予小鼠α7nAChR抗体后,100 Hz电针明显提高了小鼠NK细胞活性(P<0.05)。结论α7nAChR可能在100Hz电针调节小鼠免疫功能中发挥了重要作用。     

酒制豨莶草和生豨莶草对缺氧损伤的H9c2心肌细胞保护作用的比较研究

目的:比较酒制豨莶草和生豨莶草对大鼠心肌细胞缺氧损伤的保护作用,并探讨其作用机制,为临床用药选择提供实验依据。方法:采用H9c2细胞缺氧模型,给予不同浓度酒制豨莶草和生豨莶草干预,CCK-8法测定细胞成活率,比色法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,超氧化物歧化酶(SOD)活性;荧光酶标仪检测细胞内活性氧(ROS)含量;用蛋白质印迹法(Western Blotting)检测凋亡B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达。结果:缺氧16 h成功制备H9c2心肌细胞缺氧损伤模型;筛选确定300 μg/mL是生豨莶草和酒制豨莶草最佳给药浓度;与模型组比较,酒制豨莶草和生豨莶草均可提高细胞成活率(P<0.05),改善损伤细胞形态,减轻LDH外漏(P<0.05),降低ROS的含量(P<0.05),增加SOD活性(P<0.05),上调Bcl2(P<0.05)和Bcl-2/Bax的表达。给药浓度为300 μg/mL时,生豨莶草在提高SOD活力和细胞成活率方面优于酒制豨莶草(P<0.05),酒制豨莶草在抑制LDH外漏的作用强于生豨莶草,在活性氧(ROS)含量和Bcl、Bax蛋白表达方面,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:酒制豨莶草和生豨莶草对缺氧损伤的H9c2心肌细胞具有保护作用,其机制可能是通过抵抗氧化应激,抑制心肌细胞凋亡。     

橙皮苷对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞活化的影响

目的:探讨橙皮苷对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞合成细胞外基质的影响。方法:12.5~200μmol·L~(-1)的橙皮苷作用于MRC-5细胞,得出不影响细胞增殖的剂量用于后续实验。5 ng·m L~(-1)的TGF-β1作用于MRC-5细胞,诱导细胞大量合成或分泌细胞外基质成分,同时用橙皮苷干预。结果:12.5~50μmol·L~(-1)橙皮苷未发现显著影响MRC-5细胞的增殖(P0.05)。受到TGF-β1刺激后,MRC-5细胞的Col-I分泌量和α-SMA及FN的合成量均显著增加(P0.05)。12.5~50μmol·L~(-1)橙皮苷显著减少上述分子的分泌量或合成量(P0.05)。结论:橙皮苷抑制TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞合成或分泌细胞外基质成分。     

山茱萸水提液对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)的影响机制初探

目的探讨山茱萸水提液体外对D-半乳糖致衰人胚肺成纤维细胞(MRC-5)的影响作用及机制。方法 MTT法观察山茱萸水提液对D-半乳糖致衰MRC-5细胞生长状况的影响;Western blot法观察山茱萸水提液对D-半乳糖致衰MRC-5细胞抗衰老通路P16,P21的影响;Telomere PNA Kit/FITC for Flow Cytometry法观察山茱萸水提液对MRC-5细胞端粒长度的影响。结果 MTT检测山茱萸水提液对D-半乳糖致衰MRC-5细胞有促进增殖作用;Western blot法检测,与对照组比较山茱萸水提液能够使D-半乳糖致衰MRC-5细胞P16、P21表达降低;与对照组比较山茱萸水提液能够延缓端粒缩短。结论山茱萸水提液有抗衰老作用。