三七三醇皂苷与脑缺血耐受对脑自体神经干细胞增殖的作用

背景：脑缺血耐受可促进大鼠脑梗死后海马区自体神经干细胞的增殖,但传统中药三七通舒对脑自体神经干细胞增殖的影响还未见报道。目的：明确中药三七三醇皂苷、缺血预处理与大鼠脑梗死后7d海马区自体神经干细胞增殖的关系,以及其对大鼠脑梗死后神经行为学评分的影响。方法：50只SD雄性大鼠随机等分为假手术组、缺血组、预缺血对照组、预缺血组和三七三醇皂苷组,后4组采用改良的Zea-Longa法制备急性脑梗死模型,假手术组仅做颈部手术切口,预缺血组采用二次线栓法建立局灶-局灶性脑缺血耐受的动物模型,缺血对照组利用假手术代替预缺血。三七三醇皂苷组大鼠在造模前7 d起,每天给予三七三醇皂苷100 mg/kg腹腔注射。结果与结论：大鼠脑梗死7 d后,缺血组大鼠神经行为学评分和海马区中神经干细胞数量明显增加（P〈0.01）,而与缺血组相比,预缺血组和三七三醇皂苷组大鼠神经行为学评分下降（P〈0.01）,而海马区中神经干细胞数量增加（P 〈0.01）,且两组差异无显著性意义（P 〉0.05）,而预缺血对照组大鼠神经行为学评分和海马区中神经干细胞数量与缺血组接近（P〉0.05）。提示传统中药三七三醇皂苷可以发挥类缺血耐受作用,改善大鼠脑梗死后的神经功能缺损症状。     

脑缺血预处理诱导大鼠脑缺血耐受的研究

目的：探讨局灶性脑缺血预处理在大鼠脑缺血耐受巾的作用及机制。方法：线栓法制作大鼠右大脑中动脉阻塞的局灶性脑缺血模型。在缺血预处理组脑缺血预处理15min：3d后，再次阻塞右大脑中动脉8h。评估神经功能缺失、脑梗死体积和右脑组织形态学．免疫组化法检测右脑组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的表达。结果：缺血预处理组大鼠神经功能缺失评分明显改善（P〈0.01）．脑梗死体积明显减小（P〈0.01），缺血损伤改变明显减轻，TNF-α和iNOS的表达也明显减少（P〈0.05）。结论：局灶性脑缺血预处理可诱导大鼠脑缺血耐受，其机制可能是抑制缺血脑组织表达TNF-α及iNOS而减轻炎症免疫损伤。     

局灶性脑缺血预处理对大鼠肿瘤坏死因子表达影响的实验研究

目的观察局灶性缺血预处理对大鼠肿瘤坏死因子（TNF—a）的表达影响,探讨TNF—a与缺血耐受的关系及其在内源性保护机制中的作用。方法利用线栓法建立局灶性脑缺血耐受的动物模型。选用30只SD大鼠．随机将30只大鼠分为实验组：预缺血＋缺血（IP＋MCAO）;假手术组（SS＋MCAO）：假手术代替IP,余同实验组：对照组（SS＋SS）,每组10只。评价指标包括神经功能缺损评分、光镜下组织病理改变及免疫组织化学染色和图像分析比较各组TNF-a的表达变化。结果局灶性IP能够明显改善3d后的大鼠的神经功能评分,减轻组织学的损伤,下调了TNF—a的表达,IOD值实验组（8109．53±571．21）对比假手术组（10704．72±584．01）,差异有统计学意义（F=233．59,P〈0．05）。结论局灶性缺血预处理对随后的脑梗死有明显的保护作用．能够诱导缺血耐受的产生,其可能的机制是通过下调肿瘤坏死因子的表达。     

