基于细胞支架大鼠原位移植肝癌模型的制备

背景:超声引导下瘤细胞注射法已应用于制备大鼠原位移植肝癌模型,但成瘤率不高,且易形成腹腔种植.目的:实验拟采用细胞基质胶Matrigel包裹瘤细胞,超声引导下注射到大鼠肘内制各肝癌模型,以提高成瘤率,减少腹腔种植.设计、时间及地点:验证性实验,于2007-12/2008-03在福建医科大学药学院药理系动物实验室完成.材料:取Wistar大鼠20只,按随机数字表法分为瘤细胞悬液注射组和瘤细胞Matrigel注射组,每组10只.方法:取大鼠皮下移植的Walker-256肿瘤组织匀浆制备细胞悬液,在超声引导下注射到10只瘤细胞悬液组大鼠肝实质内,每只2×108个细胞.瘤细胞与Matrigel混合后,超声引导下注射到瘤细胞Matrigel组10只大鼠肝内.主要观察指标:定期超声监测大鼠肝脏移植肿瘤生长情况,移植后第21天麻醉处死动物进行人体解剖,取肿瘤行病理组织学检查.结果:瘤细胞Matrigel组10只大鼠有9只形成了肝脏移植肿瘤灶,仅1只大鼠发生腹腔种植.瘤细胞悬液组10只大鼠仅6只出现肝脏移植肿瘤灶,而发生腹腔种植达6只.大鼠原位移植肝癌病理切片显示典型的肿瘤组织形态学特征.结论:采用Matrigel作为细胞支架制各大鼠肝癌模型可提高成瘤率,明显降低腹腔种植的发生率,是一种较为理想的大鼠原位移植肝癌模型制备方法.     

大鼠直肠癌腹腔种植模型的制作

目的通过注射人直肠癌细胞建立直肠癌腹腔种植的大鼠模型。方法60只大鼠随机分为两组：实验组和对照组。实验组30只大鼠腹腔注射由人直肠癌组织制成的癌细胞悬液0．5ml，对照组则注射大肠癌LOVO细胞悬液，两组分别于种植后10d，20d，30d和40d处死动物2只，观察肿瘤生长、播散情况，并作病理切片观察肿瘤侵犯情况。结果腹腔种植后10d即可见有少量腹水和微小瘤结节形成，然后出现腹膜广泛播散、血性腹水；病理切片可见肿瘤侵入肠壁固有肌和结肠旁脂肪组织。两组的体重、肿瘤成活率、平均生存期、肿瘤结节数无显著性差异；而腹围和最大瘤结节直径存在显著性差异。结论通过腹腔注射肿瘤细胞悬液的方法可以建立大鼠直肠癌腹腔种植模型，为有效评价直肠癌的各种研究和治疗创造了条件。     

两种方法建立人胃癌裸鼠移植瘤模型的比较

目的采用两种不同方法建立人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型。方法人胃癌细胞悬液直接注射法:将处于对数生长期的人胃癌细胞悬液接种于裸鼠皮下;胃癌裸鼠瘤转瘤法:将胃癌细胞悬液接种入裸鼠,待肿瘤生长直径在8 mm左右时,处死裸鼠并取其肿瘤组织边缘新鲜的组织,接种于裸鼠皮下,形成皮下移植瘤。观察并比较两种方法所建立的模型肿瘤移植成功率及瘤体生长速度,实验结束后MSP法检测移植瘤组织中Reprimo基因的甲基化水平并采用免疫组织化学法检测移植瘤的Ki-67和CD31分子表达。结果细胞悬液直接注射组的瘤体成瘤速度较瘤转瘤组慢(P<0.05);瘤转瘤组的Reprimo基因甲基化水平及Ki-67和CD31的表达均高于细胞悬液直接注射组(P<0.05)。结论胃癌裸鼠皮下瘤转瘤法的瘤体生长状况优于胃癌细胞悬液直接注射法。     

