消岩汤经Wnt通路抑制肺腺癌A549细胞增殖的机制研究

目的 探讨消岩汤经Wnt通路抑制人肺腺癌A549细胞增殖的可能机制。方法 体外培养A549细胞,加入梯度浓度消岩汤(10、50、100、200、300 g/L)后,采用CCK8法检测A549细胞存活率。通过PCR测定Wnt通路相关基因β-catenin、c-myc、凋亡相关基因bcl-2、caspase-3表达情况;通过荧光素酶报告基因检测反应Wnt通路活性。流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果 消岩汤可以剂量和时间依赖性地抑制A549细胞的增殖,同时消岩汤可以剂量依赖性地显著降低A549细胞中β-catenin、c-myc的表达水平,抑制Wnt通路活性,并通过降低bcl-2表达、增强caspase-3表达来促进了肿瘤细胞凋亡。结论 消岩汤可能通过抑制Wnt信号通路来抑制A549细胞的增殖、促进凋亡。     

消岩汤通过WNT通路抑制肺腺癌A549细胞增殖、促进细胞凋亡的机制研究

[目的] 探讨扶正祛瘀解毒法经典用药消岩汤抑制人肺腺癌A549细胞增殖、促进细胞凋亡的可能机制。[方法] 体外培养A549细胞,乳酸脱氢酶（LDH）、CCK8、流式细胞术检测对照组、消岩汤组、消岩汤加WNT通路激动剂组、WNT通路抑制剂XAV939组、单独WNT通路激动剂组细胞毒性、存活率和凋亡率。通过聚合酶链式反应（RT-PCR）测定对照组、消岩汤组和WNT通路抑制剂XAV939组中WNT通路相关基因β-catenin、c-myc,凋亡相关基因Bcl-2、Caspase-3表达情况;通过荧光素酶报告基因检测反应WNT通路活性。[结果] 消岩汤可以抑制A549细胞的增殖,促进细胞凋亡,而消岩汤加WNT通路激动剂组可以减弱以上作用;同时消岩汤可以显著降低A549细胞中β-catenin、c-myc的表达水平,抑制WNT通路活性,并通过降低Bcl-2表达、增强Caspase-3表达来促进了肿瘤细胞凋亡。[结论] 扶正祛瘀解毒法消岩汤可以抑制A549细胞的增殖、促进凋亡,其作用机制可能是抑制WNT通路活性。     

消岩汤剂拆方配伍对A549肺腺癌细胞体外生长抑制作用研究

[目的]探讨消岩汤及各拆方组对人肺腺癌A549细胞的体外生长的作用机制,探究消岩汤剂中最有效的作用成分和浓度。[方法]消岩汤全方和根据功效拆分的清热解毒组、活血化瘀组、益气扶正组,以CCK-8检测A549肺腺癌细胞的细胞增殖活性。[结果]各组均有明显的抑制细胞活性作用,抑制强度依次为:全方组、清热解毒组、活血化瘀组、益气扶正组。[结论]消岩汤及其拆方组在体外实验中均能抑制A549肺腺癌细胞细胞生长,消岩汤全方组当浓度达到50 g/L时达到最大抑制率为85.60%。清热解毒组药物在抗肿瘤作用方面,与全方接近,提示清热解毒组中药为体外实验中全方抗肿瘤作用最有效组分。     

消岩汤对肺腺癌A549实体荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡干预机制的研究

目的分析消岩汤干预下Survivin siRNA对肺腺癌A549实体荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡的影响。方法以人肺腺癌A549实体移植瘤裸鼠模型为研究对象,将消岩汤含药血清及siRNA转染后的A549细胞分别进行瘤内注射,通过流式细胞术观察小鼠体内细胞凋亡情况;免疫细胞化学法检测Survivin蛋白表达。结果 siRNA转染组对Survivin蛋白表达的抑制率明显高于消岩汤组,但显著低于消岩汤+siRNA转染组。siRNA转染组和消岩汤组均可诱导细胞凋亡,且siRNA转染组的诱导作用强于消岩汤组,消岩汤+siRNA转染组可协同增强诱导细胞凋亡作用。结论消岩汤联合Survivin siRNA可协同增强诱导细胞凋亡作用。     

