FMR1基因敲除对雌性小鼠生殖功能的影响

目的利用FMR1基因敲除小鼠,研究FMR1基因缺失对雌性小鼠生殖功能的影响,并对其影响机制进行探讨。方法将成年的KO纯合子、KO杂合子、WT雌鼠分别和成年的WT雄鼠合笼,观察合笼时间及产仔数;随机取10周的上述3种基因型雌鼠,HE染色观察卵巢形态;免疫组化测定NPY和GABA在下丘脑的分布,Image Pro Plus 6.0分析平均光密度值;ELISA测定血清NPY水平。结果 3组小鼠中,KO纯合子雌鼠的产仔数少于WT雌鼠(6.39±2.30)、(7.60±2.69)和(8.00±1.88);KO纯合子雌鼠的卵泡总数少于WT雌鼠(36.00±5)、(39.33±7.87)和(45.45±7.85);KO纯合子雌鼠下丘脑NPY的表达弱于WT雌鼠(0.27±0.016)、(0.29±0.04)和(0.31±0.041);血清NPY及下丘脑GABA的表达三组间差异均无显著性(P>0.05)。结论FMR1基因敲除可导致雌鼠生育功能下降,FMR1基因可能是通过下调NPY的表达来降低其生殖功能的。     

乙醇摄入对乙醛脱氢酶2不同基因型小鼠急性心肌梗死及DNA氧化损伤的影响

目的探讨大剂量乙醇摄入对乙醛脱氢酶2(ALDH2)不同基因型小鼠急性心肌梗死及DNA氧化损伤的影响。方法将23只ALDH2基因敲除型(KO)和19只野生型(WT)小鼠随机分为4组:KO组11只,KO+乙醇(E)组12只,WT组9只,WT+E组10只,其中KO+E组及WT+E组经口灌胃大剂量乙醇[2g/(kg·d),连续8d],而KO组及WT组每日经口予以等量0.9%氯化钠溶液连续8d。所有小鼠均制备急性心肌梗死模型,建模4周后经超声诊断仪检测心功能,采用伊文蓝颜料测定心肌梗死面积,E LISA法测定心肌8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平。结果(1)急性心肌梗死造模后4周,KO组、KO+E组、WT组、WT+E组小鼠存活数量分别为7、8、7、7只,病死率分别为18.2%、33.3%、22.2%、30.0%,4组间差异无统计学意义(P>0.05)。(2)WT组小鼠左室短轴缩短率、射血分数均高于KO组小鼠,4组间差异均有统计学意义(均P<0.05)。(3)心肌梗死面积由大至小依次为:KO+E组>KO组>WT+E组>WT组,4组间差异均有统计学意义(均.P<0.05)。(4)心肌8-OHdG水平由高至低依次为:KO+E组>KO组>WT+E组>WT组,4组间差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论增强ALDH2表达可有效地拮抗大剂量乙醇摄入对急性心肌梗死的损害作用,其发挥保护作用的机制可能与减轻心肌细胞DNA氧化损伤有关。     

p18~(INK4C)基因敲除加重顺铂诱导的小鼠急性肾损伤

目的 探讨周期素依赖性激酶抑制基因p18INK4C敲除对顺铂诱导的小鼠急性肾损伤(AKI)的影响,并分析其可能机制.方法 利用已引种的杂合p18INK4C基因敲除小鼠p18INK4C+/-繁育p18INK4C基因敲除小鼠P18INK4C-/-(KO组),以同窝野生型小鼠p18INK4C+/+作为对照(WT组).腹腔注射顺铂制备AKI模型,观察两组小鼠的存活情况,并检测给药后第2、3、5天血肌酐、尿素氮的变化及肾组织的病理变化.结果 WT组小鼠在第3天出现死亡,第7天存活率为46.7%(14/30).KO组小鼠自第2天出现死亡,至第7天全部死亡(100.0%,30/30).KO组的死亡率显著高于WT组(P<0.05).自给药后第2天起,KO组小鼠的肾功能恶化明显,此后继续加重.给药后第2、3、5天,KO组的尿素氮、肌酐均显著高于WT组(P值均<0.05).WT和KO组小鼠均以给药后第3天肾脏病变最为严重.结论 p18INK4C基因敲除加速了顺铂诱导的小鼠AKl的进展,可能与其增加小管上皮损伤及加剧炎性反应有关.     