电针对局灶性脑缺血大鼠神经干细胞巢蛋白表达的影响

目的研究电针治疗对成年大鼠脑缺血后缺血侧神经干细胞巢蛋白（nestin）表达的影响,探讨电针治疗缺血性脑损伤的作用机制。方法采用开颅热凝闭法制作大脑中动脉阻塞（MCAO）模型,随机分为模型组与电针组,针刺“大椎”、“百会”,并行电针干预,采用巢蛋白免疫组化法观察脑缺血后3,7,14与21d四个不同时相巢蛋白表达阳性细胞的数量。结果脑缺血后不同时相缺血侧皮质、海马齿状回和纹状体均有巢蛋白表达阳性细胞,其中7d时的阳性细胞数量明显增加（皮质：P〈0．05,海马：P〈0．01。纹状体：P〈0．01）;而电针组在不同时相的巢蛋白阳性细胞数量均较同时相模型组有明显的增加（P〈0．05或P〈0．01）。结论电针可促进缺血后相关脑区巢蛋白阳性细胞数量的增加,提示这种作用可能是电针治疗脑缺血的重要作用机制之一。     

成熟大鼠脑损伤后神经干细胞的表达与增殖

目的探讨成熟大鼠在脑组织受损后神经干细胞的表达与增殖情况。方法通过立体定向仪横断成熟大鼠皮质和内囊处的尾状核,于术后1、2、3、4、5周分别杀死动物。用Nestin免疫组化染色和Nissl染色的方法,观察损伤后成熟大鼠脑内神经干细胞的反映模式。结果成熟大鼠在损伤后伤侧侧脑室、对侧侧脑室和三脑室室管膜下区的神经干细胞明显分裂增殖,伤后1周最显著;在伤口处表达为一个以伤口为中心的梯度递减模式,伤后两周最显著。结论成熟大鼠脑损伤后可诱导脑室室管膜下区的神经干细胞增殖,进而表达为伤口周围的神经干细胞梯度递减反应模式,提示神经干细胞对于脑组织损伤后的修复起着重要作用。     

脑缺血耐受机制的研究进展

脑缺血耐受机制的研究有助于重新评价短暂性脑缺血发作的临床诊治,为缺血性脑卒中的内源性神经保护治疗策略提供现实可能,也为新的脑保护药物的开发提供理论依据。研究表明,热休克蛋白、即早基因、兴奋性氨基酸、腺苷、Bcl-2表达、细胞信号传导通路、低氧诱导因子-1等参与了脑缺血耐受机制。     

激光调控内源性神经干细胞的增殖分化及脑功能重建

背景: 大量研究表明增强脑内源性神经细胞的增殖能力和自我修复将成为治愈缺血缺氧性脑损伤有价值的方法之一.目的:观察氦氖激光对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤内源性神经干细胞增殖分化及脑功能重建的影响.方法:7 d龄健康Wistar新生大鼠,建立缺血缺氧性脑损伤模型后第2天开始,激光穴位照射组给予氦氖激光照射.穴位选取顶骨正中的"百会"穴,以及第7颈椎与第1胸椎间、背部正中的"大椎"穴.假手术组和模型组不给予激光照射.于第2疗程结束后,用Y-型迷宫检测各组大鼠的学习记忆能力.随后制备脑海马切片,分别进行巢蛋白和微管关联蛋白2免疫组织化学染色.结果与结论:①激光穴位照射组大鼠的学习和记忆能力明显高于模型组(P < 0.05),但与假手术组相比,无明显差异(P > 0.05).②大鼠内源性神经干细胞的表达:与假手术组比较,模型组、激光治疗组齿状回内巢蛋白免疫阳性细胞均明显增多(P < 0.05),且激光治疗组增多幅度大于模型组(P < 0.05).③神经元特有结构蛋白的表达:激光治疗组大脑皮质微管关联蛋白2表达相当广泛,强阳性染成棕褐色的树突呈条索样、流星样放射状分布,海马各区锥体神经元和齿状回颗粒细胞层神经元排列比较整齐,树突连续阳性染色呈树枝状交叉分布于分子层.假手术组与激光治疗组染色所见无明显差别.模型组微管关联蛋白2表达明显减弱.结果提示激光治疗能够促进缺血缺氧性脑损伤新生大鼠脑内源性神经干细胞增殖,诱导其向神经元方向分化,并达到学习记忆功能的重建.     

