黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元caspase-3表达的作用

目的观察黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡相关基因caspase-3表达的影响。方法取原代培养8 d的大鼠海马神经元,随机分为4组:正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖组、黄芪注射液溶剂对照组和黄芪注射液组。除正常对照组外均进行缺氧缺糖0.5 h,再复氧复糖。各组于复氧复糖后0、0.5、2、6、24、48、72 h和120 h采用免疫组织化学染色法和Western blot检测caspase-3蛋白的表达,采用原位杂交检测海马神经元caspase-3 mRNA的表达。结果免疫组化结果显示:与正常对照组相比,除0 h和0.5h之外,缺氧缺糖/复氧复糖组各时间点海马caspase-3阳性神经元数目占神经元总数的百分率均明显增多(P<0.05),于24 h达到高峰。黄芪注射液溶剂对照组以上指标的变化趋势与缺氧缺糖/复氧复糖组相一致。黄芪注射液组除0 h和0.5 h之外,各时间点以上指标均比缺氧缺糖/复氧复糖组减少(P<0.05)。Western blot检测结果显示:除0 h和0.5 h外,各时间点缺氧缺糖/复氧复糖组海马神经元caspase-3蛋白的平均灰度值均较正常对照组明显增加(P<0.05),24 h最高;与缺氧缺糖/复氧复糖组相比,黄芪注射液溶剂对照组各时间点caspase-3蛋白的平均灰度值无变化(P>0.05),而黄芪注射液组除0 h和0.5 h外,在各个时间点caspase-3蛋白的平均灰度值明显降低(P<0.05)。原位杂交检测结果显示:caspase-3 mRNA阳性神经元形态、数目占神经元总数的百分率的变化趋势与caspase-3蛋白的变化趋势完全一致。结论黄芪注射液可抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡相关基因caspase-3的表达,从而抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元的凋亡。     

黄芪有效成分对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元cyt-c、CcO表达的影响

目的观察黄芪有效成分对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元cyt-c及CcO表达的影响,探讨黄芪有效成分防治海马神经元凋亡可能的作用机制。方法取培养8 d的大鼠海马神经元,进行缺氧缺糖0.5 h,再分别复氧复糖0、0.5、2、6、24、72和120 h。实验分4组:正常对照组、模型组(缺氧缺糖/复氧复糖组)、黄芪注射液溶剂对照组和黄芪注射液组。分别采用细胞免疫化学法、Western blot法检测海马神经元cyt-c蛋白的表达、RT-PCR法检测CcO mRNA的表达。结果模型组在各个时间点cyt-c蛋白和CcO mRNA表达均较正常对照组增加(P<0.05);与模型组相比,黄芪有效成分组在各个时间点cyt-c蛋白和CcO mRNA表达均降低(P<0.05),而黄芪注射液溶剂对照组则无变化(P>0.05)。结论黄芪注射液可抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元cyt-c、CcO的表达,从而抑制缺氧缺糖/复氧复糖后大鼠海马神经元的凋亡。     

黄芪注射液抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元JNK3的表达

目的观察黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡相关蛋白c-Jun氨基末端激酶3(c-Jun N ter-minal kinase 3,JNK3)及其mRNA表达的影响,探讨黄芪注射液防治海马神经元凋亡可能的作用机制。方法取原代培养8d的大鼠海马神经元,随机分为4组:正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖组、黄芪注射液组和黄芪溶剂对照组。其中缺氧缺糖/复氧复糖组、黄芪注射液组和黄芪溶剂对照组进行缺氧缺糖0.5h再复氧复糖,并于复氧复糖后0、0.5、2、6、24、72和120h采用Western blot、ELISA和RT-PCR方法检测海马神经元JNK3蛋白及其mRNA的表达。结果缺氧缺糖/复氧复糖组在0、0.5、2、6、24和72h海马神经元JNK3蛋白条带平均光密度值及蛋白活性均较正常对照组增加(P<0.05),而复氧复糖120h组较正常对照组降低(P<0.05);与缺氧缺糖/复氧复糖组相比,除120h之外,黄芪注射液组在各个时间点JNK3蛋白条带的平均光密度值及蛋白活性均降低(P<0.05);而黄芪溶剂对照组与缺氧缺糖/复氧复糖组相比则差异无显著性(P>0.05)。缺氧缺糖/复氧复糖组在0、0.5、2、6、24、72和120h海马神经元JNK3mRNA平均光密度值均较正常对照组增加(P<0.05);与缺氧缺糖/复氧复糖组相比,除120h之外,黄芪注射液组在各个时间点JNK3mRNA的平均光密度值均降低(P<0.05);而黄芪溶剂对照组与缺氧缺糖/复氧复糖组相比则差异无显著性(P>0.05)。结论黄芪注射液可抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡相关基因JNK3mRNA表达,从而抑制JNK3蛋白表达,降低了JNK3蛋白活性,从而抑制缺氧缺糖/复氧复糖引起大鼠海马神经元凋亡的作用。     

