日本血吸虫感染小鼠CD8α-CD11c+型树突状细胞对哮喘抑制作用的肺部病理学研究

摘 要：目的 通过过继转移日本血吸虫感染鼠CD8α-CD11c+树突状细胞(DC) ,研究CD8α-CD11c+DC在抑制过敏性哮喘中的作用。方法 用磁珠分选（MACS）方法纯化日本血吸虫感染鼠及正常鼠DC亚群CD8α-CD11c+细胞。将20只BALB/c小鼠随机分为4组,A组为过继转移日本血吸虫感染鼠CD8α-CD11c+ DC并诱发过敏性哮喘组,B组为过继转移正常鼠CD8α-CD11c+ DC并诱发过敏性哮喘组,C组为单纯过敏性哮喘组,D组为生理盐水对照组。A、B两组小鼠经尾静脉过继转移5 ×105 DC,1h后A、B、C3组均开始诱发哮喘。4周后处死小鼠,取小鼠肺组织进行病理学检查。 结果 与B、C 组比较,A组肺部炎症明显减轻, 按Underwood标准,A、B、C 、D 4组总评分分别为7.67±2.34、l0.86±1.35、11.75±2.22、4.5±1.73 ,差异有统计学意义( P<0．05)。结论 日本血吸虫感染鼠CD8α-CD11c+D C明显抑制过敏性哮喘的发生。     

镇痛灵治疗偏头痛的实验研究

目的 探讨镇痛灵对实验性偏头痛的治疗作用.方法 SD大鼠60只均分为6组:假手术对照(S)组和模型对照(M)组给予0.9%氯化钠注射液;其他4个治疗组分别给予元胡0.68 g/kg(A组)、镇痛灵20.8 g/kg(B组)、41.6 g/kg(C组)或83.2 g/kg(D组).建立硝酸甘油诱导的实验性偏头痛大鼠模型,观察镇痛灵对大鼠行为学、血液流变学、血小板聚集及血清一氧化氮(NO)含量的影响.结果 A、C、D组行为学评分明显低于M组[(1.54±0.37)分、(2.06±0.43)分、(2.06±0.43)分vs.(3.43±0.48)分](P<0.01).A、B、C、D四组的血小板最大聚集率均与S组[(35.28±6.71)%]接近;D组血小板最大聚集率明显低于M组[(35.21±7.56)%vs.(46.56±7.34)%](P<0.05).M组全血和血浆黏度明显高于S组(P<0.05).镇痛灵处理各组全血黏度均低于M组(P<0.05).M组大鼠血清中NO的含量明显高于S组比较(P<0.01);镇痛灵处理各组全血黏度均低于M组(P<0.05).结论 镇痛灵对实验性偏头痛大鼠有一定的治疗作用.     

The Inhibitory Effect of CD8α-CD11c+ Dendritic Cells on Asthma in Schistosoma Japonicum Infected Mice

目的:研究日本血吸虫尾蚴感染鼠CD8α-CD11c+型树突状细胞(DC)在抑制过敏性哮喘中的作用.方法:用磁珠分选方法纯化日本血吸虫尾蚴感染鼠及正常鼠DC亚群CD8α-CD11c+细胞.将20只BALB/c小鼠随机均分为4组,A组为过继转移日本血吸虫尾蚴感染鼠CD8α-CD11c+型DC并诱发过敏性哮喘组,B组为过继转移正常鼠CD8α-CD11c+型DC并诱发过敏性哮喘组,C组为单纯过敏性哮喘组,D组为生理盐水对照组.A、B组小鼠经尾静脉过继转移5×105个DC,1h后A、B、C3组均开始诱发哮喘.4周后处死小鼠,取小鼠肺组织进行病理学检查.结果:肺部病理学结果显示A组小鼠肺组织炎症明显减轻,支气管管壁基本光滑,支气管内无黏液分泌.B组、C组肺组织炎症反应严重,支气管管壁增厚,管内存在大量黏液.D组小鼠肺组织无炎症反应.病理评分结果A组高于D组,低于B、C组,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),B组和C组的差异无统计学意义(P＞0.05).结论:日本血吸虫尾蚴感染鼠CD8α-CD11c+型DC可明显抑制过敏性哮喘的发生.     