电针对局灶性脑缺血成年大鼠神经干细胞增殖、分化的影响

目的:观察电针对成年大鼠局灶性脑缺血后神经干细胞增殖、分化的影响,探讨其治疗脑梗死的可能机制。方法:采用线栓法制备大鼠MCAO模型,应用BrdU/NeuN、BrdU/GFAP免疫荧光双标法观察再灌注损伤后第4、7、14天时大鼠神经干细胞增殖、分化情况。结果:脑缺血后第4、7、14天3个时间点室管膜下区、缺血边缘区均有BrdU阳性细胞表达,BrdU阳性细胞数在第7天达高峰;电针组第7天BrdU阳性细胞数高于相同时间段模型组(P<0.05);电针组BrdU/GFAP双标阳性细胞数在7天高于相同时间段模型组(P<0.05);电针组和模型组BrdU/NeuN双标阳性细胞数在缺血后第4、7和14天差异无显著性(P>0.05)。结论:缺血损伤可诱发室管膜下区、缺血边缘区神经干细胞的增殖,少量的新增殖细胞可以向神经元和星型胶质细胞分化;电针可以促进脑缺血后细胞增殖作用并可激发新增殖细胞向星型胶质细胞分化,而对向神经元细胞分化则影响不明显。     

不同数量神经干细胞移植治疗实验性脑梗死

背景:研究已经确证脑梗死后进行神经干细胞移植可以促进动物神经功能恢复。目的:观察在大鼠实验性脑梗死后移植不同数量神经干细胞的效果,以期寻找出能有效促进神经功能恢复的最小移植数量。方法:提取Wistar胚胎鼠脑组织,体外培养神经干细胞。利用线栓法制作Wistar大鼠脑梗死模型。在大鼠脑梗死第7天,取培养第12天的神经干细胞,预标记BrdU后通过立体定向、微量注射泵方法,分别移植低6×105、中8×105、高10×105数量的神经干细胞,并设立假移植组,通过抓握牵引实验、斜板实验评价移植3个月时4组动物的行为学变化,以及BrdU、神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白等免疫组织化学染色方法检测移植后神经干细胞与周围宿主整合及向神经元、神经元胶质细胞分化情况。结果与结论:神经干细胞移植后能在宿主脑内存活,并分化为神经元和胶质细胞促进功能恢复。移植神经干细胞后3个月时,各移植组与假移植组相比行为学评分均有显著性升高;中等数量移植组大鼠各项行为学评分明显优于低等数量移植组,而中、高等数量移植组两组之间差异没有显著性意义。提示脑梗死后移植不同数量神经干细胞可改善因脑梗死造成的功能障碍,8×105数量神经干细胞移植可以较少的数量发挥较好移植效果。     

不同数量神经干细胞移植治疗实验性脑梗死

背景：研究已经确证脑梗死后进行神经干细胞移植可以促进动物神经功能恢复。目的：观察在大鼠实验性脑梗死后移植不同数量神经干细胞的效果,以期寻找出能有效促进神经功能恢复的最小移植数量。方法：提取Wistar胚胎鼠脑组织,体外培养神经干细胞。利用线栓法制作Wistar大鼠脑梗死模型。在大鼠脑梗死第7天,取培养第12天的神经干细胞,预标记BrdU后通过立体定向、微量注射泵方法,分别移植低6×105、中8×105、高10×105数量的神经干细胞,并设立假移植组,通过抓握牵引实验、斜板实验评价移植3个月时4组动物的行为学变化,以及BrdU、神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白等免疫组织化学染色方法检测移植后神经干细胞与周围宿主整合及向神经元、神经元胶质细胞分化情况。结果与结论：神经干细胞移植后能在宿主脑内存活,并分化为神经元和胶质细胞促进功能恢复。移植神经干细胞后3个月时,各移植组与假移植组相比行为学评分均有显著性升高;中等数量移植组大鼠各项行为学评分明显优于低等数量移植组,而中、高等数量移植组两组之间差异没有显著性意义。提示脑梗死后移植不同数量神经干细胞可改善因脑梗死造成的功能障碍,8×105数量神经干细胞移植可以较少的数量发挥较好移植效果。     

