UVA-1及UVA照射对局限性硬皮病患者成纤维细胞Ⅰ型胶原和MMP-1表达的影响

目的 探讨UVA-1及UVA照射对局限性硬皮病患者成纤维细胞中Ⅰ型胶原和基质金属蛋白酶1(MMP-1)表达的影响.方法 局限性硬皮病患者(6例)和健康人(4例)皮肤活检标本进行成纤维细胞培养,荧光定量PCR法检测不同强度UVA-1照射前后及相同强度UVA/UVA-1照射后两组皮肤成纤维细胞中COL1A1和MMP-1 mRNA的表达水平.结果 局限性硬皮病组与健康对照组相比,成纤维细胞中COL1A1表达量增加(P＜0.05),MMP-1表达量下降(P＜0.05).UVA-1照射未能明显减少局限性硬皮病患者成纤维细胞中COL1A1表达(P＞0.05),但可使MMP-1 mRNA表达明显增加(P＜0.05).相同剂量UVA对局限性硬皮病患者成纤维细胞中Ⅰ型胶原的抑制作用和MMP-1的刺激作用优于UVA-1.结论 UVA-1照射治疗可以抑制Ⅰ型胶原的表达,刺激MMP-1的表达,且中等剂量UVA-1的疗效优于小剂量,相同照射剂量UVA疗效优于UVA-1.     

UVA-1及UVA照射对局限性硬皮病患者成纤维细胞I型胶原和MMP-1表达的影响

目的探讨UVA-1及UVA照射对局限性硬皮病患者成纤维细胞中I型胶原和基质金属蛋白酶1（MMP-1）表达的影响。方法局限性硬皮病患者（6例）和健康人（4例）皮肤活检标本进行成纤维细胞培养,荧光定量PCR法检测不同强度UVA-1照射前后及相同强度UVA／UVA-1照射后两组皮肤成纤维细胞中COL1A1和MMP-1mRNA的表达水平。结果局限性硬皮病组与健康对照组相比,成纤维细胞中COL1A1表达量增加（P〈0．05）,MMP-1表达量下降（P〈0．05）。UVA-1照射未能明显减少局限性硬皮病患者成纤维细胞中COL1A1表达（P〉0．05）,但可使MMP-1mRNA表达明显增加（P〈0．05）。相同剂量UVA对局限性硬皮病患者成纤维细胞中I型胶原的抑制作用和MMP-1的刺激作用优于UVA-1。结论UVA-1照射治疗可以抑制I型胶原的表达,刺激MMP-1的表达,且中等剂量UVA-1的疗效优于小剂量,相同照射剂量UVA疗效优于UVA-1。     

热休克对体外培养的成纤维细胞表达MMP-1和TIMP-1的影响

目的:确定体外培养的成纤维细胞热休克对表达基质金属蛋白酶(MMP-1)和基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)的影响.方法: 在体外培养的成纤维细胞热休克分别在37℃、43℃、45℃水浴30 min,24 h后应用ELISA法上清液检测MMP-1和TIMP-1表达,并与对照组比较.结果:体外培养的成纤维细胞热休克后,上清液中MMP-1明显增高,并呈温度依赖性.热休克对其表达TIMP-1无明显影响.结论:热休克早期成纤维细胞产生的MMP-1导致真皮基质降解,在皮肤光老化中有重要作用.     

肉桂醛对UVA照射后体外成纤维细胞表达MMP-1,MMP-3和MAPK信号的影响

目的探讨肉桂醛对UVA照射后体外皮肤成纤维细胞表达基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)的影响。方法皮肤成纤维细胞在体外培养后,在培养基中加入不同浓度(0,5,10,20和40μM)肉桂醛,24h后MTT法检测细胞活性。皮肤成纤维细胞经肉桂醛预处理24h后再予UVA照射,Western blot法检测MMP-1,MMP-3,ERK,JNK,p38磷酸化蛋白水平。结果 0~40μM肉桂醛对成纤维细胞的活性无明显影响(P均>0.05)。肉桂醛能抑制UVA照射后成纤维细胞MAPK信号蛋白ERK,JNK,p38的活化,其也能抑制成纤维细胞表达MMP-1和MMP-3,且各浓度间作用差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论肉桂醛可能通过抑制UVA照射后成纤维细胞MAPK信号蛋白的活化来抑制MMP-1和MMP-3的表达,减少胶原降解,延缓皮肤光老化。     

