支气管肺泡灌洗液中T-抗原检测对肺癌诊断的价值

目的 :探讨肺癌支气管肺泡灌洗液中T 抗原检测的诊断意义。方法 :收集 61例原发性肺癌和 3 1例非肺癌患者的支气管肺泡灌洗液 ,采用半乳糖氧化酶法检测痰液中T 抗原的敏感性和特异性。结果 :肺癌组T 抗原总阳性表达率为 68 3 % ,对照组BALF中T 抗原阳性率为 9 7%。中心型肺癌组支气管肺泡灌洗液中T 抗原阳性率 67 3 % ,纤支镜刷检细胞学阳性率为 61 2 % ,支气管肺泡灌洗液细胞学阳性率为 12 2 % ,支气管肺泡灌洗液中T 抗原的阳性率高于细胞学阳性检出率 ,二者比较差异有显著性 (P <0 .0 1)。周围型肺癌组支气管肺泡灌洗液中T 抗原阳性率为 71 4% ,纤支镜刷检细胞学阳性率为 5 0 0 % ,支气管肺泡灌洗液细胞学阳性率为 2 1 4% ,支气管肺泡灌洗液中T 抗原阳性率高于支气管肺泡灌洗液细胞学阳性率 ,二者比较差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论 :支气管肺泡灌洗液中T 抗原有较高的敏感性和特异性 ,可作为肿瘤标志物为临床诊断提供重要线索     

脱落细胞癌基因检测在肺癌诊断中的意义

目的用分子生物学检测手段寻求敏感的肺癌诊断新方法.方法应用多聚合酶链反应(PCR)及聚合酶链式反应-单链构型多态(PCR-SSCP)银染技术,检测56例肺癌和36例肺部良性疾病患者肺泡灌洗液和(或)胸水细胞的p53、p16及K-ras基因的突变情况,将检测结果与组织学、脱落细胞形态学诊断结果进行对比分析.结果肺癌患者肺泡灌洗液和(或)胸水脱落细胞形态学检测敏感性为57%,阴性预计值(NPV)为60%;p53阳性表达的敏感性为68%,NPV为61%;p16阳性表达的敏感性为46%,NPV为52%;K-ras阳性表达的敏感性为36%,NPV为83%;p53、p16及K-ras阳性表达的敏感性为82%,NPV为74%;p53、p16及K-ras分子生物学和脱落细胞形态学联合检测敏感性提高至93%(P<0.05),NPV为87%(P<0.05).24例脱落细胞形态学假阴性标本中经分子生物学检测阳性16例(67%).在56例肺癌中,其中有22例同时收取肺泡灌洗液细胞和胸水细胞,结果为细胞病理学检测敏感性由57%提高到68%,细胞病理学检测加分子生物学检测敏感性由93%提高到95%.结论脱落细胞癌基因的分子生物学检测可增加脱落细胞形态学检测的敏感性,提高脱落细胞形态学的诊断价值.     

支气管肺泡灌洗对周围型肺癌诊断价值的探讨

目的 :探讨支气管肺泡灌洗对周围型肺癌的诊断价值。方法 :对 2 8例周围型肺癌患者进行支气管肺泡灌洗液细胞学 (BALF)检查 ,并与 2 8例刷检 ,9例肺活检进行对照。结果 :BALF阳性率为 46.40 % ,刷检阳性率为 3 2 .10 % ,肺活检阳性率为 2 2 .2 0 %。结论 :BALF阳性率明显高于活检和刷检 ,有较高的临床诊断价值。     

支气管肺泡灌洗液中肿瘤标志物的研究

方法 :应用放射免疫方法对 2 6例肺癌 (观察组 )和 2 0例肺良性疾病 (对照组 )患者的支气管肺泡灌洗液和血清中降钙素、β2 —微球蛋白和癌胚抗原的含量进行了测定。结果表明 :1在血清中肺癌组仅降钙素高于对照组 (P<0 .0 1) ;2在支气管肺泡灌洗液中肺癌组所有三项肿瘤标志物均比对照组明显升高 (P<0 .0 1) ;3取对照组 95 %的可信限即 x+1.96 Sx为各项指标的阳性界值 ,在支气管肺泡灌洗液中降钙素、β2 —微球蛋白和癌胚抗原对肺癌的阳性率分别为 92 .3%、80 .7%和 88.6 %。提示支气管肺泡灌洗液中肿瘤标志物的测定对早期和周围型肺癌的诊断有一定的意义 ,其临床价值优于血清。     

非小细胞肺癌 BALF 中 RAR-β基因甲基化与p53突变检测及相关性研究?

