黄芪对糖尿病大鼠肾脏保护作用的机制

目的:观察黄芪对糖尿病大鼠肾脏病变的保护作用并探讨其作用机制.方法:将SD大鼠制成链脲佐菌素糖尿病模型,12周后观察黄芪对糖尿病大鼠肌酐清除率(Ccr)、尿白蛋白排泄率及肾小球平均体积、肾小球毛细血管基底膜平均厚度的影响,观察血、尿内皮素-1(ET-1),转化生长因子-β1(TGF-β1)的变化.结果:黄芪可降低糖尿病大鼠Ccr、尿白蛋白排泄率、肾小球平均体积、肾小球毛细血管基底膜平均厚度,并可不同程度地降低尿ET-1、TGF-β1水平.结论:黄芪可延缓糖尿病肾脏结构和功能的损害,此作用可能与黄芪降低ET-1、TGF-β1水平有关.     

leflunomide对IgA肾病大鼠肾脏保护作用的机制研究

目的 观察leflunomide对实验性IgA肾病(IgAN)大鼠肾脏病理及肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)表达的影响.方法 建立IgAN大鼠模型,随机分成模型组、泼尼松组、leflunomide组,同时设立正常对照组.用免疫荧光和光镜观察免疫复合物在肾脏的沉积及系膜区基质增生程度;用免疫组化和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法分别检测肾组织TGF-β1、MCP-1的蛋白和基因表达水平.结果 与模型组比较,leflunomide组免疫复合物在肾脏的沉积明显减少,系膜区基质增生程度显著减轻(P均＜0.01);leflunomide在基因和蛋白水平均能够有效抑制TGF-β1和MCP-1在肾组织中的表达(P＜0.05或P＜0.01).结论 leflunomide能减少免疫复合物在肾脏的沉积,并且下调TGF-β1、MCP-1在肾脏的表达,减少局部炎症反应,减轻系膜区基质增生,延缓肾脏纤维化的进程,保护肾脏.     

重组人促红细胞生成素诱发慢性肾功能衰竭大鼠高血压的机制以及波生坦的干预作用

目的探讨内皮素受体拮抗剂波生坦对重组人促红细胞生成素(rHuEPO)诱发肾大部切除大鼠高血压的干预作用及可能机制。方法采用分阶段5/6肾切除术制备大鼠慢性肾功能衰竭动物模型。实验动物随机分为4组:Ⅰ组假手术组,Ⅱ组肾大部切除组(SNX),Ⅲ组肾大部切除加EPO组(SNX+EPO),Ⅳ组肾大部切除加EPO加波生坦组(SNX+EPO+波生坦)。观察各组大鼠红细胞压积、血肌酐、血压及血浆和肾皮质内皮素(ET-1)水平的变化。结果rHuEPO不仅可显著提高慢性肾功能衰竭大鼠的红细胞压积,并可诱发其血压升高,同时显著升高血浆及肾皮质ET-1水平(P<0.05)。rHuEPO诱导的血压升高与ET-1呈正相关关系(P<0.05);而波生坦则可明显降低由rHuEPO诱发的高血压水平,且可降低血肌酐水平,肾组织ET-1含量亦显著下降(P<0.05)。结论波生坦可明显干预由rHuEPO治疗慢性肾功能衰竭贫血所诱导的血压升高,提示rHuEPO和波生坦的效应可能是由内皮素机制所介导。     

辛伐他汀对一氧化氮缺乏性高血压大鼠肾脏的保护作用

目的：观察辛伐他汀对一氧化氮(nitric oxide，NO)缺乏性高血压大鼠肾功能的保护作用，并探讨其机制和可能的干预方法。方法：L—硝基精氨酸甲酯(NG-nitro-L-argintne methyl ester，L-NAME造成NO缺乏性高血压大鼠模型，随机分为对照组、高血压组、辛伐他汀组，每组8只。测定尿β2—微球蛋白(β2—M)、尿蛋白，肾脏电镜图及NO和血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)等水平。结果：给予L—NAME2周始血压持续升高，第7天和8周时尿蛋白[(40．5&;#177;10．5)mg／L和(48．4&;#177;5．6)mg／L]及β2—M[(0．58&;#177;0．11)mg／L和(0．64&;#177;0．04)mg／L]形成两个高峰，8周时肾小球滤过膜明显损伤；辛伐他汀在不影响血压和血脂水平条件下，减少尿蛋白和尿β2—M排出；减轻肾小球滤过膜损伤，肾脏局部NO和AngⅡ水平发生显著的差别。结论：辛伐他汀对NO缺乏性高血压大鼠早期肾功能损害有保护作用，其机制可能与影响肾脏局部内皮功能和AngⅡ水平有关。     