黄体酮对大鼠脑创伤后神经干细胞增殖的影响

背景:脑创伤一定程度上可刺激神经干细胞增殖,而黄体酮可改善脑创伤后学习记忆功能,黄体酮可能通过刺激神经干细胞增殖,促进脑创伤后神经功能的恢复。目的:观察黄体酮对弥漫性脑创伤后神经干细胞增殖的影响。设计:随机对照动物实验。单位:新乡医学院。材料:成年健康雄性SD大鼠48只,四五个月龄,体质量280～330g。方法:实验于2004-09/2005-02在新乡医学院完成。采用Marmarou弥漫性脑创伤模型。48只大鼠随机分为4组,每组12只:①假手术组,仅切开头皮后缝合。②脑创伤组,建立脑创伤动物模型。③二甲基亚砜组,脑创伤后1h及以后每天腹腔注射与黄体酮组等容量的二甲基亚砜。④黄体酮组,脑创伤后1h及以后每天腹腔注射黄体酮4mg/kg。于假手术或脑创伤手术后3,6d处死动物,苏木精-伊红染色观察大脑皮质神经元形态学变化,免疫组织化学染色检测海马和齿状回巢蛋白表达情况。主要观察指标:神经元组织形态学观察;海马和齿状回巢蛋白表达检测。结果:①假手术组大鼠皮质无神经元损伤,脑创伤3d组和6d组大鼠皮质显示明显的神经元损伤,有神经元缺失,黄体酮3d组和6d组所显示的神经元损伤均明显轻于脑创伤组。②假手术组齿状回巢蛋白呈低水平或少量表达,海马CA4区偶见巢蛋白表达。脑创伤组海马CA4区和齿状回巢蛋白表达则明显增多(P<0.05),黄体酮组大鼠海马CA4区和齿状回巢蛋白的表达与脑创伤组比较明显增多(P<0.05)。③脑创伤组和二甲基亚砜组在神经元损伤和巢蛋白表达方面无明显差别(P>0.05)。结论:黄体酮减轻脑创伤作用可能与其促进神经干细胞增殖有关。     

黄体酮对大鼠脑创伤后神经干细胞增殖的影响

背景：脑创伤一定程度上可刺激神经于细胞增殖，而黄体酮可改善脑创伤后学习记忆功能，黄体酮可能通过刺激神经干细胞增殖，促进脑创伤后神经功能的恢复。 目的：观察黄体酮对弥谩性脑创伤后神经干细胞增殖的影响。 设计：随机对照动物实验。 单位：新乡医学院。 材料：成年健康雄性SD大鼠48只，四五个月龄，体质量280-330g。 方法：实验于2004-09／2005-02在新乡医学院完成。采用Marmarou弥漫性脑创伤模型。48只大鼠随机分为4组，每组12只：①假手术组，仅切开头皮后缝合。②脑创伤组，建立脑创伤动物模型。③二甲基亚砜组．脑创伤后1h及以后每天腹腔注射与黄体酮组等容量的二甲基亚砜。④黄体酮组，脑创伤后1h及以后每天腹腔注射黄体酮4mg／kg。于假手术或脑创伤手术后3，6d处死动物，苏木精-伊红染色观察大脑皮质神经元形态学变化，免疫组织化学染色检测海马和齿状回巢蛋白表达情况。主要观察指标：神经元组织形态学观察；海马和齿状回巢蛋白表达检测。 结果：①假手术组大鼠皮质无神经元损伤，脑创伤3d组和6d组大鼠皮质显示明显的神经元损伤，有神经元缺失，黄体酮3d组和6d组所显示的神经元损伤均明显轻于脑创伤组。②假手术组齿状回巢蛋白呈低水平或少量表达，海马CA4区偶见巢蛋白表达。脑创伤组海马CA4区和齿状回巢蛋白表达则明显增多（P〈0．05），黄体酮组大鼠海马CA4区和齿状回巢蛋白的表达与脑创伤组比较明显增多（P〈0．05）。⑧脑创伤组和二甲基亚砜组在神经元损伤和巢蛋白表达方面无明显差别（P〉0．05）。 结论：黄体酮减轻脑创伤作用可能与其促进神经干细胞增殖有关。     

