染料木黄酮对人结肠癌细胞系HT-29细胞增殖的影响

目的:研究染料木黄酮对人结肠癌细胞系HT-29细胞增殖的影响.方法:采用MTT比色法测定染料木黄酮对人结肠癌细胞系HT-29细胞增殖的影响,应用流式细胞术检测染料木黄酮对HT-29细胞周期及凋亡的影响.结果:染料木黄酮能够显著抑制HT-29细胞的增殖,且具有浓度依赖性,其半数抑制浓度(IC50)为23μmol/L;染料木黄酮能够引起HT-29细胞发生G0/G1期阻滞,并能够诱导HT-29细胞发生凋亡;western结果显示染料木黄酮作用后Bax表达增强,而Bcl-2表达减弱.结论:染料木黄酮能够诱导人结肠癌HT-29细胞发生周期阻滞和凋亡,从而导致HT-29细胞增殖能力下降.     

靛玉红甲肟对HT-29细胞STAT3和Bcl-2/Bax表达的影响

目的检测靛玉红甲肟（Indirubin-3’-monoxime,IRO）作用前后人结肠癌HT-29细胞转录活化因子3（STAT3）和凋亡调节基因Bcl-2/Bax表达变化,探讨IRO抑制HT-29细胞增殖的机制。方法MTT法检测不同浓度、不同作用时间IRO对HT-29细胞增殖活性的影响。RT-PCR法检测10μmol/L的IRO作用不同时间对HT-29细胞STAT3、Bcl-2和BaxmRNA表达的影响。结果IRO对HT-29细胞生长具有明显的增殖抑制作用,且表现为剂量依赖性和时间依赖性（P〈0.01）。RT-PCR检测发现,以10μmol/L的IRO处理HT-29细胞后,STAT3和Bcl-2表达显著下降,而Bax表达上升,不同时间组间差异有统计学意义（P〈0.01）。结论IRO具有抑制人结肠癌HT-29细胞增殖的作用,其机制与下调STAT3、Bcl-2表达和升高Bax表达有关。     

NS-398对结直肠癌细胞HT-29放射增敏机制的初探

目的:探讨COX-2抑制剂NS-398对结直肠癌细胞系HT-29的放射增敏作用及其相关机制。方法:COX-2高表达细胞系HT-29经25μmol/LNS-398处理24h后,给以不同剂量(0、2、4、6、8Gy)X-ray照射,应用克隆形成实验测NS-398对HT-29细胞的放射增敏作用,流式细胞仪(FCM)分析NS-398对HT-29细胞凋亡及细胞周期的影响,RT-PCR和FCM观察NS-398处理后Bax、Bcl-2在mRNA及蛋白水平的表达变化。结果:25μmol/LNS-398对HT-29有明显增敏作用,细胞存活分数(SF)为0.1时,放射增敏比SER为1.76;NS-398诱导HT-29凋亡、增强HT-29对放射诱导凋亡的敏感性,同时抑制细胞增殖;BaxmRNA及蛋白表达呈NS-398剂量依赖性增高,而Bcl-2的表达无明显变化。结论:NS-398对HT-29有放射增敏作用,其机制与诱导凋亡、直接抑制细胞增殖有关。     

选择性环氧合酶2抑制剂对人膀胱癌细胞T24增殖和凋亡的作用

背景与目的:环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)与膀胱癌的发生发展密切相关,因此COX-2抑制剂对于膀胱癌可能具有潜在的抗肿瘤效应.本实验旨在探讨选择性COX-2抑制剂对人膀胱癌细胞T24增殖和凋亡的抑制作用.方法:用四甲基偶氮唑蓝还原法(MTT)研究选择性COX-2抑制剂SC-58125、塞来昔布(celecoxib)和非选择性COX抑制剂吲哚美辛(indomethacin)对T24细胞增殖的影响;用流式细胞术、DNA电泳和Hoechst33258荧光染色3种方法检测SC-58125作用下T24细胞的凋亡,同时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax基因的变化.结果:在12.5 μmol/L至200 μmol/L的剂量范围内,SC-58125、塞来昔布及吲哚美辛均能不同程度地抑制T24细胞的增殖,以SC-58125的抑制作用最强,IC50在25 μmol/L～50 μmol/L之间;3种凋亡检测方法均观察到SC-58125作用后凋亡细胞的比例增加,其中100 μmol/L的SC-58125作用于T24细胞6 h和12 h后,流式细胞仪测得凋亡细胞的比例分别为(7.95±1.88)%和(12.5±2.42)%,较对照组增加(P＜0.05),但细胞内与凋亡相关的Bcl-2和Bax基因表达没有变化.结论:选择性COX-2抑制剂体外可抑制T24细胞的增殖,并诱导细胞凋亡.     

