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敲低CD2相关蛋白的表达对足细胞黏附和胞质伸展功能的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 观察敲低足细胞CD2相关蛋白(CD2AP)表达对细胞黏附和胞质伸展功能的影响,并探讨其机制。 方法 用RPMI 1640培养基33℃下培养小鼠未分化足细胞系,转染针对CD2AP的小分子干扰RNA(siRNA),设无特异靶位点的scrambing 序列即control siRNA转染组作对照。48 h后将转染的足细胞制备成单细胞悬液,接种于预铺有Ⅳ型胶原蛋白的96孔板内,33℃下培养90 min后检测足细胞的贴壁率和细胞的伸展面积;流式细胞仪检测抑制CD2AP后足细胞的凋亡率以及在不同氨基核苷嘌呤霉素(PAN)刺激下足细胞的凋亡率;激光共聚焦显微镜下检测F肌动蛋白(F-actin)的分布变化;Western印迹和免疫共沉淀检测nephrin蛋白的表达及其磷酸化水平。 结果 转染CD2AP siRNA足细胞的黏附率为41.72%±6.07%,显著低于对照组64.46%±8.53%(P < 0.05);细胞伸展的面积>200 μm2的比例(55.86%)亦显著低于对照组(73.61%)。转染CD2AP siRNA后48 h足细胞的凋亡率高于对照组[(5.73±0.61)%比(3.26±0.45)%,P < 0.05]。100 mg/L的PAN能明显诱导足细胞的凋亡,减少足细胞的黏附率(P < 0.05)。敲低CD2AP的表达后足细胞F-actin的分布发生明显的变化,nephrin蛋白表达和磷酸化水平下降(P < 0.05)。 结论 敲低CD2AP的表达使足细胞易于凋亡,影响细胞的黏附功能。足细胞骨架蛋白的紊乱和nephrin信号通路的抑制可能是足细胞黏附和伸展功能下降的机制。 相似文献
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肾脏固有细胞在肾脏结构重塑中的作用研究进展 总被引:4,自引:3,他引:1
肾脏硬化及其伴随的肾脏功能丧失依然是当今肾脏病研究领域的挑战性课题之一。近年研究认为肾脏固有细胞在肾脏病变过程中表现活跃,作用复杂。深刻认识肾脏固有细胞在生理、病理条件下的改变,将有助于深化对肾脏疾病发生机制及防治的理解。我们主要对各种肾脏固有细胞在生理、病理条件下的可塑性及其在肾脏重塑中的作用进行综述。一、肾脏固有细胞的组成肾脏固有细胞(residentcell)种类较多。肾小球中主要有:血管内皮细胞、肾小囊壁层上皮细胞、肾小囊脏层上皮细胞(足细胞)、系膜细胞。肾小管间质中主要有:肾小管上皮细胞、间质成纤维细胞和… 相似文献
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CD2AP与慢性肾脏病 总被引:2,自引:0,他引:2
慢性肾脏病主要表现为尿蛋白排泄增加,肾脏功能进行性减退,最终可导致慢性肾衰竭发生.近年来随着慢性肾脏病尿蛋白分子机制研究的深入开展,已经发现肾小球脏层上皮细胞,即足细胞在慢性肾脏病蛋白尿产生及发展过程中起重要作用.以往认为血管基膜是主要的滤过屏障,目前认为足细胞裂孔隔膜的分子结构和功能是维持肾小球滤过屏障的主要因素,有多种重要的足细胞相关蛋白与其功能密切相关[1],CD2相关蛋白(CD2 associated protein,CD2AP)为其中重要蛋白之一,研究发现CD2AP 不仅参与T 细胞的活化,而且对肾脏功能起着至关重要的作用[2],其异常表达可能是引起人类肾脏疾病的诱因之一[3],本文拟针对CD2AP 的结构特征,其表达异常与慢性肾脏病足细胞病变及蛋白尿等内容作一综述. 相似文献
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目的观察敲低CD2相关蛋白(CD2AP)基因表达对足细胞增殖和分裂的影响。方法采用RPMI 1640培养基,在33℃培养永生化小鼠足细胞系。以PKH-26红色荧光染料标记足细胞后,用Metafectene转染试剂转染针对CD2AP的小分子干扰RNA(siRNA)。转染24 h后以流式细胞仪检测转染效率;48 h后用RT-PCR和Western印迹检测转染后CD2AP mRNA和蛋白表达情况;72 h后以流式细胞仪检测足细胞增殖指数及细胞周期;用Oregon Green 488标记的Paclitaxel直接标记足细胞内的微管蛋白;用激光共聚焦显微镜检测双核及多核足细胞的比例。结果流式细胞仪结果显示,CD2AP特异性siRNA转染效率为66.27%。转染siRNA 48 h后,CD2AP mRNA和蛋白表达分别下降57%和39%。转染72 h后,足细胞增殖指数显著下降(P〈0.05),G2/M期的细胞数量显著增多(P〈0.05)。共聚焦显微镜下可见转染CD2AP siRNA后,部分细胞有丝分裂后不能分离,双核及多核足细胞的比例显著增加(P〈0.05)。结论敲低CD2AP基因的表达能阻碍细胞有丝分裂后期的细胞分离,抑制足细胞的增殖能力。 相似文献
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足细胞裂孔隔膜与信号传导 总被引:2,自引:0,他引:2