扶正消岩汤抑制三阴性乳腺癌细胞增殖的机制研究

目的 研究扶正消岩汤对三阴性乳腺癌细胞增殖的影响并从药物影响线粒体功能及线粒体动力学平衡的角度探讨药物的作用机制。方法 依据扶正消岩汤对三阴性乳腺癌细胞的IC₅₀浓度确定药物的干预浓度及作用时间,设立对照组即扶正消岩汤高、中、低剂量给药组;24h后,TUNEL染色检测凋亡细胞比率;Annexin V-PI双染流式细胞仪定量检测扶正消岩汤对细胞凋亡的影响;JC-1染色流式细胞仪检测中药对细胞线粒体去极化水平的影响;实时定量PCR方法检测中药对凋亡相关因子mRNA表达水平及mir-34a表达水平的影响;Western Blot检测扶正消岩汤对细胞线粒体动力学平衡相关蛋白表达的影响。结果 扶正消岩汤具有诱导MDA-MB-231细胞发生凋亡及提高凋亡基因BAX、Caspase3 mRNA表达水平的作用,且与给药浓度相关;随着扶正消岩汤药物浓度的提高,TNBC细胞内线粒体活性降低且中剂量组及高剂量组细胞线粒体去极化水平较对照组显著提高;同时中剂量组及高剂量组细胞中mir-34a的表达水平及线粒体动力学平衡关键因子mTOR、Drp-1的蛋白表达水平也较对照组显著降低。结论 扶...     

消岩汤不同时段联合化疗对Lewis肺癌小鼠免疫功能的影响

[目的]观察消岩汤对不同时段联合化疗对Lewis肺癌小鼠免疫功能的影响。[方法]60只C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、荷瘤空白组、单纯顺铂组、提前7d运用消岩汤加顺铂组、化疗前3d运用消岩汤加顺铂组和消岩汤同时加顺铂组。消岩汤灌胃第12天后,处死小鼠,观察小鼠生长活动情况、体质量、抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数、血清干扰素(IFN-γ)、白介素-2(IL-2)含量的变化。[结果]消岩汤提前介入化疗对Lewis肺癌小鼠有较好的抑瘤作用,生长活动状况也较好。化疗前运用消岩汤介入治疗Lewis肺癌小鼠胸腺指数、脾脏指数及IL-2、IFN-γ细胞因子分泌水平显著高于单纯化疗组。[结论]消岩汤能保护实验动物的细胞免疫器官,提高小鼠的免疫功能。     

消岩汤治疗晚期恶性肿瘤恶液质42例临床观察

[目的]观察消岩汤治疗晚期恶性肿瘤恶液质前期或恶液质期的临床疗效。[方法]将83例晚期恶性肿瘤恶液质患者随机分为治疗组(42例)和对照组(41例),对照组予醋酸甲地孕酮分散片治疗,治疗组在对照组的基础上联合消岩汤,连续观察3个月后,比较两组患者进食量、卡氏评分、体液潴留变化,检测比较治疗前后调整体质量(ABW)和淋巴细胞总数的差异。[结果]治疗组在提高患者卡氏评分、增加患者进食量及ABW方面优于照组(P0.05);治疗组发生体液潴留较对照组少(P0.05);在改善生化指标方面,治疗组优于对照组(P0.05)。[结论]消岩汤治疗晚期恶性肿瘤恶液质前期或恶液质期疗效较好,能改善患者患者营养状态,减少不良反应发生,提高生活质量。     

