补阳还五汤对特发性肺纤维化大鼠Keap1/Nrf2/HO-1抗氧化信号通路的影响

目的 观察补阳还五汤对特发性肺纤维化（IPF）大鼠Kelch样ECH相关蛋白1（Keap1）/核因子E₂相关因子2（Nrf2）/血红素氧合酶-1（HO-1）抗氧化信号通路的影响，探讨该方干预IPF的作用机制。方法 将40只SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法分为假手术组、模型组、补阳还五汤组、尼达尼布组，每组10只。除假手术组外，其余各组气管内滴注博来霉素（0.005 g·kg^-1）制备IPF大鼠模型。补阳还五汤组灌服补阳还五汤煎液（14.84 g·kg^-1），尼达尼布组灌服尼达尼布混悬液（0.1 g·kg^-1），假手术组、模型组灌服等容积生理盐水，共28 d。肺功能检测后，取血清及肺组织。苏木素-伊红（HE）染色和马松（Masson）染色观察肺组织病理改变并行半定量分析；检测肺组织羟脯氨酸（HYP）含量；测定血清和肺组织丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）活性；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）、免疫组化和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测Keap1、Nrf2、HO-1 mRNA与蛋白表达情况。结果 与假手术组比较，模型组大鼠呼吸系统阻力和弹力增高，顺应性显著降低（P<0.01）；肺指数和病理评分、HYP含量显著升高（P<0.01）；血清和肺组织MDA含量增加，SOD、GSH-Px、CAT活性显著降低（P<0.01）；肺组织Keap1 mRNA与蛋白表达降低，Nrf2、HO-1 mRNA与蛋白表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较，补阳还五汤组大鼠呼吸系统阻力和弹力下降，顺应性显著升高（P<0.01）；肺指数、病理评分、肺组织HYP含量显著降低（P<0.01）；血清和肺组织MDA含量下降、SOD、GSH-Px、CAT活性显著升高（P<0.01）；肺组织Keap1表达降低，Nrf2、HO-1表达升高（P<0.05，P<0.01）。结论 补阳还五汤可启动Keap1/Nrf2/HO-1介导的抗氧化效应，增强机体抗氧化能力，延缓IPF大鼠病理进程。     

补阳还五汤通过甲酰肽受体2减轻大鼠脑缺血再灌注后氧化应激损伤

目的 探讨补阳还五汤通过甲酰肽受体2（FPR2）对脑缺血再灌注模型大鼠氧化应激反应的抑制作用及神经保护作用。方法 将48只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组和补阳还五汤联合FPR2抑制剂（Boc-2）组，假手术组仅游离血管，不做插线处理。其他各组运用改良Longa法构建大脑中动脉栓塞（MCAO）模型，缺血2 h后再灌注；再灌注后补阳还五汤组和补阳还五汤联合Boc-2组给予补阳还五汤（16 g·kg^-1）灌胃，每日2次；补阳还五汤联合Boc-2组术前30 min腹腔注射Boc-2 （0.4 mg·kg^-1）；假手术组与模型组给予等体积生理盐水。再灌注24 h后，退化神经元染色（FJC）观察FJC阳性细胞数目的变化；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测缺血侧脑组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2），Bcl-2相关X蛋白（Bax）和活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（cleaved Caspase-3）蛋白表达；生化试剂盒检测缺血侧脑组织中超氧化物歧化酶（SOD），丙二醛（MDA），谷胱甘肽（GSH），一氧化氮（NO）水平；免疫荧光检测还原型辅酶Ⅱ（NADPH）氧化酶2（NOX2）平均荧光强度。结果 与假手术组比较，模型组的FJC阳性细胞数目增加（P<0.01），Bcl-2表达减少（P<0.01），Bax和cleaved Caspase-3表达增加（P<0.01），NO和MDA含量增加（P<0.05，P<0.01），GSH和SOD活性下降（P<0.05，P<0.01），NOX2表达增加（P<0.01）；与模型组比较，补阳还五汤组FJC阳性细胞数目减少（P<0.01），Bcl-2表达增加（P<0.01），cleaved Caspase-3和Bax明显减少（P<0.05，P<0.01），NO和MDA减少（P<0.05，P<0.01），GSH和SOD增加（P<0.01），NOX2表达减少（P<0.01）。给予Boc-2后，补阳还五汤的作用部分被抑制。结论 补阳还五汤可以减轻脑缺血再灌注大鼠氧化应激损伤，抑制细胞凋亡，其作用机制可能与FPR2调控NOX2的表达有关。     