靛玉红甲肟对HT-29细胞增殖和凋亡的影响及机制

背景与目的:近年来有报道称靛玉红甲肟(indirubin-3'-monoxime)在体内外实验中对部分实体肿瘤细胞具有明显的抑制作用,但尚未见其对人结肠癌HT-29细胞影响的研究报道,因而本文旨在研究其对HT-29细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法:MTT法检测不同浓度靛玉红甲肟处理HT-29细胞后细胞的增殖活性,制作生长抑制曲线.流式细胞仪检测凋亡率,RT-PCR检测细胞凋亡抑制基因survivin和bcl-2及凋亡促进基因Bax mRNA的变化.结果:靛玉红甲肟明显的抑制HT-29的增殖,其作用表现为剂量依赖性和时间依赖性(F=11.25,P<0.01).流式细胞仪检测发现:以10 μ mol/L的靛玉红甲肟处理HT-29细胞后,其凋亡率呈时间依赖性上升(F=195.25,P<0.01).RT-PCR检测发现HT-29细胞survivin(F=78.75,P<0.01)和Box(F=87.61,P<0.01)转录上升,而bcl-2转录显著下降(F=95.82,P<0.01).结论:靛玉红甲肟对人结肠癌HT-29细胞具有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用,其作用机制与下调bcl-2/Bax比例有关.     

人参皂甙-Rh2对人肝癌Bel-7404细胞增殖和凋亡的影响

目的研究人参皂甙-Rh2(GS-Rh2)对肝癌Bel-7404细胞增殖和凋亡的影响及其可能的机制.方法采用MTT比色法观察GS-Rh2对体外培养的Bel-7404细胞生长的抑制作用;应用流式细胞仪检测凋亡细胞和细胞周期变化;采用免疫组化S-P法检测药物处理前后凋亡相关基因产物p53、Bax和Bcl-2蛋白表达.结果①MTT比色法测定显示,Bel-7404细胞经GS-Rh2作用后生长受抑制,呈剂量依赖性和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)为27.6 μg/ml.②流式细胞仪检测证实,GS-Rh2能诱导Bel-7404细胞凋亡.③当GS-Rh2浓度由12.5 μg/ml增加至50.0 μg/ml时,细胞凋亡率(AR)依次升高;但GS-Rh2浓度进一步增加时,AR未见相应升高.④GS-Rh2可将细胞周期阻滞于G1期.⑤GS-Rh2处理细胞后,突变型p53表达下调而Bax表达上调,Bcl-2在GS-Rh2处理前后无明显变化.结论①GS-Rh2能抑制体外培养的Bel-7404细胞增殖并诱导其凋亡;②GS-Rh2诱导Bel-7404细胞凋亡可能是通过上调Bax表达、下调突变型p53表达以及阻滞细胞周期而实现.     

双糖链蛋白聚糖对大肠癌细胞增殖抑制作用及其机制研究

[目的]探讨双糖链蛋白聚糖Biglycan对大肠癌细胞HT-29和SW480增殖抑制作用及其机制[方法]采用Brd U法和细胞克隆形成实验检测Biglycan对大肠癌细胞HT-29和SW480的增殖能力影响;Hoechst染色检测细胞凋亡情况;Western Blot法检测加药处理前后细胞内细胞周期相关蛋白Cyclin D1、CyclinA、p21和p27表达变化.[结果]Biglycan呈剂量依赖性的抑制大肠癌细胞HT-29和SW480生长,100nmol/L Biglycan和50 nmol/L Biglycan浓度作用即可诱导HT-29 、SW480细胞凋亡. 经Biglycan处理后,细胞内CyclinD1和CyclinA表达出现下调趋势,p21和p27表达有所增加.[结论]Biglycan 可能抑制大肠癌细胞HT-29和SW480增殖,诱导细胞凋亡、下调CyclinDl和CyclinA表达和上调p21和p27表达.     