足细胞足突间的裂孔隔膜(sht diaphragm,SD)是肾小球滤过屏障最重要的组成部分。直到近年,才通过对一些遗传性或先天性肾病综合征(NS)的研究先后确定了多个位于SD的蛋白分子,如nephrin、podoein、CD2AP、ZO-1、FAT和NEPH1等,并把这些分子组成的复杂结构称为“SD复合体”(SDeomplex)。随后,在一些获得性NS和肾病动物模型发现,这些足细胞分子的表达和分布也存在异常。可见,SD以“静态分子筛”(static molecular siever)的形式在肾脏的超滤中起着关键作用。 相似文献
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肾小球血管上皮细胞,也称足细胞,是一种特殊终末分化细胞。足细胞可分为:细胞体,初级突起,足突。微管和中间丝构成足细胞体和初级突起的支架。微丝则是足突的细胞骨架。微丝在同一个足细胞的相邻足突间形成一个高的拱状袢,在袢的弯曲处,微丝连接于初级突起的中间丝和微管上[1]。 相似文献
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目的:探讨舒洛地特通过对膜性肾病(membranous nephropathy,MN)大鼠肾脏中CD2AP(CD2-associated pro-tein,CD2AP)表达的影响,从而对MN起到保护作用.方法:将SD大鼠40只,随机分为4组,正常对照组(NG)、模型组(MG)、低剂量舒洛地特组(LG,10 mg·kg-... 相似文献
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目的探讨足细胞分子nephrin在自发性高血压大鼠(SHR)肾脏的表达及作用。方法监测不同时期SHR与京都大鼠(wistar-kyotorats,WKY)尾动脉收缩压(SBP)、尿β2-微球蛋白(β2-MG)、尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)水平;免疫组化、RT-PCR方法检测nephrin蛋白及mRNA的表达,观察肾脏的病理改变。结果与WKY组相比,SHR组SBP、β2-MG、BUN、SCr升高,nephrin蛋白及mRNA表达量下降,且nephrin含量与尿β2-MG呈负相关。SHR组肾脏发生病理改变。结论足细胞分子nephrin在SHR肾小球表达减少,可能是导致足细胞裂隙膜损伤,引起尿β2-MG排泄水平增加,肾功能受损,肾脏病理改变的基础。 相似文献
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目的 探讨腺苷酸环化酶相关蛋白2(CAP-2)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其在HCC发生发展中的作用.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)和免疫组织化学染色方法检测CAP2在正常肝脏、肝硬化、早期HCC及进展期HCC组织中的表达情况.结果 RT-PCR及Western blot显示,HCC组织中CAP2的表达明显升高,且进展期HCC较早期HCC升高的更为明显,而在正常肝及肝硬化组织中CAP2几乎不表达或仅有微弱表达.免疫组化染色检查结果与此相同,并且中低分化HCC的CAP2表达较高分化的HCC强.结论 CAP2在HCC中是一个上调表达的基因,可能参与了HCC的多步骤发展过程,有望成为今后HCC诊断的一个有价值的分子标记物. 相似文献
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During the past 3 years there have been significant advances in our understanding of the biology of the glomerular podocyte. In particular, two proteins, CD2-associated protein and nephrin, have been identified as critical podocyte proteins that are both required for normal glomerular filtration. In addition to supporting the idea that the slit diaphragm plays a crucial role in glomerular function, these results suggest novel insights into the pathogenesis of glomerular diseases. The present review addresses these recent advances and discusses the implications of the findings. 相似文献