归芪白术方联合奥沙利铂对胃癌荷瘤小鼠EGFR，VEGFR2表达和血管生成的影响

目的 探讨归芪白术方联合奥沙利铂对胃癌荷瘤小鼠表皮生长因子受体（EGFR）、血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）表达及血管生成的影响。方法 昆明种小鼠进行实验并建立胃癌荷瘤模型，造模成功后将小鼠随机分成6组：空白组、模型组、奥沙利铂组（10 mg·kg^-1）、联合高、中、低剂量组（奥沙利铂10 mg·kg^-1联合归芪白术方17.68、8.84、4.42 g·kg^-1）；末次给药后，取移植瘤，计算抑瘤率；苏木素-伊红（HE）染色观察瘤组织形态学变化；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清表皮生长因子（EGF），白细胞介素-8（IL-8）、血管内皮生长因子（VEGF）水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）和免疫组化法（IHC）检测EGFR、磷酸化EGFR（p-EGFR）、VEGFR2、磷酸化VEGFR2（p-VEGFR2）和血小板-内皮细胞黏附分子（CD31）的表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测EGFR、VEGFR2 mRNA相对表达。结果 给药组瘤体质量较模型组显著下降（P<0.01）；与奥沙利铂组比较，联合高、中剂量组瘤体质量明显下降（P<0.05，P<0.01）；模型组肿瘤细胞密度较高，细胞形状规则，未见明确的组织坏死灶；给药组肿瘤细胞密度降低，可见明确的组织坏死灶及大规模炎性细胞；与空白组比较，模型组与给药组血清中EGF，VEGF和IL-8水平均明显上升（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，给药组血清中EGF、VEGF和IL-8水平显著降低（P<0.01），EGFR、p-EGFR、VEGFR2、p-VEGFR2和CD31蛋白及EGFR、VEGFR mRNA表达显著降低（P<0.01）；与奥沙利铂组比较，联合高、中剂量组EGF、VEGF和IL-8水平明显降低（P<0.05，P<0.01），EGFR、p-EGFR、VEGFR2、p-VEGFR2和CD31蛋白及EGFR、VEGFR2 mRNA表达明显下降（P<0.05，P<0.01）；联合低剂量组中EGF、VEGF和IL-8含量降低，EGFR、p-EGFR、VEGFR2、p-VEGFR2和CD31蛋白及EGFR、VEGFR2 mRNA表达也有所下降，但差异无统计学意义。结论 归芪白术方联合奥沙利铂能通过影响EGFR，VEGFR2的表达，抑制胃癌荷瘤小鼠肿瘤组织的生长和血管生成。     

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨通络蠲痹颗粒对骨关节炎炎症损伤和细胞凋亡的影响

目的 观察通络蠲痹颗粒对膝骨关节炎（KOA）兔软骨细胞凋亡及Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）/核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的影响,研究其防治KOA的作用机制。方法 30只新西兰兔按随机数字表法分为假手术组、模型组、通络蠲痹颗粒低、高剂量组（4.1、8.2 g·kg^-1·d^-1）、塞来昔布组（10.9 mg·kg^-1·d^-1）,每组6只。采用内侧半月板失稳法（DMM）建立兔KOA模型,造模6周后给药,干预8周,每日1次。用苏木素-伊红（HE）染色和番红O-固绿染色观察关节软骨病理改变;原位末端标记法（TUNEL）荧光染色检测关节软骨细胞凋亡;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测关节液中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关基因的mRNA和蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,模型组关节软骨退变严重,Mankin评分升高（P<0.01）,关节液IL-1β、TNF-α含量升高（P<0.01）,软骨细胞凋亡数量增加（P<0.01）,软骨组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65的mRNA和蛋白表达上调（P<0.01）,而Bcl-2的mRNA及蛋白表达下调（P<0.01）;与模型组比较,通络蠲痹颗粒低、高剂量组软骨退变得到改善,Mankin评分降低（P<0.01）,IL-1β、TNF-α含量降低（P<0.01）,软骨细胞凋亡数量减少（P<0.01）,软骨组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65的mRNA和蛋白表达下调（P<0.01）,Bcl-2的mRNA及蛋白表达上调（P<0.01）,且在上述观察指标中通络蠲痹颗粒高剂量组均明显优于低剂量组。结论 通络蠲痹颗粒可抑制KOA兔关节软骨细胞凋亡,改善软骨退变,其作用机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路介导的炎症反应有关。     