丁酸钠增强5-aza-dC对人胃癌MKN-28细胞生长的抑制作用

目的 探讨丁酸钠(NaB)和5-氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-dC)对胃癌细胞MKN-28细胞生长抑制的协同作用.方法 MKN-28细胞分为5-aza-dC组(A组)、NaB组(B组)、5-aza-dC+NaB组(C组)和对照组(D组).四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法观察人胃癌MKN-28细胞生长,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡.结果 C组对MKN-28细胞的生长抑制作用明显强于A、B组(P<0.05);A组对细胞周期无影响,而B组及C组均可使细胞周期阻滞于G0/G1期(P<0.05);C组诱导的细胞凋亡率明显高于A、B组[(33.7±3.1)%vs.(8.3±1.3)%、(20.8±2.4)%](P<0.05).结论 NaB可增强5-aza-dC对人胃癌MKN-28细胞的生长抑制作用,此协同作用可能与阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡有关.     

肝炎肝硬化患者淋巴细胞亚群及HLA-DR抗原的表达及临床意义

目的 探讨肝炎肝硬化患者淋巴细胞亚群及抗原HLA-DR表达的临床意义.方法 肝炎肝硬化患者66例分为脾未切除38例(A1组)和脾切除28例(A2组),以慢性乙型肝炎46例(B组)和健康者22例(C组)为对照.用流式细胞术检测外周血淋巴细胞各亚群及HLA-DR抗原.结果 A2组外周血CD3~+、CD4~+及CD8~+T细胞分别为(41.59±6.79)%、(22.64±6.87)%和(19.16±7.28)%,显著低于B组和C组(P<0.01);CD19~+B细胞为(27.63±9.15)%,显著高于B组(P<0.05)和C组(P<0.01);HLA-DR抗原在CD3~+、CD4~+及CD8~+T细胞上的表达为(25.42±5.51)%、(22.36±4.90)%和(28.53±8.35)%,显著低于B组(P<0.05或P<0.01).结论 肝炎肝硬化患者存在明显的细胞及体液免疫功能紊乱,主要表现为CD3~+、CD4~+、CD8~+T细胞数量减少和细胞活性下降,以肝硬化脾切除患者尤为明显.     

慢性阻塞性肺疾病患者血清巨噬细胞移动抑制因子的表达

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血清巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的表达。方法 COPD患者100例均分为急性加重(A)组和稳定(B)组,同期体检的健康人50例予以对照(C组)。检测并比较三组患者的血清NF-κB、MIF、IL-6和C反应蛋白(CRP)的表达。结果三组血清NF-κB均无统计学差异(P>0.05);三组血浆MIF水平差异无统计学意义(P>0.05)。A组MIF mRNA高于B、C组(0.0314±0.0210vs.0.0130±0.0193、0.0175±0.0063)(P<0.05)。A组巨噬细胞CD4~+MIF~+T细胞和CD8~+MIF~+T细胞占总CD4~+T细胞的百分比均高于B、C组[(77.78±15.75)%vs.(60.39±20.71)%、(62.08±19.65)%和(76.97±19.89)%vs.(59.36±26.18)%、(55.72±28.94)%](P<0.05)。B、A组血清IL-6表达高于C组[(45.46±17.04)ng/L、(31.78±19.65)ng/L vs.(24.82±8.97)ng/L](P<0.05)。A组CRP高于B、C组[(28.23±37.56)mg/L vs.(8.23±17.21)mg/L、(2.82±4.79)mg/L](P<0.05)。结论血清巨噬细胞MIF和IL-6可能与COPD发病有关。     

