多重PCR病原体分子检测技术在下呼吸道感染诊断中的应用价值

目的 分析多重PCR病原体分子检测技术在下呼吸道感染诊断中的应用价值.方法 随机选取2019年1月至2019年12月于两家医院接受治疗的128例下呼吸道感染患者作为研究对象,提取患者的痰液标本后分别使用多重PCR和直接免疫荧光法进行病原体检测,对比不同检查方式的检查结果.结果 128例患者经多重PCR检测后共检出阳性标...     

多媒体超高倍显微分析仪在诊断泌尿生殖系感染中的应用

目的研究超高倍显微分析仪在诊断泌尿生殖系感染中的应用价值。方法用清华同方多媒体超高倍显微分析仪检测3 544例门诊妇科和泌尿科患者阴道或尿道分泌物,并对部分标本与PCR法和培养法作对照分析。结果一种病原体感染者占54.56%,两种至四种病原体混合感染者占41.49%。超高倍显微分析仪病原体检出率占96.05%。超高倍显微分析仪对沙眼衣原体和解脲支原体的检出率与培养法和PCR法比较无显著性差异(P>0.05)。结论超高倍显微分析仪可同时动态观察多种病原体,对于多重混合感染患者可避免漏检。方法简便、快速、准确、直观,为泌尿生殖系感染的诊断、指导用药和疗效观察提供了可靠依据。     

单管多重PCR快速检测STD病原菌

目的建立一种同时检测解脲支原体(UU)、沙眼衣原体(CT)、淋病奈瑟菌(NG)三种病原体DNA的方法并用于临床标本检测。方法建立单管多重PCR体系,其结果与常规PCR法比较。结果可以一次性检测出解脲支原体、沙眼衣原体和淋病奈瑟菌。结论该法特异性好,单管多重PCR体系检测3种STD病原菌DNA的灵敏度最低为0.43 fg,与单独的PCR检测的灵敏度相同,将它做成体外基因诊断试剂盒能快速特异性指导单种和多重感染。     

巢式聚合酶链式反应检测脑脊液标本中病原体的方法评价

目的探讨巢式聚合酶链式反应(PCR)检测脑脊液标本中病原体的可行性,为疾病的快速临床诊断提供参考。方法源自细菌16S rRNA基因序列设计的巢式PCR技术方法,包括2对引物,2次PCR扩增,第1对引物首次PCR扩增脑脊液标本提取的核酸DNA,第2对引物再次PCR扩增,其DNA模板为第1轮PCR扩增产物。将第2轮PCR扩增产物进行测序,对序列进行比对分析,从而确定感染的病原体。使用DNA微量分光光度测定布鲁氏菌纯菌核酸DNA,将DNA进行倍比稀释,用于巢式PCR敏感性测试。结果巢式PCR能够检测的最低限约为1个核酸DNA拷贝数。应用巢式PCR检测40份临床患者的脑脊液标本,扩增结果表明有37份标本获得约1 460 bp的预期扩增条带(不同细菌扩增片段有差异),测序比对结果显示,检出脑膜炎奈瑟菌7份、产碱假单胞菌1份、草假单胞菌22份、嗜麦芽窄食单胞菌2份、肺炎链球菌1份、未知细菌性病原体4份、未检出3份。结论巢式PCR能够快速检测与鉴定脑脊液标本中的细菌性病原体。     

检测呼吸道感染非细菌性病原体的三种标本比较

目的 选择适宜的呼吸道标本，以方便呼吸道感染非细菌性病原体病原学诊断应用。方法 采集呼吸道感染患者的鼻咽分泌物(NPS)、痰和支气管肺泡灌洗液(BLF)为检测标本，应用聚合酶链反应技术(PCR)检测腺病毒(ADV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、肺炎衣原体(CP)和肺炎支原体(MP)4种非细菌性病原体，比较这3种呼吸道标本检测病原体结果的差异。结果 ADV、RSV、CP和MP的检出率，NPS标本分别为10．4％、29．2％、33．3％和18．8％，痰标本分别为10．4％、25．0％、35．4％和16．7％，BLF标本分别为8．3％、22．9％、27．1％和16．7％。上呼吸道感染和下呼吸道感染时，不同标本检测病原体的阳性率有一定的差别。结论 NPS、痰和BLF均可用做PCR检测呼吸道感染非细菌性病原体的标本，其中NPS容易获得、采集安全、能够满足病原学诊断需要，可以作为首选标本。     

成人流感样病例13种病原体检测情况及多重PCR毛细电泳片段分析法检测的临床应用

目的 探究成人流感样病例中13种病原体分布情况及多重聚合酶链反应(PCR)毛细电泳片段分析法在病原体检测中的应用价值.方法 收集2019年12月至2020年2月北方地区189份流感样病例咽拭子标本,采用多重RT-PCR与毛细电泳片段分析法联用技术得到病原体的检测结果.检测病原体包括甲型流感病毒(InfA)、人腺病毒(H...     