补阳还五汤对Cav-1敲除小鼠脑缺血后mTOR通路的影响

目的探讨小窝蛋白(caveolin-1,Cav-1)对脑缺血后哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的影响及补阳还五汤抗脑缺血的可能作用机制。方法将Cav-1基因敲除(knock out,KO)与野生型(wild type,WT)小鼠随机分为KO假手术组、KO模型组、KO补阳还五汤组(补阳组)、WT假手术组、WT模型组及WT补阳组。采用大脑中动脉栓塞法建立脑缺血模型,干预14 d后观察小鼠神经功能评分;免疫组化检测大脑mTOR、磷酸化核糖体S6蛋白激酶(phospho-ribosomal S6 kinase,p-S6K1)、磷酸化真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白-1(phospho-eukaryotic initiation factor 4E-binding protein 1,p-4EBP1)的蛋白表达;qRT-PCR检测大脑mTOR的mRNA水平。结果与同类假手术组比较,其他4组神经功能评分、mTOR、p-S6K1、p-4E-BP1蛋白表达及mTOR mRNA表达明显上升(P<0.01);与同类模型组比较,KO补阳组、WT补阳组神经功能评分明显下降(P<0.01),各蛋白表达与mRNA表达明显上升(P<0.01);与WT模型组比较,KO模型组神经功能评分上升(P<0.05),各蛋白与m RNA表达明显下降(P<0.01);与WT补阳组比较,KO补阳组神经功能评分明显上升(P<0.01),各蛋白及m RNA明显下降(P<0.01)。结论Cav-1基因的缺失会导致mTOR通路活性降低并加重脑缺血后神经功能损伤;补阳还五汤可能通过Cav-1调控mTOR信号通路的活性,发挥抗脑缺血损伤的作用。     

OPN诱导小鼠MSCs向表皮细胞分化促进创面愈合的研究

目的 以骨桥蛋白(osteopontin,OPN)基因敲除小鼠及野生型小鼠为研究对象,探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)分化为表皮细胞的潜能及骨桥蛋白在分化过程中的作用.方法 体外实验:将分离培养的野生型(WT)和基因敲除型(KO)新生鼠(鼠龄1d)MSCs鉴定纯度后分别设为WT组和KO组,取其第3代分别在表皮转化培养体系中孵育,通过镜下观察、流式细胞术、免疫荧光染色、Western blot等方法,比较两组表皮细胞标志物(CK14)表达水平的差异.动物实验:实验分4组,WT组小鼠创周注射GFP-MSCs (WT/MSCs)组,WT小鼠创周注射PBS(WT/PBS)组,KO小鼠创周注射GFP-MSCs (KO/MSCs)组,KO小鼠创周注射PBS(KO/PBS)组,每组各8只雄鼠,鼠龄6～8周,体质量20 ～25 g,按分组将分离培养的GFP-MSCs和PBS注射到创周,观察创面愈合及GFP-MSCs向表皮细胞分化的情况.结果 分离培养的MSCs呈梭形或成纤维细胞样生长,流式细胞术检测MSCs的纯度超过91％;诱导分化第12、17天的两组细胞检测发现,WT组和KO组的细胞均表达CK14;第17天免疫荧光结果示WT组CK14的表达阳性率(0.936 3±0.009 5)明显高于KO组(0.647 5±0.023 1),(P＜0.01);Western blot检测结果也显示KO组的CK14表达量(0.3894±0.016 8)明显低于WT组(0.614 6±0.015 3),(P＜0.01).动物实验WT/PBS组创面愈合速度快于KO/PBS组(P＜0.05),WT/MSCs组的创面愈合速度快于WT/PBS组(P＜0.05),注射的GFP-MSCs向表皮细胞分化的能力WT/MSCs组强于KO/MSCs组(P＜0.05).结论 OPN在体内、体外均可诱导MSCs分化为表皮细胞,进而促进创面愈合.     