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Podocytes are highly differentiated epithelial cells that form interdigitating foot processes with bridging slit diaphragms (SDs) that regulate renal ultrafiltration. Proteinuria is the most common clinical manifestation of glomerular diseases. Losartan is the traditional renin–angiotensin system (RAS). However; the precise mechanisms underlying the beneficial effects of Losartan on podocytes are still unknown. This study tested the hypothesis that podocytes were exposed to Angiotensin II (Ang II) to induce apoptosis and Proteinuria. Losartan directly reduces the rate of apoptotic podocytes induced by Ang II. Our results showed that apoptotic podocytes may be related to the decrease of CD2AP mRNA and protein expressions, Losartan reduced the apoptosis and Proteinuria by stabilizing the CD2AP mRNA and protein expressions. In this study, we explored the role of CD2-associated protein in podocyte apoptosis and Proteinuria induced by Ang II. Our findings provide some possible clues for further exploring the pharmacological targets to the proteinuria. 相似文献
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Interaction of endogenous nephrin and CD2-associated protein in mouse epithelial M-1 cell line 总被引:15,自引:0,他引:15
Palmén T Lehtonen S Ora A Kerjaschki D Antignac C Lehtonen E Holthöfer H 《Journal of the American Society of Nephrology : JASN》2002,13(7):1766-1772
The interpodocyte slit diaphragm is an essential structure for maintaining the functional glomerular filtration barrier. The slit diaphragm is proposed to consist of an interacting meshwork of nephrin molecules. Earlier studies with tagged proteins have suggested that the intracellular part of nephrin interacts with CD2-associated protein (CD2AP). This study was addressed to show by coimmunoprecipitation and pulldown assays an interaction of endogenously expressed nephrin and CD2AP in the kidney-derived mouse epithelial M-1 cell line, to provide evidence of the domain(s) of CD2AP involved in the interaction, and to show the localization of the respective proteins by immunoelectron microscopy in kidney cortex. In addition, the localization of CD2AP, podocin, alpha-actinin 4, and nephrin was studied in human kidney glomeruli and in M-1 cells by immunofluorescence microscopy. The results indicate an endogenous interaction between nephrin and CD2AP in M-1 cells and suggest that this interaction is mediated by the third Src homology 3 (SH3) domain of CD2AP. We also show by immunoelectron microscopy that nephrin and CD2AP are detected at the slit diaphragm area, supporting their interaction in the glomeruli in vivo. In addition, nephrin