青霉素过敏病人外周血淋巴细胞IL-4、IFN-γmRNA的表达

目的 :研究青霉素类过敏反应和细胞因子IL 4、IFN γ的关系。方法 :采用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测 1 4例青霉素G(PG)过敏病人 (速发型、迟发型过敏病人 7例 )和 1 1例对照者外周血淋巴细胞经青霉素G刺激后IL 4、IFN γmRNA的表达。结果 :速发型青霉素过敏反应组有 4例 ,迟发型青霉素过敏反应组、正常对照组各有 1例外周血淋巴细胞中IL 4mRNA有表达 ;速发型过敏反应组有 6例 ,迟发型过敏反应组有 2例 ,正常对照组有 1例淋巴细胞内有IFN γmRNA表达。速发型过敏反应组IFN γ表达明显高于迟发型过敏反应组、正常对…     

酮替酚对鸡蛋过敏特应性皮炎患儿淋巴细胞增殖反应的抑制作用

作者探讨了鸡蛋过敏特应性皮炎(AD)患儿外周血单个核细胞(PBMCs)对卵白蛋白(OA)刺激的增殖反应并观察了酮替酚(KF)对此反应的影响.结果提示AD患儿的PBMCs增殖反应显著高于健康儿童;KF可剂量依赖性地抑制鸡蛋过敏AD患儿PBMCs对OA刺激的增殖反应,且这一效应可通过KF抑制T细胞的作用而得以实现.KF对植物血凝素(PHA)和破伤风类毒素(TT)诱导的PBMCs增殖反应无抑制作用.这说明KF只抑制食物过敏AD患者PBMCs对食物抗原的特异性增殖反应.     

雷帕霉素对人外周血T淋巴细胞上BTLA表达的影响

目的:探讨雷帕霉素(rapamycin,RPM)对人外周血T淋巴细胞上B、T淋巴细胞弱化子(BTLA)表达的影响,为其在器官移植和自身免疫性疾病中的应用提供实验依据。方法:采用Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单核细胞(PBMCs),然后利用免疫磁珠分离技术分离PBMCs中的T细胞。用刀豆蛋白A刺激、活化人外周血T细胞。用MTT比色法测定T细胞的增殖。用ELISA法测定细胞培养上清液中IL-2、IFN-γ的水平。用流式细胞术检测T细胞上BTLA的表达。结果:用不同浓度(10~1 000 mL)的RPM处理的T淋巴细胞上BTLA的表达无显著差别;而与未经RPM处理组比较差别显著(P<0.01)。ELISA检测结果显示不同浓度的RPM与未处理组相比均能显著抑制IL-2和IFN-γ的分泌(P<0.01),并可以剂量依赖的方式显著抑制T淋巴细胞增殖(P<0.01)。结论:RPM对BTLA的表达影响较小,而对T淋巴细胞增殖和IL-2、IFN-γ的分泌有较强的抑制作用,提示RPM适宜用于器官移植排斥反应和自身免疫性疾病的治疗。     

卡介苗刺激后CD8~+T细胞活化、增殖及其调节

目的:探讨卡介苗(BCG)刺激后,结核菌素试验阳性(PPD+)正常人外周血单个核细胞(PBMCs)中CD8+T细胞的活化、增殖、细胞因子产生及调节性T细胞(Treg)对其调节作用。方法:体外用BCG刺激PPD+正常人PBMCs,检测CD8+T细胞的细胞因子产生、活化和增殖。纯化后获得调节性T细胞(Treg)和CD25-细胞,检测Treg对CD8+T细胞增殖的调节作用。结果:BCG诱导CD8+T细胞表达CD69和CD25等活化分子。在低剂量IL-2存在的条件下,BCG诱导CD8+T细胞发生增殖,且增殖的CD8+T细胞大部分表达Granzyme-B。体外BCG短期刺激PBMCs后,CD8+T细胞几乎不产生IFN-γ、IL-2和TNF-α。此外,调节性T细胞抑制CD8+T细胞增殖。结论:BCG诱导CD8+T细胞活化、增殖和表达颗粒酶,Treg抑制CD8+T细胞增殖。     

STUDY ON PERIPHERAL BLOOD MONONUCLEAR CELL(PBMC) PROLIFERATIVE RESPONSES TO DIFFERENT HCV ANTIGENS IN PATIENTS WITH HEPATITIS C

