脑缺血再灌注后血管内皮细胞凋亡及其与Bcl—2表达的关系

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后血管内皮细胞凋亡及其与Bcl-2蛋白表达的关系。方法 采用原位末端标记法和免疫组化法分别观察脑缺血再灌注2h、6h、12h、24h、2d、3d、7d、14d和21d等时间 点血管内皮细胞凋亡和Bcl-2蛋白的表达。结果 （1）脑缺血再灌注2h在缺血周围区即有凋亡内皮细胞出现,12－24h达高峰,之后逐渐下降,至21d与假手术组已无显著性差异。（2）脑缺血再灌注后2h在缺血周围区内皮细胞Bcl-2开始表达,12－24h达高峰,之后逐渐下降,至14d接近假手术组水平。（3）Bcl-2蛋白表达时相变化与内皮细胞凋亡基本一致。结论 脑缺血再灌注损伤中凋亡是血管内皮细胞的死亡形式之一,Bcl-2蛋白具有抑制缺血再灌注后血管内皮细胞凋亡的作用。     

大鼠全脑缺血再灌注损伤后调控基因Bcl-2、Bax的表达及与细胞凋亡的关系

目的:本研究旨在探讨Bcl-2及Bax蛋白在大鼠全脑缺血再灌注损伤中的变化及与细胞凋亡的关系。方法:雄性Wistar大鼠56只,随机分为假手术组、缺血15分钟再灌注1、6、12、24、48、72小时组。采用大鼠四条血管阻断方法制备大鼠全脑缺血再灌注模型。采用TUNEL法观察不同再灌注时间组海马CAl区细胞凋亡的变化。采用免疫组化法观察Bcl-2及Bax蛋白表达水平的变化。结果:脑缺血损伤后随再灌注时间延长凋亡细胞逐渐增多,至再灌注48小时达到高峰,72小时后减少。Bcl-2表达至再灌注12小时达高峰,再灌注24~72小时组逐渐减弱。Bax表达至48小时达高峰,再灌注72小时减少。结论:Bcl-2于再灌注早期表达增强,Bax于再灌注中期表达增强,Bcl-2/Bax比例失衡可能是大鼠全脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的机制之一。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马Bcl-2、Bax蛋白的表达

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后Bcl-2、Bax蛋白在海马表达的变化.方法 线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组化染色检测Bcl-2、Bax蛋白表达,应用TUNEL法检测海马区细胞凋亡.结果 缺血再灌注2h后海马神经元Bcl-2、Bax蛋白开始表达,Bcl-2蛋白12h达高峰,Bax蛋白12h～24h达高峰,之后开始下降.再灌注2h后海马凋亡细胞开始表达,随着再灌注时间的延长,其表达不断增加.Bcl-2/ Bax的比率在再灌注开始时升高,再灌注12h达高峰,随后开始下降.结论 凋亡是脑缺血再灌注损伤的重要形式之一,Bcl-2/ Bax的改变与缺血再灌注后海马的神经元存亡有关,缺血再灌注可导致海马神经元凋亡.     

高龄大鼠全脑缺血再灌注后认知功能障碍与额叶神经细胞凋亡及P53蛋白表达的实验研究

目的 探讨高龄大鼠全脑缺血再灌注不同时间大鼠行为变化与额叶神经细胞凋亡及P^53蛋白表达的相关性。方法 采用四血管阻断方法建立SD高龄大鼠急性全脑缺血模型。实验第1部分为大鼠行为测定，第2部分为制造大鼠全脑缺血模型。并随机分为正常组、假手术组、手术组。缺血15min，分别于再灌注1、6、12、24、48、72h和7d断头取脑，采用TUNEL方法检测神经细胞凋亡。免疫组化方法观察额叶P^53蛋白的表达。结果 全脑缺血再灌注72h、7d学习记忆能力明显下降。TUNEL染色结果示。手术组于再灌注24h开始出现阳性细胞，72h时达高峰，7d时明显减少。免疫组化染色结果为，手术组于再灌注24h开始出现P^53蛋白表达，48h时达高峰。7d时明显下降。结论 急性全脑缺血再灌注使大鼠学习记忆功能受到损害，全脑缺血再灌注后的迟发性神经元坏死主要以凋亡方式，全脑缺血再灌注后额叶P^53蛋白表达增加。神经细胞凋亡和P^53蛋白的表达在一定时间内呈正相关，P^53蛋白的表达和神经细胞凋亡与认知功能呈负相关。     