目的：探讨非小细胞肺癌患者支气管肺泡灌洗液(BALF)中 RAR-β基因甲基化与 p53基因突变检测的临床意义及二者的相关性。方法收集非小细胞肺癌患者(肺癌组)85例及良性疾病患者(良性疾病组)70例的 BALF 标本,采用甲基化特异性 PCR(MSP)方法检测 BALF 中的 RAR-β基因甲基化,PCR 结合 DNA 测序法检测 p53基因突变。结果肺癌组 BALF 中RAR-β基因甲基化率及 p53基因突变率分别为49.4%、36.5%,均显著高于良性疾病组(P <0.01);(Ⅰ+Ⅱ)期 RAR-β基因甲基化率(32.5%)高于同期 p53基因突变率(12.5%)(P <0.05);(Ⅲ+Ⅳ)期 RAR-β基因甲基化率及 p53基因突变率均显著高于(Ⅰ+Ⅱ)期(P <0.01);发生 RAR-β基因甲基化的肺癌患者 p53基因突变率更高(P <0.01);发生 p53基因突变的肺癌患者RAR-β基因甲基化率更高(P <0.01)。结论检测非小细胞肺癌患者 BALF 中 RAR-β基因甲基化与 p53基因突变有助于肺癌的诊断。     

纤支镜检查联合BALF细胞p53突变的检测对肺癌的诊断价值

目的探讨纤支镜检查联合支气管肺泡灌洗液中细胞p53突变检测对肺癌的诊断价值。方法对可疑肺癌患者行纤支镜检查,并以聚合酶链反应一单链构象多态性（PCR—SSCP）分析法检测BALF细胞p53的第5、6、7、8外显子突变情况。结果在最终确诊的68例肺癌患者中,纤支镜检查诊断肺癌49例,p53突变检测发现37例,纤支镜检查与检测BALF中细胞p53突变联合的方法共同检出61例肺癌患者,阳性率高达89．7％,较单独纤支镜检查差异有高度统计学意义（P〈0．01）。结论PCR—SSCP法检测BALF中p53突变可弥补纤支镜检查的不足,有助提高肺癌的诊断率。     

液相芯片技术检测非小细胞肺癌多基因突变

目的 建立基于高通量液相芯片技术、可同时检测p53、p16、视网膜母细胞瘤(Rb)和表皮生长因子受体(EGFR)基因热点突变的方法,并探讨其在非小细胞肺癌(NSCLC)分子诊断中的意义.方法 针对p53、p16、Rb和EGFR基因热点突变位点,分别设计正常序列和突变序列探针,将探针固定于标记不同比例荧光物的微球上.分别提取65例NSCLC患者(Ⅰ期23例,Ⅱ期20例,Ⅲ期22例)癌组织标本和其中20例患者癌旁正常组织标本基因组DNA,PCR扩增p53、p16、Rb和EGFR基因.将PCR产物与含寡核苷酸探针的微球混合后用Luminex 100多功能流式点阵仪进行流式荧光检测分析.结果 单独检测p53、p16、Rb和EGFR基因突变时,NSCLC标本突变检出率分别为53.8%(35/65)、20.0%(13/65)、7.7%(5./65)和35.4%(23/65);癌旁正常组织标本为5.0%(1/20)、5.0%(1/20)、0和0.而四基因联合检测,敏感性为81.5%(53/65),特异性为90.0%(18/20),准确性为83.5%(71/85);Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期NSCLC标本突变检出率分别为78.3%(18/23)、80.0%(16/20)和86.4%(19/22).结论 成功建立了具有较高敏感性和特异性、可同时检测临床NSCLC标本多基因突变的液相芯片检测方法,该方法有助于提高NSCLC分子诊断的效率,并可能有助于NSCLC的早期诊断.     

