Molecular epidemiologic study of Mycoplasma genitalium infection in high risk populations of sexually transmitted diseases in China

Objective To detect Mycoplasma genitalium (Mg) infection in high risk populations of sexually transmitted diseases (STDs) from several cities in China and to clarify the possible role of Mg in the pathogenesis of non-gonococcal urethritis.
Methods Polymerase chain reaction (PCR) based on 2 pairs of primers, one for Mg-Pa (adh esion protein) and the other for 16S-rRNA (Mycoplasma genera) was used to det ec t Mg infection. Urogenital specimens of different high risk populations and ure thritis patients, were collected from the Guangdong, Kunming, Shanghai, Nanjing, and Changzhou areas.
Results The positive detection rate of Mg-DNA in high risk populations of STDs was sign ificantly higher than that of the control group (x²=7.82, P<0.01). The positive detection rates in Guangdong STD clinics and promiscuous persons from Kunming were higher than those from the Shanghai, Nanjing, and Changzhou areas (x²=8.54, P<0.01 and x²=5.89, P<0.05). Mg DNA could be det ecte d in those patients without other relevant pathogens. Some patients were simult aneously infected with Mg and other microbes, such as Chlamydia trachomati s and/or Ureaplasma urelyticum. The positive Mg-DNA detection rate i n patients with urethritis symptoms was higher than in patients without the symp toms (x²=11.68, P<0.01).
Conclusion Mg infection exists in high risk populations of STDs in China, and the Mg infection rate is different among different high risk groups.     

不同人群生殖道支原体和衣原体感染的血清流行病学研究

目的：了解我国６个地区不同人群生殖道支原体与衣原体感染情况及分布特点，为制订防制对策提供依据。方法：用ＰＨＡ法检测Ｍｈ、Ｕｕ、Ｃｔ抗体。结果：Ｍｈ、Ｕｕ、Ｃｔ抗体阳性率，性病患者分别为２７．４０％、１９．９４％、９．５８％；性乱者分别为２４．５４％、１６．９７％、７．２３％；健康人分别为８．１９％、５．０３％、４．３８％。结论：我国广大地区有生殖道支原体和衣原体感染症的存在，性病患者和性乱者是高危人群。     

青岛地区人疱疹病毒6型毒株的分离与初步鉴定

①目的分离培养人疱疹病毒6型(HHV-6)青岛地方株并进行初步鉴定。②方法取20例青岛地区健康献血员唾液标本，接种至预激活的脐带血单个核细胞(CBMC)中进行病毒分离培养。出现典型细胞病变(CPE)的标本采用电镜观察，并提取病毒DNA，应用聚合酶链反应(PCR)扩增HHV-6基因组保守区特异性片段，然后应用限制性核酸内切酶技术进一步鉴定。③结果唾液分离培养得到1例具有典型CPE的标本，电镜观察显示细胞内存在具有疱疹病毒特征的病毒颗粒，酶切产物电泳结果显示66bp和97bp两条带，初步鉴定为HHV-6B毒株。④结论成功分离培养得到1例HHV-6青岛地方株，为进一步研究青岛地区HHV-6的流行及致病性奠定了实验基础。     

雷公藤内酯醇对成纤维细胞的影响

目的：研究雷公藤内酯醇(Tri)对成纤维细胞的细胞动力学及形态学影响，以探讨其抑制增生性瘢痕的机制。方法：用光镜、电镜观察用药前后成纤维细胞的形态学变化，用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。结果：用药组在光镜下细胞密度较低，细胞体细长，部分失去正常的细胞形态、细胞质红染，并可见典型的凋亡小体；电镜下粗面内质网疏松，内容物减少，并可见各期凋亡细胞。细胞动力学检测(FCM)示用药组凋亡比例(AI)明显增加，并呈一定的量效关系，对细胞周期则无影响。结论：Tri促进成纤维细胞的凋亡，可能对胶原的分泌也有一定的影响。     

