献血员中TT病毒DNA检测及部分基因序列分析

目的探讨献血员中一种与输血后肝炎有关的病毒—ＴＴＶ的感染情况。方法采用ＴＴＶ基因组ＯＲＦ１区的套式聚合酶链反应（ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）方法检测２６２份献血员血清标本。结果在血清丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）异常、ＨＢｓＡｇ及抗－ＨＣＶ阴性的５８份献血员血清标本中，１８份ＴＴＶＤＮＡ阳性，ＴＴＶＤＮＡ的阳性检出率为３１０％；在２０４份正常献血员血清标本中检出３０份（１４７％）ＴＴＶＤＮＡ阳性，ＴＴＶＤＮＡ的阳性检出率明显低于ＡＬＴ异常献血员人群（χ２＝３８１，Ｐ＜００５）。序列分析结果显示，其序列与日本株和中国株相应位置核苷酸序列的同源性大于９７％，可能属同一基因型。结论提示我国献血员中存在ＴＴＶ感染，ＴＴＶ存在“健康携带状态”，输血可能成为传播ＴＴＶ感染的途径之一     

深圳地区不同人群TTV感染情况的调查

目的了解深圳地区不同人群ＴＴＶ的感染情况。方法在ＴＴＶＯＲＦ１保守区设计两对套式引物，建立了检测ＴＴＶＤＮＡ的巢式聚合酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ），用该法对深圳地区９０例一般人群、８８例职业献血员、７９例静脉毒瘾者及２９例非甲庚型肝炎病人进行ＴＴＶＤＮＡ的检测。结果ＴＴＶＤＮＡ在以上４种人群中的阳性率分别为７８％，９０％，４１７％与４４８％，前者与后两者比较差异均有显著性（Ｐ＜００５）。９０例一般人群与８８例职业献血员中，１４例ＴＴＶＤＮＡ阳性者丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）均正常。结论深圳地区一般人群与职业献血员中ＴＴＶ携带者较常见；静脉毒瘾者是ＴＴＶ感染的高危人群；部分非甲～庚型肝炎可能与ＴＴＶ相关     

TTV部分基因的克隆及序列测定

为了弄清萍乡地区ＴＴ病毒 (ＴＴＶ)感染情况 ,分析本地区ＴＴＶ株基因结构特点 ,我们对江西省萍乡地区 8例ＴＴ病毒株进行了部分基因的克隆及序列测定。1　材料和方法1 1　材料　血清标本采用本地区流行病学调查和本院的临床阳性标本。Ｔ载体、ＸＬ1 Ｂｌｕｅ菌为美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司产品。Ｔａｑ酶、ｄＮＴＰｓ及Ｔ4ＤＮＡ连接酶购自华美公司。ＰＣＲ试剂由中国军事医学科学院提供。1 2　引物合成　根据Ｏｋａｍｏｔｏ等报道的ＴＴＶ基因序列 ,采用Ｇｏｌｄｋｅｙ软件在ＴＴＶＯＲＦ保守区设计两对套式引物 ,引物序列如下 :外…     

TTV相关病毒的发现

近年来发现一些ＴＴＶ相关病毒 ,如ＴＴＶ样微小病毒 (ＴＬＭＶ)、ＰＭ病毒 (ＰＭＶ)、ＳＡＮＢＡＮ病毒 (ＳＡＮ ＢＡＮ)、ＹＯＮＢＡＮ病毒 (ＹＯＮＢＡＮ)和ＳＥＮ病毒 (ＳＥＮＶ)等 ,并对其致病性进行了一些研究。一、ＳＡＮＢＡＮ病毒ＳＡＮＢＡＮ(日文意“第三”)病毒是从日本一名健康供血员血清中分离的 ,该供血员用原型ＴＴＶＰＣＲ检测为ＴＴＶＤＮＡ阴性 ,但用测定ＴＴＶＤＮＡ覆盖面更广的ＰＣＲ检测为阳性。Ｈｉｊｉｋａｔａ等〔1〕 对该株病毒的全序列分析表明 ,其基因组全长为 380 8个核苷酸 ,较ＴＴＶ原型株ＴＡ2 78(385 2ｂ…     