神经鞘氨醇磷酸胆碱对人真皮成纤维细胞表达MMP-1,MMP-3和TIMP-1的影响

目的研究神经鞘氨醇磷酸胆碱(shingosylphosphorylcholine,SPC)对体外培养人真皮成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶内源性组织抑制剂-1(TIMP-1)的影响,探索在促进皮肤创伤愈合方面SPC的作用机制。方法通过MTT的方法检测SPC在成纤维细胞增殖效率方面的作用。利用RT-PCR和Western blotting的方法检测体外培养人真皮成纤维细胞经5μmol/L SPC诱导后,表达损伤修复相关蛋白MMP-1,MMP-3,TIMP-1的情况。结果一定浓度的SPC具有促进成纤维细胞增殖的作用。5μmol/L SPC具有上调成纤维细胞表达MMP-1,MMP-3,TIMP-1 m RNA和蛋白的作用(P0.05)。结论实验证实体外培养人真皮成纤维细胞在经SPC干预后,其表达细胞外基质调节蛋白MMP-1,MMP-3,TIMP-1的作用得到增强,提示SPC具有促进皮肤创伤愈合的作用。     

紫外线对皮肤角质形成细胞和成纤维细胞产生MMP-1和MMP-3的影响

目的:研究中波紫外线辐射对体外培养的表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞产生基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和MMP-3的直接和间接影响,研究绿茶中的主要活性成分表没食子儿茶酚没食子酸酯(EGCG)对此影响的保护作用。方法:体外培养角质形成细胞株HaCaT和真皮成纤维细胞,中波紫外线辐射、不同浓度IL-6刺激及EGCG处理后,ELISA方法测定上清液中Pro-MMP-1和MMP-3蛋白含量,半定量RT-PCR方法测细胞中mRNA含量。结果:UVB30mJ/cm2辐射后角质形成细胞分泌的pro-MMP-1和MMP-3并未增加(P>0.05),真皮成纤维细胞合成和分泌MMP-1和MMP-3mRNA含量和蛋白水平均显著增加(P<0.05),IL-6(8、16、24pg/mL)可显著增加成纤维细胞产生MMP-1和MMP-3(P<0.05)。EGCG(0.15、0.3mM)能够显著抑制紫外线诱导成纤维细胞产生MMP含量的增加(P<0.05),但IL-6刺激成纤维细胞所产生的MMP-1和MMP-3的增加不受EGCG的影响(P>0.05)。结论:中波紫外线辐射并不能直接导致角质形成细胞分泌MMP-1和MMP-3增加,但紫外线辐射后角质形成细胞分泌的IL-6可促进成纤维细胞产生MMP。EGCG对IL-6刺激成纤维细胞产生MMP增加没有影响,但它可以显著抑制紫外线辐射直接导致的成纤维细胞产生MMP-1和MMP-3的增加,对防治皮肤光老化可能有一定作用。     

紫外线及黄芪甲苷对人皮肤成纤维细胞E3连接酶Hrd1表达的影响

目的:探讨紫外线(UV)对人皮肤成纤维细胞中E3连接酶Hrd1表达的影响及黄芪甲苷的干预作用。方法:分离培养人原代成纤维细胞,分别以10J/cm~2UVA和30mJ/cm~2 UVB进行照射,黄芪甲苷进行干预处理。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的黄芪甲苷对成纤维细胞增殖活性的影响;荧光定量PCR法检测成纤维细胞中Hrd1的mRNA表达;免疫组化法观察成纤维细胞Hrd1的蛋白表达。结果:MTT结果示:在适宜浓度下,黄芪甲苷对体外培养的成纤维细胞有显著的促增殖作用,药物浓度为10、20、30mg/L时最为明显(P0.001);荧光定量PCR结果示:UVA、UVB照射组成纤维细胞Hrd1 mRNA表达量明显高于正常对照组,而黄芪甲苷可显著抑制UV辐射后成纤维细胞中Hrd1的表达(P0.001);免疫组化结果示:UV照射(UVA或UVB)可增加Hrd1的蛋白表达,黄芪甲苷可显著抑制UV照射后成纤维细胞中Hrd1的蛋白表达。结论:UV辐射可以上调人皮肤成纤维细胞中E3连接酶Hrd1的表达,而黄芪甲苷对这一现象具有逆转作用。     

