养阴益气活血冲剂对培养人脐静脉内皮细胞抗凝和纤溶等功能的影响

目的 :研究养阴与益气活血方药对培养人脐静脉内皮细胞抗凝和纤溶等功能的影响。方法 :采用血清药理学方法观察养阴益气活血方药对培养人脐静脉内皮细胞抗凝、纤溶及抗自由基损伤的作用。结果 :养阴益气活血方药具有显著增高前列环素 (6 keto PGF1α)含量 ;提高组织型纤溶酶原激活物 (t PA)的活性 ,抑制组织型纤溶酶原激活抑制物 (PAI)活性的作用 ;提高超氧化物歧化酶 (SOD)活力 ,降低丙二醛 (MDA)含量的作用 ;降低ET含量 ,提高NO含量等作用。结论 :养阴与益气、活血方药相伍在抗栓、溶栓、抗自由基损伤等方面具有协同作用 ,认为养阴生津方药是治疗血瘀证的重要法则。     

蝎毒纤溶活性肽预处理对缺氧血管内皮细胞抗凝和纤溶功能的影响

目的 应用人脐静脉内皮细胞(HUVECs)缺氧模型,探讨蝎毒纤溶活性肽(SVFAP)对缺氧损伤内皮细胞的保护作用.方法 对培养的HUVECs传代并分组:对照组常规培养;缺氧组将其放入含95% N2、5% CO2混合气体的缺氧环境中培养12 h,制备HUVECs缺氧损伤模型;药物干预组分别将终浓度为2,4,8 mg/L的SVFAP加入细胞培养液中进行培养,1 h后进行缺氧模型复制.观察各组细胞培养上清液中漂浮细胞数、抗凝、纤溶指标等变化.结果 与对照组相比,模型组培养液中的漂浮细胞数显著增高,前列环素(6-keto-PGF1α)和NO水平显著下降,组织型纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)活性增高,组织型纤溶酶原激活物(t-PA)活性显著降低; 蝎毒纤溶活性肽在较高剂量组能显著提高6-keto-PGF1α和NO水平、调节PAI-1和t-PA活性.结论 实验制备的HUVECs缺氧损伤模型存在着内皮细胞(EC)受损, 纤溶、抗凝功能失调; 蝎毒纤溶活性肽对缺氧环境下受损EC具有保护作用.     

蝎毒纤溶活性肽对血管内皮细胞分泌纤溶因子的影响

目的　研究蝎毒纤溶活性肽 (SVFAP)对血管内皮细胞释放组织型纤溶酶原激活剂 (t -PA)和纤溶酶原激活剂抑制物 (PAI - 1)的影响。方法　将不同浓度SVFAP与脐静脉内皮细胞共同孵育 10min及 4h后 ,分别收集培养液 ,以发色底物法测定培养液中t-PA和PAI -1的活性。结果　SVFAP在用药后 10min及 4h各浓度大多使t-PA活性增强 ,PAI - 1活性降低 ,t-PA/PAI - 1比值升高。结论　SVFAP的纤溶作用与抑制内皮细胞分泌PAI - 1和促进t-PA释放有关。     

养阴方对培养人脐静脉内皮细胞ET和NO含量的影响

目的研究养阴方对培养人脐静脉内皮细胞内皮素(ET)和一氧化氮(NO)含量的影响。方法采用血清药理学方法观察养阴方对培养人脐静脉内皮细胞ET和NO含量的变化。结果养阴方能显著降低ET含量,提高NO含量;丹参对ET含量也有显著降低作用,并对NO含量有一定提高作用,但与养阴方作用相比差异仍有显著性。结论结合以往临床与实验研究,提示养阴方具有保护血管内皮细胞、调节血管舒缩功能、抗血栓等作用。     

川芎嗪对缺氧人脐静脉内皮细胞抗凝和纤溶功能的影响

目的 应用人脐静脉内皮细胞(HUVECs)缺氧模型,观察川芎嗪对其抗凝和纤溶功能的影响.方法 制备正常人脐静脉原代EC,待EC培养达融合状态后,将其放入含95%N2、5%CO2混合气体的缺氧环境,制备人脐静脉原代EC缺氧损伤模型.并设正常组,模型组,川芎嗪组,观察各组细胞培养上清液中漂浮细胞数、抗凝、纤溶指标等变化.结果 与对照组相比,模型组培养液中的漂浮细胞数显著增高,前列环素(6-keto-PGF1α)水平显著下降,组织型纤溶酶原激活物抑制物(PAI)活性显著增高,组织型纤溶酶原激活物(t-PA)活性显著降低,内皮素(ET)水平显著增高,NO水平显著降低;川芎嗪具有显著提高6-keto-PGF1α水平,调节PAI、t-PA活性和ET、NO水平的作用.结论 本实验制备的人脐静脉原代EC缺氧损伤模型存在着EC受损,分泌功能下降,血管舒缩功能失调;川芎嗪具有保护在缺氧环境下EC受损,调节EC分泌功能和血管舒缩功能.     