消岩汤通过HSPA5逆转肺腺癌耐药的研究

目的 分析肺腺癌耐药细胞株A549/DDP在中药复方消岩汤作用后细胞的差异蛋白并寻找相关耐药靶点。方法 通过Label-free蛋白组学筛选出两组关于耐药方面的差异蛋白,利用GO富集分析,PPI蛋白相互作用网络图的构建筛选核心蛋白,Western blot及qRT-PCR方法验证核心蛋白及基因的表达;利用CCK8法检测A549/DDP细胞增殖活力情况,利用流式细胞术检测A549/DDP细胞凋亡情况。在上调HSPA5蛋白表达的基础上,检测消岩汤对A549/DDP细胞增殖及凋亡的影响,以及A549/DDP细胞对顺铂耐药性的影响。结果 在中药复方消岩汤作用后的A549/DDP细胞蛋白质谱中找到29种耐药相关差异蛋白质,其中14种上调,15种下调。通过PPI蛋白网络互做分析得出核心蛋白,选择HSPA5进行体外实验验证,结果显示与对照组相比,中药复方消岩汤可以降低A549/DDP细胞中HSPA5蛋白及基因的表达,与蛋白组学结果一致。CCK8及细胞凋亡实验显示,消岩汤可以抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,增强耐药细胞对顺铂的敏感性;上调HSPA5蛋白表达,消岩汤抑制细胞生长及增强细胞对顺铂敏感性的能力减...     

消岩汤含药血清介导下Survivin siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

[目的]分析消岩汤含药血清介导下Survivin siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响,探究其抑瘤机制。[方法]在Invitrogen公司的网上设计系统中设计靶向Survivin基因的siRNA序列,并将其转染A549细胞,应用噻唑蓝(MTT)法检测消岩汤以及转染组对A549细胞生长抑制的情况,免疫组化法观察A549细胞Survivin蛋白的表达情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。[结果]MTT法显示消岩汤具有抑制A549细胞生长的作用,其作用具有一定的时间依赖性,转染中药组的抑制率显著高于转染对照组及非转染中药组。经免疫组化法检测,转染对照组对Survivin蛋白表达的抑制率明显高于非转染中药组,但显著低于转染中药组。流式细胞术检测结果显示消岩汤及重组质粒以诱导细胞晚期凋亡为主,转染中药组A549细胞凋亡率显著高于其他各组。[结论]消岩汤可诱导A549细胞的凋亡,联合应用转染靶向Survivin基因的重组质粒可增强其体外诱导A549细胞凋亡的作用。     

理肺消癌汤治疗中晚期肺癌临床观察

目的 观察理肺消癌汤治疗中晚期肺癌的临床疗效.方法 将患者随机分为两组,中药组采用中药复方理肺消癌汤治疗,化疗组采用国际通用的化疗方案治疗,疗程均为6周,1个疗程后比较两组的临床疗效.结果 化疗组瘤体有效率高于中药组;中药组在瘤体稳定率、咳嗽、发热、气短、乏力、纳差、生存质量、中位生存期、1年生存率等方面优于化疗组.结论 理肺消癌汤在治疗中晚期肺癌方面毒副作用少,具在稳定瘤体,减小癌灶,改善中晚期肺癌患者的临床主要症状,提高患者生活质量、延长带瘤生存时间等方面具有显著的优势.     