黄芪甲苷对缺氧缺糖/复氧复糖PC12细胞凋亡的影响

目的观察黄芪甲苷对缺氧缺糖/复氧复糖PC12细胞凋亡的影响。方法取对数生长期的PC12细胞,随机分为4组:正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖组、黄芪甲苷组和黄芪甲苷溶剂对照组。其中缺氧缺糖/复氧复糖组、黄芪甲苷组和黄芪甲苷溶剂对照组进行缺氧缺糖3h后再复氧复糖12 h,并于复氧复糖的同时加入黄芪甲苷。用倒置显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞活性,TUNEL染色和Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果正常对照组PC12细胞贴壁生长,呈多角形,突起明显,突起之间交织成网状,细胞膜光滑且完整,胞体折光性较强。与正常对照组相比,缺氧缺糖/复氧复糖组细胞变圆或肿胀,突起回缩或消失,细胞膜破损,胞体折光性差,细胞活性明显下降(P<0.05),细胞凋亡率和凋亡指数明显升高(P<0.05)。与缺氧缺糖/复氧复糖组相比,黄芪甲苷组细胞生长状态见好转,突起较为明显,胞体折光性较好,细胞活性升高(P<0.05),细胞凋亡率和凋亡指数下降(P<0.05)。黄芪甲苷溶剂对照组与缺氧缺糖/复氧复糖组相比无明显差异(P>0.05)。结论黄芪甲苷可减轻缺氧缺糖/复氧复糖引起的PC12细胞损伤,提高细胞活性,抑制细胞凋亡。     

黄芪甲苷对缺氧缺糖/复氧复糖PC12细胞TLR4通路的影响

<正>TLR4受体已经被证明在脑缺血中发挥着关键的作用~([1])。黄芪甲苷可明显减轻大鼠脑缺血/再灌注损伤中的脑梗死面积,抑制神经细胞凋亡~([2])。黄芪甲苷是否通过TLR4/My D88通路来抑制细胞凋亡?本文以PC12细胞为实验对象,研究黄芪甲苷对缺氧缺糖/复氧复糖PC12细胞TLR4通路的影响,探讨黄芪甲苷抑制细胞凋亡的作用机制。     

硫氧还蛋白对缺氧/复氧海马神经元生长与凋亡的影响

本研究诱导原代培养10d的新生SD大鼠海马神经元,在神经元缺氧／复氧前,先用硫氧还蛋白处理,检测在不同时点的神经元存活率及Caspase-3蛋白酶活性,探讨硫氧还蛋白在神经元生长及凋亡中的可能作用机理。     

黄芪甲苷调控自噬抑制缺氧缺糖/复氧复糖HT22细胞凋亡

目的探讨黄芪甲苷通过调控自噬,对缺氧缺糖/复氧复糖HT22细胞凋亡的影响。方法将HT22细胞随机分为正常组(Control)、模型组(Model)、溶剂对照组(DMSO)、黄芪甲苷组(AS-IV)、黄芪甲苷组加正常细胞组(AS-IV+N)、黄芪甲苷加自噬抑制剂组(AS-IV+3-MA)、自噬抑制剂组(3-MA)、自噬激活剂组(Rapa)。除正常组外,其余各组细胞均在缺氧缺糖6 h后复氧复糖。镜下观察细胞形态,CCK-8法检测细胞存活率,LDH法检测细胞损伤,免疫荧光染色检测细胞凋亡。结果与正常组比较,模型组细胞胞体突触减少,细胞皱缩,细胞间连接减少;细胞存活率明显降低,LDH漏出率、Bax/Bcl-2明显升高(P<0.01)。与模型组比较,AS-IV组、Rapa组细胞存活率明显升高,LDH漏出率、Bax/Bcl-2明显降低(P<0.01);3-MA组细胞存活率明显降低,Bax/Bcl-2明显升高(P<0.01);AS-IV+3-MA组无明显差异。结论黄芪甲苷可通过激活自噬,抑制缺氧缺糖/复氧复糖HT22细胞凋亡。     