血培养阴性血流感染影响因素及实验室检测研究进展

血流感染是指病原微生物侵入血流引起的播散感染,包括菌血症和败血症,可造成严重的临床后果,病死率较高。血培养作为诊断血流感染的金标准,具有很高的特异性。但采血前使用抗菌药物、采血量不足、血培养样本延迟上机处理等分析前因素,苛养微生物和无法常规培养的病原体的存在,导致血培养的阳性率较低。通过富集阳性血培养瓶中的病原体,利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）技术和荧光原位杂交技术（FISH）进行病原鉴定,可有效提高血流感染的诊断效率。血清抗体检测、病原16S rRNA检测、实时荧光聚合酶链反应（PCR）、多重PCR、下一代测序（NGS）等技术能进一步提高血液标本中病原的检出率,是诊断血流感染的可靠方法。文章就血培养阴性结果的影响因素及血流感染实验室检测进展进行综述。     

聚合酶链反应诊断细菌和真菌性中枢神经系统感染的临床价值

目的探讨聚合酶链反应(PCR)在细菌和真菌性中枢神经系统感染快速诊断中的临床价值。方法收集137例中枢神经系统感染患者留存的脑脊液进行DNA提取,采用细菌和真菌通用引物扩增病原体DNA并进行序列测定,对比同期脑脊液培养方法与PCR方法的检测结果。结果 137份脑脊液标本中PCR检测到细菌50株,真菌6株,脑脊液培养检测到细菌38株,真菌5株;PCR检测法灵敏度为40.9%,特异度为100%,阳性预测值为100%,阴性预测值为38.2%,诊断效率为56.7%;传统培养法则分别为31.4%、100%、100%、34.7%、44.4%。PCR的灵敏度、阴性预测值和诊断效率均明显优于传统培养方法,特异度和阳性预测值与培养法相当,两方法鉴定菌种的符合率为97.7%。结论通用引物PCR扩增法具有快速、特异、灵敏、准确等特点,对细菌和真菌性中枢神经系统感染的病原学快速诊断具有重要的应用价值。     

荧光偏振技术同步检测沙眼衣原体解脲脲原体方法的研究

沙眼衣原体(CT)、解脲脲原体(UU)是常见泌尿生殖系感染等病原体，其早期检测对临床诊断治疗十分重要。传统的单一检测这两种病原体工作繁琐、费用高。本研究建立了荧光偏振与模板指导的末端延伸反应检测技术(TDI-FP)，在同一反应体系应用多重引物，检测CT、UU感染，大大提高了检测时效。     

阴道感染三种病原菌多重PCR检测方法的建立及其应用研究

目的 探讨阴道感染病原体多重PCR快速检测白念珠菌、加德纳菌和阴道滴虫的方法建立及其临床应用。方法 根据白念珠菌EO3基因、加德纳菌ITS-23srRNA基因及阴道滴虫TVK3～TVK7基因设计特异性PCR引物,采用加热煮沸裂解法制备DNA模板,进行多重PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳检测分析,在同一体系内完成三种阴道常见病原体的快速检测。结果 经特异性试验证明所建立的方法能特异地检测出白念珠菌125 bp,加德纳菌433 bp和阴道滴虫300 bp的目的片段,而其它非目的菌株均不能扩增出相应片段; 敏感性试验证实白念珠菌为10 cfu/ml,加德纳菌为10 cfu/ml,阴道滴虫为20 cfu/ml; 对30份已知临床标本和10份模拟混合标本进行检测均可检测出相应的病原体。结论 实验证明该研究所建立的白念珠菌、加德纳菌和阴道滴虫的多重PCR体系,具有灵敏度高、特异度强,可一步同时检测阴道分泌物中三种病原体,用于阴道感染的早期快速诊断。     