消岩汤对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用及对髓源性抑制细胞的影响

[目的]观察消岩汤对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长的抑制作用及对髓源性抑制细胞(MDSCs)的影响。[方法]选取C57BL/6小鼠建立Lewis肺癌小鼠模型。成模小鼠随机分为模型组、环磷酰胺(CTX)组、消岩汤组、联合组,每组6只。另取正常小鼠6只为空白组。空白组、模型组:每日灌胃0.2 mL生理盐水;消岩汤组:每日予消岩汤灌胃2次,每次0.2 mL(28.77 g/mL);环磷酰胺组:每日腹腔注射CTX 0.2 mL(6 mg/mL);联合组:在消岩汤组基础上腹腔注射CTX0.2 mL(6 mg/mL)。7 d后处死小鼠,称量瘤质量、脾脏质量、胸腺质量,计算抑瘤率、脾指数、胸腺指数。流式细胞技术检测小鼠脾脏MDSCs表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测小鼠外周血白细胞介素(IL)-6,转化生长因子-β(TGF-β)表达水平。[结果]各组小鼠抑瘤率结果表明,消岩汤、环磷酰胺及联合用药干预均可抑制肿瘤生长,抑瘤率分别为20.3%、49.7%及56.7%。与模型组比较,消岩汤组及联合组脾指数及胸腺指数显著升高(P0.05)。与空白组相比,模型组小鼠脾脏中MDSCs百分比显著上升(P0.05);与模型组比较,消岩汤组、CTX组及联合组小鼠脾脏中MDSCs百分比均有不同程度显著降低(P0.05);与CTX组相比,联合组小鼠脾脏中MDSCs百分比降低更显著(P0.05)。与模型组相比,消岩汤组、CTX组及联合组小鼠血清中IL-6、TGF-β水平有不同程度降低(P0.05);与CTX组相比,联合组小鼠血清中TGF-β水平显著降低(P0.05)。[结论]消岩汤可以协同化疗药物抑制肿瘤生长,下调免疫负向调节因子IL-6、TGF-β水平,抑制MDSCs扩增,可能从重塑肿瘤免疫微环境角度发挥作用。     

消岩汤对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞多药耐药相关蛋白的调控作用

目的探讨消岩汤含药血清对耐顺铂人肺腺癌A545659/DDP细胞多药耐药相关蛋白1(MRP1)、肺耐药蛋白(LRP)及其m RNA表达水平的影响,发现消岩汤对化疗耐药的作用靶点,为肺癌化疗耐药的临床治疗提供理论基础。方法 A549裸鼠皮下移植瘤模型ip给予等量生理盐水,2 mg/kg顺铂,消岩汤低、高剂量(20、40 g/kg)获得含药血清,选择耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞系作为获得性耐药模型,采用Western blotting免疫印迹法及RT-PCR技术,检测各组含药血清作用下A549/DDP细胞多药耐药基因MRP1、LRP及其产物MRP1、LRP蛋白的表达水平。结果与对照组相比,随着血清中药物浓度的增加,消岩汤低、高剂量组LRP与MRP1蛋白表达逐渐减弱(P0.05)。LRP及MRP1 m RNA水平也有所下降(P0.05),且随着药物浓度的增加,基因表达抑制越明显。结论不同浓度的消岩汤含药血清对MRP1、LRP及其m RNA表达均具有不同程度的抑制作用,且浓度越高,抑制作用越明显,即与剂量呈正相关,揭示消岩汤逆转肺癌耐药可能与抑制MRP1和LRP蛋白功能有关。     

消岩汤剂拆方配伍对肺腺癌A549细胞survivin和caspase-3表达的影响

目的 探讨消岩汤及其各拆方组分对人肺腺癌A549细胞株凋亡的影响及其机制.方法 将消岩汤按照功效进行拆方,分为清热解毒组、活血化瘀组、益气扶正组.以CCK-8法检测各拆方对A549细胞的最有效抑制浓度,采用Western blotting法测定Survivin、Caspase-3蛋白表达,RT-PCR法检测survivin与caspase-3基因表达.结果 消岩汤及其各拆方组分均有明显的抑制A549细胞生长作用,消岩汤及其各拆方组分具有诱导A549细胞凋亡的作用,其机制与下调survivin基因和蛋白表达有关,对caspase-3基因和蛋白表达影响不显著.结论 消岩汤及其各拆方组分体外均有明显的抑制A549细胞生长作用,消岩汤及其各拆方组分可通过下调survivin的表达诱导肿瘤细胞凋亡,清热解毒组方中药是其抗肿瘤作用主要组分.     