TTV感染与肝组织学改变的关系

ＴＴＶ是一种新型的肝炎相关病毒。流行病学研究表明ＴＴＶ存在于各类人群之中 ,但ＴＴＶ的致病性目前尚未定论 ,对肝组织的原位研究尚少见。为了解ＴＴＶ在肝组织中的感染情况及肝组织学改变 ,我们观察血清ＴＴＶＤＮＡ阳性患者肝组织的炎症活动度、纤维化程度及ＴＴＶＤＮＡ的分布情况 ,现报告如下。从 1998年 6月～ 2 0 0 0年 12月深圳市东湖医院肝穿标本中 ,收集到血清中 15例ＴＴＶ巢式聚合酶链反应检测阳性及 6例ＴＴＶＤＮＡ阴性患者 ,其中男性 14例 ,女性 7例 ,年龄 2 1～5 5岁。全部病例血清甲、乙、丙、丁及庚型肝炎标志物与抗 Ｅ…     

TT病毒的检测及部分核苷酸序列比较

目的 为阐明ＴＴ病毒（ＴＴＶ）流行病学特征和基因级异质性以及血清学诊断试剂的研制提供资料。方法 从健康查体者的血清中提取ＤＮＡ，设计一套引物，采用套式聚合酶链反应（ｎｅｓｔｅｌ－ＰＣＲ）检测ＴＴＶ，对其中７例阳性标本进行了克隆测序，并与２株ＴＴＶ的核苷酸序列作了比较。结果 １１１例正常人中ＴＴＶ的感染率为１２．６％。７株中国株ＴＴＶ间的核苷酸同源性为９０．６％～９５．４％，与日本株ＴＸ０１１（Ｏ）     

部分人群TT病毒的分子流行病学研究

继甲、乙、丙、丁、戊、庚型肝炎的相继发现后 ,仍有部分肝炎病人未能进行病原学的分型。日本学者Ｎｉｓｈｉｚａｗａ等〔1〕 报道了一种可能与输血后肝炎相关的病毒 ,暂称为输血传播病毒 (ＴＴｖｉｒｕｓ) ,它可能是原因不明的非甲～庚型肝炎的病原。目前对ＴＴＶ的研究尚处在起步阶段 ,其病毒特性、临床情况和流行病学状况均有待研究。我们对部分人群血清进行了ＴＴＶＤＮＡ的检测 ,并分析了部分片段的ＤＮＡ序列。1　材料和方法1.1　化学试剂及工具酶　ＴａｑＤＮＡ聚合酶、ＰＣＲ仪来自ＰＥＲＫＩＮＥＬＭＥＲ公司 (美国 ) ,限制性内切…     

山西地区TT病毒感染的分子流行病学研究

目的 了解山西地区不同人群中ＴＴ病毒（ＴＴＶ）感染状况及ＴＴＶ山西分离株基因型分布情况。方法 用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对山西地区不同人群血清标本进行检测,分析其基因型。结果 ２４例慢性乙型肝炎患者、３１例非甲￣庚型肝炎患者、５３例职业献血员、１１２例健康产妇中,ＴＴＶ ＤＮＡ阳性率分别为４１．６６％、２９．０３％、５８．４９％、８．９３％;１８例２￣３岁健康儿童血清,１０例ＴＴＶ ＤＮＡ阳性产     