乌头汤通过下调HIF-1α/VEGFA/Ang信号通路抑制AIA风寒湿痹证大鼠血管翳形成

目的 探讨乌头汤对佐剂型关节炎（AIA）风寒湿痹证大鼠血管翳形成的抑制作用及其潜在作用机制。方法 将无特定病原体（SPF）雄性SD大鼠40只,按随机数字表法分为空白组、AIA风寒湿痹证组［完全弗氏佐剂（CFA）,200 μg］、乌头汤组（15 g·kg^-1·d^-1）、吲哚美辛组（10 mg·kg^-1）,除空白组外,其余各组注射CFA前给予风寒湿刺激。连续给药30 d,期间观察AIA风寒湿痹证大鼠的基本情况、发病时间、关节炎评分、足容积。最终取外周动脉血、踝关节和滑膜组织。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子A（VEGFA）蛋白含量和风湿3项,包括抗O（ASO）、C反应蛋白（CRP）和类风湿因子（RF）;苏木素-伊红（HE）染色观察关节组织形态学改变;免疫组化检测踝关节通路关键蛋白HIF-1α和VEGFA;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠滑膜组织中HIF-1α、VEGFA、血管生成素-1（Ang-1）、血管生成素-2（Ang-2）mRNA表达。结果 与空白组比较,AIA风寒湿痹证大鼠足肿容积和关节炎评分显著升高（P<0.01）;血清CRP、RF、ASO阳性表达显著（P<0.01）;HE染色可见踝关节滑膜炎性增生,血管新生、血管翳形成,骨破坏程度加重,提示模型构建成功。乌头汤干预后,发病时间显著延迟（P<0.01）;足容积和关节炎评分显著降低（P<0.01）;血清CRP、RF、ASO含量显著下降（P<0.01）;滑膜组织炎性增生明显缓解,血管新生及血管翳减少,骨破坏减轻;滑膜HIF-1α、VEGFA、Ang-1、Ang-2 mRNA明显降低（P<0.05,P<0.01）;血清与踝关节HIF-1α和VEGFA蛋白表达显著下降（P<0.01）。在吲哚美辛组中,大鼠发病时间显著延迟（P<0.01）;足容积和关节炎评分显著降低（P<0.01）;血清CRP、RF、和ASO含量显著下降（P<0.01）;HIF-1α/VEGFA/Ang信号通路激活,病理组织损伤改善。结论 乌头汤可延缓AIA风寒湿痹证大鼠发病时间,降低足容积、关节炎评分、风湿活动度,改善关节组织病理情况,对血管翳形成具有抑制作用,其作用机制可能与下调HIF-1α/VEGFA/Ang通路表达有关。     

基于HIF-1α/VEGFA信号通路探讨柴胡桂枝汤对三阴性乳腺癌细胞的影响

目的 基于缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）/血管内皮生长因子A（VEGFA）信号通路探讨柴胡桂枝汤对三阴性乳腺癌（TNBC）细胞的影响。方法 建立TNBC移植瘤模型,随机分为模型组,卡培他滨组（0.2 mg·kg^-1）,柴胡桂枝汤低、中、高剂量组（10.62、21.23、42.46 g·kg^-1）,每组10只,干预21 d。给药结束后,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肿瘤组织中HIF-1α mRNA表达情况;免疫组化法（IHC）检测肿瘤组织中HIF-1α、TNF-α、VEGFA的表达水平及CD34染色检测肿瘤内血管生成情况并计算微血管密度（MVD）;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肿瘤组织中HIF-1α、VEGFA、表皮生长因子受体（EGFR）蛋白的表达。结果 与模型组比较,卡培他滨组、柴胡桂枝汤低、中、高剂量组TNF-α水平显著降低（P<0.01）,HIF-1α mRNA显著降低（P<0.01）,HIF-1α、TNF-α、VEGFA和CD34阳性细胞表达及MVD明显降低（P<0.05,P<0.01）,HIF-1α、VEGFA、EGFR蛋白水平显著降低（P<0.01）。与卡培他滨组比较,柴胡桂枝汤中、高剂量组TNF-α水平显著降低（P<0.01）,HIF-1α mRNA显著降低（P<0.01）,HIF-1α、TNF-α和VEGFA阳性细胞表达显著降低（P<0.01）,CD34表达及MVD显著降低（P<0.01）,HIF-1α、VEGFA、EGFR蛋白水平均显著降低（P<0.01）。结论 柴胡桂枝汤可能通过调控HIF-1α/ VEGFA信号通路,抑制TNBC细胞血管生成,从而发挥抗肿瘤作用。     