全蝎纯化液对凝血酶诱导血管内皮细胞纤溶活性的影响

目的观察不同浓度全蝎纯化液对凝血酶诱导血管内皮细胞（VEC）释放组织型纤溶酶原激活物（t-PA）、纤溶酶原激活物抑制物（PAI）活性的影响。方法以凝血酶和不同剂量的全蝎纯化液同时作用于培养的人脐静脉内皮细胞（VEC-340）,12h后收集细胞液测定t-PA和PAI活性。结果与空白组比较,凝血酶组t-PA活性降低,PAI活性增高,差异有统计学意义（P〈0.01）,与凝血酶组比较,全蝎大剂量、中剂量、小剂量组t-PA活性均增高,PAI活性降低,差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论凝血酶对VEC-340细胞具有损伤作用,可诱导内皮细胞抗血栓性发生变化。全蝎纯化液可促进血管内皮细胞释放t-PA,抑制PAI分泌,对纤溶平衡具有调节作用。提示这可能与全蝎纯化液增加血管内皮细胞抗血栓能力有关。     

参芍胶囊对大鼠内皮素及纤溶酶原激活抑制物的影响

目的观察参芍胶囊对动脉粥样硬化大鼠血管内皮细胞中内皮素(ET)、一氧化氮(NO)及组织型纤溶酶原激活抑制物(PAI-1)水平的影响。方法将60只大鼠随机分成对照组、模型组、治疗组(低、中、高剂量)和阳性对照组,模型组给予高脂饮食,对照组给予普通饮食,治疗组给予高脂饮食的同时给予参芍胶囊治疗(低、中、高)3个治疗剂量,阳性对照组在给予高脂饮食的同时给予给辛伐他汀;42 d后分别测定各组大鼠血管内皮细胞中ET、NO和PAI-1的含量,观察各项指标有无统计学意义。结果与对照组相比,动脉粥样硬化组大鼠血管内皮细胞中NO降低,ET及PAI-1升高,有统计学意义(P<0.05)。治疗组与模型组相比较:给予参芍胶囊治疗后血管内皮细胞NO水平升高,ET、PAI-t含量降低,其中中剂量组与模型组相比有显著的统计学意义(P<0.05),低剂量和高剂量组与模型组相比无统计学意义。中剂量组与阳性对照组相比各项数据无显著性差异。结论参芍胶囊可以通过升高动脉粥样硬化大鼠血管内皮细胞中NO及降低ET及PAI-1水平,从而改善血管内皮细胞功能。     

不同条件下香烟提取物对血管内皮细胞纤溶平衡的影响

目的研究不同条件下香烟提取物（CSE）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）组织型纤溶酶原激活物（t—PA）和纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）含量的影响。方法选用第4代～6代HUVECs，接种于24孔培养板中，分为3组：①对照组；②不同浓度（5％、10％、20％）同一时间点CSE组：6h后收集各组细胞上清液；③同一浓度不同时间点CSE组：5％CSE刺激HUVECs，于不同时间点（4h、6h、8h、12h、24h）分别收集细胞上清液，采用酶联免疫吸附双抗体夹心分析（ELISA）法测定各组上清液中t—PA和PAI-1的抗原浓度。结果与对照组相比，不同浓度（5％、10％、20％）同一时间点CSE组中，6h后各浓度CSE组PAI-1含量均显著增高（P〈0．05），但各组间差异无统计学意义，10％与20％CSE组t—PA含量变化明显降低，而5%CSE组t—PA含量变化无统计学意义。同一浓度不同时间点CSE组中，5％CSE组PAI-1含量较对照组升高，且呈时间依赖性；t—PA含量变化无统计学意义。结论CSE可直接损伤血管内皮细胞，并抑制其纤溶活性，从而增加血栓痛的发生。     

螺旋藻激酶对人脐静脉内皮细胞t-PAmRNA、PAI-1mRNA表达的影响

目的研究螺旋藻激酶(Spirulina kinase,SPK)对人脐静脉内皮细胞t-PAmRNA、PAI-1mRNA表达的影响,探讨其抗血栓作用机制,为开发新型溶栓药物提供理论依据。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),建立肾上腺素(Adr)损伤模型加入不同浓度的SPK,并以肝素(Hep)为阳性对照,与空白组对照,经过12,24,48 h后,逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR),扩增产物经凝胶电泳分离后,凝胶图像分析仪照相和扫描,测定各组t-PAmRNA、PAI-1mRNA与内参基因三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mRNA的相对表达量。结果在Adr损伤模型中,2 mg/ml SPK可以上调t-PAmRNA表达,超大剂量SPK降低t-PAmRNA表达。SPK还可以随着剂量的增加明显的抑制PAI-1mRNA的表达,效果强于大剂量的肝素。结论 SPK可能通过小部分活化t-PAmRNA的表达,抑制PAI-1mRNA的表达,从而达到抗血栓的作用。     