聚合酶链反应-微孔板杂交法检测输血传播病毒DNA

目的 建立聚合酶链反应（ＰＣＲ）－微孔板杂交检测ＴＴ病毒（ＴＴＶ）ＤＮＡ的方法,探讨不国因素对方法敏感度和特异性的影响。方法 硫氰酸胍裂介异丙醇沉淀提取ＴＴＶ ＤＮＡ,以ＰＣＲ扩增,扩增产物上标记的生物素与包被在微孔板上的链亲和素结合标记有荧光素的探针与产物杂交,再与酶标抗荧光素抗体结合,经底物显果在各种影响因素中,当ＮａＯＨ浓度为０．３ｍｏｌ／Ｌ,杂交时间６０ｍｉｎ,酶反应时间为４５ｍｉｎ时,结     

TLMV5‘非编码区基因的克隆与序列分析

目的 调查ＴＴＶ阴性的非甲￣庚型肝炎患者中ＴＴＶ－ｌｉｋｅ ｍｉｎｉ ｖｉｒｕｓ（ＴＬＭＶ）感染情况,对ＴＬＭＶ５’非编码区（５’ＮＣＲ）部分基因进行分子克隆与序列分析。方法 采用巢式ＰＣＲ技术检测５３例ＴＴＶ阴性的非甲－庚肝炎患者血清ＴＬＭＶ ＤＮＡ,对ＰＣＲ产物进行克隆、测序和分析。结果 ５３例病例中ＴＬＭＶ ＤＮＡ阳性３７例（６９．８％）,对其中８株ＴＬＭＶ基因克隆测序,并与Ｔａｋａｈａｓｈ     

泉州地区肝炎患者TT病毒感染状况调查

ＴＴ病毒(ＴＴＶ)是新近发现的一种被认为可能与肝炎有关的新型病毒。为了解闽南地区ＴＴＶ感染情况,我们采用ＰＣＲ技术对泉州地区43例肝炎患者血清ＴＴＶＤＮＡ进行检测。43例为1998年1～4月住院的肝炎患者,男34例,女9例,年龄22～70岁。临床类型:急性肝炎11例,慢性肝炎21例,重型肝炎4例;肝炎肝硬化5例,洒精性肝炎2例。收集血清标本47份,采用ＥＬＩＳＡ法检测抗ＨＡＶＩｇＭ、ＨＢｓＡｇ、抗ＨＢｓ、ＨＢｅＡｇ、抗ＨＢｅ、抗ＨＢｃＨＢｃＩｇＭ(以上为上海荣盛公司试剂)、抗ＨＣＶ(华美公司)、ＨＤＡｇ、抗ＨＤＶＩｇＭ(河南瑞安公司)、抗…     

将抗体库所获抗-HBs Fab转换为全长人IgG

目的 将大肠杆菌表达的抗－乙肝表面抗原（ＨＢｓ）人Ｆａｂ转换为真核表达的全长人ＩｇＧ１。方法 用重叠ＰＣＲ法将人工合成的人Ｖｋ前导序列拼到抗－ＨＢｓ的ＶＨ和ＶＫ上,构建人ＩｇＧ１真核表达载体。转染真核细胞,通过ＥＬＩＳＡ、ＲＴ－ＰＣＲ、免疫印迹检测抗－ＨＢｓ人ＩｇＧ的表达。结果 用轻链和重链同时表达的单一载体在ＣＨＯ细胞中获得了抗－ＨＢｓ人ＩｇＧ的表达。结论 通过噬菌体抗体库所获Ｆａｂ段可经拼接人     

检测HBVDNA/Ig-双特异性循环免疫复合物的免疫捕捉法PCR

目的;建立一种免疫捕捉法ＰＣＲ技术,研究血清免疫复合物中不同Ｉｇ类型抗体结合ＨＢＶ的情况,并初步探讨其意义。方法：以羊抗人μ,γ,α链的ＩｇＧ为捕捉抗体,再利用ＰＣＲ扩增捕捉物中的ＨＢＶＤＮＡ。结果;成功地建立了检测ＨＢＶＤＮＡ／ＩｇＭ,ＩｇＧ和ＩｇＡ－ＴＣＩＣ的免疫捕捉法ＰＣＲ技术。     