维生素D3对糖尿病大鼠肾脏的保护作用

目的 探讨维生素 D3对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其机制. 方法实验选用 3月龄雌性 SD大鼠(清洁级) 30只.按随机数字表法分为 3组,分别为正常对照组,糖尿病模型组,维生素 D3治疗组,每组 10只.检测各组第 4,8周时血糖、糖化血红蛋白、血肌酐、尿素氮、尿白蛋白、血胆固醇、三酰甘油,转化生长因子-β 1 (transforming growth factor-beta 1,TGF β 1)水平等指标的变化,用 RT-PCR方法检测各组大鼠肾皮质 TGF β 1表达水平的变化,免疫组化法检测纤维连接蛋白 (fibronectin,FN)和层黏连蛋白 (liminin, LN)表达水平的变化. 结果实验 4周时维生素 D3治疗组尿白蛋白排泄率 [(10.28± 1.09)μ g/24 h]较糖尿病模型组 [(12.62± 0.51)μ g/24 h]减少 (t=3.987,P< 0.05),8周时也明显减少( t=4.475, P< 0.01).实验 8周时维生素 D3治疗组血 TGF β 1水平较糖尿病模型组明显下降( t=2.704, P< 0.05).实验 4, 8周时维生素 D3治疗组肾皮质 TGF β 1表达水平较糖尿病模型组明显下降 (t=7.697,P< 0.01;t=3.068,P< 0.05).免疫组化显示糖尿病大鼠肾小球 FN和 LN沉积增多,维生素 D3治疗组 FN和 LN表达低于糖尿病模型组( t=- 3.228,- 1.432, P< 0.01). 结论 维生素 D3对于糖尿病肾脏病变具有部分保护作用,其机制可能为通过下调糖尿病大鼠 TGF β 1的表达,抑制血中 TGF β 1水平,从而减少细胞外基质的沉积.     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏的保护作用

目的:观察氯沙坦对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠肾脏病变的保护作用及其机制.方法:将链脲佐菌素诱导的DM大鼠分为模型组(DM组)和氯沙坦治疗组(LOS组),另设正常对照组(NC组).氯沙坦治疗组予腹腔注射氯沙坦30 mg/(kg·d),NC组和DM组则予同体积的生理盐水.12周后收集尿样并取血,检测血糖(BG)、血肌酐、尿素氮,尿β2-微球蛋白(β2-MG)和24 h尿白蛋白排泄率(UAER),测尿和血中TNF-o和TGF-β1浓度,计算肾脏肥大指数,观察肾小球病理变化.结果:DM组尿素氮、血肌酐、UAER、血糖、β2-MG、肾重/体重明显增高(P＜0.01或P＜0.05),血、尿中TNF-α和TGF-β1浓度显著增高(P＜0.01或P＜ 0.05).氯沙坦治疗组上述指标显著低于DM模型组(P＜0.01或P＜0.05),肾脏病理明显改善.结论:氯沙坦可降低血和尿中TNF-α、TGF-β1浓度,减少尿蛋白排泄,有助于保护肾功能.     