联合检测病原体在妇科炎症的临床应用

目的联合检测妇科患者泌尿生殖系统病原体[包括:细菌性阴道病(Bacterial Vaginolis,BV)、沙眼衣原体(Ch1amydia trachomatis,CT)、支原体(指寄居于生殖道的支原体)、淋病奈瑟氏双球菌(Ncisseria gomorrhoeae,NC)、念珠菌(Candida albicans,CA)、阴道毛滴虫(TrichomonaSba baginalis,TV)等等]的阳性率,提供临床对妇女泌尿生殖系统炎症的临床诊断与治疗。方法对宫颈拭子、白带标本检查病原体,统计各种病原体单纯感染和混合感染比例。结果单纯感染的百分率明显低下混合感染百分率,混合感染在妇科阴道炎中占主导地位。结论临床对所有妇科分泌物标本迸行联合检测病原体,提高检测阳性率,达到明确病因,对症下药。     

液相芯片技术检测儿童急性呼吸道感染病原体的研究

目的探讨液相芯片技术快速检测呼吸道病原体的可行性,为重大传染病原体核酸快速应急检测平台的建立提供实验依据。方法采用xTAG~?Respiratory Viral Panel Fast v2试剂盒对74例咽拭子临床标本进行检测,结果与实时荧光定量PCR(RT-PCR)进行比较。结果 74例咽拭子临床标本经液相芯片技术与RT-PCR检测,阳性率分别为77.0%和68.9%,差异有统计学意义(P0.05);其中呼吸道合胞病毒、鼻病毒、肠道病毒、甲型H1N1流感病毒、腺病毒及人博卡病毒检出率差异均有统计学意义(P0.05)。结论液相芯片技术可以较准确地鉴定呼吸道病原体和检测混合感染的临床标本,具有快速、高通量等优势,可应用于呼吸道病原体的快速应急检测。     

多重核酸检测技术和传统检测方法对胃肠道感染性病原体检测的比较

目的比较一种商品化的多重核酸检测试剂盒和传统检测方法对胃肠道感染性病原体检测的性能。方法收集135例有胃肠道感染症状患者的135份粪便标本,分别用多重核酸检测技术和传统检测方法进行检测。结果多重核酸检测技术和传统检测方法检出至少一种病原体的检出率分别是81.5%和33.3%,其中多重核酸检测技术可检出12种病原体,传统检测方法可检出5种病原体;传统方法检测的阴性标本中,用多重核酸检测技术可以检出48.1%的阳性标本;多重核酸检测技术和传统检测方法分别检出31.1%和0的混合感染标本;多重核酸检测技术检测的结果中,门诊、住院和急诊患者标本中病毒的阳性检出率均是最高,分别是15.6%,31.1%和3.7%。传统检测方法和多重核酸检测技术方法对住院的标本中病原体的检出率均高于急诊和门诊患者。采用配对资料χ~2检验进行统计学分析,两种方法的阳性检出率,混合感染标本的阳性检出率及不同环境中阳性标本检出率,差异均具有统计学意义(χ~2=45.57～58.887,P0.01)。结论多重核酸检测技术相对于传统检测方法阳性检出率更高,为临床上诊断胃肠道感染提供一种可能有效的检测方法。     

聚合酶链反应技术在检测不同类型标本常见病原体中的应用

PCR技术的问世,为医疗卫生事业的发展带来了翻天覆地的变化,传统以免疫法和培养法检测病原体,PCR技术将其诊断带入了更为准确、快捷的通道。目前,PCR技术已广泛应用于大中型医疗机构的病原体检测,本文从不同的标本采集类型着手,分析PCR技术对临床常见病原体的诊断价值。     

多重RT-PCR与毛细电泳联用技术在儿童下呼吸道感染病原体检测中的应用

目的采用多重逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)与毛细电泳联用技术对13种儿童呼吸道常见病原体痰液标本进行检测,研讨其在儿童下呼吸道感染病原体检测中的价值。方法采集2019年12月至2020年1月该院38例因下呼吸道感染住院患儿的痰液标本,应用多重RT-PCR技术检测13种呼吸道病原体,同时采用直接免疫荧光法检测7种常见呼吸道病毒抗原。结果38例下呼吸道感染住院患儿的痰液标本中,多重RT-PCR检出至少一种病原体阳性36份,检出率94.7%(36/38),其中乙型流感病毒检出最多,阳性20例(52.6%),其次检出呼吸道合胞病毒14例(36.8%)阳性,甲型流感病毒H1N1(2009)8例(21.0%)阳性,鼻病毒6例(15.8%)阳性,副流感病毒4例(10.5%)阳性,其中检出2种或2种以上呼吸道病原体混合感染14份,检出率为36.8%(14/38)。选取与直接免疫荧光法(DFA)检测相同的7种病毒进行比较,DFA检出阳性16份,检出率仅有42.1%(16/38),多重RT-PCR阳性检出率高于DFA方法,两种方法病毒阳性检出率差异有统计学意义(P<0.01)。结论多重RT-PCR与毛细电泳联用方法是一种高效快速、高通量、准确的检测技术;同DFA比较特别在流感病毒检测方面具有更高灵敏度,可同时检测更多病原体,能指导临床了解儿童下呼吸道感染病原并进行及时有效治疗。     