为探讨丙型肝炎(HC)病人细胞免疫功能和丙型肝炎病毒(HCV)的致病机制及机体对其免疫保护作用,收集24例HC病人(急性3例,慢性21例),用3H-TdR掺入法研究病人外周血单个核细胞(PBMC)对不同HCV抗原增殖反应,并用流式细胞仪(FACS)检测了PBMC中CD4+、CD8+淋巴细胞亚群在HCV抗原刺激后的变化.结果:HC病人PBMC对HCV合成肽CP9,NS和基因重组抗原C,E1,E2,NS3刺激后出现不同程度增殖反应,刺激指数(SI)分别为1.69±0.51,1.61±0.54,1.68±0.58,1.49士0.44,1.44±0.44和1.33±0.33.3例急性HC中2例病人的PBMC对HCV抗原呈有效增殖反应(SI≥2.1),且血清HCVRNA阴转伴ALT正常.细胞表型分析显示:增殖的细胞表型是CD4+淋巴细胞,而CD8+淋巴细胞增殖反应较弱.结论:HC病人PBMC确实存在对HCV抗原的增殖反应;CD4+淋巴细胞比CD8+淋巴细胞增殖反应要强,急性HC病人PBMC对HCV抗原有效的增殖反应预示可能有良好的临床愈合.     

1型糖尿病患者外周血IL-35表达及其对Th9细胞的调控作用

目的观察1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus, T1DM)患者外周血IL-35的表达及其对Th9细胞的调控作用。方法入组31例T1DM患者和13例对照者, 分离血浆和外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)。ELISA检测血浆IL-35和IL-9水平, 实时定量PCR法检测PBMCs中IL-35亚基EBI3和IL-12p35亚基以及Th9转录因子PU.1 mRNA相对表达量, 流式细胞术检测PBMCs中Th9细胞比例。使用重组人IL-35刺激T1DM患者和对照者PBMCs, CCK-8法检测细胞增殖, 并检测Th9细胞比例、PU.1 mRNA相对表达量、IL-9分泌水平的变化。分选11例T1DM患者PBMCs中的CD4+CCR4-CCR6-CXCR3-细胞和CD8+T细胞, 使用重组人IL-35刺激CD4+CCR4-CCR6-CXCR3-细胞, 将104个CD4+CCR4-CCR6-CXCR3-细胞与105个CD8+T细胞共培养, ELISA法检测培养上清中IFN-γ和TNF-α水平, 酶联免疫斑点试...     

中国恒河猴外周血淋巴细胞免疫表型及功能研究

目的通过研究中国恒河猴外周血淋巴细胞免疫表型及其功能, 为以恒河猴为模型的研究提供数据参考。方法通过优选抗体克隆和荧光配色, 确定了主要淋巴细胞亚群检测和T细胞功能检测Panel, 并用此方法分析15只健康中国恒河猴外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中T、B、NK等多种细胞亚群的比例, 以及在非特异性刺激条件下T细胞分泌细胞因子的能力。结果成功建立了两套多色流式Panel, Panel 1可同时检测细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T-lymphocyte, CTL)、滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cell, Tfh)、调节性T细胞(regulatory T cells, Treg)、B细胞和NK细胞等多种淋巴细胞亚群, Panel 2可检测多种T细胞亚群功能和免疫检查点分子的表达。中国恒河猴PBMCs中主要淋巴细胞亚群比例的平均值分别为T细胞(75.32±7.73)%、B细胞(13.22±7.50)%、NK细胞(0.88±0.48)%、Tfh细胞(0.73±0.27)%、Treg细胞...     

哮喘肺组织和外周血淋巴细胞端粒酶逆转录酶表达上调及其意义

目的:研究支气管哮喘(哮喘)肺组织和哮喘病人外周血淋巴细胞端粒酶逆转录酶(TERT)mRNA和蛋白质的表达,并探讨其在哮喘发病机制中的作用及其临床意义。方法:用核酸原位杂交和免疫组织化学方法检测了6只豚鼠哮喘模型组织、6只正常对照组肺组织、16例哮喘发作期和 14例正常人外周血淋巴细胞 TERT mRNA和蛋白质的表达。结果:哮喘豚鼠肺组织中气道上皮细胞和淋巴小结,以及哮喘病人外周血淋巴细胞TERT mRNA和蛋白质表达强度显著高于正常对照组,哮喘病人外周血淋巴细胞 TERT mRNA和蛋白质表达的阳性指数与哮喘病人 FEV1/预计值、MVV/预计值比值呈显著负相关,与血清IgE水平呈显著正相关。结论:(1)TERT在哮喘豚鼠气道上皮、肺淋巴小结和人体外周血淋巴细胞中表达上调;(2)检测人体外周血液中淋巴细胞对TERT表达强度有望可以作为衡量哮喘病情的指标。     