日本血吸虫尾蚴感染小鼠CD8α~-CD11c~+型树突状细胞对哮喘的抑制作用

目的:研究日本血吸虫尾蚴感染鼠CD8α-CD11c+型树突状细胞(DC)在抑制过敏性哮喘中的作用。方法:用磁珠分选方法纯化日本血吸虫尾蚴感染鼠及正常鼠DC亚群CD8α-CD11c+细胞。将20只BALB/c小鼠随机均分为4组,A组为过继转移日本血吸虫尾蚴感染鼠CD8α-CD11c+型DC并诱发过敏性哮喘组,B组为过继转移正常鼠CD8α-CD11c+型DC并诱发过敏性哮喘组,C组为单纯过敏性哮喘组,D组为生理盐水对照组。A、B组小鼠经尾静脉过继转移5×105个DC,1h后A、B、C3组均开始诱发哮喘。4周后处死小鼠,取小鼠肺组织进行病理学检查。结果:肺部病理学结果显示A组小鼠肺组织炎症明显减轻,支气管管壁基本光滑,支气管内无黏液分泌。B组、C组肺组织炎症反应严重,支气管管壁增厚,管内存在大量黏液。D组小鼠肺组织无炎症反应。病理评分结果A组高于D组,低于B、C组,差异有统计学意义(P0.05或P0.01),B组和C组的差异无统计学意义(P0.05)。结论:日本血吸虫尾蚴感染鼠CD8α-CD11c+型DC可明显抑制过敏性哮喘的发生。     

C57/BL6小鼠骨髓间充质干细胞分离培养方法的改良和鉴定

目的 建立一种体外纯化及培养扩增C57/BL6小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的简单有效方法.方法 利用骨髓MSCs在体外培养皿中培养时具有贴壁生长的特性,采用全骨髓法分离培养C57/BL6小鼠MSCs,通过体外培养和连续传代达到纯化和扩增MSCs目的,并与以优化.倒置显微镜下观察细胞形态变化情况;利用四唑盐比色(MTT)法测定MSCs的生长曲线;流式细胞仪(FCM)鉴定MSCs膜抗原.结果 C57/BL6小鼠胫骨全骨髓细胞在分离后与含15％优质胎牛血清DMEM/F12培养基混合,约5～10 min后即可见大量有核细胞贴壁,细胞形态为圆形,24～48 h后可见贴壁细胞转变为椭圆形、多角形及短梭形,7～12 d时细胞呈长梭形并达到90％单层融合.通过传代细胞进一步纯化及扩增.细胞传代后2d内处于潜伏期,3d后进入生长期,5d后进入平台期.第4代MSCs进行FCM检测CD45、CD44、CD29和CD54阳性率分别为2.4％、83.2％、95.1％和94.1％.激光免疫共聚焦结果显示造血细胞表面标物CD34和CD45阴性,而CD44和CD105阳性.结论 C57/BL6小鼠全骨髓贴壁法能有效得到分离纯化的MSCs,用此方法培养的C57/BL6小鼠MSCs生长稳定,增殖能力活跃,具有MSCs的一般生物学特性,可以为组织工程提供理想的种子细胞.     

N-乙酰半胱氨酸对支气管哮喘小鼠模型肺脏树突状细胞功能的影响

目的 观察N-乙酰半胱氨酸(NAC)干预支气管哮喘模型后,其肺脏树突状细胞(DC)表面分子表达的变化及其对T淋巴细胞分化的影响.方法 卵蛋白(OVA)致敏、激发裸鼠(BALB/C)哮喘模型后随机分成对照(C)组、地塞米松干预(B)组和NAC干预(A)组,每组16只.ELISA法进行检测血清总IgE、肺泡灌洗液(BLAF)和肺脏DC和DO11.10(OVA特异性转基因小鼠)脾脏T淋巴细胞共培养液上清中白细胞介素(IL)13和γ干扰素(IFN-γ)水平.结果 A、B组血清IgE水平低于C组(P<0.01).A、B组BALF中IL-13低于c组,而IFN-γ水平升高于C组(P<0.01).A、B组肺脏DC表面分子CD80、CD86、MHC Ⅱ下调.与C组比较,小鼠肺脏DC和T淋巴细胞共培养后,A、B组上清IL-13水平明显降低,IFN-γ水平明显升高(P<0.01).结论 NAC可以抑制哮喘免疫应答反应向Th2方向偏移,且它的治疗作用可能是通过肺脏DE来实现的.     