大鼠创伤性脑损伤后神经干细胞的增殖及移植后的修复作用

目的:基于神经干细胞的自我更新和多向分化的特点,探讨创伤性脑损伤(traumaticbraininjury,TBI)后神经干细胞(neuralstemcells,NSCs)的增殖及其移植对脑损伤的修复作用。方法:实验于2004年在复旦大学附属华山医院神经外科动物实验室完成。采用Feeney氏法制备大鼠创伤性脑损伤模型,随机分为对照组、损伤组、PBS治疗组、NSCs移植治疗组,免疫组化检测大鼠损伤后海马NSCs的数量;用绿色荧光蛋白(GFP)标记的NSCs立体定向移植。神经损害严重程度评分和旋转爬杆试验对移植后大鼠的神经系统行为和运动功能进行评估,免疫组化染色观察NSCs的分化情况。结果:TBI后7d海马齿状回nestin阳性细胞明显增多,为(8.1±2.5)个,与正常动物组(2.5±1.3)个比较差异有非常显著性意义(F=40.91,P<0.01)。移植后部分GFP阳性细胞表达神经元特异性标记物β-tubilinIII,移植组大鼠神经系统行为学评分明显改善。结论:TBI后移植NSCs可以有效地促进损伤后大鼠神经行为功能的恢复,NSCs能够分化为神经元从而发挥对损伤后的大脑的修复作用。     

低氧预适应刺激脑海马区内源性神经干细胞的增殖

背景:缺血/缺氧/低氧等刺激均能导致内源性神经干细胞的增殖和分化,起到脑组织修复作用,但低氧预适应能否影响内源性神经干细胞的增殖尚不清楚.目的:探讨低氧预适应对小鼠脑海马区内源性神经干细胞增殖的影响.方法:清洁级Balb/c近交系小鼠随机分为3组,低氧对照组小鼠放入广口瓶内,立即用橡皮塞封紧,以动物出现第1次喘呼吸为低氧耐受极限的标志,完成低氧暴露1次;低氧预适应组小鼠按此法重复操作4次;正常对照组小鼠不进行低氧暴露.通过免疫荧光和激光共聚焦显微镜等技术,测定海马BrdU阳性细胞数和荧光强度.结果与结论:与低氧对照组比较,低氧预适应组小鼠耐受时间显著延长(P<0.01).正常对照组海马区BrdU标记的内源性神经干细胞荧光强度微弱.海马区可见少量BrdU阳性细胞:低氧对照组、低氧预适应组荧光强度及BrdU阳性细胞数均明显增加(P<0.01),且低氧预适应组增加幅度大于低氧对照组(P<0.01).证实在低氧预适应过程中,海马区内源性神经干细胞明显增殖,可能参与低氧预适应脑保护机制.     

吡咯喹啉醌与神经干细胞的增殖

背景：目前国内外学者主要应用生长因子样物质来促进神经干细胞的分裂与增殖,所以作者推测吡咯喹啉醌小分子化合物也能促进神经干细胞的分裂增殖。目的：体外观察氧化还原酶辅酶吡咯喹啉醌促进鼠成体神经干细胞增殖的作用。方法：体外培养Wistar胎鼠成体神经干细胞成球体后,于培养液中加入1×10-8mol/L吡咯喹啉醌,对照组加入同等剂量的Hanks溶液。应用流式细胞仪测细胞周期增殖率,应用免疫组化法和WesternBlot测周期蛋白激酶（CDK2）和周期蛋白激酶抑制剂（P27）的表达。结果与结论：与对照组相比,吡咯喹啉醌处理16h和24h后,S期和G2期细胞数的比例显著增高,而细胞的凋亡率降低;CDK2蛋白的表达显著增强,而P27的表达显著降低。结果显示低浓度的吡咯喹啉醌即能促进鼠成体神经干细胞的增殖。     