解毒通络保肾胶囊对糖尿病大鼠肾脏的保护作用

背景临床观察发现中药解毒通络保肾胶囊对糖尿病肾病具有较好的防治作用,但具体作用途径不甚清楚.目的探讨解毒通络保肾胶囊对糖尿病大鼠肾脏病变的保护作用及其机制.设计随机对照观察.单位吉林大学再生医学科学研究所及长春中医学院中医研究所.材料实验于2002-05/2003-01在吉林大学再生医学科学研究所病理研究室完成.选用Wistar大鼠46只.方法将实验动物分为正常对照组(10只);糖尿病对照组(12只);苯那普利治疗组(阳性对照组,12只)和解毒通络保肾胶囊治疗组(实验组,12只).检测各组第12周的血糖、尿素氮、血肌酐、尿白蛋白排泄率、肾组织的肾素活性、血管紧张素转换酶活性、血管紧张素Ⅱ含量和肾脏肥大指标及肾脏组织学检查,应用反转录-聚合酶链反应检测肾皮质转化生长因子β1mRNA表达水平,免疫组化法检测肾脏纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原蛋白表达水平.主要观察指标①糖尿病和糖尿病肾病相关的生化指标检测.②肾脏组织的肾素活性、血管紧张素转换酶和血管紧张素Ⅱ水平.③肾脏纤维连接蛋白、兔抗鼠Ⅳ型胶原蛋白表达水平.④肾皮质转化生长因子β1mRNA表达.⑤组织学观察.结果在实验过程中糖尿病对照组死亡5只大鼠,阳性对照组和实验组大鼠分别死亡4只和3只.实验结束时,正常对照组、糖尿病对照组、阳性对照组和实验组分别有10,7,8,9只进入结果分析.①糖尿病和糖尿病肾病相关的生化指标检测阳性对照组和实验组与糖尿病对照组比较,体质量上升、肾重/体质量和血糖降低(P＜0.05,P＜0.01),实验组血糖较糖尿病对照组和阳性对照组下降明显(P＜0.01).阳性对照组和实验组的尿素氮、血肌酐、内生肌酐清除率和尿白蛋白排泄率指标均较糖尿病对照组显著下降(P＜0.05,P＜0.01).②肾脏组织的肾素活性、血管紧张素转换酶和血管紧张素Ⅱ水平阳性对照组肾组织肾素活性较其余3组明显升高(P＜0.01).阳性对照组和实验组肾组织中血管紧张素转换酶活性和血管紧张素Ⅱ含量较糖尿病对照组明显下降(P＜0.01),其中血管紧张素转换酶活性阳性对照组较实验组下降明显(P＜0.05).③肾脏纤维连接蛋白、兔抗鼠Ⅳ型胶原蛋白表达水平阳性对照组和实验组较糖尿病对照组免疫染色明显减弱(P＜0.01),介于正常对照组和糖尿病对照组之间.④肾皮质转化生长因子β1mRNA表达阳性对照组和实验组的表达水平较糖尿病对照组显著下降,分别为糖尿病对照组的66.28%,64.75%(P＜0.05).⑤组织学观察光镜下阳性对照组和实验组大鼠肾小球系膜增生、肾小球基底膜增厚均较轻,且系膜区扩大不明显,肾小球基底膜无明显增厚且厚度均匀,系膜细胞增多不显著,上皮细胞足突均匀分布.结论解毒通络保肾胶囊对糖尿病肾脏病变有保护作用,其机制可能是通过抑制肾组织肾素活性和血管紧张素转换酶,减少肾组织中血管紧张素Ⅱ含量,下凋糖尿病大鼠肾皮质转化生长因子β1mRNA表达,减少细胞外基质的沉积.     

中药生精汤对雄性不育大鼠睾丸转化生长因子-β1表达的影响

目的 观察中药生精汤对雄性不育大鼠睾丸转化生长因子-β1(TBF-β1)表达的影响.方法 40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、小剂量组、大剂量组,采用腺嘌呤制作雄性大鼠不育模型,小、大剂量组给予生精汤灌胃.造模后30 d处死大鼠,观察睾丸组织形态学变化;采用免疫组织化学法及图像分析系统检测睾丸内TGF-β1的平均光密度;同时测定大鼠体质量和睾丸质量.结果 大剂量组与模型组比较睾丸系数明显增加(P＜0.05);TGF-β1阳性表达主要见于早期精母细胞、圆形精子细胞以及支持细胞,生精汤大剂量组TGF-β1阳性的表达与模型组比较明显降低(P＜0.01).结论 生精汤通过下调TGF-β1的表达实现对睾丸生精功能的调节,对腺嘌呤所致的雄性大鼠不育有一定的治疗效果.     