中波紫外线对角质形成细胞MMP-1及TIMP-1的影响

目的：研究中波紫外线照射对永生化人角质形成细胞的影响。方法：绘制细胞生长曲线,用不同剂量UVB（30、60、90 mJ/cm2）照射永生化人角质形成细胞,用MTT方法测定UVB照射后细胞的增殖活性,用RT-PCR方法测定HaCaT细胞中MMP-1mRNA和TIMP-1mRNA的表达。结果：UVB照射后,HaCaT细胞的增殖活性受到抑制,MMP-1 mRNA表达增强,TIMP-1 mRNA表达下降,90 mJ/cm2照光组与未照光组比较,差异均有统计学意义。结论：UVB照射可诱导HaCaT细胞损伤和细胞凋亡,促使MMP-1mRNA表达增加,TIMP-1 mRNA表达减少,二者比例失调,这可能与光老化的发生有一定的关系。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对中波紫外浅诱导的人皮肤成纤维细胞基质金属蛋白酶-1表达的影响

目的:研究中波紫外线(UVB)诱导人皮肤成纤维细胞(FB)表达基质金属蛋白酶(MMP)-1和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)及c-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂SP600125对该诱导的保护作用.方法:以30 mJ/cm2 UVB及12.5μg/mL EGCG处理FB.同时以SP600125为对照,照光和(或)加药后于相应时间点提取上清及总RNA,以ELISA法检测MMP-1表达,反转录(RT)-PCR法检测细胞中MMP-1 mRNA含量.结果:30 mJ/cm2 UVB照射FB后24h MMP-1表达为对照组的3.1倍,12h及24h时MMP-1 mRNA表达分别增加至对照组的2.60倍及2.66倍(P均<0.05).UVB照射前、后加EGCG及SP600125组较单纯UVB照射组显著抑制MMP-1的表达,MMP-1 mRNA含量分别为单纯照射组的71.9%及40.4%,MMP-1蛋白表达量分别为单纯照射组的61.8%及48.9%.结论:UVB照射FB后MMP-1 mRNA及MMP-1表达水平均显著增加,EGCG可抑制UVB所致的MMP-1 mRNA及MMP-1高表达.     

TGF-β/Smad信号转导通路对紫外线致人工皮肤光损伤中MMP-1、pro-collagen I mRNA表达影响的初步研究

目的 探讨人工皮肤光损伤中TGF-β/Smad信号转导通路与基质金属蛋白酶1及Ⅰ型前胶原蛋白的相互作用.方法 以紫外线照射人工皮肤后,通过Real-Time RT-PCR法(荧光染料掺入法)检测其中基质金属蛋白酶1、Ⅰ型前胶原蛋白、TGFβR Ⅰ及TGFβRⅡmRNA的表达量.结果 紫外线使人工皮肤中基质金属蛋白酶1(MMP-1)的mRNA表达量明显增加,而Ⅰ型前胶原蛋白mRNA的表达下调(P＜0.05),TGFβRⅡmRNA表达显著下调(P＜0.01);加入TGF-β1后MMP-1表达显著下调(P＜0.01),Ⅰ型前胶原蛋白及TGFβRⅡmRNA表达显著增高(P＜0.01);而UV照射后8小时加入TGF-β1,MMP-1表达量较对照组高(P＜0.05),Ⅰ型前胶原蛋白及TGFβRⅡmRNA表达量均较对照组低(P＜0.05).结论 UV可以抑制人工皮肤中Ⅰ型前胶原mRNA的表达、上调MMP-1的表达,而这种调控作用可能与TGF-βRⅡ的表达受抑制,TGF-β/Smad信号传导通路被削弱有关.     

SLE患者皮损部ICAM-1 LFA-1 VCAM-1 ELAM-1的表达

以37例SLE患者为实验对象，应用LSAB试剂盒，用ABC法研究了SLE患者皮损部I－CAM－1、LFA－1、VCAM－1、ELAM－1的表达。结果表皮细胞表面ICAM－1、血管内皮细胞表面ELAM-1、VCAM－1、ICAM－1及浸润细胞表面ICAM－1、LFA－1的表达均增强。说明细胞表面粘附分子与SLE皮损发生有关。     