吡咯喹啉醌与神经干细胞的增殖

背景:目前国内外学者主要应用生长因子样物质来促进神经干细胞的分裂与增殖,所以作者推测吡咯喹啉醌小分子化合物也能促进神经干细胞的分裂增殖。目的:体外观察氧化还原酶辅酶吡咯喹啉醌促进鼠成体神经干细胞增殖的作用。方法:体外培养Wistar胎鼠成体神经干细胞成球体后,于培养液中加入1×10-8mol/L吡咯喹啉醌,对照组加入同等剂量的Hanks溶液。应用流式细胞仪测细胞周期增殖率,应用免疫组化法和WesternBlot测周期蛋白激酶(CDK2)和周期蛋白激酶抑制剂(P27)的表达。结果与结论:与对照组相比,吡咯喹啉醌处理16h和24h后,S期和G2期细胞数的比例显著增高,而细胞的凋亡率降低;CDK2蛋白的表达显著增强,而P27的表达显著降低。结果显示低浓度的吡咯喹啉醌即能促进鼠成体神经干细胞的增殖。     

HD02对慢性前脑缺血大鼠神经干细胞增殖分化的影响

目的:观察HD02对慢性前脑缺血大鼠神经干细胞增殖分化的变化。方法:结扎双侧颈总动脉制备慢性前脑缺血大鼠模型,采用免疫单标和双标方法检测成体大鼠神经干细胞及分化的功能细胞。给予模型大鼠HD02水煎剂灌胃,分别于造模后15,30d观察神经干细胞增殖分化的变化。结果:与正常对照组相比,慢性前脑缺血大鼠大脑皮质、室周区、海马BrdU阳性细胞数和BrdU+NF200,BrdU+NeuroD,BrdU+GFAP免疫荧光双标细胞数于造模后15d明显增多(P<0.01),但造模后30dBrdU阳性细胞数和BrdU+NF200,BrdU+NeuroD,BrdU+GFAP免疫荧光双标细胞数与正常对照组相比差异无显著性意义(P>0.05);造模后30d,HD02组BrdU阳性细胞数和BrdU+NF200,BrdU+NeuroD,BrdU+GFAP免疫荧光双标细胞数较慢性前脑缺血组明显增多(P<0.01)。结论:HD02可显著增加慢性前脑缺血大鼠神经干细胞增殖分化能力     

半乳凝素1诱导脑损伤大鼠内源性神经干细胞原位增殖及定向分化

背景：半乳凝素1表达于室管膜下区的星形胶质细胞中并诱导其分化，分化的星形胶质细胞可明显提高脑源性神经生长因子的产生。目的：观察半乳凝素1诱导脑损伤大鼠内源性神经干细胞的原位增殖和定向分化效果。设计、时间及地点：细胞学体内观察实验，于2007—03／11在佳木斯大学神经科学研究所完成。材料：纯种清洁级成年Wistar大鼠48只，随机分为模型组、药物组，24只／组。半乳凝素1为北京晶美生物工程公司产品。方法：两组大鼠均采用线栓法制作局灶性大脑中动脉闭塞模型。造模后24h，药物组经右侧侧脑室注入10uL浓度为0．2g／L的半乳凝素1，模型组注射等量生理盐水。分别于缺血再灌注后3，7，14，28d处死大鼠，取脑组织制作石蜡切片，处死前1d腹腔注射Brdu。主要观察指标：免疫组织化学染色检测海马齿状回颗粒细胞层下区Brdu和巢蛋白阳性细胞的表达，免疫荧光双标法检测海马齿状回颗粒细胞层下区胶质纤维酸性蛋白和神经元特异性烯醇化酶的表达。结果：模型组脑缺血后3dBrdu、巢蛋白阳性细胞开始增加，7d增殖达高峰，14d后表达开始下降，28d后下降至最低。药物组脑缺血后3d两种阳性细胞均明显增加；7d增殖达高峰，半定量分析Brdu、巢蛋白阳性细胞数分别是模型组的1．8倍和2倍：14d后开始下降；28d降至最低，但仍明显多于模型组俨〈0．05）。脑缺血后各时间点两组Brdu^＋／胶质纤维酸性蛋白^＋细胞基本相似（P〉0．05）；药物组脑缺血7dBrdu^＋／神经元特异性烯醇化酶^＋细胞开始大量增多，28d达高峰，半定量分析所有BrdU^＋细胞中约27％表达神经元特异性烯醇化酶，明显高于模型组（P〈0．05）。结论：半乳凝素1在大鼠脑缺血后可激活内源性神经干细胞的原位增殖及分化，且分化后表达成熟神经元标志物神经元特异性烯醇化酶阳性细胞明显增多。     