动态成像模式下蛋白A胶体金单分子三维构象原子力显微镜研究

目的 确定葡萄球菌蛋白A胶体金分子特征性构象。方法 应用原子力显微镜扫描生理状态下分布在云母表面的葡萄球菌蛋白A胶体金分子,并进行数据测定建模。结果 葡萄球菌蛋白A胶体金分子为48.80nm×42.13nm×20.53nm“反C”形链状分子三维结构。结论 原子力显微镜可以在生理状态下直观测定生物大分子纳米尺度直观结构;葡萄球菌蛋白A胶体金分子的特征性结构可以作为神经细胞膜表面N-甲基-D-天冬氨酸受体原子力显微镜观测的原位标记物。     

云南省不同地理株恶性疟原虫的MSP-2基因多态性研究

目的研究云南省不同地理株恶性疟原虫的裂殖子表面抗原蛋白基因2(MSP-2)的多态性，探索其多态性的地域特征，为鉴定不同地理株恶性疟原虫提供重要的科学依据。方法使用随机扩增多态DNA-多聚酶链反应(RAPD-PCR)为主的分子生物学方法。结果分析云南不同疟疾流行区的169份样本，PCR扩增获得6个不同大小的MSP-2基因片段，600bp片段占多，其频度为34．8％，540bp片段其次，占28．3％；同时显示具有一定的地理分布差异。结论研究证实云南不同地区恶性疟原虫的MSP-2具有较为明显的地理多态性特征。     

利用反向遗传学原理构建B、E型肉毒神经毒素基因型特异性靶片段

目的 利用反向遗传学原理构建B、E型肉毒神经毒素(BoNT)基因型特异性靶片段质粒、菌株.方法 自GenBank获取BoNT基因序列,利用DNAMAN、Lasergene、VectorNTI等多种生物信息学分析软件和BLAST等网上数据分析平台进行综合分析,以锚定BoNT/B与BoNT/E基因中的型特异性靶片段,分别设计合成5条和10条DNA短链,经重叠PCR扩增获得完整的靶片段,纯化后连接到pMD 18-T载体上,转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中,质粒提取后进行酶切和测序鉴定.结果 分析了全球已报道的60条BoNT基因序列(A、B、E、F型),于BoNT/B与BoNT/E基因中,分别锚定了215 bp和360bp的靶片段,并设计合成其特异的检测引物对,经酶切、测序确证,成功合成具有型特异性的BoNT/B与BoNT/E靶片段.结论 获得含有型特异性BoNT/B与BoNT/E靶片段的重组质粒pMD18-T-BoNT/B,pMD18-T-BoNT/E及其菌株.     

In vitro Recombination and Identification of Mutated Fragment Corresponding to Regulation Region of mtrR Gene of Neisseria Gonorrhoeae

A site-directed mutant DNA fragment was synthesized and transfected into clinical Neisseria Gonorrhoeae(NG) stains to construct the transformants that contained the corresponding mutagenesis of regulation region of mtrR gene.According to the technique of gene splicing by overlap extension(SOEing),a DNA segment with specific mutagenesis was constructed by two-step polymerase chain reaction(PCR).The mutation fragments EF could be used for the next experiment in which the mutation NG strains were induced.By comparing the recombinant EF fragments to the corresponding DNA fragments of clinical NG strains,2 of these were not compatible completely.The results of sequencing revealed that there was a 9 bp deletion between the 45 to 54 inverted repeat sequence localized within the mtrR promoter.It can be confirmed that the fragments EF are the specifically designed mutant fragments.     

虎眼万年青多糖的原子力显微镜观察

目的 :研究虎眼万年青多糖的微观形貌。方法 :采用原子力显微镜 ( AFM)观察虎眼万年青多糖的微观形貌。结果 :虎眼万年青多糖的单一多糖 OCA- ba呈多股紧密并行螺旋形排列。结论 :利用 AFM可以快速、直观地观察虎眼万年青多糖的微观形貌 ,推断这种现象是由于该多糖中所含糖醛酸发生糖链间氢键缔合所致     

静脉血栓患者和正常人凝血因子V Leiden和凝血酶原基因G2021 …

目的 了解静脉血栓虱和正常人中凝血因子Ｖ Ｌｅｉｄｅｎ和凝血酶原基因Ｇ２０２１０Ａ变异的发生率。方法 用多聚酶链反应（ＰＣＲ）及限制性内切酶分析一步法,对９７例静脉血栓患者和１００名正常人的凝血因子Ｖ Ｌｅｉｄｅｎ９ＦＶ Ａｒｇ５０６Ｇｌｎ）和凝血酶原基因Ｇ２０２１０Ａ变异进行分析。结果 凝血因子Ｖ Ｌｅｉｄｅｎ基因和凝血酶原基因ＰＣＲ产物经ＴａｑⅠ酶切消化后电泳显示为１５７ｂｐ和９８ｂｐ片段,静     