The Research on Chimeric MHC-Ⅰ Gene Responsing to Allogeneic Dendritic Cells

目的:构建分子嵌合主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅰ基因小鼠骨髓造血干细胞,并探讨其诱导脾脏T细胞对异基因小鼠树突状细胞(DC)反应的机制.方法:密度梯度法分离培养BALB/c小鼠骨髓造血干细胞.构建携带C57BL/6小鼠MHC-Ⅰ基因慢病毒载体(病毒感染组),携带无意义基因慢病毒载体(阴性对照组).分别感染BALB/c 小鼠骨髓造血干细胞,构建分子嵌合细胞.分别取病毒感染组、阴性对照组及未加入病毒的空白对照组造血干细胞输注BALB/c小鼠后7d,获取脾脏T淋巴细胞,分别与C57BL/6小鼠DC进行混合淋巴细胞培养,测定刺激指数.结果:成功体外分选及培养BALB/c小鼠骨髓造血干细胞.病毒感染组C57BL/6小鼠MHC-Ⅰ蛋白表达率可达98.17％.单向混合淋巴细胞培养结果显示,C57BL/6小鼠DC对输注病毒感染组细胞后BALB/c小鼠脾脏T细胞刺激指数明显降低(P＜0.01).结论:输注分子嵌合MHC-Ⅰ基因造血干细胞后,小鼠脾脏T细胞对异基因小鼠DC反应明显减低.     

Dendritic cells and T cells in immunotherapy

Autologous cellular immunotherapies have been used experimentally in humans to treat many types of cancer. These therapies are divided into two principal types: active cellular immunotherapies that rely on autologous dendritic cells or other antigen presenting cells; and adoptive T-cell therapies, in which large numbers of antigen-specific T lymphocytes are propagated ex vivo and then infused back into the patient. With the FDA approval of the antigen presenting cell vaccine sipuleucel-T for prostate cancer, active immunization has become an accepted approach for the treatment of established cancer.     

D609 induces vascular endothelial cells and marrow stromal cells differentiation into neuron-like cells

AIM: To investigate the effect of tricyclodecane-9-yl-xanthogenate (D609) on cell differentiation in vascular endo- thelial cells (VECs) and marrow stromal cells (MSCs). METHODS: Morphological changes were observed under phase contrast microscope. Electron microscope and immunostaining were used for VECs identification. The expressions of neuron-specific enolase (NSE) and glial fibrillary acidic protein (GFAP) were examined by immunohistochemistry. RESULTS: After 6 h of induc…     

引流淋巴结树突状细胞对自身肿瘤细胞作用研究

目的　从胃癌患者引流淋巴结中分离和定向诱导培养扩增树突状细胞 (DC) ,观察其经自身肿瘤细胞抗原冲击后对自身细胞因子诱导的杀伤细胞 (CIK细胞 )杀伤活性的影响。方法　取手术切除肿瘤周围转移引流淋巴结 ,提取单个核细胞 ,将贴壁生长的细胞用细胞因子rhGM CSF、rhIL 4、rhTNF α联合诱导培养DC ,然后用自身肿瘤细胞抗原冲击DC并作用CIK细胞 ,最后检测CIK细胞杀伤三种靶细胞 (自身胃癌细胞、K5 6 2和SGC 790 1细胞 )的活性。结果　胃癌患者转移引流淋巴结中的贴壁细胞 ,经细胞因子联合诱导培养 ,DC含量可达 4 5 %。经自身肿瘤抗原冲击的引流淋巴结DC活化的CIK细胞 ,杀伤自身肿瘤细胞活性达 79 3% ,单纯CIK细胞为 33% ,两者比较差异有显著意义 (P <0 0 1) ;而对K5 6 2和SGC 790 1细胞杀伤活性无明显差异。结论　肿瘤周围转移引流淋巴结贴壁细胞在体外能定向诱导扩增出大量DC :DC经自身肿瘤抗原冲击后能明显提高CIK细胞对自身肿瘤细胞的杀伤活性。此结果为肿瘤DC的免疫治疗应用奠定了理论基础     