ATP敏感性钾通道开放剂对大鼠脑缺血再灌注后caspase-12 mRNA及蛋白表达的影响

目的 观察ATP敏感性钾通道(KATP)开放剂对大鼠脑缺血再灌注后caspase-12mRNA和蛋白表达的影响,探讨内质网信号通路是否参与了KATP开放剂对脑缺血后神经元凋亡的抑制机制.方法 200只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组,缺血再灌注组,开放剂组及阻断剂组.应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,分别应用免疫组化染色、RT-PCR技术检测脑缺血再灌注后各组caspase-12蛋白及mRNA的表达.结果 在缺血再灌注组,开放剂组及阻断剂组,随着缺血再灌注时间的延长,caspase-12mRNA及蛋白的表达逐渐增高,在缺血再灌注后24 h达高峰.开放剂组caspase-12 mRNA及蛋白表达在各时间点均显著少于缺血再灌注组及阻断剂组(P＜0.05或P＜0.01).阻断剂组各时间点与缺血再灌注组相比均无显著性差异(P＞0.05).结论 KATP开放剂可能通过抑制内质网信号通路,减少神经元凋亡,降低脑缺血再灌注损伤.     

P-选择素在大鼠全脑缺血再灌注微血管内皮细胞损伤中的作用

目的 探讨P-选择素（P-selectin)在大鼠全脑缺血再灌注血管内皮细胞损伤过程中的作用。方法 将大鼠随机分为假手术组和脑缺血30min再灌注1h,3h,6h,12h,24h,48h,72h组，动物模型采用全脑缺血模型三血管阻塞法，用免疫组化法检测脑组织缺血再灌注不同时间点FⅧ相关抗原（vWF)的表达以标记内皮细胞损伤与修复过程，同时用原位杂交方法检测P-选择素mRNA的表达变化。结果 假手术对照组未见P-选择素mRNA表达，脑缺血再灌注后1h表达出现上调，12-24h达高峰，72h仍有表达，FⅧ相关抗原在假手术组呈强阳性表达，脑缺血再灌注后3h表达下降，24-48h表达最低，72h表达开始恢复，结论 脑缺血再灌注微血管内皮细胞损伤主要发生在早期，此过程中P-选择素mRNA表达上调，说明P-选择素参与了脑缺血后内皮细胞的损伤过程。     

局灶性脑缺血/再灌注损伤后大鼠脑组织tPA表达变化与细胞凋亡研究

目的　探讨大鼠脑缺血 /再灌注后脑组织内组织型纤溶酶原激活物 (t PA)表达变化及与细胞凋亡的关系和意义。方法　采用大鼠局灶性脑缺血 /再灌注模型 ,应用免疫组化染色及原位杂交技术检测脑组织 t PA表达变化 ,TU NEL 染色观察神经元的凋亡及其发生规律。结果　 t PA蛋白及 m RNA在缺血再灌注早期即开始表达 ,主要见于皮质损伤区周围及海马区 ,阳性着色的神经元表达明显 ,血管表达较弱。再灌注 4 8h神经元表达明显增强 ,缺血灶及其周边的微血管内皮表达也明显增强。再灌注 72 h表达有所下降。凋亡细胞主要出现于大脑皮质及尾壳核病变中心区的周围 ,再灌注 4 8～ 72 h达高峰。结论　脑缺血 /再灌注损伤可诱导神经元及血管内皮细胞 t PA表达增加 ,t PA可能通过促进细胞凋亡而介导再灌注损伤。     

大鼠脑缺血再灌注模型粘附分子VCAM-1表达的研究

目的 探讨血管内皮细胞粘附分子（vascular cell molecule-1,VCAM-1)在脑缺血再灌注损伤中的作用和机制。方法 制作大脑中动脉梗死模型。分别于再灌注后6h,24h,36h,48h和7d5个时相点用免疫组化方法观察大鼠模型脑缺血区域VCAM-1的表达，并与永久性脑梗死，假手术组和正常大鼠组比较。结果 （1）正常对照组无VCAM-1的表达，假手术组在6h,24h,36h和48h均无VCAM-1的表达；（2）永久性脑梗死组6h后，在梗死周边区大脑微血管内皮细胞上和神经元上有VCAM-1的明显表达，24h表达达高峰，36-48h开始减弱，7d后完全消失；（3）缺血再灌注组6h后，在缺血周边区大脑神经元上和微血管内皮细胞上有较弱表达，24-48h达高峰，7d后在内皮细胞上仍有VCAM-1的持续表达。结论 缺血再灌注模型脑缺血区域有VCAM-1的表达，VCAM-1可能是缺血再灌注损伤的机制之一。     