动态成像模式下蛋白A胶体金单分子三维构象原子力显微镜研究

OBJECTIVE: To determine the three-dimensional (3D) conformation of staphylococcal protein A-gold (SPA-G) single molecule using atomic force microscope (AFM) so as to evaluate the feasibility of using this molecule for in situ labeling of the neuronal membrane protein. METHODS: AFM was used to acquire the images of SPA-G binding to the surface of mica under physiological condition for determining the 3D conformation of the molecule. RESULTS: SPA-G single molecule was shown to contain a characteristic structure with a chain in the shape of mirror image of the letter C, which had the dimension of 48.80 nm x 42.13 nm x 20.53 nm. CONCLUSION: AFM provide a new means for morphological investigation of the biomacromolecule at the nanometer scale in physiological conditions, and SPA-G can be utilized for in situ labeling of the neuronal membrane receptors.     

大肠癌相关基因ST13转录启动区的增强子研究

目的:探讨大肠癌相关基因ST13上游5'近端调控区(-595～ 74)中增强子碱基序列.方法:设计系列缺失PCR引物,扩增ST13基因5'近端碱基序列片段,pGEMT-EASY克隆、测序,再亚克隆到pGL2系列瞬间报告载体上,等量转染SW620细胞,检测荧光酶活性.结果:系列扩增碱基序列片段669 bp、263 bp、163 bp对pGL2-Basic中的荧光素酶基因均具有较强的启动表达作用,片段101 bp、47 bp则几乎没有启动下游基因表达的作用.而101 bp片段与系列报告载体pGL2重组的分子,在其中含有启动子的报告基因表达载体中具有明显的增强作用(P＜0.01),但作用强度小于阳性对照pGL2-Control(P＜0.05).结论:位于ST13基因上游5'近端调控区的碱基序列101 bp片段(-595～-494),是一个基因转录调控增强子.     

脐血贴壁细胞体外培养与生长特性观察

目的 观察脐血贴壁细胞生长特性及提高体外培养脐血贴壁细胞成功率,为造血干细胞培养提供基质环境。方法 采用密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,在含20ng／ml bFGF,10％胎牛血清的低糖DMEM培养基中培养,于倒置显微镜下观察细胞生长情况、并描绘其生长曲线、流式细胞仪检测细胞周期。结果 脐血贴壁细胞呈长梭形、针形或三角形,增殖周期G0／G1为85．12％,倍增时间为48h。结论 体外培养的脐血细胞能够贴壁生长并形成单层细胞层。     

Structure and function of alleles in the 3' end region of human apoB gene

ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆａｌｅｌｅｓｉｎｔｈｅ３’ｅｎｄｏｆｔｈｅａｐｏＢｇｅｎｅｉｎＨａｎ,ＭｏｎｇｏｌｉａｎａｎｄＴｉｂｅｔａｎｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓｉｎＣｈｉｎａａｓｗｅｌａｓｔｈｅｒｏｌｅｓｉｎｔｈｅｒｅｇ...     

广东省鼠疫疫源地性质的研究

目的了解疫源地的现状、空间结构、性质、主要宿主和媒介与病原体的关系,确正IHA检出阳性血清的特异性和鼠疫菌突变的生物学特性。方法流行病学抽样调查和监测,宿主对鼠疫菌的敏感性和感受性试验,鼠疫菌突变试验,血清学IHA、RIP的特异性试验,蚤传播能力试验。结果雷州半岛1950～1951年检鼠疫患者314份,分离到鼠疫菌91株,检蚤118只分离至4株,检鼠和臭鼩鼱1830份分离108株、镜检鼠和臭鼩鼱3668份,阳性53份;1952年镜检鼠和臭鼩鼱12063份,阳性58份;1953～2005年镜检和培养鼠和臭鼩鼱575768份,蚤5300只,均未检到菌;1973～1988年用IHA检鼠和臭鼩鼱血清89092份,阳性40份,RIP检5247份,阳性2份,RIHA检鼠脏器2050份阳性3份;1989～2005年IHA检98906份,RIP检5686份均为阴性。非疫区1957～2005年检鼠和臭鼩鼱27227份和蚤3809只均未检到菌,IHA检鼠类血清9241份和RIP检6727份全为阴性。结论雷州半岛是黄胸鼠鼠疫疫源地,黄胸鼠是主要宿主,褐家鼠和臭鼩鼱、小家鼠是间接宿主,黄毛鼠对鼠疫菌极敏感,印鼠客蚤是主要媒介,伍氏病蚤传播能力与印鼠客蚤相当、穗缘端蚤较弱,50年代初是流行末期、70年代至80年代是迁延期、90年代至2005年是静息期。用四个实验结果证实血清学检出的F1抗体和F1抗原,皆有很好特异性。     