络活喜对自发性高血压大鼠肾脏的保护作用

目的：为探讨钙离子拮抗剂——络活喜对高血压所致肾脏损害的保护作用。方法：采用体外灌注法给药，18只自发性高血压大鼠（SHR）随机分为治疗组和非治疗组。用9只魏-凯二氏大鼠（WKY）作对照，观察治疗前后血压及肾功变化情况，实验结束时取肾脏观察组织形态学变化。结果：与非治疗组比较，治疗组能有效地降低SHR的血压。治疗后血Bun,Scr及24小时尿蛋白与同期非治疗组比较有所下降，Ccr有所提高。肾脏组织形态学改变明显好于非治疗组。结论：络活喜不仅能明显降低SHR血压，而且可以改善肾功，减轻肾脏损害，对肾脏起保护作用。     

环孢素A对糖尿病大鼠晚期肾脏病理学改变的影响

目的 研究环孢素A(CsA)对链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病(DM)大鼠晚期肾脏病理学改变的影响.方法 将30只Wistar大鼠随机均分为正常对照组(CON组)、DM组、CsA组.一次性腹腔注射STZ55 mg/kg制备DM大鼠模型;喂养28周时给予CsA 3 mg·kg-1·d-1口服6周,DM组不予治疗.各组大鼠同步喂养34周后处死,取肾脏观察组织病理学改变,免疫球蛋白IgG、IgA、IgM沉积,核转录因子-κB(NF-κB)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的阳性表达及半定量分析.结果 STZ诱导的晚期DM大鼠肾脏存在病理学损伤和功能异常,免疫组化染色证实晚期DM大鼠肾脏有较多IgG、IgA和少量IgM沉积,NF-κB和TGF-β1呈阳性表达;CsA可减少肾脏免疫球蛋白沉积和细胞因子表达.半定量分析显示,DM组IgA、IgG及NF-κB、TGF-β1吸光度值显著高于CON组,CsA组虽显著高于CON组,但明显低于DM组(P<0.05或P<0.01).结论 糖尿病肾病的发生发展与高血糖、免疫球蛋白沉积及细胞因子表达关系密切,CsA对其有保护作用.     

甘草酸对CCl4肝纤维化大鼠肝组织smad7免疫组化表达的影响

目的：利用CCl4诱导肝纤维化动物实验模型，研究甘草酸治疗前后smad7的变化，揭示甘草酸抗肝纤维化的分子生物学机制。方法：将89只雄性大鼠随机分成3组：正常对照组24只；ccl4组33只；甘草酸治疗组32只。其中甘草酸治疗组腹腔注射o．2％的甘草酸氨水溶液，每周3次。应用免疫组织化学法检测不同时期（1、2、4．8周）3组大鼠Smad7的表达。结果；研究发现甘草酸在肝纤维化发生的各个阶段均能改善肝脏的病理变化，且其作用在肝纤雏化的后期更为明显。在甘草酸治疗组中Smad7的表达在第4周明显超过CCl4组。结论：甘草酸能改善CCl4诱导肝纤维化大鼠的病理变化。甘草酸抑制肝纤维化的作用机制之一是通过增强Smad7的表达实现的。     

5-氟尿嘧啶对瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad7和转化生长因子βⅠ型受体表达的影响

背景:很多实验已证明5-氟尿嘧啶应用于瘢痕疙瘩治疗可收到良好的效果.但作者所查针对5-氟尿嘧啶经由转化生长因子β信号通路作用于瘢痕疙瘩分子机制的报道较少.目的:实验拟观察5-氟尿嘧啶对瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad7和转化生长因子βⅠ型受体表达的影响.设计、时间及地点:细胞观察实验,于2007-02/10在安徽医科大学微生物教研室完成.材料:标本分别取自因瘢痕疙瘩入院的6例整形手术患者.方法:①瘢痕疙瘩组织成纤维细胞原代培养,取4～6代传代细胞加入5个不同浓度5-氟尿嘧啶(10,20,40,80,160 μmol/L)干预24,48,72 h.②待细胞长至80%汇合时,加入5-氟尿嘧啶配成10,20,30 μmol/L 3个药物干预浓度组,每组再加入转化生长因子β1继续培养.设空白对照和单纯加转化生长因子β1(5 μg/L)的阳性对照.主要观察指标:①利用四甲基偶氮唑盐法测定瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖能力.②蛋白免疫印迹检测各组瘢痕疙瘩成纤维细胞中Smad7和转化生长因子βⅠ型受体的表达.结果:①5-氟尿嘧啶浓度为10,20 μmol/L 作用24 h 时未发现成纤维细胞死亡,与空白对照组相比差异无显著性意义(P > 0.05);其他浓度下作用各组均有显著的成纤维细胞死亡现象(P < 0.01).②与空白对照组相比,转化生长因子β1组Smad7表达明显减弱,转化生长因子βⅠ型受体表达则显著增强(P均 < 0.01).③加入5-氟尿嘧啶干预后可显著增强Smad7的表达,且在5-氟尿嘧啶浓度为20 μmol/L 时的表达最强(P < 0.01).④不同浓度5-氟尿嘧啶对转化生长因子βⅠ型受体表达无明显影响.结论:5-氟尿嘧啶浓度为10～20 μmol/L 时无细胞毒性,与转化生长因子β1共同培养成纤维细胞,能够提高该细胞转化生长因子β1诱导的Smad7表达,但对于转化生长因子βⅠ型受体的表达没有明显影响.     