大鼠全脑缺血再灌注后额叶神经细胞凋亡与P53蛋白表达的实验研究

目的 探讨大鼠全脑缺血再灌注后不同时间对额叶神经细胞凋亡及P~(53)蛋白表达的影响。方法采用改良的Pulsineli 4-血管阻断(4-VO)方法建立SD大鼠急性全脑缺血模型,随机分为3组:正常组(n=7);假手术组(n=49);手术组(n=49)。缺血15min,分别于再灌注1、6、12、24、48、72h和7d断头取脑,采用TUNEL方法检测神经细胞凋亡,SP免疫组化方法观察额叶P~(53)蛋白的表达。结果 全脑缺血再灌注24h,可见少量TUNEL阳性细胞,再灌注48h可见较多TUNEL阳性细胞,72h出现大量TUNEL阳性细胞,7d明显减少。免疫组化染色:缺血组于再灌注24h可见少量P~(53)蛋白表达,48h达高峰,72h有所下降,7d明显下降,这种表达主要在细胞核内。结论 急性全脑缺血再灌注后的迟发性神经元坏死是以凋亡的方式发生的,全脑缺血再灌注后,额叶P~(53)蛋白表达增加,神经细胞凋亡和P~(53)蛋白的表达在一定时间内呈正相关。     

大鼠全脑缺血再灌注后额叶神经细胞凋亡与P^53蛋白表达的实验

目的 探讨大鼠全脑缺血再灌注后不同时间对额叶神经细胞凋亡及P^53蛋白表达的影响。方法 采用改良的Pulsineli 4-血管阻断(4-VO)方法建立SD大鼠急性全脑缺血模型，随机分为3组：正常组（n=7)；假手术组（n=49)；手术组（n=49)。缺血15min，分别于再灌注1、6、12、24、48、72h和7d断头取脑，采用TUNEL方法检测神经细胞凋亡，SP免疫组化方法观察额叶P^53蛋白的表达。结果 全脑缺血再灌注24h，可见少量TUNEL阳性细胞，再灌注48h可见较多TUNEL阳性细胞，72h出现大量TUNEL阳性细胞，7d明显减少。免疫组化染色：缺血组于再灌注24h可见少量P^53蛋白表达，48h达高峰，72h有所下降，7d明显下降，这种表达主要在细胞核内。结论 急性全脑缺血再灌注后的迟发性神经元坏死是以凋亡的方式发生的，全脑缺血再灌注后，额叶P^53蛋白表达增加，神经细胞凋亡和P^53蛋白的表达在一定时间内呈正相关。     

脑缺血再灌注后热休克蛋白70、c-fos的表达及柘树制剂的神经保护作用

目的 观察局灶脑缺血再灌注后热休克蛋白（HSP）70、c-fos的表达及其与细胞调亡的关系,探讨柘树制剂对脑缺血后神经细胞损伤的保护作用。方法 采用改良Longa法制作大鼠局灶脑缺血冉灌注模型。柘树制剂预处理组（柘树组）大鼠在实验前灌服柘树制剂2ml每日3次,连用5d。在缺血再灌注不同时点（1h、6h、12h、24h、3d、7d）将大鼠处死取腑,进行HSP70及c-fos免疫组化染色、c-fos mRNA原位杂交、原位末端标记（TUNEL）及HE染色,许对其阳性结果进行半定量分析。结果脑缺血再灌注能诱导HSP70及c-fos的表达。缺血冉灌注6h绀HSP70存缺血侧皮质及基底节开始表达,24h达高峰。缺血再灌注1h组c-fos即有表达,6h达高峰,后逐渐下降。细胞凋亡于缺血再灌注6h最显著。柘树组HSP70及c-fos表达的阳性细胞数均较缺血再灌注组明监增加,两组比较差异均有显著性（均P〈0．01）,而TUNEL阳性细胞数明显减少。结论 HSP70及c=-ros均参与了脑缺血的病理生理过程,柘树制剂对脑缺吡冉灌注损伤有保护作用。     