双蓣调脂汤对高胆固醇血症模型大鼠肝组织HNF1α/PCSK9/LDLR信号通路的影响

目的 观察高胆固醇血症大鼠肝组织中肝细胞核因子1α（HNF1α）,前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶kexin 9型（PCSK9）,低密度脂蛋白胆固醇受体（LDLR）的表达水平,探讨双蓣调脂汤调节胆固醇代谢、缓解高胆固醇血症的作用机制。方法 40只雄性SD大鼠随机抽取8只为正常组予普通饲料喂养,其余32只予高脂饲料喂养,高胆固醇血症模型造模成功后,分为模型组,双蓣调脂汤低剂量组（7.8 g·kg^-1）,双蓣调脂汤高剂量组（15.6 g·kg^-1）,辛伐他汀组（4 mg·kg^-1）,每组8只,连续灌胃给药8周。生化法检测血清总胆固醇（TC）,甘油三酯（TG）,低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量;苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠肝组织病理形态学变化;免疫组化检测大鼠肝组织中PCSK9和LDLR的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肝组织HNF1α,PCSK9和LDLR mRNA与蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清TC,TG,LDL-C水平显著升高（P<0.01）,肝脂肪变性明显,HNF1α,PCSK9 mRNA与蛋白表达水平明显上升（P<0.05）,LDLR mRNA与蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;与模型组比较,双蓣调脂汤高剂量组大鼠血清TC,TG,LDL-C水平显著降低（P<0.01）,双蓣调脂汤低剂量组和辛伐他汀组大鼠血清TC,LDL-C水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,各给药组HDL-C水平没有明显变化,各治疗组肝脂肪变性明显改善,各治疗组大鼠肝脏HNF1α mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,双蓣调脂汤低、高剂量组大鼠肝脏PCSK9 mRNA与蛋白表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,辛伐他汀组大鼠肝脏PCSK9 mRNA水平显著升高（P<0.01）,蛋白表达水平呈降低趋势,各治疗组大鼠肝脏LDLR mRNA水平显著升高（P<0.01）,双蓣调脂汤高剂量组大鼠肝脏LDLR蛋白表达水平显著升高（P<0.01）,双蓣调脂汤低剂量组和辛伐他汀组大鼠肝脏LDLR蛋白表达量呈升高的趋势,免疫组化结果显示各治疗组PCSK9阳性表达减弱,LDLR阳性表达增强。双蓣调脂汤高剂量组的治疗效果略优于辛伐他汀组,双蓣调脂汤低剂量组的治疗效果与辛伐他汀组比较,差异无统计学意义。结论 双蓣调脂汤可能通过HNF1α/PCSK9/LDLR信号通路降低血脂水平,在调节胆固醇代谢和减轻大鼠高胆固醇血症中发挥积极作用。     

基于OX1R/PLCβ-1/PKCα/ERK1/2信号通路探讨安寐丹对失眠模型大鼠肝脏神经递质和昼夜节律的影响及机制

目的 基于食欲素受体1（OX1R）/磷脂酰肌醇特异性磷酯酶Cβ-1（PLCβ-1）/蛋白激酶Cα（PKCα）/细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）信号通路探讨安寐丹对失眠大鼠肝脏神经递质及昼夜节律的影响及机制。方法 SPF级SD大鼠60只,随机分为空白组、模型组、苏沃雷生组、安寐丹低、中、高剂量组,各10只;除空白组外,其余各组通过腹腔注射对氯苯丙氨酸（PCPA）进行造模,空白组给予等容生理盐水、苏沃雷生组给予苏沃雷生溶液30 mg·kg^-1·d^-1灌胃、安寐丹低、中、高剂量组分别给予安寐丹水煎液（4.55、9.09、18.18 g·kg^-1·d^-1）;观察各组一般情况、体质量和24 h自主活动情况;采用苏木素-伊红（HE）和马松（Masson）染色观察肝脏病理学改变,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肝脏神经递质γ-氨基丁酸（GABA）、5-羟色胺（5-HT）、肾上腺素（EPI）、去甲肾上腺素（NE）和乙酰胆碱（ACh）的表达,生化检测肝脏谷氨酸（Glu）的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肝脏生物钟基因Per1、Per2、Cry1、Cry2、Bmal1、Bmal2的mRNA表达,蛋白免疫印迹法（Western blot）、Real-time PCR检测肝脏OX1R/PLCβ-1/PKCα/ERK1/2信号通路蛋白及mRNA表达。结果 与空白组比较,模型组体质量下降（P<0.05,P<0.01）,狂躁、静止节律紊乱（P<0.01）,肝脏肌纤维断裂、水肿伴炎性细胞浸润,GABA、5-HT、EPI、NE和ACh含量降低、Glu含量升高（P<0.01）,Per1、Per2、Cry1和Cry2 mRNA表达降低（P<0.01）,Bmal1和Bmal2 mRNA表达升高（P<0.01）,OX1R、PLCβ-1、PKCα、ERK1/2蛋白及mRNA基因表达均增高（P<0.01）;与模型组比较,苏沃雷生和安寐丹低、中、高剂量组可增加失眠大鼠体质量（P<0.05,P<0.01）,减少狂躁状态、增加其静止时间和频率（P<0.05,P<0.01）,并可上调神经递质GABA、5-HT、EPI、NE、ACh和节律基因Per1、Per2、Cry1、Cry2 mRNA表达（P<0.05,P<0.01）,抑制Glu及Bmal1、Bmal2、OX1R、PLCβ-1、PKCα、ERK1/2 mRNA和OX1R、PLCβ-1、PKCα、ERK1/2蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。结论 安寐丹可通过抑制OX1R/PLCβ-1/PKCα/ERK1/2信号通路调节失眠大鼠肝脏神经递质表达,改善昼夜节律紊乱,且安寐丹高剂量组效果最佳。     