α-细辛醚对FMR1基因敲除小鼠旷场行为的干预作用

目的探讨α-细辛醚对FMR1基因敲除小鼠的旷场行为的干预作用。方法通过对30日龄FMR1基因敲除小鼠连续腹腔注射不同剂量α-细辛醚5天,用药第5天进行旷场行为实验,观察能否改善KO鼠过度活动的表型。结果在旷场行为实验中,与WT鼠相比,未使用α-细辛醚的KO鼠的总运动长度及总跨格次数,中央格(区4)活动时间,中央格(区4)进入次数均比WT鼠多,P<0.05;使用α-细辛醚后,KO鼠α-细辛醚6~24 mg/kg剂量组与生理盐水(0 mg/kg)组比较,旷场实验运动长度及跨格次数均有减少(P<0.05)。结论 6~24mg/kgα-细辛醚能改善KO鼠活动过度的表型,可能对FMR1基因敲除小鼠有治疗作用。     

跳台实验训练后 FMR1基因敲除小鼠学习记忆与细胞外信号调节激酶1／2的关系

目的：探讨跳台实验训练后FMR1基因敲除（ KO）小鼠学习记忆与海马CA1、CA3区细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）信号通路的关系。方法将20只4周龄FVB近交系KO及20只野生型（WT）小鼠分为KO组和WT组。利用跳台实验观察各组小鼠被动学习记忆能力,并通过Western blot检测海马CA1、CA3区ERK1／2及p－ERK1／2的表达。结果跳台实验第1天KO组的潜伏期较WT组短,错误次数较WT组多。跳台实验第2天KO组的潜伏期较WT组短,错误次数较WT组多。 Western blot结果显示跳台后KO组海马组织CA1区p－ERK1／2表达增加,与WT组比较差异有统计学意义（ P＜0.05）;跳台后KO组海马CA3区p－ERK1／2表达虽有增加,但与WT组比较,差异无统计学意义;跳台后KO组海马组织CA1及CA3区ERK1／2的表达与WT组比较差异无统计学意义。跳台后KO组和WT组ERK1／2及p－ERK1／2的表达与跳台前比较差异无统计学意义。结论 FMR1基因敲除小鼠学习记忆障碍与海马p －ERK1／2的异常表达有关。     

科技动态

Dat1基因敲除小鼠的行为学研究多巴胺(DA)运输体基因(Dat1)编码重吸收多巴胺能神经递质的蛋白质,起终止多巴胺能神经递质活动的功能。为了研究KO小鼠行为异常的行为和生化机制,Vladimir MPogorelov等人研究了野生型(WT)、Dat1杂合型(HZ)、和Dat1基因敲除(KO)3种雄性小鼠(3~5月龄)的行为学试验,这3种小鼠均来自C57BL/6J和129 Sv/J杂交Dat1小鼠,杂交15代。KO小鼠中Dat1表达消失,HZ小鼠有50%的Dat1表达。跟WT对照组相比,KO小鼠细胞外的DA增加2~5倍。尽管KO小鼠的旷野活动能力跟WT和HZ相似,但能力较之为强。HZ小鼠紧张度低,能…     

Slc4a11基因缺失在CHED发病中的作用

目的　探讨Slc4a11缺失在先天性遗传性角膜内皮营养不良（congenital hereditary endothelial dystrophy, CHED）发病中的作用及其与自噬信号通路的潜在调控关系。方法　利用CRISPR/Cas9技术构建Slc4a11基因敲除小鼠模型。以野生型小鼠（wild type, WT）和Slc4a11基因敲除小鼠（knockout, KO）为实验对象,通过Western印迹法、RT-qPCR、茜素红染色、H-E染色、透射电镜评估KO小鼠角膜表型特征的变化。通过Western印迹法和RT-qPCR检测自噬标志物LC3、beclin1、p62在角膜内皮的表达量。透射电镜观察两组小鼠角膜内皮细胞自噬情况。结果　Slc4a11基因敲除小鼠角膜显示与CHED相似的表型特征,包括角膜厚度增加;角膜内皮细胞体积增大,密度减小;后弹力层增厚;角膜内皮空泡形成。KO小鼠与WT小鼠相比,LC3、beclin1的mRNA和蛋白的相对表达量上升,差异有统计学意义（P<005）,而p62的mRNA和蛋白的相对表达量下降,差异有统计学意义（P<005）。KO小鼠角膜内皮细胞内自噬体明显多于WT小鼠。结论　利用CRISPR/Cas9技术构建的Slc4a11基因敲除小鼠角膜显示CHED特征的表型。同时Slc4a11缺失通过增强自噬信号通路参与CHED的发病机制。     