Patched-1和Gli-1在银屑病皮损中的表达

目的 探讨Patched-1、Gli-1在银屑病皮损中的表达。方法 应用免疫组化和原位杂交的方法,检测银屑病皮损及正常人皮肤中Patched-1、Gli-1的表达和分布情况。结果 在银屑病皮损中Patched-1表达高于正常人皮肤(免疫组化χ²=6.53,P<0.05;原位杂交χ²=7.93,P<0.05),Gli-1表达显著高于正常人皮肤(免疫组化χ²=19.21,P<0.01;原位杂交χ²=14.34,P<0.01),主要分布于表皮细胞胞浆中,在毛囊、浸润的炎细胞及血管内皮细胞中也有阳性表达。结论 银屑病皮损表皮中Patched-1和Gli-1均处于高表达状态,Hedgehog信号转导通路可能在银屑病发病中起一定作用。     

Distribution of intercellular-adhesion molecule-1 (ICAM-1) and lymphocyte-function-associated antigen-1 (LFA-1) in epidermal tumours

The cutaneous distributions of intercellular-adhesion molecule-1 (ICAM-1) and lymphocyte-function-associated antigen-1 (LFA-1) in epidermal tumours were studied.     

HLA-Ⅱ类基因与大疱性类天疱疮的相关性研究

目的 探讨大疱性类天疱疮(BP)与HLA-Ⅱ类基因的相关性，BP的免疫遗传发病背景。方法 用聚合酶链反应-序列特异性引物寡核苷酸探针(PCR-SSOP)方法对上海地区汉族56例类天疱疮患者和150例健康对照进行了HLA-DRB1、DQA1、DQB1位点等位基因分型。结果 发现HLA-DRB1*1001与DQB1*0501紧密连锁，其基因频率在BP组与对照组比较明显增高，与BP的临床特征黏膜损害正相关，与靶抗原BP230抗体正相关：DRB1*04与DQB1*0302紧密连锁，其基因频率在BP组与对照组比较也明显增高，与靶抗原BP180正相关：DRB1*12基因频率BP组与对照组比较明显降低(P=0．007，RR=0．358)，与BP的年龄因素和对皮质类固醇的治疗反应负相关。结论 DRB1*1001、DRB1*04可能为上海地区BP患者的易感基因，而DRB1*12(*1201，*1202)可能为上海地区汉族BP患者的保护基因。     

Percutaneous penetration of hydrocortisone in humans following skin delipidization by 1:1:1 trichlorethane

The effect of skin delipidization in humans on the percutaneous penetration of hydrocortisone was investigated in a cross-over trial. The delipidizing agent was 1:1:1 trichloroethane, a common industrial organic solvent. The findings do not show any significant difference in the topical absorption of hydrocortisone with and without skin delipidization. It was postulated that the natural skin barrier was reestablished by the metabolic cutaneous lipid regeneration concomitant with the absorption of the fatty ingredients from the cream.     

RNAi-mediated inhibition of COL1A1 and COL3A1 in human skin fibroblasts

Types I and III collagens are the major collagens comprising skin connective tissue. Defects in these collagens lead to diseases of dermal connective tissue and fibre hyperplasia. RNA interference (RNAi) provides a powerful tool to inhibit specific gene expression. In this study, we generated small interfering RNAs (siRNA) expression cassettes (SECs) by polymerase chain reaction (PCR) as a method to quickly screen the efficacy of siRNAs. We then cloned the most efficient SECs into vectors, using a rapid and novel method intrinsic to the design of the SEC, and transfected human skin fibroblasts (HSF) to generate stable lines. We show that the transfection of SECs into HSFs resulted in specific and effective repression of COL1A1 and COL3A1 expression (5.00% and 6.48% of control levels) provided a rapid method for testing candidate siRNA sequences. We report the use of vector-based RNAi to establish stable HSF cell lines with persistent knockdown over at least 30 days (25.21% and 22.12% of control levels). These stably modified HSF cell lines may be used for the study of other types of collagen or proteins of the extracellular matrix (ECM).     

ICAM—1，IGF—1在银屑病皮损中的表达

目的了解银屑病患者皮损中ICAM-1、IGF-1表达水平及分布,并讨论其临床意义和相互关系.方法用免疫组化的方法对16例实验组标本和16例对照组标本进行检则.结果实验组ICAM-1为72.9375±21.1408,对照组为51.3750±17.0876,两组间存在显著性差异(P＜0.01);IGF-1实验组为50.1875±13.5288,对照组为33.3125±17.8281,两组间存在显著性差异(P＜0.02);患者组ICAM-1、IGF-1增高呈明显的正相关(P＜0.05).结论银屑病皮损中ICAM-1、IGF-1表达增高且密切相关,在银屑病病程中起着重要作用.