国人颅骨卵圆孔的形态观察及测量

目的:为探究国人卵圆孔的准确径值提供依据。方法:观测78例颅骨,156侧(男104侧,女52侧)卵圆孔的形态和径值。结果:国人的卵圆孔可分为5种类型:卵圆形、圆形、梨形、长条形、肾形;长径均值为7.54mm,宽径均值为3.66mm。结论:卵圆孔在性别、侧别上存在差异,有显著性意义(P<0.05)。     

人血小板反应素-1活性片段的克隆与序列分析

目的　为研究抗肿瘤基因工程药物的表达奠定基础。方法　根据 Genbank中人血小板反应素 - 1(TSP- 1) m RNA序列 ,设计和合成了两对特异引物 ,利用逆转录聚合酶反应扩增出人 TSP- 1中的两个活性片段 ,大小分别为 72 8bp和 2 5 7bp,分别命名为 TSP- 1- 和 TSP- 1- 。将此片段纯化后插入 PMDT载体。结果　限制酶切分析表明 :这两个片段已插入载体中 ,其大小与预期值相符。序列分析显示 :TSP- 1- 长 72 8bp,编码的多肽长2 12个氨基酸残基 ,推测其相对分子质量为 2 3.6× 10 3;TSP- 1- 长 2 5 7bp,编码的多肽长 86个氨基酸残基 ,推测其相对分子质量为 9.5× 10 3。结论　同源性分析表明 :TSP- 1- 和 TSP- 1- 与 Genbank中的 TSP- 1序列完全相同     

显微切割技术鉴定病毒核内包涵体

建立应用显微切割技术鉴定病毒核内包涵体的新方法。方法通过光学显微镜直视下用显微操纵系统进行显微切割结合ＤＮＡ提取和ＰＣＲ方法,对在组织切片上获得病毒核内包涵体的来源进行分子生物学鉴定。结论显微切割技术可用于病毒核内包涵体的鉴定,为病毒包涵体病变的分子病理学研究建立了一种新的方法。     

人鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒载体的构建

目的：构建人鸟氨酸脱羧酶(ODC)第三外显子和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC)翻译起始位点双反义RNA腺病毒载体。方法：应用RT-PCR方法扩增出SAMDC mRNA翻译起始位点区205 bp的基因片断。插入PMD-18T载体中．经XbaI、XhoI酶切回收,反向插入穿梭质粒pAdTrack-CMV-ODCr,形成重组质粒pAdTrack-ODC-SAMDCr。经PmeI酶切线性化后,转入Adeasy-1细菌与pAdeasy-1质粒发生同源重组。挑选阳性重组质粒pAdeasy-ODC-SAMDCr,经PacI酶切后,转染293细胞,包装出腺病毒颗粒．经荧光显微镜和PCR方法对重组腺病毒进行鉴定。结果：利用RT-PCR方法成功地从大肠癌细胞扩增出205bp的cDNA片断,经测序证实为SAMDC翻译起始位点序列。测序证实,重组质粒pAdTrack-ODC-SAMDCr两个基因插入方向和序列均正确．转入Adeasy-1细菌获得多个阳性重组克隆。pAdeasy-ODC-SAMDCr转染293细胞进行包装扩增．可见明显病毒空斑形成,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白在293细胞中表达．PCR法证实含有目的基因。结论：成功构建并扩增出ODC和SAMDC双反义RNA腺病毒载体．为以后肿瘤的基因治疗和预防研究提供了必要工具。