DNAM-1通过IL-2/STAT-5通路调节Ⅰ型调节性T细胞的增殖和功能

目的 探讨DNAM-1对Ⅰ型调节性T细胞(Tr1细胞)活化、增殖和功能的影响及相关分子机制。方法 利用anti-CD3/CD28激活小鼠T细胞,采用流式细胞术分别检测静息和激活状态下CD4⁺T细胞和Tr1细胞DNAM-1分子表达变化;分离DNAM-1基因敲除小鼠(KO小鼠)脾脏初始CD4⁺T细胞并体外诱导Tr1细胞,流式细胞术检测CD25和CD69活化分子表达水平,CFSE标记后检测增殖能力,IL-2刺激前后检测KO小鼠Tr1细胞分泌IL-10和转录激活蛋白(p-STAT5)水平变化。结果 流式细胞术结果显示：与静息状态下相比较,激活状态的CD4⁺T细胞和Tr1细胞表达DNAM-1分子均增高(P<0.05);敲除DNAM-1不影响小鼠脾脏Tr1细胞的数量和比例,但KO小鼠Tr1细胞表达细胞激活分子CD25和CD69均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与WT小鼠比较,KO小鼠诱导型Tr1细胞体外增殖能力降低(P<0.05);与WT组Tr1细胞比较,KO小鼠Tr1细胞分泌抑制性细胞因子IL-10水平降...     

FSCB基因敲除对雄性小鼠生殖功能的影响

目的 利用fscb基因敲除小鼠,探讨FSCB蛋白在小鼠精子运动和授精功能中的作用.方法 应用免疫荧光观察fscb基因敲除雄鼠睾丸组织及精子中FSCB蛋白表达情况;应用计算机辅助精液分析(computer assisted sperm analysis,CASA)系统分析fscb基因敲除小鼠精子在体外的运动特征、活率和运动参数改变情况;在体外获能培养条件下检测精子的体外受精能力;将fscb基因敲除纯合子(KO)、杂合子(HET)、野生型(WT)雄鼠分别与野生型C57BL/6J成年雌鼠交配,观察雌鼠怀孕率、怀孕胚胎数量、自然产仔数及子代成年雄鼠生殖腺形态学是否存在差异.结果 免疫荧光显示纯合子雄鼠睾丸组织及精子中均无FSCB蛋白表达,杂合子雄鼠睾丸组织及精子中FSCB蛋白表达与野生型相比明显减低.CASA显示各组雄鼠精子数、活率、各项运动参数差异均无统计学意义(P＞0.05);野生型、杂合子和纯合子雄鼠精子与透明带完整卵细胞及与无透明带卵细胞结合的精子平均数、卵细胞的受精率差异均无统计学意义(P＞0.05);各组雄鼠对应雌鼠的受孕率差异无统计学意义(P＞0.05);野生型、杂合子和纯合子对应雌鼠受孕后每只雌鼠胚胎数分别为(7.00±1.41)、(7.33 ±1.53)、(7.20±1.48)只,每窝自然产仔数分别为(6.00±2.00)、(6.75±1.71)、(7.80±1.30)只,组间比较差异无统计学意义(P＞0.05);各组子代成年雄鼠生殖腺发育差异无统计学意义(P＞0.05).结论 敲除fscb基因对雄性小鼠精子的运动功能及体内外受精能力均无明显影响,提示该基因所编码的FSCB蛋白的功能对于精子的运动和授精能力的维持可能是非必需的或可被替代的.     

睾丸间质细胞Prl3c1过表达转基因小鼠建立与生物学功能初步研究

目的 建立睾丸prolactin family 3,subfamily c,member 1(Prl3c1)过表达转基因(TG)小鼠,并对其功能进行初步研究.方法 设计引物扩增insulin like 3(Insl3)、Prl3c1、Insl3PA片段,通过融合PCR,形成Insl3-Flag-Prl3c1-Insl3 PA片段,构建pPrl3c1转基因载体,测序验证.通过受精卵原核注射,建立TG小鼠.免疫荧光、Western blot方法鉴定转基因表达情况.采用ELISA方法检测3月龄TG小鼠与野生型对照(WT)小鼠睾酮基础水平;并测定5 U/10 g人绒毛膜促性腺激素(human chorionicgonadotropin,HCG)刺激后,TG与WT小鼠睾酮水平(n=6).结果 免疫荧光与Western blot检测结果表明转基因片段表达于TG小鼠睾丸间质细胞.TG小鼠睾丸形态学未见明显异常.此外,TG小鼠基础睾酮水平与WT小鼠差异无统计学意义[(2.61 ±0.34) ng/mL vs (2.51 ±0.35) ng/mL,P＞0.05],但在HCG刺激后,TG小鼠睾酮水平低于WT小鼠[(5.35±0.83) ng/mL vs(7.56±1.17) ng/mL,P＜0.01].Western blot检测结果表明Prl3c1过表达减弱HCG刺激的STAR表达(P＜0.01).结论 成功建立了Prl3c1 TG小鼠,体内功能研究显示Prl3c1参与睾酮产生.     