支气管肺泡灌洗液配合气管镜刷片细胞学检查对周围型肺癌的诊断效果及价值观察

目的观察支气管肺泡灌洗液配合气管镜刷片细胞学检查对周围型肺癌的诊断效果及价值。方法选取2015年3月至2016年3月期间我院肿瘤科收治的周围型肺癌患者120例,采用硬币投掷法将其分观察组和对照组,每组患者各50例,观察组患者采用支气管肺泡灌洗液配合气管镜刷片细胞学进行检查,对照组采用气管镜刷片细胞学进行检查,观察;两组患者阳性检测率及阴性检测率。结果观察组患者阴性检测率28.00%明显低于对照组的62.00%,观察组患者阳性检测率72.00%显著高于对照组38.00%,差异具有统计学意义(P0.05)。结论采用支气管肺泡灌洗液配合气管镜刷片细胞学检查阳性检出率显著高于单一采用气管镜刷片细胞学检查,且操作简单和安全,可作为早期诊断周围型肺癌的重要临床依据,具有广阔的应用前景。     

肺癌患者痰、BALF及肺癌组织中检测K-ras和p53基因突变的诊断价值

目的 探讨K-ras和p53基因突变在肺癌患者的痰、支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺癌组织等3种标本中的检出和临床应用价值.方法 以组织病理学证据作为肺癌诊断的标准,将207名患者分为肺癌组(101例)和良性肺病组(106例).采用聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性分析法(PCR-RFLP)和聚合酶链反应结合单链构象多态性分析法(PCR-SSCP)分别检测痰、BALF及肺癌组织等3种标本中K-ras和p53基因突变情况,同时检测痰、BALF中的脱落细胞进行比较.结果 3种标本中K-ras和p53基因突变率在肺癌组明显高于良性肺疾病组(P＜0.05);基因突变率高于细胞学阳性率;基因突变率在肺癌组织中最高,在痰中最低,但差异不具显著性.2种基因突变均与吸烟指数的关系最密切;K-ras基因突变率在腺癌中最高,p53基因突变率在鳞癌中最高,但在不同分期的肺癌中分布无差异.结论 K-ras基因激活和p53基因失活在肺癌的发生中是常见事件,将它们作为肿瘤标志物并联合细胞学进行检测,可明显提高肺癌的诊断率.     

应用部分变性高效液相色谱技术检测胃癌组织、血清中基因突变的研究

目的:探讨部分变性高效液相色谱(DHPLC)在检测胃癌组织、血浆中基因突变中的应用.方法:应用DHPLC对39例胃癌组织及血清中p53基因突变进行检测,并测序验证.结果:本研究中p53基因的突变率为21%(8/39);其中肠型胃癌突变率40%(6/15)明显高于弥漫型胃癌8.33%(2/24)(P＜0.01);发现既往未见报道突变3例.血清标本中50%(4/8)可扩增出目的片段,但均未检出突变.结论:DHPLC是一项较好的检测胃癌组织中基因突变的筛查方法,在血清中的应用仍需探讨.     

应用PCR-SSCP银染法检测肺癌p53基因的突变

目的：探索并建立一套适用于临床检测的ｐ５３基因突变的分析方法，探讨肺癌发生发展与ｐ５３基因突变的关系，为临床诊断和治疗提供分子依据。方法：采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法对２２例肺癌患者ｐ５３基因的第６、第７外显子进行分析。结果：全部患者组织标本经ＰＣＲ扩增，均获得特异的ｐ５３基因扩增产物，进一步对第６第７外显子应用ＳＳＣＰ进行突变分析，不同组织类型肺癌的ｐ５３基因突变率各不相同，第７外显子的突变率（２７．３％）高于第６外显子（９．１％）。结论：ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法是适于肺癌患者ｐ５３基因突变分析的简捷、快速而可靠的检测方法，通过进一步研究，将为肺癌的早期诊断、鉴别诊断和预后判断提供有价值的分子指标。     