青心酮对人血管内皮细胞tPA和PAI生成的影响

以发色底物分解产色法检测了青心酮对培养的人脐静脉内皮细胞tPA和PAI活性的影响。结果显示青心酮具有调节PAI和tPA平衡的作用，由于对PAI的抑制作用明显强于对tPA的作用．PAI／tPA比值明显下降。此调节作用并呈现一定的量效关系。因此，DHAP改善器官如子宫胎盘的微循环可能与其调节血管内皮细胞PAI／tPA活性平衡的作用有关。     

裘氏内异方含药血清对人脐静脉内皮细胞血管新生活性的影响

目的:观察裘氏内异方含药血清对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和管腔形成能力的影响。方法:设浓度分别为5%、10%、15%的裘氏内异方含药血清组和空白血清组,运用MTT法、Transwell实验和Tube formation实验观察细胞增殖、迁移及管腔形成能力。结果:裘氏内异方含药血清能够显著抑制内皮细胞的增殖、迁移和管腔形成能力,上述作用呈剂量依赖性。结论:抗血管新生活性可能是裘氏内异方治疗子宫内膜异位症的作用机制。     

四妙勇安汤对缺氧人脐静脉内皮细胞的影响

目的观察四妙勇安汤对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧损伤模型的影响。方法实验分为3组,即正常组、模型组、四妙勇安汤组,后2组建立体外细胞缺氧模型,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验观察四妙勇安汤对缺氧内皮细胞存活率的影响,测定四妙勇安汤对缺氧内皮细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量的影响,并用免疫荧光法检测细胞中血管内皮生长因子(VEGF)生成量的表达。结果四妙勇安汤能显著增加MTT实验中各孔吸光度值,降低LDH漏出量,增加VEGF的生成量。结论四妙勇安汤具有保护缺氧的HUVEC损伤的作用,其作用机制与增加细胞活性、降低缺氧造成的细胞毒性、增加VEGF的表达、促进血管新生的作用有关。     

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??OBJECTIVE To investigate the effect and the mechanism of baicalin in alleviating human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) injury induced by lipocalin-2. METHODS Lipocalin-2 at different concentration (0, 5, 10, 20 ??mol??L^-1) and different time gradient (0, 24, 48 and 72 h) were added in HUVEC, the proliferation and apoptosis of HUVEC, contents of interleukin-6 (IL-6) and monocyte chemotactic protein-1 (MCP-1) in HUVEC supernatant, lactic dehydrogenase (LDH) activities and the expressions of p-JNK, Bax and Bcl-2 in HUVEC were measured by MTT assay, flow cytometry, enzyme-linked immuno-sorbent assay (ELISA), colorimetry and Western blot, respectively. Different concentration of baicalin (15??30??60 mg??L^-1) or 10 ??mol??L^-1 SP600125, the specific inhibitor of JNK pathway, was added into HUVEC to detect the effect of baicalin. RESULTS Compared with the control group, 10 ??mol??L^-1 lipocalin-2 could significantly increase the apoptosis, IL-6, MCP-1 contents and LDH activities, p-JNK expression and Bax/Bcl-2 rate but restrain the proliferation in HUVEC (P<0.05). Compared with lipocalin-2 group, 30 mg??L^-1 baicalin could significantly restrain the apoptosis, IL-6, MCP-1 contents and LDH activities, p-JNK expression and Bax/Bcl-2 rate but increase the proliferation in HUVEC (P<0.05). CONCLUSION Our findings indicate that baicalin could alleviate HUVEC injury induced by lipocalin-2, the protective mechanism is related to the inhibition of JNK pathway.     

糖痹康对高糖损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的:观察糖痹康大鼠含药血清对高糖造成人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用。方法:以CCK-8法观察不同浓度葡萄糖对人脐静脉内皮细胞活力的影响;根据实验结果选择葡萄糖浓度为5.55mmol/L组为正常组,葡萄糖浓度为25mmol/L组做为模型组。然后制备正常组,弥可保组,糖痹康组的大鼠含药血清,将含药血清作用于高糖损伤的人脐静脉内皮细胞,分为正常组、高糖模型组、高糖弥可保组、高糖糖痹康低、中、高剂量组,并通过测定培养液中丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)含量与超氧化物歧化酶(SOD)活力,探讨糖痹康对血管内皮细胞损伤的保护作用。结果:与高糖模型组比较,糖痹康含药血清能减少细胞MDA、LDH释放量,提高SOD活力及NO含量。结论:糖痹康对高糖损伤的血管内皮细胞有一定的保护作用,间接的起到对周围神经的保护作用。     