呼吸道病原体检测平台应用进展

呼吸道感染(RTIs)是临床感染性疾病的主要死因。随着医学技术的高速发展,呼吸道病原体检测技术取得了巨大进展,其中高通量测序技术平台在呼吸道罕见病原体诊断中发挥了重要作用。该文基于传统病原体检测技术、生物芯片技术以及二代测序技术,结合呼吸道病原体检测平台的应用,从技术原理、临床应用展开述评,以期为呼吸道病原体高通量检测的临床实践提供参考。     

探讨荧光探针定量PCR检测淋球菌、沙眼衣原体和解脲支原体的临床评价

目的 探讨荧光探针定量(FQ-PCR)法检测三种性病即淋球菌(NG)、沙眼衣原体(CT)、解脲支原体(UU)的临床价值和了解本地区三种性病病原体感染现状。方法 用荧光探针定量(FQ-PCR)法对三种性病病原体DNA进行定量测定。结果 2607例标本其检出率分别为NG 4，6％．CT 7.8％。UU 11.2％，总检出率为43.5％。结论 应用FQ-PCR法具有较高的灵敏度度特异性、且定量准确结果可靠：1例标本可同时检测多种病原体DNA的可靠、准确、敏感的方法。     

qPCR快速检测痰标本中MRSA的临床应用

目的探讨实时荧光定量PCR(qPCR)法快速检测痰液标本中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的临床应用。方法痰标本经裂解获取DNA,应用qPCR法检测mecA和Sa442基因,同时对痰标本进行常规培养鉴定。结果以痰培养鉴定结果为金标准,在887份合格痰标本中,PCR检测MRSA的灵敏度为95.7%,特异度为91.2%,阳性预测值为37.8%,阴性预测值为99.7%。结论 qPCR法可用于快速检测痰标本MRSA,排除MRSA的定植和感染。     

Filmarray全自动医用PCR分析系统检测临床疑似呼吸道感染患者的数据分析

目的 回顾性分析Filmarray全自动医用PCR分析系统对呼吸道感染的诊断潜力和临床应用.方法 选取该院2016年8月至2019年6月临床疑似呼吸道感染的231例门诊、住院患者,比较Filmarray全自动医用PCR分析系统检测20种常见呼吸道相关病原体的结果,分析住院患者临床资料,评价Filmarray全自动医用PCR分析系统在临床应用中的价值.结果 共检测住院患者160例,呼吸道病原体阳性率为38.13％,其中呼吸科患者检测总例数最多,占61.25％,儿科患者阳性率最高,为77.78％;共检测门诊患者71例,阳性率为36.62％,急诊科患者检测总例数最多,占32.39％.呼吸科住院患者与非呼吸科住院患者的年龄、吸烟、慢性阻塞性肺疾病、体温、咳嗽、肌肉痛或疲劳、咳痰,以及白细胞计数、B型脑钠肽水平比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 应用Filmarray全自动医用PCR分析系统能快速检测常见呼吸道感染相关病原体,对呼吸道感染性疾病的诊断及治疗有重要意义.     

桂北地区9种呼吸道病原体IgM抗体检测的临床意义

目的了解桂北地区不同年龄、月份患者9种呼吸道病原体的感染和流行情况,为临床诊治提供病原学依据。方法回顾分析该院从2017年1月1日至2018年1月31日疑似呼吸道感染患者血清5 883例,采用间接免疫荧光法检测9种呼吸道病原体IgM抗体。结果 5 883例血清标本检出阳性2 267例,阳性率为38.53%,其中肺炎支原体(MP)1 635例,阳性率最高(27.79%)。其次为副流感病毒(PIVs)240例(4.07%)。多重感染阳性251例,占阳性总数的11.07%,主要是MP合并其他病原体感染。9种呼吸道病原体在不同年龄段阳性率比较差异均有统计学意义(P0.05)。肺炎支原体(MP)、嗜肺军团菌(LP)和副流感病毒(PIVs)不同月份阳性率比较差异有统计学意义(P0.05)。2018年1月乙型流感病毒(INFB)检出率明显增高。结论桂北地区引起呼吸道感染的主要病原体是MP和流感病毒,不同年龄、月份的病毒感染谱为临床诊治和流行病学研究提供病原学依据。