戊地昔布对人结肠癌HT-29细胞凋亡的影响

目的 观察戊地昔布（Valdecoxib）对COX-2高表达的人结肠癌HT-29细胞凋亡的影响。方法 将体外培养HT-29细胞分为正常组（C）、药物处理组（V）及溶剂对照组（S）。采用流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测COX-2、caspase-3、cleaved caspase-3、Bcl-2、p38 MAPK、p-p38MAPK。结果 与正常组相比,药物处理组细胞凋亡明显增加(P<0.05),cleaved caspase-3和p-p38MAPK表达增高,Bax/Bcl-2比率明显升高(P<0.05)。Valdecoxib干预能够显著促进HT-29细胞凋亡,上调cleaved caspase-3和p-p38 MAPK的表达,增加Bax/Bcl-2比率。 结论 COX-2选择性抑制剂Valdecoxib能够促进HT-29细胞凋亡部分可能是通过激活p38MAPK信号通路而实现的。     

白藜芦醇诱导HL-60细胞凋亡机制的实验研究

背景与目的:探讨白藜芦醇(resveratml,Res)诱导人早幼粒白血病HL60细胞凋亡的机制.材料与方法:用不同浓度Res作用HL-60细胞,倒置显微镜观察细胞的形态学变化,MTY法检测Res对HL-60细胞增殖的抑制作用,确定Res作用于HL-60细胞的半数抑制浓度(IC50).Western blot法检测Res作用HL-60后Caspase-3活性的变化及GADD45a、Annexin A1、Bcl-2/Bax、Cleaved-Caspase 3表达的变化.结果:Res处理后,HL-60细胞体积变小,细胞的折光性减弱,细胞内出现颗粒样物质,且随着Res浓度的增加上述形态变化增强.12.5～200 μmol/L浓度的Res可明显抑制HL-60细胞的增殖,具有时间和剂量依赖性(P<0.05),24 h的IC50为75.64 μmol/L.Res处理后,HL-60细胞Caspase-3活性增强,12 h达高峰,24 h开始下降;细胞的Annexin A1、GADD45α、Bax、Cleaved-Caspase 3蛋白表达量升高,Bcl-2蛋白表达量下降,Bcl-2/Bax比值下降.结论:Res抑制HL-60细胞增殖,并通过依赖Caspase-3途径诱导HL-60细胞凋亡,GADD45α、Annexin A1参与了凋亡过程.     

环氧合酶-2特异性siRNA真核表达质粒对HT-29细胞生长的影响

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)特异性小干扰RNA(siRNA)真核表达质粒对人结肠癌HT-29细胞COX-2表达和生长的影响。方法设计短发夹结构的COX-2 siRNA对应模版DNA序列,构建重组质粒pshCOX-2。将重组质粒转染人结肠癌HT-29细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹分别从mRNA和蛋白水平检测COX-2表达。用四氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪观察COX-2表达被抑制后细胞的生长情况,放射免疫法(RIA)和ELISA法分别检测培养上清中PGE2和VEGF的含量变化。结果酶切及测序证实质粒pshCOX-2构建成功。转染重组质粒72h后可以显著抑制HT-29细胞COX-2 mRNA和蛋白表达(P<0.05),细胞生长受抑,凋亡细胞数显著增加(P<0.05),细胞PGE2和VEGF的产生受抑制(P<0.05)。结论成功构建的COX-2 siRNA真核表达质粒pshCOX-2通过抑制人结肠癌HT-29细胞COX-2基因表达,从而抑制细胞生长、PGE2合成和VEGF的产生。