基于PI3K/Akt/mTOR通路探讨补肾通络方对血管性痴呆大鼠海马神经元突触可塑性的影响

目的 探讨补肾通络方对血管性痴呆（VD）模型大鼠海马神经元突触可塑性的影响及其作用机制研究。方法 选用SPF级SD大鼠,采用双侧颈总动脉分次结扎法,建立VD大鼠模型。选取造模成功的大鼠,随机分为模型组,补肾通络方高、中、低剂量组,胰岛素样生长因子-1（IGF-1）组,并设假手术对照组,分别给予对应的药物灌胃,1次/d,连续4周;其中补肾通络方高、中、低剂量组的灌胃剂量分别为3,1.5,0.75 g·kg^-1,IGF-1组灌胃剂量20 μg·kg^-1,模型组和假手术组给予同体积的生理盐水灌胃。末次灌胃结束后,采用Morris水迷宫法观察各组大鼠空间学习记忆能力,原位末端标记法（TUNEL）检测海马神经元细胞凋亡情况,高尔基染色法（Golgi）观察海马神经元突触形态及树突棘数量变化,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）,蛋白激酶B（Akt）,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）,突触素（SYP）及淀粉样前体蛋白（APP）蛋白的表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期、游泳路程明显延长,撤除平台后跨越原平台次数明显减少（P<0.05）,细胞凋亡数目明显增多（P<0.05）;树突棘数量明显减少（P<0.05）;PI3K,Akt,mTOR,SYP蛋白表达明显减少,APP表达明显增多（P<0.05）;与模型组比较,补肾通络方组,IGF-1组逃避潜伏期、游泳路程明显缩短,撤除平台后跨越原平台次数明显增多（P<0.05）,细胞凋亡数目明显减少（P<0.05）;PI3K,Akt,mTOR,SYP蛋白表达明显增多,APP表达明显减少（P<0.05）;与IGF-1组比较,在大鼠逃避潜伏期、游泳路程、撤除平台后跨越原平台次数,细胞凋亡数目,树突棘数量,PI3K,Akt,mTOR,SYP,APP蛋白表达等,补肾通络方高剂量组差异均无统计学意义;补肾通络方中、低剂量组差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 补肾通络方能够改善VD大鼠学习记忆能力,其机制可能与激活PI3K/Akt/mTOR自噬通路,改善海马神经元细胞突触可塑性有关。     

补阳还五汤防治2型糖尿病小鼠骨骼肌病变的作用

目的 基于线粒体转运、糖代谢、氧化应激及炎性介质探讨补阳还五汤防治2型糖尿病骨骼肌病变的作用。方法 选用60只SPF级雄性C57BL/6J小鼠,高脂饲料联合链脲佐菌素腹腔注射构建2型糖尿病小鼠模型,按随机数字表法随机分组,其中正常组、补阳还五汤高、中、低剂量组、二甲双胍组、模型组各10只。补阳还五汤各剂量组及二甲双胍组灌喂剂量分别为86.5、43.2、21.6 g·kg^-1、150 mg·kg^-1;实验期间定期检测小鼠血糖等指标,实验结束后取骨骼肌,分别置于4%多聚甲醛-80 ℃冰箱冻存。进行血液样本送检,骨骼肌采用苏木素-伊红（HE）染色,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测炎症指标及活性氧（ROS）,蛋白免疫印迹法（Western blot）、免疫组化检测线粒体蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组小鼠空腹血糖、饮水量、进食量显著升高（P<0.01）,体质量显著降低（P<0.01）,与模型组比较,补阳还五汤组及二甲双胍组小鼠空腹血糖、进水量、进食量明显降低（P<0.05,P<0.01）,体质量上升（P<0.01）;与正常组比较,模型组TNF-α、IL-6、ROS显著增加（P<0.01）,与模型组比较,二甲双胍组与补阳还五汤各组TNF-α、IL-6、ROS均明显下降（P<0.05,P<0.01）。模型组骨骼肌肌纤维普遍萎缩性变细,提示骨骼肌萎缩,形态结构改变,而二甲双胍组及补阳还五汤各组小鼠骨骼肌病理状态有所减轻,纤维束形态部分恢复正常;与正常组比较,模型组线粒体融合蛋2（Mfn2）显著减少（P<0.01）,与模型组比较,二甲双胍组与补阳还五汤各剂量组Mfn2明显增多（P<0.05,P<0.01）;与正常组比较,模型组分裂蛋白Drp1显著增多（P<0.01）,与模型组比较,二甲双胍组与补阳还五汤各剂量组分裂蛋白1（Drp1）显著减少（P<0.01）。结论 补阳还五汤可以改善2型糖尿病骨骼肌病变小鼠的体质量及骨骼肌病理形态,降低空腹血糖、进食量、进水量、TNF-α、IL-6、ROS值及分裂蛋白Drp1,升高体质量及线粒体融合蛋白Mfn2。     