黄芪注射液对脑缺血/再灌注大鼠海马神经元Caspase-3表达的影响

目的观察黄芪注射液对脑缺血/再灌注大鼠海马神经元Caspase-3表达的影响。方法将132只♂SD大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、黄芪注射液溶剂对照组及黄芪注射液组。采用四血管阻断法建立大鼠脑缺血/再灌注模型[1],于再灌注后0、0.5、2、6、24、72和120 h断头取脑。采用免疫组织化学法、Western blot法检测大鼠海马组织Caspase-3蛋白的表达,实时荧光PCR法检测Caspase-3 mR-NA的表达。结果模型组除0和0.5 h外,其余各个时间点Caspase-3蛋白及mRNA表达均较假手术组增加(P<0.05);与模型组相比,黄芪注射液组除0和0.5 h外其余各个时间点Caspase-3蛋白及mRNA表达均减少(P<0.05),而黄芪注射液溶剂对照组则无明显变化(P>0.05)。结论黄芪注射液能抑制大鼠海马神经元Caspase-3的表达,从而抑制海马神经元的凋亡,保护神经元。     

硫酸镁对缺氧/复氧诱导海马神经元凋亡的作用

无论是创伤性或缺血性脑损伤后,脑组织以及神经细胞内Mg2 含量、血清Mg2 含量皆明显下降,而且Mg2 下降程度和脑外伤伤情明显相关.Mg2 对缺氧/复氧诱导的新生大鼠离体海马神经神经元凋亡的作用,目前报道甚少.本研究在缺氧/复氧诱导离体培养海马神经元凋亡的模型上,观察了Mg2 对损伤海马神经元的作用.     

异丙酚预处理对缺氧/复氧后培养海马神经元金属硫蛋白-3蛋白表达的影响

目的:本研究观察异丙酚对培养海马神经元缺氧复氧后损伤反应的影响及金属硫蛋白-3(metallothionein-3,MT-3)在其中的作用。方法:培养7～10d海马神经元,以不同浓度的异丙酚(50,150,250μmol/L)预处理后24h后,制备缺氧4h后复氧24h模型(H/R),Western blot法检测MT-3蛋白表达水平;以MT-3特异性siR-NA沉默MT-3表达后,采用MTT法观察异丙酚对H/R海马神经元存活率的影响。结果:在H/R条件下,异丙酚可浓度依赖性促进MT-3的蛋白表达。以MT-3siRNA抑制MT-3蛋白表达后,异丙酚提高神经元存活率的作用消失。结论:异丙酚具有神经元保护效应,这一作用可能与其上调MT-3的蛋白表达有关。     

羟丁酸钠在大鼠海马脑片缺氧/复氧损伤中的保护作用机制

目的：研究羟丁酸钠（SO）在大鼠海马脑片缺氧/复氧（H/R）损伤中的保护作用,揭示SO在缺血性脑损伤中的保护作用机制。方法：采用大鼠海马脑片H/R损伤模型。设正常对照组,H/R组,SO1、10、100μmol/L组,NCS-382100μmol/L＋SO100μmol/L（NCS-382＋SO）组、NCS-356100μmol/L（NCS-356）组。测定脑片孵育液中乳酸脱氢酶（LDH）释放率,γ-氨基丁酸（GABA）、谷氨酸（Glu）含量;脑片进行TTC染色计算组织损伤百分率;HE染色观察组织病理形态学变化,流式细胞仪测定细胞内钙;酶组织化学法检测一氧化氮合酶（NOS）的表达。结果：SO明显降低H/R海马脑片LDH释放率（P〈0.01）,提高TTC染色的A490值,降低组织损伤百分率（P〈0.01）,升高GABA/Glu比值（P〈0.01）,减轻H/R所致的组织病理损伤。H/R组脑片细胞内钙荧光强度和NOS阳性神经元明显高于正常对照组（P〈0.01）;SO100μmol/L组、NCS-356组细胞内钙荧光强度较H/R组显著减弱（P〈0.01）,NOS阳性神经元的数目明显减少（P〈0.01）。用γ-羟基丁酸（GHB）受体选择性阻断剂NCS-382后再使用SO,细胞内钙荧光强度、NOS阳性神经元的数目均接近H/R组。结论：SO对大鼠海马脑片H/R损伤有明显的保护作用,其机制可能与升高GABA/Glu比值,激动GHB受体抑制细胞内钙的增高及NOS的表达有关。     

黄芪提取物对缺氧/复氧诱导神经元损伤的保护作用

目的探讨黄芪提取物在缺氧/复氧所致神经元损伤中的保护作用。方法原代培养大鼠海马神经元细胞,建立缺氧/复氧损伤的海马神经元凋亡模型。采用四唑盐(MTT)法和LDH释放法检测细胞活力;Hoechst染色、Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测AKT和磷酸化AKT蛋白的表达。结果经缺氧/复氧后细胞活力明显下降,出现凋亡典型的形态学特征,磷酸化AKT蛋白表达下降;黄芪提取物能明显提高损伤海马神经元细胞活力,降低细胞凋亡率,促进磷酸化AKT蛋白的表达。结论黄芪提取物对缺氧/复氧神经元具有保护作用,其机制可能与激活PI3K/AKT细胞信号通路有关。     