转化生长因子β细胞内信号转导负调控蛋白Smad6，7在肾间质纤维化大鼠肾脏表达与益气活血法的影响

目的:观察肾间质纤维化大鼠肾组织中转化生长因子β细胞内信号转导负调控蛋白Smad6,7表达变化与益气活血法中药制剂的影响。方法:实验于2006-12/2007-06在首都医科大学解剖与组织胚胎学系实验室完成。①实验动物:Wistar雄性大鼠30只,采用随机数字法随机分为模型组、中药大剂量组、中药中剂量组、中药小剂量组、西药蒙诺组、假手术组,每组5只。益气活血法中药提取液(生黄芪15g,当归10g,赤白芍10g,丹参30g,黄芩10g,车前草15g,牛膝15g等)经水提醇沉得4.4kg/L生药提取液。实验过程中对动物处置符合动物伦理学要求。②实验方法:其中前5组行单侧输尿管梗阻致肾小管间质纤维化模型手术。假手术组打开大鼠腹腔后分离左侧输尿管,并不结扎即关闭腹腔。中药大剂量组、中药中剂量组、中药小剂量组、西药蒙诺组,于手术前2d给予灌胃给药0.072mL/(kg·d),0.036mL/(kg·d),0.018mL/(kg·d),10mg/(kg·d),1次/d,连续2周。模型组及假手术组用相同体积的生理盐水灌胃。③实验评估:6组大鼠于术后14d麻醉后处死,观察梗阻肾组织病理改变,用免疫组化方法检测肾组织Smad6,7蛋白表达,通过医学病理图像分析系统对Smad6,7蛋白的积分光密度进行统计学分析。结果:30只大鼠全部进入结果分析。苏木精-伊红染色显示模型组肾小管上皮细胞萎缩,大部分肾小管管腔扩张,间质纤维组织增生,大量炎性细胞浸润,肾小球数目明显减少。中药大剂量组、中剂量组、西药蒙诺组较模型组肾间质炎性细胞浸润、纤维组织增生、肾小管扩张情况明显减轻。Smad6,7蛋白主要在肾皮质肾小管上皮细胞内表达,在模型组它们的表达较假手术组明显减弱且分布面积减少,两组间积分光密度差异具有统计学意义(P<0.05);中药中剂量组、大剂量组、西药蒙诺组Smad6,7蛋白的表达较模型组明显增强、面积增加,积分光密度差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:益气活血法可以通过诱导肾组织Smad6,7蛋白表达而抑制肾间质纤维化。     

Lack of nidogen-2 increases blood pressure, glomerular and tubulointerstitial damage in DOCA-salt hypertension

Background  Nidogen-2, an extracellular matrix protein, is ubiquitous in renal basement membranes linking the laminin and collagen IV networks. Nidogen-2-deficient (nidogen-2^−/–) mice do not exhibit a phenotype, and renal basement membranes appear normal. The functional role of nidogen-2 in the adult kidney under pathological conditions however remains unclear. We tested the hypothesis that nidogen-2 mediated cell-matrix interactions are important to maintain glomerular integrity and structure in renal hyperperfusion and hypertension.
Materials and methods  Two weeks after unilateral nephrectomy (UNX), desoxycorticosterone (DOCA)-salt hypertension was induced in nidogen-2^−/– mice and their wild type littermates for 6 weeks. Renal damage was assessed by means of semiquantitative scoring, morphometric analysis, immunohistochemistry and measurement of serum creatinine and albumin excretion.
Results  UNX alone resulted in a very mild increase in renal damage in nidogen-2^−/– mice compared to wild type animals. Following DOCA-salt treatment, blood pressure, serum creatinine and albumin excretion were significantly higher in nidogen-2^−/– than in wild type mice. In addition, nidogen-2^−/– mice showed increased mesangial cell hyperplasia and matrix expansion with higher expression of fibronectin and its receptor α8 integrin. Glomerular capillaries were significantly reduced in size and number.
Conclusions  We demonstrate that in both mild and severe glomerular damage, lack of nidogen-2 is associated with: (i) increased mesangioproliferation; (ii) higher mesangial matrix expansion; and (iii) reduction in glomerular capillary supply. These findings suggest a critical role for nidogen-2 in the maintenance of glomerular structure in the diseased kidney.     