化风丹中As2S2及As2O3的含量测定

目的:建立化风丹中不溶性砷盐和可溶性砷盐的含量测定方法,为该制剂的质量控制提供参考。方法:采用滴定法和紫外分光光度法分别测定18批化风丹中二硫化二砷和三氧化二砷的含量。结果:建立的二硫化二砷含量测定方法重复性好,平均加样回收率97.61%,RSD 2.0%。三氧化二砷在4~16μg与吸光度线性关系良好,平均回收率97.77%,RSD2.1%。18批化风丹中二硫化二砷质量分数0.012~0.021 3 g·g-1,平均质量分数0.018 4 g·g-1,差异系数13.3%;三氧化二砷质量分数75.24~124.55μg·g-1,平均质量分数92.99μg·g-1,差异系数15.3%。结论:建立的含量测定方法简单、准确,为化风丹质量标准提升提供实验依据。不同批次化风丹中二硫化二砷和三氧化二砷含量差异较大。     

不同产地雄黄及其炮制品中二硫化二砷和可溶性砷含量比较

目的:比较研究不同产地雄黄及其炮制品中主成分As2S2及可溶性砷盐As2O3的含量差异。方法:采用2010年版《中国药典》雄黄项下的滴定法测定不同产地雄黄及其炮制品中As2S2的含量,采用AFS-230E型原子荧光光度计检测上述样品中可溶性砷盐As2O3含量。结果:不同产地的雄黄及其炮制品中As2S2,As2O3含量存在显著差异。雄黄炮制后,炮制品中As2S2含量均提高,As2O3含量均明显降低。除吉林和江苏2个产地的的雄黄及其炮制品中As2S2含量<90.0%,其余样品均符合药典规定;且雄黄炮制品中As2O3含量均能控制在1.7 mg.g-1以下。结论:研究结果可为指导雄黄临床合理用药提供参考依据。     

乌头汤对CIA大鼠MCP-1/CCR2/ERK1/2信号的作用

目的:研究乌头汤对胶原诱导关节炎大鼠体内MCP-1/CCR2/ERK1/2信号的影响。方法:50只SD大鼠,随机选10只为正常组,剩下40只造胶原诱导关节炎模型,造模成功后随机分成模型组、乌头汤低剂量组(3.75 g·kg~(-1)·d~(-1))、乌头汤高剂量组(7.5 g·kg~(-1)·d~(-1))和甲氨蝶呤组(1 mg·kg~(-1)·w~(-1)),灌胃给药28 d后取材。采用ELISA法检测大鼠血清中单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)的含量,免疫组织化学法检测大鼠踝关节中MCP-1的表达水平,利用Western Blotting检测大鼠踝关节中CC趋化因子受体2(CC chemokine receptor 2,CCR2)和细胞外信号调节激酶1/2(extracellular-signal-regulated kinases 1/2,ERK1/2)及其磷酸化形式的表达水平。结果:乌头汤能显著降低胶原诱导关节炎大鼠血清及踝关节中MCP-1的含量,同时能够显著降低模型大鼠踝关节中CCR2的含量及ERK1/2的磷酸化水平,但对总的ERK1/2没有明显影响。结论:乌头汤具有下调胶原诱导关节炎大鼠体内MCP-1/CCR2/ERK1/2信号的作用。     