静脉血管平滑肌细胞中的多倍体细胞分析

目的探讨流式细胞术分析静脉血管平滑肌细胞多倍体细胞的方法和意义。方法选取普通级健康成年日本大耳白兔2只,雄性,8月龄,大约3 kg;普通级SD大鼠2只,雄性,8周龄,大约200 g。人大隐静脉为2例心脏冠状动脉旁路移植术中修补血管所得。在麻醉日本大耳白兔和大鼠后开腹腔获取下腔静脉,采用多种酶组合的消化液消化兔、大鼠以及人的静脉血管得到适合流式细胞检测的静脉血管平滑肌单细胞悬液,用碘化丙啶标记细胞,利用细胞流式仪分析兔、大鼠以及人的静脉血管平滑肌单细胞悬液各5 000个细胞,检测细胞DNA含量,DNA含量翻倍的细胞为多倍体细胞。并利用荧光原位杂交技术（FISH）验证阳性对照HEK293细胞系中的多倍体的存在。结果流式结果显示分析的5 000个细胞中,阳性对照HEK293细胞的多倍体细胞为1 355个（27.1%）,从2例患者中取得的大隐静脉多倍体细胞为310个（6.2%）和250个（5.0%）;2只大鼠的下腔静脉平滑肌细胞中多倍体细胞为360个（7.2%）和450个（9%）;2只兔的下腔静脉平滑肌细胞中多倍体细胞分别为270个（5.4%）和305个（6.1%）。结论成年的静脉血管包括人大隐静脉的平滑肌细胞中普遍存在一定比例的多倍体细胞。     

Comparative effect of cadmium on osteoblastic cells and osteoclastic cells

Cadmium(Cd) has been thought to disturb the bone metabolism directly. The mechanism for the bone lesion is unknown, however. To examine the effects of cadmium on bone metabolism, we compared its effects on osteoblasts and osteoclasts in vitro. We used an established cell line, MC3T3-E₁, as osteoblasts and tartrate resistant acid phosphatase (TRACP)-positive multi-nucleated cells (MNC) formed by a bone marrow culture system as osteoclasts. Alkaline phosphatase (ALP) activity was decreased by 10^–7 M Cd and DNA content and hydroxyproline content of osteoblastic cells were decreased by 10^–5 M Cd. Cadmium at 10^–7 M inhibited the osteoclastic cell formation from mouse bone marrow in the presence of 10^–8 M 1,25(OH)₂ vitamin D₃. A 100-fold higher concentration of zinc(Zn) simultaneously added to the cadmium-containing medium prevented the toxicity of cadmium to osteoclastic cells as observed in the culture of osteoblastic cells. These results indicate that both bone formation and bone resorption are inhibited by cadmium. The responses of osteoclasts and osteoblasts to cadmium in this culture system were the same and the responses of cadmium-damaged osteoblasts and osteoclasts to zinc were also similar. These results suggest that another mechanism by which cadmium could cause bone damage should be considered in addition to the specific induction of osteoclastic cells by Cd.     

Cardiac-derived stem cells

Current scientific dogma holds that cardiomyocyte stem cells do not exist in the adult mammalian heart, and furthermore, that there is little, if any, potential for the regeneration of damaged myocardium. In order to approach this topic, I have begun with a brief overview of advances in stem cell research in other organ systems, such as the bone marrow and the brain. Very recent progress in cardiac stem cell research is then discussed, which indicates that a cardiomyocyte progenitor cell contributes to cardiomyocyte replacement throughout life. This progenitor cell may reside in the heart itself, or derive from a circulating marrow stem cell.