was found to partially colocalize with CD2AP and podocin in double immunofluorescence microscopy, confirming the close proximity of these proteins and proposing that these proteins may belong to nephrin-associated protein complex in glomeruli. The existence of nephrin, CD2AP, podocin, and alpha-actinin 4 enables further characterization of their relationship in M-1 cells. 相似文献
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目的:观察肿瘤坏死因子-α诱导蛋白-8样分子2(TIPE2)在CD4<'+>CD25<'+>调节性T细胞(CD4<'+>CD25<'+>Treg)中的表达.方法:免疫磁珠法分离正常BALB/C小鼠脾脏CD4<'+>CD25<'+>Tregs,流式细胞术鉴定CD4<'+>CD25<'+>Treg的纯度.激光共聚焦荧光法检... 相似文献
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目的:探讨CD24蛋白在肾细胞癌中的表达及与肾细胞癌临床特征的关系。方法:采用免疫组织化学SP法检测了60例肾细胞癌组织中CD24蛋白的表达。结果:在60例肾细胞癌组织中,41例(68.33%)CD24蛋白表达阳性。随着肿瘤细胞病理分级、临床分期的升高,CD24蛋白表达阳性率随之增高,且各组间比较差异有统计学意义(P〈0.05)。远隔肿瘤旁正常肾组织无CD24蛋白表达。结论:CD24蛋白表达与肾细胞癌临床分期、病理分级呈密切正相关(P〈0.05)。CD24蛋白在肿瘤的发生、发展中起重要作用,且可能成为判断肾细胞癌患者无病生存的预后指标。 相似文献
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目的研究CD257/CD256及其受体在发生排斥反应移植肾组织中的作用。方法收集1987年1月至2007年7月间因移植肾失功切除的移植肾组织标本46份和2009年行程序性活组织检查的移植肾组织标本10份。运用免疫组织化学法分别检测了CD256、CD257、BAFF-R、BCMA、TACI及CD138、CD3和CD20等分子的表达。采用图像分析软件Histo Quest Analysis和统计分析软件SPSS16.0对表达结果进行统计分析。结果依据Banff 2005标准,对移植肾组织标本进行病理学分组:抗体介导的排斥反应(ABMR)组15例、T细胞介导的排斥反应(TCMR)组16例和未明原因病例(UAC)组15例。免疫组织化学结果显示,CD256、CD257及其受体BAFF-R、BCMA和TACI均表达于ABMR组和TCMR组肾小管上皮细胞的胞膜或胞浆,而UAC组和正常对照组无表达或弱表达。CD257在ABMR组、CD256在ABMR组和TCMR组的表达与其他组比较差异有统计学意义(P〈0.05)。BAFF-R和BCMA在ABMR组的表达与其他组比较差异有统计学意义(P〈0.05);而TACI在ABMR组和TCMR组的表达与UAC组和正常对照组比较差异有统计学意义(P〈0.05)。CD138+细胞除浸润于肾组织间质外,也浸润于肾小管上皮细胞胞浆或胞膜。CD138+细胞在ABMR组的表达水平高于其他组(P〈0.05)。CD3+细胞主要浸润于肾组织间质,以散在分布为主,在ABMR组和TCMR组均有表达,但在TCMR组表达水平更高。CD20+细胞亦主要分布于肾组织间质,成簇分布为主,在ABMR组和TCMR组的表达水平相似。相关性分析显示,CD256与BCMA、TACI和CD138+细胞具有显著相关性;而CD257与BAFF-R、BCMA、TACI和CD138+细胞均具有显著相关性。结论 CD256信号与CD257信号可能均参与了ABMR进程。 相似文献
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CD44v6和p16蛋白表达与肾癌转移的关系 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:探讨评估肾细胞癌预后因素的指标。方法:应用免疫组化方法对60例肾癌组织进行CD44v6和p16蛋白检测。结果:在肾癌细胞中CD44v6和p16蛋白表达阳性率分别为66.7%和51.7%。肾细胞癌分级、分期和淋巴结转移与CD44v6高表达和p16低表达相关(P<0.05);CD44v6表达与p16表达呈负相关(r=-0.43,P<0.01)。结论:CD44v6高表达和p16低表达,对判断肾细胞癌恶性程度、预测淋巴结转移有一定的参考价值。 相似文献
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水通道蛋白2(AQP2)属于膜整合蛋白,在肾脏内髓部集合管分布较多,主要受抗利尿激素(AVP)调节,是调节体内水代谢平衡的重要物质基础.近年研究表明除受抗利尿激素调节外还受渗透压、酸碱度、肾上腺皮质激素、药物、饮食、神经系统等因素影响.本文就影响水通道蛋白2基因和蛋白水平表达的因素作一综述. 相似文献