神经生长因子在异丙酚对大鼠海马神经元缺氧/复氧损伤中的作用及机制

目的探讨不同浓度的异丙酚预处理对大鼠海马神经元缺氧/复氧损伤的保护及神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)的作用。方法取离体培养的大鼠海马神经元,随机分成7组:对照组(Con组);CoC l2组(CoC l2组):加入300μM CoC l2处理1 h,然后更换正常的培养基培养24 h,之后更换无血清的培养基培养;脂肪乳剂组(Intralipid,Intra组):加入10%脂肪乳剂90μL预处理1 h后加入300μM CoC l2;异丙酚组(prop组)培养孔中加入10、20、50、100μM浓度的异丙酚预处理1 h后,同CoC l2组。MTT法测定细胞增殖,流式细胞技术测定细胞的凋亡。为进一步研究不同浓度的异丙酚对NGF及其受体TrkA表达的影响,本研究将大鼠海马神经元分为6组,分别为对照组,CoC l2组,10、20、50、100μM浓度异丙酚组,用RT-PCR检测NGF mRNA和TrkA mRNA表达。为探讨NGF/TrkA的作用,将细胞随机分为4组:对照组,CoC l2组,50μM异丙酚组,1.0μmol/L K252a组。结果脂肪乳剂组与CoC l2组比较,细胞活性差异无统计学意义(P>0.05),50μM异丙酚预处理可以明显增加大鼠海马神经元的增殖能力,减少凋亡(P<0.01),50μM异丙酚预处理上调NGF mRNA和TrkA mRNA的表达(P<0.05或P<0.01),10、20、100μM异丙酚组与缺氧/复氧组相比差异无统计学意义(P>0.05),异丙酚对海马神经元的保护作用被K252a抑制(P<0.01)。结论 50μM异丙酚预处理对缺氧/复氧后的大鼠海马神经元有保护作用,NGF及其受体TrkA在异丙酚的预处理中起到重要的作用。     

脉络宁对原代大鼠海马神经元在氧糖剥夺/复氧中的保护作用

目的:观察脉络宁对氧糖剥夺/复氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)诱导的SD大鼠原代培养海马神经元损伤的保护作用及可能机制。方法:原代培养从新生24 h内SD乳鼠取材的海马神经元,建立氧糖剥夺30 min/复氧8 h海马神经元损伤模型。实验分为正常对照组、OGD/R模型组、脉络宁低、中、高剂量组(5,10和20μg.mL-1)。采用Hoechest33258染色测定细胞凋亡,免疫细胞化学检测各组细胞中脑红蛋白(neuroglobin,NGB)及Bcl-2的表达,PCR检测其mRNA的表达情况。结果:与OGD/R模型组比较,各剂量脉络宁组神经元凋亡率均不同程度降低(P<0.01),且随药物浓度的升高而降低;NGB和Bcl-2蛋白表达不同程度地升高(P<0.01),且随药物浓度升高而升高;NGB及Bcl-2蛋白的mRNA亦升高(P<0.01)。结论:脉络宁发挥神经保护作用可能的机制之一是抑制OGD/R诱导的海马神经元细胞凋亡,促进NGB和Bcl-2蛋白的表达。     

乳化异氟醚后处理对成年大鼠缺氧/复氧心肌细胞超微结构的影响

目的 观察乳化异氟醚(emulsified isofurane,EI)对原代培养成年大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后超微结构的影响.方法 体外培养成年大鼠心肌细胞,建立心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,然后将心肌细胞随机分为7组,正常组(N组)、缺氧/复氧组(H/R组)、缺氧后处理组(HPO组)和不同浓度EI后处理组(0.84 mmol/L、1.68 mmol/L和2.52 mmol/L,EI1～EI3组)及脂肪乳组(F组),倒置显微镜观察心肌细胞生长的特性及形态的变化;采用透射电子显微镜观察缺氧/复氧损伤后心肌细胞超微结构的变化.结果 心肌细胞电镜显示正常组心肌细胞超微结构正常,缺氧/复氧组超微结构损伤严重,HPO组、EI1-EI3均可减轻H/R心肌细胞的损伤,但EI2组与EI1组和EI3组比较减轻更明显;F组无明显效果.结论 缺氧/复氧对原代培养的成年大鼠心肌细胞可以造成明显损伤;EI后处理对原代培养成年大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤具有一定的保护作用.