亚低温通过抑制两种凋亡通路对大鼠脑缺血再灌注损伤发挥保护作用

目的探讨亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后胱冬酶(caspase)依赖性及非依赖性两种凋亡通路的影响。方法线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(M CAO)及再通模型,分为假手术组、常温及亚低温脑缺血再灌注组,应用RT-PCR技术检测再灌注后不同时相缺血侧皮层凋亡诱导因子(A IF)及caspase-3 mRNA的表达。结果脑缺血2h再灌注2~4h,A IF及caspase-3 mRNA表达开始增加,随着再灌注时间的延长表达逐渐增强,至再灌注24h达高峰。每一再灌注时间点亚低温组与常温组A IF及caspase-3 mRNA表达均有显著差异,亚低温组mRNA表达均低于相应常温组。结论亚低温不仅降低caspase依赖性通路中的关键蛋白酶—caspase-3的mRNA的表达,而且降低caspase非依赖性通路中的关键蛋白—A IF的mRNA的表达,亚低温通过抑制两种凋亡通路对大鼠脑缺血再灌注损伤发挥保护作用。     

大鼠脑缺血再灌后凝血酶与PAR-1的表达及意义

目的探讨大鼠脑缺血再灌后凝血酶（thrombin）及蛋白酶活化受体-1（PAR-1）的表达变化及意义。方法栓线法制作大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型,用Western Blot方法检测对照组及脑缺血2h再灌注不同时程组（12、24h,3、7d）凝血酶和PAR1蛋白表达水平。结果对照组可以检测到少量凝血酶（thrombin）和PAR-1的表达,两种蛋白于再灌注12h显著上升。3d达高峰（P〈0．01）,7d下降;缺血再灌注后凝血酶与PAR-1的表达呈高度正相关（r=0．934,P〈0．01）。结论凝血酶和PAR-1蛋白的表达增加可能与脑缺血冉灌注损伤的发病机制有关;凝血酶可能通过激活PAR-1参与了再灌注损伤的病理生理过程。     

大鼠局灶性脑缺血后CPP32和P53蛋白的表达

目的　探讨大鼠脑缺血后神经元损害过程中CPP32和P5 3蛋白表达的变化。方法　建立大鼠大脑中动脉闭塞 (MCAO 2h)模型 ,采用免疫组化方法观察CPP32和P5 3蛋白在大鼠脑缺血后不同时间的动态变化。结果　CPP32蛋白在脑缺血再灌注 2 2h和 4 6h ,阳性表达最明显。而P5 3在脑缺血再灌注 2 2h阳性表达最明显 ,并持续至再灌注 70h。阳性表达主要位于神经元严重受损的缺血区内。结论　CPP32和P5 3蛋白表达与脑缺血后神经细胞死亡关系密切。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后Fas表达与细胞凋亡关系的研究

目的 :本实验通过观察缺血再灌注后大鼠脑组织中 Fas的表达及细胞凋亡的情况 ;初步探讨脑缺血后 Fas表达与细胞凋亡的关系 ,以及其发生的机理。方法 :采用 TUNEL和免疫组化方法观察细胞凋亡及 Fas蛋白在脑缺血再灌注后随时间延长动态变化情况 ,并利用图像分析测定二者的免疫强度。结果 :脑缺血再灌注后神经细胞过度地表达 Fas,以缺血半暗带明显 ,且在缺血再灌注后 6小时达高峰 ,于 2 4小时开始下降。而细胞的凋亡于缺血再灌注后 6小时开始增加 ,于 2 4小时达高峰 ,于 36小时略有下降 ,凋亡细胞分布也以缺血半暗带明显。结论 :脑缺血再灌注可引起Fas的过度表达和神经细胞凋亡增加 ,而缺血后 Fas的过度表达是诱导细胞凋亡的重要的因素之一     

脑缺血再灌流后HSP70蛋白的表达及其与凋亡的关系

目的 :研究脑缺血再灌流后 HSP70蛋白的表达及其与凋亡的关系。方法 :应用免疫组化的方法观察大鼠局灶性脑缺血再灌流后脑组织 HSP70蛋白的表达和细胞凋亡的分布。结果 :缺血 2 h再灌流 0 h即可见 HSP70表达和凋亡细胞 ,HSP70至 2 4h达高峰 ,凋亡细胞数于再灌流后 2 4～ 48h达高峰。结论 :脑缺血诱导 HSP70蛋白的表达和细胞凋亡 ,脑缺血后 HSP70蛋白的表达可能参与抑制细胞凋亡     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后MDM2的表达

目的探讨局灶性脑缺血再灌注后(murine double-minute 2,mdm2)mRNA表达的时间分布特征。方法采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血2h再灌注模型,RT-PCR技术检测mdm2 mRNA的表达。结果 Mdm2 mRNA在半暗带区缺血再灌注后6h表达开始增加,12h达高峰,24h开始下降,7d仍有表达。结论脑缺血再灌注后mdm2 mRNA表达增加可能是机体对缺血损伤的保护性反应。