莫诺苷抑制H2O2诱导的神经细胞凋亡

目的：研究莫诺苷对氧化应急诱导的神经细胞凋亡的影响。方法：培养的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)神经细胞加入莫诺苷(1,10,100 μmol·L^-1)预孵育24 h，加入H₂O₂(500 μmol·L^-1) 作用18 h诱导产生氧化损伤，测定对细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响；用Western blot方法检测caspase-3,caspase- 9，Bcl-2和Bax的表达。结果：莫诺苷(10,100 μmol·L^-1)抑制氧化损伤，与模型组相比，SOD活性分别增加了14%(P<0.01)和11%(P<0.05)；莫诺苷(1,10,100 μmol·L^-1) 与模型组相比，caspase-3的含量分别减少了31%(P<0.01)，103%(P<0.001)和95%(P<0.001)，caspase-9的含量分别减少了71%(P<0.001)，132%(P<0.001)和37%(P<0.05)，Bcl-2分别增加了88%(P<0.01),121%(P<0.001)和60%(P<0.01)，对Bax没有影响。结论：莫诺苷可通过抗氧化作用抑制H₂O₂诱导的神经细胞凋亡，具有神经保护作用。     

益肾达络饮对EAE小鼠p-JNK1/2,JNK1/2,COX-2的影响

目的:研究益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠磷酸化c-Jun氨基末端激酶1/2(p-JNK1/2),c-Jun氨基末端激酶1/2(JNK1/2)及环氧合酶-2(COX-2)的影响。方法:将48只雌性SJL小鼠(8~12周龄)随机分为4组,即正常组、模型组、益肾达络饮组和泼尼松组,每组各12只。在模型组、益肾达络饮组和泼尼松组每只小鼠上腹部,分两点ih抗原乳剂200μL[含髓鞘蛋白脂质蛋白(PLP)139-151150μg,H37 Ra 400μg],记为第1天;分别在第1天和第3天给予每只小鼠尾静脉注射百日咳杆菌液100μL(含百日咳杆菌0.6×106个)。造模的第7天给药,正常组和模型组给予生理盐水10 m L·kg-1ig,益肾达络饮组给予益肾达络饮生药量20 g·kg-1ig,泼尼松组给予泼尼松药液3.9 mg·kg-1ig,共干预15 d。免疫后每天记录各组小鼠的神经功能评分;Western blot法测定EAE小鼠脑组织内p-JNK1/2,JNK1/2,COX-2的表达。结果:与正常组比较,模型组EAE小鼠的神经功能评分明显升高(P0.01),p-JNK1,p-JNK2和COX-2的表达水平明显升高(P0.05);与模型组比较,益肾达络饮组和泼尼松组明显降低EAE小鼠的神经功能评分(P0.05),明显降低p-JNK1,p-JNK2和COX-2蛋白表达的水平(P0.05,P0.01);泼尼松组COX-2的表达水平低于益肾达络饮组(P0.05)。结论:JNK1/2通路和COX-2与EAE的发病有关,益肾达络饮可通过降低p-JNK2和COX-2的表达降低EAE小鼠的神经功能评分,但其具体的机制需进一步探讨。     

黄芩体内H2O2清除系统和黄酮类活性成分积累的相关性研究

目的:研究黄芩H2O2清除系统和黄酮类活性成分积累的相关性.方法:采用HPLC方法检测黄芩悬浮细胞中黄芩苷、黄芩素的含量,采用紫外分光光度法测定总黄酮、H2O2含量和POD,PAL酶活性.结果:40℃、黑暗、PEG胁迫组总黄酮含量和PAL酶活性在12 d显著提高.NPA,NPA+40℃,40℃,NPA+黑暗,黑暗,PEG胁迫12 d前后黄芩苷呈下降趋势,黄芩素呈上升趋势,POD酶活性呈升高趋势,H2O2含量保持稳定.结论:适度的环境胁迫促进黄芩总黄酮的积累,黄芩苷在POD酶的作用下转化为黄芩素,同时维持H2O2水平的稳定以避免氧化伤害.     

松花粉对H2O2诱导HepG2细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨松花粉对过氧化氢(H_2O_2)诱导人肝癌HepG2细胞应激性氧化损伤的保护作用。方法:将HepG2细胞分为正常组,H_2O_2模型组和样品干预组。样品干预组用不同浓度的松花粉预处理HepG2细胞12 h,H_2O_2模型组和样品干预组用400μmol·L~(-1)过氧化氢氧化损伤细胞2 h,产生氧化应激损伤。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测HepG2细胞活力;微板法检测细胞内活性氧(ROS),超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,乳酸脱氢酶(LDH)及丙二醛(MDA)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测抗氧化通路中关键基因核因子E2相关因子2(Nrf2),Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1),谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCL)和血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白的表达水平,以评价松花粉对HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用。结果:MTT结果显示,与正常组比较,松花粉(80,40,20,10,5 mg·L~(-1))对HepG2细胞没有毒性;H_2O_2模型组中ROS,LDH及MDA的水平显著升高(P0.01),SOD和GSH-Px的活性显著降低(P0.01)。与H_2O_2模型组比较,松花粉干预组中ROS,LDH及MDA的水平显著降低(P0.05,P0.01),SOD和GSH-Px的活性显著升高(P0.05,P0.01)。Western blot结果显示,松花粉显著上调Nrf2,HO-1和GCL的蛋白表达,并下调Keap1的蛋白表达。结论:质量浓度5~20 mg·L~(-1)松花粉可有效保护400μmol·L~(-1)H_2O_2对HepG2细胞应激性氧化损伤。其机制可能与调节SOD,GSH-Px活性,ROS,LDH,MDA水平有关,同时与调控抗氧化通路中关键基因Nrf2,Keap 1,HO-1,GCL蛋白的表达水平有关。     

