分枝杆菌液体培养MALDI-TOF MS快速直接鉴定法的建立与评价

目的建立并评价分枝杆菌液体培养基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)直接鉴定技术。方法收集2014年6月至2016年5月首都医科大学附属北京同仁医院1 466例呼吸科住院患者痰标本,进行BactecTMMGITTM960分枝杆菌快速液体培养(简称液体培养),以其中报警并经萋-尼抗酸染色确认为抗酸杆菌的105例(无重复病例)为研究对象,对比本实验室自行设计并改良的"同仁"分枝杆菌液体培养直接鉴定法(培养液经特殊前处理后直接进行MALDI-TOF MS鉴定)及传统鉴定法(培养液转种于L-J固体培养基,得到菌落后再进行MALDI-TOF MS鉴定),并通过16S rRNA基因及16S~23S rRNA基因间隔区测序验证。结果以基因测序鉴定为金标准,液体培养直接鉴定与传统鉴定法结果一致率为100%;二者鉴定至属的准确率均为100%(105/105),鉴定至种的准确率均为99.05%(104/105)。液体培养后直接鉴定与传统鉴定法MALDI-TOF MS鉴定分值≥2.000分的比例差异无统计学意义(χ~2=2.952,P=0.086)。4例分值1.700分的菌株谱图杂峰较多而有效峰较少。结论本实验室自行设计的"同仁"分枝杆菌液体培养MALDI-TOF MS直接鉴定法鉴定结果准确,缩短了分枝杆菌培养和鉴定的时间,且可保证生物安全,对分枝杆菌感染的快速诊断和及时治疗意义重大,适用于我国各级临床实验室。     

MALDI-TOF MS在病原微生物鉴定中的临床意义

目的 分析基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)在病原微生物鉴定中的临床意义.方法 收集医院2019年6月至12月225株临床分离菌株,均行Walkaway96、Phoenix-100、MALDI-TOF MS鉴定.分析三种方法对革兰阳性(G+)菌及革兰阴性(G-)菌的鉴定结果并比较.结果 225...     

MALDI-TOF MS自建数据库对非结核分枝杆菌鉴定的应用价值

目的 构建基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)非结核分枝杆菌(NTM)鉴定数据库并评价其应用价值.方法 收集2018年1月—2021年5月临床分离NTM菌株72株,分别采用直接同源序列比对法和MALDI-TOF MS法进行菌种鉴定,MALDI-TOF MS以自建数据库+MBT DB5989数据...     

MALDI-TOF MS在临床微生物检验中的应用

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)是一种软电离质谱,适用于分析蛋白质等生物大分子物质,可用来绘制微生物的蛋白质图谱,达到鉴定的目的。基于MALDI-TOF MS的蛋白质谱技术具有快速、准确、敏感性高、高通量等特点,目前已应用于细菌和真菌的鉴定,其在微生物耐药性分析、分型和毒力研究等科研领域的应用也初有成效,尚有巨大的发展空间。本文就以MALDI-TOF MS为代表的蛋白质谱技术在微生物检验和科研中的应用作一综述。     

MALDI-TOF MS直接涂靶法快速鉴定丝状真菌的临床应用

目的评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱直接涂靶法（质谱直涂法）快速鉴定丝状真菌的临床应用价值。方法对2010年1月至2017年12月首都医科大学附属北京同仁医院临床标本中分离的133株丝状真菌分别进行形态学、基因序列分析及质谱直涂法鉴定，并将鉴定结果进行分析比较。 采用SPSS 16.0软件进行统计分析，计数资料采用χ2检验。结果以基因序列分析结合形态学鉴定的结果为标准，将133株丝状真菌鉴定到种、复合群和属的鉴定率:质谱直涂法分别为64.66%、79.70%和96.24%，基因序列分析则分别为69.17%、83.46%和99.25%，而形态学鉴定分别为68.42%、84.21%和93.23%。 质谱直涂法与另外两种方法的种、复合群和属的鉴定率的差异无统计学意义（χ2值分别为0.611、0.625、2.728和0.516、0.915、1.206，P值均＞0.05）。 质谱直涂法将77株曲霉属中61.04%、88.31%和98.70%的菌株分别鉴定到种、复合群和属，将14株青霉属中64.29%和92.86%的菌株分别鉴定到种和属，还将42株其他丝状真菌中的71.43%和92.86%的菌株分别鉴定到种和属；因数据库中真菌种类不足，致3.76%（5/133）的真菌无效鉴定。结论MALDI-TOF MS直接涂靶法鉴定丝状真菌的能力可与形态学鉴定和基因序列分析相媲美，因其快速且操作简便，临床应用值得推广。     

MALDI-TOF MS在人工关节置换术后病原菌快速鉴定中的价值

目的 了解基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)联合HB&L微生物培养系统(简称HB&L系统)在人工关节置换术后病原菌快速鉴定中的价值.方法 收集104例人工关节置换术后患者关节液样本,分别接种于血培养瓶及常规培养琼脂平板,将阳性培养物分别进行2种直接MALDI-TOF MS鉴定、常规MALDI-...     