Fmr1基因敲除小鼠悬尾实验的观察

目的：对不同周龄的 KO 小鼠与 WT 小鼠进行悬尾实验进行观察,探讨 KO 小鼠与 WT 小鼠的行为差别。方法采用健康的试验动物180只分两组：①KO 组（4、6、8周龄,各周龄30只,雌雄各半,共90只）②WT 组（4、6、8周龄,各周龄30只,雌雄各半,共90只）;通过悬尾实验观察性别,年龄对不动时间的影响。结果同龄 KO 雌性小鼠比雄性小鼠的静止时间差别不大;随着年龄增大,静止时间增长。同龄同性别的 KO 鼠比 WT 鼠的不动时间长。P ＜0．05;同龄雄性小鼠比雌性小鼠的不动时间短;随年龄增长各种系小鼠不动时间增长,KO 鼠的不动时间比 WT 鼠长,P ＜0．05。结论 KO 小鼠存在抑郁行为表型。     

血管紧张素转化酶2参与臭氧暴露导致的小鼠肺部炎症及气道重塑

目的 研究血管紧张素转换酶2（ACE2）在臭氧暴露致小鼠肺部炎症及气道重塑中的作用。方法 16只野生型（WT）C57BL/6J小鼠和16只ACE2 敲除（KO）小鼠分别暴露于空气和臭氧（0.8 ppm）中,每天暴露3 h,连续暴露5 d。分别设置AirWT组,Air KO组,Ozone WT组和Ozone KO组。Masson染色观察小鼠肺组织胶原沉积情况,HE染色观察小鼠肺部病理学改变,并进行评分;收集小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）,并进行细胞计数;分别采用BCA法和酶联免疫吸附法（ELISA）测定BALF总蛋白和细胞因子浓度;荧光定量PCR检测肺组织中气道重塑相关指标的mRNA表达;小鼠的气道阻力采用小动物呼吸机测量（乙酰甲胆碱激发）。结果 臭氧暴露ACE2 KO小鼠肺组织炎症病理学变化总分显著高于臭氧暴露WT小鼠（P<0.05）。Masson染色结果显示,臭氧暴露小鼠肺组织支气管和肺泡周围有大量的胶原沉积,臭氧暴露ACE2 KO小鼠肺组织的支气管和肺泡的胶原沉积阳性区域面积为（19.62±3.16）%、（21.63±3.78）%,高于臭氧暴露 WT 小鼠肺组织的（6.49±1.34）%、（4.44± 0.99）%,两者差异具有统计学意义（P<0.05）。臭氧暴露ACE2 KO小鼠BALF中总细胞数与总蛋白含量均高于臭氧暴露WT小 鼠,差异无统计学意义（P>0.05）。臭氧暴露ACE2 KO小鼠BALF中IL-6、IL-1β、TNF-α、趋化因子（C-X-C基序）配体1（CXCL1/KC）和单核细胞趋化蛋白（MCP-1）水平均高于臭氧暴露WT小鼠,其中IL-1β水平的变化差异具有统计学意义（P<0.05）。臭氧暴露 ACE2 KO 小鼠的肺组织中的基质金属蛋白酶 9（MMP-9）、MMP-13、金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP4）、Ⅰ型胶原α1 （COL1A1）、TGF-β的mRNA水平均明显高于WT组小鼠,两组的MMP-9、TIMP4、COL1A1、TGF-β的mRNA水平差异具有统计学意义（P<0.01）。两组小鼠在0、10、25、100 mg/mL的乙酰甲胆碱浓度下的气道阻力的差异无统计学意义（P>0.05）。结论 ACE2参与臭氧暴露导致的小鼠肺部炎症及气道重塑。     