独活不同提取部位抑制H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤

目的： 通过比较独活不同提取物对H₂O₂ 致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用,筛选药理活性最强的提取部位 方法： 以回流提取,溶剂萃取及硅胶柱层析方法得到独活不同提取部位预保护6 h后与250 μmol·L^-1 H₂O₂ 共同作用于人神经母细胞瘤细胞株（SH-SY5Y） 24 h,MTT检测细胞活力,并试剂盒法测定细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量,以及免疫荧光细胞化学法检测脑源性神经营养因子（BDNF）和神经因子-3（NT-3）的表达量 结果： 独活各提取物除石油醚萃取物外均能救护H₂O₂ 所致SH-SY5Y细胞活力降低,且有明显的量效关系;4种提取物均能增强SOD活性,降低MDA含量,不同提取部位抗氧化作用无差异;石油醚-乙酸乙酯组显著增强BDNF、NT-3蛋白表达（与正常组比较,分别为94.5%和97.5%）,其神经营养作用强于其余提取物。结论： 独活不同提取部位均可不同程度保护H₂O₂ 损伤SH-SY5Y细胞,其中石油醚-乙酸乙酯组作用最强。     

外源H2O2处理对药用大麻中大麻素含量的影响

目的：通过外源活性氧调节大麻的次生代谢,提高大麻二酚(CBD)含量,为优质药用大麻生产提供新的技术。方法：在大麻始果期采摘大麻植株顶端苞片,分别采用清水和20、200、2000μmol·L^–1过氧化氢(H₂O₂)对大麻苞片进行喷洒处理,连续4 d分析大麻体内活性氧含量、抗氧化酶活性、大麻素生物合成途径关键基因表达量及大麻素类成分含量的变化规律。结果：外源H₂O₂使大麻苞片中的H₂O₂、O₂^·–及丙二醛(MDA)含量均有所提升。20μmol·L^–1 H₂O₂处理使大麻超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力提升最大,在处理第1～2天达到峰值。过氧化物酶(POD)在H₂O₂处理第3天达到峰值。外源H₂O₂能够明显提升聚酮合酶、四氢大麻...     

Cardioprotective effects of rhamnetin in H9c2 cardiomyoblast cells under H2O2-induced apoptosis

Ethnopharmacological relevance

Many studies have emphasized that flavonoids, found in various fruits, vegetables, and seeds, as well as tea and red wine, have potential health-promoting and disease-preventing effects. Rhamnetin is a flavonoid that exhibits antioxidant capabilities. However, little is known about its effect on cardiac myocytes under oxidative stress and the underlying mechanisms.

Materials and methods

H9c2 cardiomyoblast cells were subjected to H₂O₂, to study the protective effect of rhamnetin on cell viability, apoptosis, and ROS production. Signaling proteins related to apoptosis, survival, and redox were analyzed by Western blot. Furthermore, the mRNA expressions of SIRTs were tested by real time-polymerase chain reaction (PCR).

Results

We investigated the protective effects of rhamnetin against H₂O₂-induced apoptosis in H9c2 cardiomyoblasts. Rhamnetin protected cells against H₂O₂-induced cell death without any cytotoxicity, as determined by the XTT assay, LDH assay, TUNEL assay, Hoechst 33342 assay, and Western blot analysis of apoptosis-related proteins. Rhamnetin also enhanced the expression of catalase and Mn-SOD, thereby inhibiting production of intracellular ROS. Furthermore, rhamnetin recovered the H₂O₂-induced decrease in phosphorylation of Akt/GSK-3β and MAPKs (ERK1/2, p38 MAPK, and JNK) and pretreatment with their inhibitors, attenuating the rhamnetin-induced cytoprotective effect. Further studies with real time-PCR and a sirtuin inhibitor showed that cardioprotection by rhamnetin occurred through induction of SIRT3 and SIRT4.

Conclusions

Taken together, these results suggest that rhamnetin may have novel therapeutic potential to protect the heart from ischemia-related injury.