MALDI-TOF MS在临床微生物样本直接检测中的应用

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（ MALDI-TOF MS）是近年来发展起来的一项新兴的微生物鉴定技术,与传统的生化表型鉴定方法和分子生物学方法相比,MALDI-TOF MS具有操作简单、快速、准确和经济的特点。鉴于其对培养出的纯菌落鉴定的准确性和稳定性,MALDI-TOF MS也可被应用于临床样本的直接检测,包括阳性血培养瓶、中段尿、脑脊液等。本文主要就MALDI-TOF MS用于直接检测临床样本的原理、流程、鉴定效能及其研究进展等方面做一综述。     

渗透压选择性裂解法在MALDI-TOF MS直接鉴定血培养阳性标本中的应用

摘要：目的?采用渗透压选择性裂解法联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)直接鉴定阳性血培养瓶中病原菌，为临床早期诊断和治疗提供可靠依据。方法?收集2018年12月至2019年3月杭州迪安医学检验中心微生物室送检的阳性血培养瓶179例，采用渗透压选择性裂解法直接进行MALDI-TOF MS检测。结果?血培养阳性标本经裂解离心、甲酸萃取后得到的谱峰丰度最高，鉴定分值最优；174份单种菌血培养的种、属水平鉴定的符合率分别是67.8%(118/174)、85.1%(148/174)。革兰阴性杆菌的种、属水平鉴定的符合率是74.7%(62/83)、91.6%(76/83)，革兰阳性球菌的种、属水平的鉴定符合率是69.4%(50/72)、80.6%(58/72)，革兰阳性杆菌鉴定种水平的准确率显著低于革兰阴性杆菌(P<0.05)和革兰阳性球菌(P<0.05)。结论?MALDI-TOF MS采用渗透压裂解法对血培养阳性标本直接鉴定，具有简单、快速的优点，但其对菌种鉴定的准确性以及前处理步骤优化方面仍然需要进一步研究。     

MALDI-TOF MS在短期培养后胸腹腔积液中细菌快速鉴定的应用

目的 对临床胸腹腔积液样本进行短期培养,使用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)进行细菌鉴定,以建立可用于胸腹腔积液的快速细菌检测方法。方法 收集360例细菌感染的胸腹腔积液(胸腔积液163例、腹腔积液197例),所有样本分为三份:一份常规培养并使用微生物鉴定仪检测; 第二份直接离心集菌后用MALDI-TOF MS鉴定; 第三份与营养肉汤混合并短期培养2 h,离心洗涤后用MALDI-TOF MS鉴定。以微生物鉴定仪结果作为金标准,评估MALDI-TOF MS对短期培养后胸腹腔积液中致病菌的鉴定效能。结果 MALDI-TOF MS对短期培养后两种样本的正确检出率分别为94.5%和90.9%,总的未检出率只有7.5%; 单一细菌生长的样本鉴定结果与常规方法符合率达到94.1%; 能从混合细菌生长的样本中准确鉴定优势菌。结论 经过短期培养后的胸腹腔积液样本,MALDI-TOF MS检出率高,结果可靠; 所需时间比常规培养缩短至少12 h,可为临床准确快速提供病原菌报告。     

MALDI-TOF MS在细菌耐药性检测中的应用进展

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)已经发展成为微生物实验室鉴定菌种的常规工具。MALDI-TOF MS在微生物学耐药性检测中的应用尚处于研究阶段。该文就MALDI-TOF MS在细菌耐药性检测中的方法及其适用病原体的研究现状做一综述。     

MALDI-TOF MS微生物鉴定的室内质量控制体系建立

基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDITOF MS)具有快速、准确、低成本、操作简单的特点,是临床微生物鉴定的首选技术之一。MALDI-TOF MS的准确鉴定依赖于良好的仪器状态、有效的菌株蛋白质抽提及规范的操作与结果判读原则,任一环节的失误均直接影响鉴定结果的准确性。因此,严格的室内质量控制对MALDI-TOF MS微生物鉴定至关重要。该实验室根据6年的应用经验及研究,建立了一套较为完整的MALDI-TOF MS微生物鉴定室内质量控制体系,覆盖硬件、软件及人工操作各个环节,内容包括仪器参数设置、维护与校准,菌株与试剂的准备以及谱图采集与结果判读分析,使鉴定结果异常时可迅速溯源并及时处理。     

国产MALDI-TOF MS系统microTyper MS对革兰阴性菌的鉴定性能评估

目的 评估国产基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)系统microTyper MS鉴定革兰阴性菌的性能.方法 使用国产MALDI-TOF MS系统microTyper MS与进口质谱系统VITEK MS系统同步鉴定该实验室储存的标准菌株及2018年6月至2019年6月临床分离的革兰阴性菌株.鉴定结...     