Smad7在兔下颌骨牵张成骨过程中的表达

背景:有研究表明Smad7可结合并抑制骨形成蛋白受体的下游信号,而骨形成蛋白可促进牵张成骨过程中的骨愈合,并且Smad7对软骨形成起到抑制作用,但Smad7在牵张成骨中的作用机制尚不清楚.目的:利用种植型牵张器增高兔下颌牙槽嵴,观察下颌骨牵张成骨过程中Smad7的表达规律.方法:将雄性日本大耳白兔24只随机分为对照组4只,牵张成骨组20只,其中牵张成骨组再按牵张时间点不同再随机分为牵张成骨1 d,1,2,4和6周组,4只/组.选取牵张成骨组兔左侧下颌骨行牵张成骨,其间歇4 d,开始种植型牵张器垂直增高兔下颌牙槽嵴.各组分别于牵张成骨后1 d,1,2,4,6周取材,在牵张成骨侧下颌骨行骨密度测量,用免疫组织化学法观察兔下颌骨牵张过程中不同时期Smad7的表达和分布.结果与结论:Smad7在正常下颌骨组织中有少量表达,在牵张后1 d下颌骨中的Smad7表达高于对照组(P<0.05).牵张成骨后1,2和4周组的Smad7表达比牵张成骨后1 d组有所减少,但仍高于对照组,牵张成骨后6周时与对照组差异无显著性意义(P>0.05).牵张区下颌骨骨密度值在牵张成骨后1 d最低,1,2和4周组骨密度值相比对照组逐渐增高(P<0.01).提示Smad7在牵张成骨过程的不同时期表达不同,Smad7可能对牵张成骨早期的新骨形成起一定的促进调节作用.     

高糖对大鼠肾系膜细胞Smad2/3及Smad7表达的影响

目的:观察不同浓度高糖刺激后大鼠肾小球系膜细胞内Smad2/3和Smad7蛋白的表达,探讨糖尿病时肾脏Smad信号通路的改变。方法:将体外培养的大鼠肾系膜细胞分别设正常对照组(葡萄糖浓度5.6mmol/L)、20mmol/L高糖组、30mmol/L高糖组、甘露醇组。用细胞免疫荧光染色法及激光共聚焦显微镜检测各组细胞Smad2/3及Smad7蛋白的表达。结果:正常对照组系膜细胞Smad2/3蛋白表达较弱,Smad7蛋白表达较强。两高糖组Smad2/3表达较正常对照组强(P﹤0.05),呈浓度依赖性;Smad7表达较正常对照组弱(P﹤0.05),呈浓度依赖性。甘露醇组与正常对照组无明显差异(P﹥0.05)。结论:高糖可诱导肾系膜细胞Smad2/3蛋白表达增强,Smad7蛋白表达减弱。提示Smad信号通路参与了糖尿病肾病的发病机制。     

Smad7稳定转染胶质母细胞瘤细胞系的建立

目的建立Smad7稳定转染胶质母细胞瘤细胞株,并观测Smad7表达对U251细胞增殖的影响。方法应用脂质体将真核细胞表达质粒pCDNA3.0-Smad7和空载质粒pCDNA3.0转染人胶质母细胞瘤细胞。并在转染后绘制生长曲线以观测细胞增殖。结果RT-PCR和westem blot证实Smad7在转录和蛋白翻译水平上均呈高表达。Smad7转染后,细胞增殖速度减慢。结论Smad7稳定转染胶质母细胞瘤细胞株已成功建立,Smad7高表达可抑制胶质母细胞瘤细胞株的增殖。     