脑微血管内皮细胞对体外缺氧神经干细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察脑微血管内皮细胞对体外培养缺氧神经干细胞增殖、凋亡的影响。方法:实验于1996-01/1996-12在佳木斯大学神经科学所完成。实验材料:同一基因背景新生的Wistar大鼠由哈尔滨医科大学实验动物学部提供(黑动字第99102001)。实验方法:①取新生24hWistar大鼠大脑培养神经干细胞,采用免疫组织化学方法鉴定神经干细胞。②取出生1～7dWistar大鼠大脑培养脑微血管内皮细胞,采用免疫细胞化学方法鉴定。③将培养传代纯化的脑微血管内皮细胞,用0.25%胰酶消化成单细胞液后接种于涂有多聚赖氨酸包被的盖玻片上,接种传3代后用胰酶消化的神经干细胞,以1∶10接种比例加入神经细胞完全培养液共培养。④用无菌石蜡油覆盖于低糖细胞培养液表面,制备低氧低糖溶液。对照组:正常神经干细胞置于37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度培养。缺氧共培养组:取共培养3d细胞,吸出培养液,用无菌Hank’s缓冲液清洗2次,加入低氧低糖溶液共同作用2,4,8,16h后换液,用PBS缓冲液冲洗3次后,换神经细胞完全培养液,置于细胞培养箱中复氧培养。缺氧单纯神经干细胞组:取传3代神经干细胞,用无菌Hank’s缓冲液清洗2次后,方法同上。实验评估:免疫组织荧光鉴定缺氧条件下神经干细胞的增殖与凋亡。结果:①免疫组织化学方法检测Nestin及Ⅷ因子相关抗原分别鉴定为神经干细胞及脑微血管内皮细胞。②对照组细胞胞体饱满,折光性强,周围有光晕。缺氧单纯神经干细胞组细胞胞体肿胀,折光性差,有大量细胞碎屑,仅有少量活细胞,并出现悬浮死细胞。缺氧共培养组细胞形态有所改善,细胞折光性仍较好,大部分细胞突起仍未见回缩,仅少数细胞肿胀,坏死。③随着缺氧时间的延长,细胞死亡明显增多,存活数明显下降。缺氧共培养组细胞存活数明显高于缺氧单纯神经干细胞组与对照组(321.76±22.20,180.00±17.89,255.33±10.33,P<0.01)。④缺氧条件下脑微血管内皮细胞对神经干细胞增殖及凋亡的影响:缺氧共培养组细胞存活数明显高于缺氧单纯神经干细胞组,细胞凋亡细胞数低于缺氧单纯神经干细胞组(P<0.05)。结论:脑微血管内皮细胞可以促进缺氧神经干细胞的增殖、减少其凋亡。     

胎鼠神经干细胞的生长、增殖及分化特点观察

目的:建立神经干细胞的分离、培养、分化及鉴定技术;观察神经干细胞的生长、增殖及分化特点。方法:分离胎鼠大脑皮质及皮质下组织,经消化及机械吹打后,用悬浮培养的方法,获得细胞克隆;用有限稀释法,得到来源于同一细胞的亚细胞系克隆;用免疫细胞化学方法,鉴定神经干细胞。结果:从胎鼠大脑皮质及皮质下分离的组织,经原代和传代培养均可形成细胞克隆,并具有增殖的能力;原代和传代细胞抗原-nestin呈阳性;单细胞克隆能分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。结论:用此方法分离、培养的细胞具有自我更新和分化潜能、有很强的增殖能力,是属于中枢神经系统的干细胞。