P53 GENE MUTATIONS IN NON-SMALL CELL LUNG CANCER DETECTED BY POLYMERASE CHAIN REACTION SINGLE-STRAND CONFORMATION POLYMORPHISM ANALYSIS

Mutations of the p53 tumor suppressor gone are the most frequent genetic akerations detected in human lung cancer. To assess the pathogenic significance of p53 gone alterations in Chlnege non-small cell lung cancer (NSCLC), 74 paired samples of primary lung cancer and normal lung tissue far away from the cancer were analyzed for mutations of the p53 gene(exons 5-8) using exon-specific PCR, single-gtrand conformation polymorphimax (PCR-SSCP). p53 mutations were observed in 55.4% (41/74) of the samples.No linkaiges were detected between the incidence of p53 mutations and histological type, lymph node metastasis, age or sex. Significant association between p53 mutations and degree of differentiation in edenotmremmnas, not in squamous cell carcinomas, was observed, The frequency of p53 mutations in(65. 3%) was higher than in nonsmokers (33. 3%) and reached stafisrical significance. We also found p53 mutations in 6/7 samples which had tissue invasion and distant metastasis. These results suggest that smcking could be an important factor in lung carcinogenesis, p53 mutation is a worse prognosis indicator in ade and nocarcinomas and related to high aggressive behavior of human lung cancer.     

胃癌患者血浆中p53基因突变的检测

目的:检测并比较胃癌患者外周血浆、肿瘤组织以及癌旁正常黏膜中p53基因突变状况.方法: 从96名胃癌患者的术前血浆、肿瘤组织及癌旁正常黏膜提取DNA,采用PCR、变性高效液相色谱分析(denaturing high performance liquid chromatography, DHPLC)及测序技术,检测p53基因5～8外显子的突变,选择20例健康人的血浆作为正常对照.结果: 96例胃癌患者肿瘤组织中,p53基因杂合性突变的检出率为19.8%(19/96),在其相应的外周血浆中,p53基因杂合性突变的检出率为5.2%(5/96),在p53基因突变阳性的外周血浆中,其对应的肿瘤组织均发现有同样的p53基因突变,在对应癌旁正常黏膜组织及20例健康人对照血浆中均未检出p53基因突变.肿瘤组织和外周血浆中p53基因突变与胃癌患者的临床病理特征无相关性.结论:胃癌患者血浆中可检测出p53基因突变,胃癌患者血浆中p53基因突变的分析有可能作为临床辅助诊断、疾病监测的指标之一.     

乳腺癌血浆循环核酸p53基因突变的意义

目的 探讨血浆循环核酸p53基因突变检测的可行性，研究乳腺癌患者循环核酸p53基因突变对于乳腺癌发生、发展和预后估计的临床意义。方法 应用聚合酶链反应（PCR）扩增p53基因外显子5－8，并用变性高效液相色谱技术（DHPLC）分析产物突变情况，再与各生物学参数进行了相关研究。结果 33例患者中14例（42．4％）p53基因突变，且突变率与组织分化级别、ER阴性显著相关（P＜0．05），与临床分期和淋巴结及远处转移情况无关。结论 DHPLC可作为一种快速简便的基因突变检测手段，p53基因突变在乳腺癌循环核酸中有较高的检出率并预示肿瘤的恶性程度，血浆基因突变有望成为简便的预后参考指标。     

应用PCR-SSCP方法检测胸水细胞中p53基因突变鉴别良恶性胸水

目的 探讨胸水细胞中ｐ５３基因突变的检测对鉴别良恶性胸水的价值。方法 应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法对３４例肺癌患和１６例良性肺部疾病患的胸水细胞中的ｐ５３基因突变情况进行了检测,同时进行了胸水的瘤细胞学检查和部分肺癌组织的ｐ５３基因突变检测,并将结果进行了比较。结果 在４７．０％９１６／３４）的肺癌患的胸水细胞中检测到ｐ５３基因的突变,在３７．５％（６／１６０的瘤细胞学检查阴性的肺癌患的胸水细     