抗HBsAg人IgG表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达

目的 尝试将１株来源于人源性噬菌体抗体库的抗ＨＢｓＡｇ人Ｆａｂ,转换成完整的抗ＨＢｓＡｇ人ＩｇＧ。方法 采用重叠ＰＣＲ方法,在抗ＨＢｓＡｇ人Ｆａｂ和Ｖκ的ＶＨ基因的５’端接上人工合成的人κ链的前导序列,构建表达完整ＩｇＧ１的真核表达载体,转染ＧＨＯ（ＤＨＦＲ＾－）细胞,用ＥＬＩＳＡ、ＲＴ－ＰＣＲ和免疫印迹检测抗ＨＢｓＡｇ人ＩｇＧ的表达。通过ＤＨＦＲ／ＭＴＸ体系及金属离子诱导提高Ｉｇ表达。结果：获得     

PCR技术和血清抗体检测妊娠期巨细胞病毒感染价值的比较

将ＰＣＲ技术检测孕妇血白细胞中ＨＣＭＶ－ＤＮＡ和ＥＬＩＳＡ检测孕妇血清中ＨＣＭＶ特生ＩｇＭ和ＩｇＧ进行对比研究。结果：ＤＮＡＰＣＲ阳性率为４２．００％，与ＩｇＭ阳性率２５．５８％比较，Ｐ〈０．０５，与ＩｇＧ阳性率６２．７９％比较，Ｐ〈０．０１，说明ＤＮＡＰＣＲ较ＩｇＭ检测敏感，但不如ＩｇＧ。结论：ＤＮＡＰＣＲ更适用于论断先天性ＨＣＭＶ感染和一部分检测不出ＩｇＭ的ＣＭＶ复发感染者，对妊娠期ＣＭＶ感染     

成都地区孕妇和新生TORCH感染的检测与分析

采用ＥＬＩＳＡ检测孕妇血清及新生儿脐血ＴＯＲＣＨ特异性ＩｇＧ，ＩｇＭ抗体，同时采用ＰＣＲ检测ＣＭＶ－ＩｇＭ阳性孕妇的羊水及产后乳汁ＣＭＶ－ＤＮＡ，以了解孕妇及新生儿ＴＯＲＣＨ感染情况。结果显示ＴＯ，ＲＶ，ＣＭＶ，ＨＳＶ－１和ＨＳＶ－２检出率分别为４１．４８％，８９．３６％，９５．７４％，３９．３６％和２２．３４％，其活动性感染分别为４．２５％，３．１９％，２４．４６％，１１．７０％和５．３１％，新     

TTV在肝炎患者中的检测及临床意义探讨

目的研究新近报道与丙氨酸转氨酶异常相关的ＴＴＶ在已知和未知病毒性肝炎中的临床意义。方法设计ＴＴＶ部分基因的特异性引物，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测了１０４例病毒性肝炎的ＴＴＶＤＮＡ，并对１例ＴＴＶ阳性标本克隆测序。结果ＴＴＶＤＮＡ序列与日本ＴＴＶ部分基因序列相对应位置的核苷酸同源性为９８．４％。在１０４例肝炎患者中ＴＴＶＤＮＡ阳性检出率为２４．０％（２５／１０４），其中在非甲～戊和庚型肝炎患者中为４８．０％（１２／４２），在甲型肝炎中为１９．０％（４／２１），乙型肝炎为２５．０％（８／３２），丙型肝炎为１１．１％（１／９），９例ＨＧＶＲＮＡ阳性者中未检出ＴＴＶＤＮＡ。值得注意的是重型肝炎ＴＴＶ检出率极高，其中急性重型肝炎６例中阳性为４例（６６．７％），慢性重型肝炎６例中阳性为３例（５０．０％）。结论ＴＴＶ在我国肝炎病人中存在。在重型肝炎中有较高的发生率，可能是未知病毒致急性和慢性及重型肝炎的病因之一。     