风湿祛痛胶囊对VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的:观察风湿祛痛胶囊对血管内皮细胞生长因子(VEGF)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖、迁移、黏附、侵袭和管腔形成能力的影响,以及对VEGF受体2(VEGFR2)的干预作用。方法:VEGF体外诱导HUVEC,加入风湿祛痛胶囊低、中、高质量浓度(0. 02,0. 1,0. 5μg·L-1)作用后,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法、转移小室(transwell)法、黏附实验、细胞侵袭及管腔形成实验检测HUVEC的增殖活性、迁移、黏附、侵袭及管腔形成能力,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中VEGFR2磷酸化水平和蛋白含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测VEGFR2 mRNA表达水平。结果:与正常组比较,VEGF诱导24,48 h后均能显著升高HUVEC的增殖活性(P 0. 01),诱导24 h能明显升高HUVEC的迁移、黏附、侵袭和管腔形成能力(P 0. 01),显著升高HUVEC中VEGFR2磷酸化及蛋白和mRNA表达水平(P 0. 01);与VEGF组比较,风湿祛痛胶囊低、中、高质量浓度组作用48 h均能明显抑制HUVEC增殖活性(P 0. 05,P 0. 01),作用24 h对VEGF诱导的HUVEC迁移、黏附、侵袭和管腔形成能力有明显抑制作用(P 0. 05),也能下调VEGFR2磷酸化及蛋白和mRNA表达水平(P 0. 05)。结论:风湿祛痛胶囊能降低VEGF诱导的HUVEC细胞增殖、迁移、黏附、侵袭及管腔形成能力,这一作用可能与其抑制VEGFR2的磷酸化、蛋白和mRNA表达水平有关。     

防己黄芪汤对脐静脉内皮细胞功能的影响

目的:防己黄芪汤对血管内皮生长因子(VEGF)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移、黏附、侵袭及管腔形成能力的作用.方法:VEGF(20μg·L-1)体外诱导HUVECs,加入不同质量浓度防己黄芪汤(0.25,0.5,1g·L-1)作用后,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法、划痕修复实验、转移小室(transw...     

MTT法检测香叶木苷对脐静脉内皮细胞增殖抑制的影响

目的:测定香叶木苷对脐静脉内皮细胞的影响,优化出最佳加药浓度和最优加药时间。方法:1)将细胞分为对照组和实验组(终浓度10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL、50μg/mL、60μg/mL),MTT法检测细胞活性,根据抑制率和抑制率曲线确定了最佳加药浓度。2)将细胞分为A组(24h)、B组(48h)、C组(72h),每组设置对照,加药(20μg/mL)后分别按照各组时间用MTT法检测细胞活性,根据抑制率和抑制率曲线确定了最优加药时间。结论:经实验选择出的最佳加药浓度为20μg/mL,最优加药时间为48h,其IC50为254.8μg/mL。     

槲皮素对人脐静脉血管内皮细胞的OGD损伤的保护作用及机制研究

目的:探讨槲皮素(Quercetin,Que)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)的缺糖缺氧(OGD)损伤的保护作用及机制研究。方法:当HUVECs进行培养达到密度为80%~90%时,对HUVECs进行NO处理,时间为24h,形成OGD损伤的HUVECs模型。用不同浓度的槲皮素进行处理干预,对进行实验的HUVECs分4组,分别为空白组、OGD组、Que 5μmol/L组、Que 15μmol/L组。进行6h的HUVECs正常培养,进行噻唑蓝(MTT)比色法检测HUVECs活性,用于表达药物抑制率。对HUVECs的生命力强度用荧光素双醋酸酯染色(FDA)来检测。针对HUVECs内有关凋亡的基因Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达量,通过Western Blot法实验得出的蛋白表达量条带,进行分析,从而得出凋亡基因的表达影响。通过荧光定量PCR法检测各组HUVECs内凋亡基因的表达,对数据进行处理,从而得出HUVECs凋亡基因在不同浓度的槲皮素干预下的表达水平。结果:槲皮素可以通过调节HUVECs上的凋亡基因的表达量,改变受损HUVECs的存活率(P<0.01),槲皮素组、空白组与OGD组进行比较得出,槲皮素对凋亡基因的影响,通过上调Bcl-2基因的表达(P<0.01),下调Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的基因活性水平,从而减少HUVECs凋亡率(P<0.01)。而且槲皮素浓度的不同,对HUVECs凋亡的保护程度也是不同的。结论:槲皮素对OGD损伤的HUVECs具有保护作用其机制可能与槲皮素可上调Bcl-2,下调Bax、Caspase-3、Caspase-9基因有关。