MALDI-TOF MS微生物鉴定数据库应用研究进展

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)具有灵敏、准确、高通量等特点,已经逐步应用于临床、食品卫生、环境等方面的微生物鉴定。但目前MALDI-TOF MS数据库中收录的大多是较常见微生物种类,对于新发现及罕见微生物以及来自不同地域和环境的微生物收录不足甚至缺乏,导致微生物鉴定的准确性受到影响。该文对MALDI-TOF MS的工作原理和应用领域、数据库的现状以及扩展数据库的重要性、基本步骤及其注意事项作一综述。     

MALDI-TOF MS在临床微生物实验室的应用研究进展

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flightmass spectrometry,MALDI-TOF MS)是近年发展起来的一种新型软电离质谱技术,目前不但应用于肿瘤、风湿性关节炎、阿尔茨海默病等的诊断,还可用于微生物鉴定,为微生物的鉴定带来了革命性的变化。MALDI-TOF MS是简便快速、高通量、低成     

革兰染色与MALDI-TOF MS在快速鉴定儿童阳性血培养病原菌种类中的应用

目的 分析革兰染色与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）在快速鉴定儿童阳性血培养病原菌种类中的应用价值,为儿童血流感染诊断提供快速、准确的实验室依据。方法 收集2019年2月—2020年10月首都医科大学附属北京儿童医院临床送检的儿童阳性血培养瓶,同时进行革兰染色镜检、MALDI-TOF MS快速鉴定和转种培养,以转种培养后的鉴定结果为标准,对革兰染色镜检和MALDI-TOF MS快速鉴定结果进行比较。结果 共收集166例儿童阳性血培养样本,其中单一菌样本占97.6%(162/166),2种菌样本占2.4%(4/166)。以转种培养后的鉴定结果为标准,162例单一菌样本革兰染色镜检结果符合率为97.5%(158/162),其中革兰阳性菌符合率为97.9%(93/95),革兰阴性菌符合率为96.8%(61/63),酵母样真菌符合率为100.0%(4/4);MALDI-TOF MS快速鉴定结果符合率为85.2%(138/162),其中革兰阳性菌符合率为81.1%(77/95),革兰阴性菌符合率为92.1%(58/63),酵母样真菌符合率为75.0%(3/4)。4例2...     

MALDI-TOF MS鉴定马尔尼菲篮状菌的实验条件优化

目的 构建用于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)鉴定马尔尼菲篮状菌的数据库,并探索用于MALDI-TOF MS鉴定马尔尼菲篮状菌的最佳培养条件和前处理方法 .方法 利用8株马尔尼菲篮状菌构建自建数据库,比较不同培养基[沙保弱葡萄糖琼脂培养基(SDA)、沙氏葡萄糖肉汤培养基(SDB)]、培养...     

MALDI-TOF MS直接鉴定血培养阳性病原的临床应用

目的 了解基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)直接快速检测血培养报阳样本的可行性.方法 收集同济大学附属同济医院报阳血培养样本682例,从血培养瓶直接抽取血液至分离胶采血管离心富集细菌后,采用MALDI-TOF MS进行直接鉴定(快速质谱法).同时对报阳血培养标本进行涂片镜检及转种培养后,分别采...     

MALDI-TOF MS技术在快速鉴定革兰阴性杆菌血流感染中的应用

目的 探讨VITEK MS质谱仪基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)在快速鉴定革兰阴性(G^-)杆菌血流感染中的应用。方法 收集昌吉回族自治州人民医院2020年1月—2021年12月检测的血培养阳性瓶,经涂片染色确认为单一G^-杆菌的163份标本,采用分离胶促凝管短时培养法,在规定时间(1 h、2 h、4 h、6 h)内使用VITEK MS质谱仪MALDI-TOF MS技术进行快速鉴定,并采用传统转种培养VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统验证鉴定结果。结果 与传统转种培养法结果比较,除4份未给出鉴定结果外,其余159份样本经MALDI-TOF MS技术鉴定结果均相符,在规定时间(1 h、2 h、4 h、6 h)内成功鉴定率分别为78.6%(125/159)、85.5%(136/159)、96.2%(153/159)、100.0%(159/159)。结论 采用MALDI-TOF MS技术结合分离胶促凝管短时培养法,对病原菌的鉴定时间可由原来的1～2 d缩短至1～6 h,该方法对血培养阳性G^-...