光信号对Fmr1 KO小鼠睡眠-觉醒的调控作用

目的 探讨光授时信号对脆性 X 智力低下基因型(Fmr1 KO)小鼠睡眠-觉醒的影响.方法 采用小鼠脑立体定位技术埋置脑电和肌电电极,记录和分析在不同光照条件下Fmr1 KO小鼠和野生型(WT)小鼠的睡眠-觉醒节律的变化.结果 Fmr1 KO 小鼠和 WT 小鼠在正常光照(12 h:12 h明暗,即8:00 am开灯,8:00 pm关灯)条件下的觉醒和睡眠均呈现一致的昼夜节律现象,且二者之间差异无统计学意义;与正常光照的同样时间段相比较,9:00 am～11:00 am关灯期间,Fmr1 KO小鼠和WT小鼠的觉醒量均显著增加(P＜0.05),且在9:00 am～10:00 am变化极显著(P＜0.01),但Fmr1 KO小鼠觉醒的增加量明显低于WT小鼠(P＜0.05);与正常光照的同样时间段相比较,9:00 am ～11:00 am关灯期间,Fmr1 KO小鼠和 WT小鼠的慢波睡眠(SWS) -觉醒(W)、W-SWS和SWS-快波睡眠( FWS)时相转换量都显著增加(P＜0.05),其中在9:00 am～10:00 am极显著增加(P＜0.01).结论 相比于WT小鼠,Fmr1 KO小鼠的睡眠-觉醒受光信号改变的影响有所减弱.     

ether-a-go-go相关基因通道在胰岛β-细胞中的作用

目的 探究ether-a-go-go相关基因（ether-a-go-go related gene,ERG）通道在胰岛β-细胞中的作用。方法 提取野生型（wild type,WT）与ERG基因敲除型（knockout,KO）小鼠胰岛β-细胞,利用全细胞膜片钳技术记录钾离子电流与动作电位,分析敲除ERG基因后钾电流与动作电位的变化。对两组小鼠进行腹腔注射葡萄糖耐量实验,分析基因敲除后小鼠糖耐量的变化,探究ERG基因是否对体内血糖浓度有影响。结果 在两组小鼠胰岛β-细胞中记录到的钾离子电流均呈现内向整流趋势,KO组钾离子电流明显减小,动作电位时程明显延长。动物实验中,KO组小鼠糖刺激2 h后血糖浓度较WT组显著降低。结论 ERG通道电流是胰岛β-细胞中钾离子电流的重要组成部分,可显著影响动作电位时程,进而影响体内血糖浓度。     

机器人辅助腹腔镜前列腺癌根治术(RALP)与开放性耻骨后前列腺癌根治术(RRP)的5年肿瘤学效果对比

 目的 分析机器人辅助腹腔镜前列腺癌根治术（robot-assisted laparoscopic radical prostatectomy，RALP）与开放性耻骨后前列腺癌根治术（open retropubic radical prostatectomy，RRP）治疗局限性前列腺癌的5年肿瘤学效果。方法 收集复旦大学附属华东医院泌尿外科2009年7月至2014年3月同期接受RALP或RRP并获得随访的95例患者临床资料，比较两种术式的手术时间、术中失血量及输血比例、术后病理、生化复发率等指标。结果 95例手术均获成功，RALP组无中转开放。RALP组与RRP组手术时间分别为212.3与166.8 min（P<0.05），术中失血量分别为237.3与557.3 mL（P<0.05）；术中输血比例分别为16.7%与78.7%（P<0.05）；手术切缘阳性率分别为22.0%与7.8%（P<0.05），1年尿控率分别为79.5%和84.7%，6个月、1年、2年、3年、4年、5年生化复发率分别为6.2%和4.3%、18.8%和6.4%、25.0%和14.9%、29.2%和21.3%、31.2%和21.3%、31.2%和23.4%。两组5年内的生化复发率差异无统计学意义。结论 RALP具有损伤小、出血少、输血少的优点，但手术时间长于RRP。两种术式的尿控、手术切缘阳性率及5年长期肿瘤学效果等相似。     