丁型肝炎病人肝组织HDVRNA与 HBVDNA的表达及关系

目的 探讨丁型肝炎病人肝组织中ＨＤＡｇ、ＨＤＶＲＮＡ与ＨＢＶＤＮＡＧ表达及关系。方法 应用免疫组化和原位杂交技术检测了７９全丁型肝炎病人肝组织ＨＤＡｇ、ＨＤＶＲＡＮ～ＨＢＶＤＮＡ表达,以５２例型肝炎病人肝组织作对照。结果 丁型肝炎ＨＢＶＤＮＡ检出率（２７％）低于乙型肝炎（４４％）（Ｐ〈０．０５）。在坏死灶边缘肝细胞和气球样变肝细胞浆内有大量的ＨＤＶＲＮＡ蓄积或ＨＤＡｇ呈强型强表达,ＨＤＶＲＮＡ表达     

MOLECULAR CLONING AND SEQUENCE ANALYSIS OF THE IMMUNOGLOBULIN LIGHT CHAIN VARIABLE REGION GENE OF A MURINE ANTI-HUMAN C1-INH IgG

获得抗体的可变区基因是由鼠源性ＭｃＡｂ制备重组抗体的前提，本实验合成与轻链可变区（ＶＬ）ＦＲ１和ＦＲ４互补的通用引物，由分泌抗人Ｃ１－ＩＮＨＭｃＡｂ的杂交瘤Ｆ７细胞株提取总ＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增出Ｆ７ＶＬ的ｃＤＮＡ片段，并将其克隆入ｐＵＣ１８／１９测序载体，从两端进行双脱氧核苷酸随机终止法的ＤＮＡ序列测定。结果显示：ＶＬｃＤＮＡ是由３０３个碱基组成，编码１０１个氨基酸残基。由国际联机检索进行ＥＭＢＬ和Ｋａｂａｔ基因库扫描发现：Ｆ７ＶＬ仅与Ｉｇ同源，符合小鼠Ｉｇ的ＶＬ基因特征，同源性为６０％～８０％。根据Ｋａｂａｔ分类方法，Ｆ７ＶＬ基因推导的氨基酸序列应归属于小鼠Ｉｇ的ＶＬ基因ＩＶ亚组，是由Ｖｋ－Ｊｋ１重排产生。ＣＤＲ３含有９个氨基酸残基，其中含３个不相同氨基酸残基，ＶＬ大多数的氨基酸变化集中在ＦＲ１和ＣＤＲ１区，Ｆ７ＶＬ符合ＩｇＶＬ氨基酸残基变化的基本特征。Ｃｙｓ２３和Ｃｙｓ８８残基位于Ｆ７ＶＬＣＤＲ１和ＣＤＲ３的起始点，与二硫键形成有关。成功获得Ｆ７ＶＬ基因为进一步构建和表达单链Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体打下了良好的基础。     

用聚合酶链反应和放射免疫法检测肾移植术后人巨细胞病毒感染

将５０例肾移植术后发热病人的尿标本接种细胞，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测第１代细胞培养上清中的人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ。结果１９例为ＨＣＭＶＤＮＡ阳性，阳性率为３８．００％，用固相放射免疫法（ＲＩＡ）检测ＨＣＭＶ抗原，阳性的有１５例，阳性率为２７．７７％。将５４倒尿标本接种人胎肺二倍体单层细胞，分离到６株ＨＣＭＶ。用ＥＬＩＳＡ检测６５例病人单份血清的ＨＣＭＶ－ＩｇＭ抗体，阳性的有１７例，检测４５例病人双份血清ＩｇＧ抗体，１１例的第２份血清的ＨＣＭＶ－ＩｇＧ抗体滴度比第１份有４倍以上升高。上述结果表明，ＰＣＲ检测结果与ＲＩＡ的检测结果基本符合；病人血清抗体的阳性率与ＰＣＲ检测的阳性率基本符合。