转化生长因子β1及其受体以及Smad4和Smad7在胃癌组织表达的临床病理学意义

目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)及其受体(TGF-βRⅡ)和Smad4、Smad7蛋白在胃癌组织中表达的临床病理学意义.方法 采用免疫组织化学方法检测109例胃癌、28例高度不典型增生、20例低度不典型增生、30例慢性萎缩性胃炎、29例肠上皮化生和21例正常对照的胃黏膜组织中TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7蛋白的表达变化.结果 在胃癌和不典型增生组织中TGF-β1、TGF-βRⅡ和Smad7蛋白表达均明显高于慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生和正常胃黏膜组织(P均<0.001).而Smad4蛋白在高度和低度不典型增生组织中虽呈高表达状态(细胞质染色分数分别为4.89±2.38、5.80±1.54;细胞核染色分数分别为3.89±1.52、3.80±1.33),但在胃癌组织中其表达水平(细胞质染色分数为2.41±2.27、核染色分数为2.02±2.14)又明显降低(P均<0.001).在胃癌组织中TGF-β1、TGF-βRⅡ和Smad7蛋白的表达在进展期胃癌(分别为4.36±2.66、3.05±1.93、4.84±3.06)高于早期胃癌(分别为2.93±1.85、2.17±1.87、4.14±2.46),差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05,P<0.05),而Smad4蛋白的表达则在早期胃癌中表达更高(P<0.001).同时,Smad4蛋白表达与肿瘤的大小(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.001)、组织学分期(T分期)(P<0.001)和临床分期(P<0.001)均有关系,而TGF-βRⅡ和Smad4蛋白的表达则与患者的5年生存率有密切关系(P<0.05,P<0.01).在蛋白表达相关性上,TGF-β1蛋白表达与TGF-βRⅡ和Smad7蛋白表达之间存在正相关性(r1=0.45,P<0.05;r2=0.49,P<0.05),而与Smad4蛋白的表达呈负相关(r=-0.21,P<0.05).结论 TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7蛋白共同参与胃癌的形成,且Smad4蛋白是TGF-β信号传导通路中的最关键因素.四种蛋白的检测对反映胃癌的侵袭、转移和预后是一个非常有意义的指标.     

白芍总苷对腹膜纤维化大鼠HMGB-1、Smad7的影响

目的:观察白芍总苷对腹膜纤维化大鼠HMGB-1、Smad7蛋白表达的影响。方法:选用健康SD大鼠32只,随机分为空白组、模型组、白芍总苷高剂量组、白芍总苷低剂量组,每组8只。用4.25%腹膜透析液每日腹腔注射和脂多糖间断腹腔注射进行大鼠腹膜纤维化造模。白芍总苷高剂量组每日给予白芍总苷200 mg/(kg·d)灌胃,白芍总苷低剂量组每日给予白芍总苷100 mg/(kg·d)灌胃;实验第30天结束后酶联免疫分析(ELISA)检测大鼠透析液中HMGB-1、Smad7的蛋白质表达情况。结果:模型组、白芍总苷高剂量组、白芍总苷低剂量组腹透液中HMGB-1水平与空白组相比有所增高,白芍总苷两组与模型组相比较,HMGB-1水平有所下降,但各组间差异无统计学意义(P>0.05)。模型组与空白组比较,腹透液中Smad7的含量显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。白芍总苷两组升高更为明显,与空白组相比,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组相比较,白芍总苷两组腹透液中Smad7水平明显上调,差异有统计学意义(P<0.05)。余各组间两两比较,腹透液中Smad7含量无统计学差异(P>0.05)。结论:白芍总苷可一定程度下调HMGB-1水平,但作用机理不确切,可能通过上调Smad7的表达来减轻大鼠的腹膜纤维化。     

苯那普利对阿霉素肾病大鼠肾皮质Smad3、Smad7表达的影响

目的 :评估苯那普利对阿霉素肾病大鼠肾皮质中Smad3、Smad7表达的影响。方法 :建立阿霉素肾病大鼠模型 ,药物组予苯那普利 10mg·kg-1·d-1灌胃。分别于第 4、7周取肾皮质 ,通过RT PCR半定量分析Smad7mRNA表达 ,通过光镜、电镜观察肾脏病理改变 ,用免疫组化法测定转化生长因子 β1(TGF β1)、Smad3、Smad7蛋白表达。结果 :Smad3、Smad7主要表达于肾小管上皮细胞 ,肾病组Smad7mRNA、蛋白的表达随病变加重而上调 ,Smad3蛋白表达下调 ,而苯那普利可抑制Smad7的上调和Smad3的下调。结论 :在阿霉素肾病大鼠肾皮质的小管病变进展中 ,Smads起着重要作用。苯那普利可通过调节Smads的表达而保护肾脏