消岩汤姑息治疗中晚期非小细胞肺癌的回顾性临床研究

目的 观察消岩汤姑息治疗中晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的临床疗效。方法 采用回顾性临床研究方法,收集Ⅲ_b～Ⅳ期NSCLC患者127例,其中治疗组73例,采用了消岩汤加减联合姑息治疗;对照组54例,采用单纯姑息治疗。比较两组治疗后无进展生存期(progression free survival,PFS)和总生存期(overall survival,OS)及临床疗效,并对两组治疗前后卡氏评分(Karnofsky performance status,KPS)、免疫功能指标进行疗效评价和对比分析。结果 与对照组比较,治疗组显著延长了NSCLC患者的中位PFS(median PFS,m PFS)(3.6月vs 2.3月,P=0.017),但中位OS(median OS,m OS)未见显著获益(5.73月vs 5.33月,P=0.176)。治疗后,治疗组KPS评分较治疗前显著提高(P<0.05);治疗组较对照组KPS评分显著提高,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗组临床总有效率为75.34%,中医症状...     

消岩汤逆转肺癌顺铂耐药的机制研究

目的探讨消岩汤逆转肺癌顺铂(DDP)耐药的可能机制。方法 MTT检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞侵袭能力;si RNA转染细胞获取稳定低表达基因的细胞株;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Werstern blotting检测m RNA和蛋白表达水平的变化。结果 MTT检测A549/DDP,在72、96 h,消岩汤能够明显抑制细胞增殖,而在48、72、96 h,DDP联合消岩汤能够明显抑制细胞增殖。划痕实验显示与A549/DDP/si RNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株迁移距离明显缩短。MTT显示与A549/DDP/si RNA-NC比较,A549/DDP/si RNA-Beclin1细胞株增殖能力减低,Westernblotting显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞P-糖蛋白(P-gp)和肺耐药相关蛋白(LRP)蛋白表达降低,MTT检测A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞,在72、96 h,DDP和消岩汤能明显抑制细胞增殖;而在24、48、72、96 h,DDP联合消岩汤明...     

消岩汤治疗非小细胞肺癌临床及基础研究进展

近年来,肺癌已成为全球死亡率最高的恶性肿瘤,其中非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)占所有肺癌的85％左右,目前NSCLC的临床疗效仍不甚理想.贾英杰教授提出本病"黜浊培本"的中医治则,并拟定消岩汤,临床疗效确切,单独应用于NSCLC或配合放化疗等抗肿瘤治疗,可有效延长无进展...     

基于HPLC-MS的消岩汤在正常大鼠体内药动学研究

目的 研究消岩汤中的有效成分并分析其在正常大鼠体内的代谢情况,从而初步探究消岩汤中抗肿瘤有效成分及其代谢规律。方法 取12只雄性Wistar大鼠随机分为实验组及对照组,实验组ig消岩汤浓缩液,对照组ig单药黄芪(消岩汤中君药)浓缩液;给药后于不同时间点目内眦取血0.5mL,采用液质联用(LC-MS)技术测定大鼠体内不同时间点黄芪甲苷、咖啡酸的浓度,得血药浓度-时间数据,采用DSA2.0软件计算血浆药动学参数。结果 实验组大鼠血浆中黄芪甲苷的消除速率常数(K10)、清除率(CL/F)均小于对照组(P<0.05、0.01),消除半衰期(t_tl/2β)、表观分布容积(V/F)、C_max、药时曲线下面积(AUC)均大于对照组(P<0.05、0.01、0.001),两组的达峰时间(t_max)相同。实验组大鼠血浆中咖啡酸的CL/F小于对照组(P<0.01),t_tl/2β、V/F、AUC、K10、C_max均大于对照组(P<0.05、0.01、0.001)。结论 消岩汤能够促进其抗肿瘤成分黄芪甲苷、咖啡酸的吸收代谢。