SD大鼠皮下移植瘤模型的建立

目的建立SD大鼠W256细胞皮下移植瘤模型。方法将W256细胞冻融后传代,调整细胞浓度后接种于大鼠腹腔,建立大鼠腹腔积液模型;以浓缩的腹腔积液接种于大鼠右侧后腿皮下,建立大鼠皮下移植瘤模型,定期测量肿瘤大小;接种2周后切取长势良好肿瘤2个,并于试验结束后切取所有肿瘤,行组织病理学检查。结果所有接种SD大鼠全部接种成功,生长良好,肿瘤周围无感染病灶;肿瘤接种后第4天可触及皮下小结节,接种后第3周肿瘤平均体积2.0cm×2.5cm×3.2cm,最大肿瘤长径达5.5cm;2周后切取肿瘤结节,大体观察可见多个灰白色结节,质软;光学显微镜下瘤细胞排列密集,细胞间无间质,瘤细胞呈团状或片状排列,核大,核仁明显,核分裂相多见,肿瘤内可见丰富的小血管;实验结束时肿瘤内均见不同程度片状坏死。结论采用浓缩腹腔积液注射法制作SD大鼠W256皮下移植瘤模型方法简单、成瘤率高,能为实验提供理想的动物模型。     

SD大鼠皮下移植瘤模型的建立

目的建立SD大鼠W256细胞皮下移植瘤模型。方法将W256细胞冻融后传代,调整细胞浓度后接种于大鼠腹腔,建立大鼠腹腔积液模型;以浓缩的腹腔积液接种于大鼠右侧后腿皮下,建立大鼠皮下移植瘤模型,定期测量肿瘤大小;接种2周后切取长势良好肿瘤2个,并于试验结束后切取所有肿瘤,行组织病理学检查。结果所有接种SD大鼠全部接种成功,生长良好,肿瘤周围无感染病灶;肿瘤接种后第4天可触及皮下小结节,接种后第3周肿瘤平均体积2.0cm×2.5cm×3.2cm,最大肿瘤长径达5.5cm;2周后切取肿瘤结节,大体观察可见多个灰白色结节,质软;光学显微镜下瘤细胞排列密集,细胞间无间质,瘤细胞呈团状或片状排列,核大,核仁明显,核分裂相多见,肿瘤内可见丰富的小血管;实验结束时肿瘤内均见不同程度片状坏死。结论采用浓缩腹腔积液注射法制作SD大鼠W256皮下移植瘤模型方法简单、成瘤率高,能为实验提供理想的动物模型。     

超声微泡介导血管内皮生长因子反义寡核苷酸抑制裸鼠膀胱肿瘤

目的 探讨利用超声辐照微泡造影剂介导血管内皮生长因子(VEGF)-反义寡核苷酸(ASODN)对人膀胱癌裸鼠移植瘤的抑制效应. 方法 建立人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤模型后,将24只成瘤裸鼠随机分为4组:UM+ASODN组每只裸鼠尾静脉注射微泡造影剂与VEGF-ASODN混合物,并对移植瘤体用超声波进行辐照;脂质体+ASODN组每只裸鼠尾静脉注射VEGF-ASODN与脂质体混合物;UM组每只裸鼠尾静脉注射微泡造影剂并以同样的条件进行体外超声辐照;单纯对照组每只裸鼠尾静脉注射生理盐水,各组处理每隔2 d进行一次,共计5次.观察裸鼠移植瘤生长情况,免疫组化SP法测Ki67、CD34、VEGF的表达,计算微血管密度、细胞增殖指数,TUNEL法测细胞凋亡指数. 结果 UM+ASODN组裸鼠皮下肿瘤生长速度较对照组明显减慢,肿瘤组织VEGF的表达及微血管密度较对照组降低(P＜0.05);与对照组相比,UM+ASODN组肿瘤细胞的凋亡增加(P＜0.01),而细胞增殖减少(P＜0.05). 结论 超声微泡介导的VEGF-ASODN转染能有效抑制膀胱癌裸鼠皮下移植瘤.     

超声评估人乳腺癌原位移植裸鼠模型的初步研究

目的超声评估并选择最佳的MDA-MB-231细胞系裸鼠人乳腺癌模型。方法 54只裸鼠随机分为2组,每组27只,分别采用乳腺区皮下细胞悬液注射法、组织悬液注射法制作小鼠乳腺癌原位移植模型,比较两组的成瘤时间、出瘤率、肿瘤表面坏死出现时间,并用超声观察肿瘤的部分生物学形态改变。结果组织悬液注射法操作简便经济,成瘤时间短,肿瘤大小不规则,但有坏死和溃疡;细胞悬液注射法成瘤时间长,肿瘤形态规则,血管丰富。结论超声可以作为一种检测动物成瘤模型的手段,操作直观、立体,可视化。两种原位种植建立的裸鼠乳腺癌模型各有特点适合不同的实验需求。     