Limk1在FMR1基因敲除小鼠脑组织的表达及意义

目的：通过免疫组化方法观察LIM-kinase 1（Limk1）在不同年龄组的FMR1基因敲除鼠（FMR1 knockout mouse,KO）和野生鼠（wild type mouse,WT）脑组织不同部位的表达差异.方法：取FVB品系新生和生后2、6周KO鼠（KO0d、KO2周和KO6周）,并分别与同龄WT鼠作对照.每组6只通过免疫组化染色,观察Limk1在不同年龄组的KO和WT小鼠脑组织各部位的表达差异.结果：Limk1在新生鼠的海马、皮层、丘脑、小脑表达丰富,以染色阳性纤维为主,染色阳性细胞少见.生后2周、6周小鼠的大脑皮质和海马仅见少量散在弱阳性细胞表达,但在丘脑未定带、腹后外侧核,小脑蒲肯野细胞和脑干前庭蜗神经核可见强阳性细胞表达.各年龄组KO与WT小鼠Limk1在脑区的分布特点基本一致.KO0d、KO2周及KO6周组小脑、蜗神经核Limk1强阳性表达脑区的平均光密度值以及KO2W及KO6W组丘脑部位的阳性细胞计数均高于同龄WT组,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：Limk1在KO与WT小鼠脑组织的表达均有着明显的时空特异性,FMRP能负性调控Limk1表达.     

胆总管结扎所致肝损伤中Nrf2对细胞信号传导和基因表达的影响

目的 研究核因子相关因子 2（Nrf2）在胆汁淤积中的作用。方法 野生鼠（WT）和Nrf2基因敲除小鼠(KO)给予胆总管结扎手术,应用蛋白杂交技术观察丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号传导途径的变化;应用RNA酶保护测定（RPA）技术测定基因变化。结果 在BDL组血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）显著升高;纤维粘连蛋白的表达在KO鼠明显增多;p-JNK、p-stat3、p-AKT、p-p38在WT鼠的BDL组的活化强度较大。Nrf2的靶基因NQO1,谷胱甘肽S 转移酶(GST)的同工酶（GST-Ya,GST-pa）在WT鼠的BDL组明显上调,而在KO鼠中则被抑制。TGF-β1、TIMP-1、胶原蛋白1在KO鼠的BDL组上调幅度较大。结论 在胆总管结扎后胆汁淤积所致肝损伤中,Nrf2对MAPK信号传导和炎症、纤维化过程均有影响,部分通过上调抗氧化基因的表达起到细胞保护作用。     

慢性缺氧诱导小鼠心肌细胞自噬及其机制

目的 观察慢性缺氧对小鼠心肌细胞自噬水平的影响,并初步探讨AMPKα2敲除对该过程的作用.方法 采用野生型与AMPKα2-/-雄性C57小鼠均分为野生型常氧组、野生型缺氧组、敲除型常氧组和敲除型缺氧组(n=10).常氧组于空气环境中饲养,缺氧组于10％ O2的低氧舱内饲养.4周后野生型小鼠取静脉血标本,测红细胞及血红蛋白水平;取心脏标本用Western blot检测AMPKα2及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值与p62的变化,用免疫荧光染色法检测心肌冰冻切片LC3变化.敲除型小鼠取心脏标本用Western blot检测心肌组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值变化.结果 ①野生型小鼠中,与常氧组比较,缺氧组红细胞与血红蛋白水平显著增加[红细胞:(9.33 ±0.15)×1012/L vs(12.78±0.66)×1012/L,P ＜0.05;血红蛋白:(135 ±3)g/L vs (192 ±4)g/L,P＜0.05];②野生型小鼠中,与常氧组相比,缺氧组心肌组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著增加[(0.49 ±0.29) vs(1.70 ±0.24),P＜0.05];p62表达明显降低[(1.32±0.57) vs (0.71 ±0.19),P＜0.05];免疫荧光结果显示,缺氧组心肌组织LC3荧光较常氧组增多;③在常氧条件下,与野生型小鼠比较,AMPKα2-/-小鼠心肌组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低,但差异无统计学意义[(0.78 ±0.08) vs (0.73 ±0.34),P＞0.05];在缺氧条件下,与野生型小鼠比较,AMPKα2-/-小鼠心肌组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著降低[(2.08±0.72) vs (1.01 ±0.21),P＜0.05];④野生型小鼠中,与常氧组比较,缺氧组AMPKα2蛋白表达水平并无显著增加[(1.14±0.13) vs(1.25±0.19),P＞0.05].结论 慢性缺氧可能通过AMPKα2依赖的途径增强心肌细胞自噬,该自噬可能是心肌细胞对慢性缺氧的适应机制.