中国南部人群家族性及早发性乳腺癌患者p53基因胚系突变分析

目的：分析p53基因在中国南方部分地区家族性和早发性乳腺癌中的突变位点及特征。方法：以中国南 方地区150例家族性和早发性乳腺癌患者为研究对象,提取静脉血基因组DNA,对p53基因的全部编码序列及外显子 与内含子拼接区进行扩增。 采用变性高效液相色谱进行预筛后,应用DNA测序分析和证实基因突变的结果。结果： 150例患者中,9例的p53编码区域共发现6种不同的p53变异,其中869_888ins20(插入突变)为新发现的致病性突变, 643_660del18(缺失突变)为已报道的致病性突变,91G>A,215C>G,537T>G和743G>A为已报道有致病意义的错义突 变位点。此外,还发现了第4外显子区域的同义突变141G>A及第3内含子区域的缺失突变IVS3+54_70del16和9个基因多 态性位点。家族性及早发性乳腺癌的p53总突变率为6.00%,其中家族性乳腺癌的p53突变率约为6.81%。早发性乳腺癌 突变率约为6.25%。结论：中国南部人群家族性乳腺癌患者的p53基因胚系总突变率高于国内外文献报道,首次发现 的插入突变869_888ins20的致病意义有待今后的功能学验证。缺失突变643_660del18丰富了国人p53基因突变数据库, 有可能是中国乳腺癌人群的特有突变。     

肺癌组织 p53 基因突变的研究

目的：探讨肺癌发生的分子遗传学机理，了解肺癌中ｐ５３基因突变的情况。方法：采取聚合酶链反应（ＰＣＲ）及聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）结合银染技术，对２０例肺癌组织中ｐ５３基因外显子５～８进行了突变分析。结果：ｐ５３基因突变１２例，占总人数６０％（１２／２０），分布于外显子５～８。其中第７外显子６例，第８外显子４例，第５、６外显子各１例。鳞癌突变率５０％（３／６），腺癌突变率６０％（６／１０），小细胞肺癌突变率７５％（３／４）。结论：ｐ５３基因突变与肺癌的发生发展有关。     

Detection of p53 gene mutations in sputum samples and their implications in th e early diagnosis of lung cancer in suspicious patients

目的　评价痰标本检测p5 3基因点突变方法及其作为肺癌早期临床诊断监测指标的真实性和可靠性。方法　用PCR SSCP 银染法检测 5 4例原发性肺癌患者和 114例良性肺疾患者痰标本中p5 3基因第 5 - 8外显子的点突变 ,同时进行痰涂片细胞学检查。结果　p5 3突变在肺癌组检出率为 5 5 5 6 % (30 /5 4 ) ,非肺癌组检出率为 1 75 % (2 /114) (P <0 0 0 1)。痰标本检测p5 3基因突变作为肺癌临床诊断监测指标的灵敏度 5 5 5 6 %、特异度 98 2 5 %、阳性似然比 31 75。肺癌组p5 3阳性检出率 5 5 5 6 % (30 /5 4 )与痰涂片瘤细胞阳性检出率 35 19% (19/5 4 )比较 :差异性有显著意义 (P <0 0 5 ) ,关联性有极显著意义 (P <0 0 1)。肺癌组p5 3检出率与性别、吸烟指数、病理分型、疾病分期均无明显关系 ,但与年龄有密切关系 ,高龄患者 ( 6 0岁 )检出率高 (P =0 0 2 )。非肺癌组一例慢性阻塞性肺病 (COPD)患者检测到E5突变 ,随访四年 ,确诊为肺鳞癌。结论　PCR SSCP 银染法检测痰标本p5 3突变可以在可疑肺癌患者 (如吸烟者合并慢性肺疾患 )中作为一项随访监测指标 ,将有助于肺癌早期临床诊断。