survivin基因RNA干涉对宫颈癌裸鼠移植瘤生长及凋亡和顺铂化疗敏感性的影响

目的观察survivin基因RNAi对宫颈癌裸鼠移植瘤生长、凋亡和化疗敏感性的影响。方法随机选择雌性BALB/C-nu/nu裸小鼠24只,细胞接种法建立4组人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,每天观察裸鼠一般状况及肿瘤生长情况,通过绘制肿瘤生长曲线并计算肿瘤生长抑制率,观察survivin基因RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响;通过免疫组化SP法检测各组移植瘤组织中survivin蛋白表达情况,TUNEL染色观察survivin基因RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤凋亡的影响;当肿瘤体积达0.2cm3时给予顺铂化疗以观察survivin基因RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤化疗敏感性的影响。结果成功建立4组人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,接种HeLa-s2组裸鼠肿瘤体积在每个检测点均明显小于接种HeLa组;观察结束时,接种HeLa-s2组裸鼠瘤重明显小于接种HeLa组,分别为：（0.369±0.043）g和（1.150±0.136）g（P〈0.05）;接种HeLa-s2组裸鼠肿瘤生长抑制率为67.9%。免疫组化结果显示：接种HeLa-s2组裸鼠survivin蛋白表达显著下降;TUNEL染色结果显示：接种HeLa-s2组裸鼠细胞凋亡明显增多,凋亡指数（AI）值达（22.73±1.37）%。顺铂化疗后不同检测点接种HeLa-s2组裸鼠肿瘤体积明显小于接种HeLa组,肿瘤生长明显受抑;观察结束后,接种HeLa-s2组裸鼠瘤重明显小于接种HeLa组,分别为：（0.323±0.058）g和（1.347±0.173）g（P〈0.05）;接种HeLa-s2组裸鼠肿瘤细胞凋亡明显增多,与接种HeLa组AI比较,接种HeLa-S2组AI明显升高,分别为：（37.38±1.01）%和（5.19±0.61）%（P〈0.05）。结论 survivin基因RNAi可通过下调移植瘤组织survivin蛋白表达抑制移植瘤生长并促进其凋亡,并通过增加顺铂化疗诱导的细胞凋亡,增强顺铂化疗对移植瘤的生长抑制,进而提高移植瘤对顺铂化疗的敏感性。     

抑制Smac基因表达对胰腺癌裸鼠移植瘤生长影响的研究

[目的]探讨Smac基因对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用.[方法]于裸鼠腋下接种200 μL 107/mL的PANC-1细胞悬液,建立人胰腺癌裸鼠移植瘤模型,将其分为三组：注射PBS液（A组）、转染空载体（B组）、转染Smac基因（C组）,比较三组移植瘤的大小、移植瘤细胞的凋亡率,移植瘤中Smac蛋白表达和微血管密度（MVD）.[结果]与A、B组比较,C组裸鼠移植瘤体积、质量和MVD显著减小;移植瘤细胞的凋亡指数和Smac蛋白的表达率均明显增高,其差异均有统计学意义（P〈0.05）.[结论]脂质体转染Smac基因能抑制人胰腺癌裸鼠移植瘤的生长,可能与该基因诱导胰腺癌细胞凋亡和抑制肿瘤血管形成有关.     

注射用七叶皂苷钠联合脐带间充质干细胞移植改善脑梗死大鼠神经功能

背景:单纯的脐带间充质干细胞移植修复受损脑组织的作用并不十分理想.目的:观察脐带间充质干细胞移植联合注射用七叶皂苷钠治疗大鼠脑梗死的效果.方法:应用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞模型,随机分为对照组、细胞移植组、七叶皂苷钠+ 细胞移植组,分别尾静脉注射细胞培养液、1×1010 L-1 脐带间充质干细胞悬液、尾静脉1×1010 L-1 脐带间充质干细胞悬液同时经腹腔注射七叶皂苷钠5 mg/(kg·d),连续5 d.结果与结论:移植后1 周,七叶皂苷钠+细胞移植组大鼠神经功能障碍评分低于细胞移植组及对照组(P < 0.05);七叶皂苷钠+细胞移植组大鼠脑梗死周围组织AQP9 及AQP4 mRNA 的表达低于细胞移植组,却高于对照组(P < 0.05);七叶皂苷钠+细胞移植组CM-Dil 阳性细胞和神经元数量多于细胞移植组及对照组(P < 0.05).提示脐带间充质干细胞移植联合注射用七叶皂苷钠治疗大鼠脑梗死可明显改善大鼠的神经功能.