青霉素皮肤试验与特异性IgE

目的 :探讨青霉素皮试与青霉素过敏病人血清中特异性IgE抗体相关性 ,评价皮试的准确性与特异性 ,改进和完善该类药物过敏的诊断方法。方法 :收集青霉素皮试阳性史者、青霉素皮试阳性即刻者和青霉素皮试阴性用药后出现过敏症状者三种过敏病人血清 ,共计 2 5 9例 ,采用放射过敏原吸附试验法 (ra dioallergsorbenttest,RAST)检测青霉素过敏病人血清中特异性IgE抗体。结果 :青霉素过敏病人血清特异性IgE抗体总阳性率为 62 .2 % (1 61 / 2 5 9) ;青霉素皮试阳性史者、青霉素皮试阳性即刻者和青霉素皮试阴性用药后出现过敏症状者三组之间特异…     

尖锐湿疣患者外周血T淋巴细胞上活化抗原的表达

目的 :探讨尖锐湿疣 (CA)患者外周血CD6 9和HLA DR分子在T淋巴细胞上表达的变化及其意义。方法 :采用免疫荧光三标记流式细胞术检测 30例CA患者外周血T细胞CD6 9和HLA DR抗原的表达 ,并以 31例正常人作为对照。结果 :CA患者外周血CD3 T细胞CD6 9的表达 (6 6 3%± 3 13% )与正常人对照组 (5 12 %± 1 6 4 % )相比 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,CD4 T细胞CD6 9的表达与正常人对照组相比 ,差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,CD8 T细胞表达CD6 9水平 (4 6 1%± 3 0 9% )明显高于对照组 (2 6 7%± 1 31% ,P <0 0 1) ;患者组CD3 T细胞中HLA DR 细胞 (2 1 6 5 %± 8 84 % )比对照组 (13 5 6 %± 5 15 % )显著增高 (P <0 0 0 1)。结论 :CA患者外周血T淋巴细胞的激活以CD8 T细胞为主 ,其免疫激活状态在抗病毒感染中起着重要作用。     

T-ALL及T细胞株相关TCR Vβ基因谱系和克隆性分析

目的了解T细胞-急性淋巴细胞白血病(T-ALL)患者外周血中的T细胞及T细胞株的TCR Vβ基因谱系及其克隆性增殖情况。方法利用RT-PCR方法扩增6个不同的T细胞株和6例初发未治T-ALL病人外周血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的互补决定区3(CDR3)，PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性，部分T细胞株的单克隆PCR产物进一步进行序列分析。结果与正常人外周血表达全部24个Vβ亚家族不同，6例T-ALL病人分别表达5～12个Vβ亚家族。6例病人均存在1个或多个Vβ亚家族的寡克隆或双克隆增殖T细胞，另外，还有一些Vβ亚家族多克隆模式发生改变，呈现寡克隆性增殖的趋势。T细胞株多显示为表达一个Vβ亚家族的单克隆T细胞，不同T细胞株的CDR3长度和序列不尽相同。结论T-ALL患者外周血T细胞的TCR Vβ谱系出现限制性改变，均可检测到克隆性增殖T细胞，尚需进一步鉴定其性质(肿瘤性或抗原特异性增殖)，对于检测微小残留病变和设计抗白血病独特型疫苗均有一定的意义。     

青霉素类药物之间交叉过敏反应

目的 :探讨青霉素类抗生素之间交叉过敏反应性 ,并分析交叉过敏反应与药物化学结构之间的关系。方法 :收集青霉素过敏者血清 397例。采用放射过敏原吸附试验法 (radioallergsorbenttest,RAST) ,检测青霉素过敏病人血清中 8种主、次要抗原决定簇 ,分别为青霉素G(BPO、BPA)、青霉素V(PVO、PVA)、氨苄西林 (APO、APA)和阿莫西林 (AXO、AXA)特异性IgE抗体 ,分析血清中特异性IgE抗体的种类与过敏药物的关系。结果 :397例青霉素过敏病人血清特异性IgE抗体总阳性 2 34例 ( 5 8.9% )。 1～ 8种抗原决定簇特异性IgE抗体的阳性率分别…     

SEB活化的人外周血T细胞CD25,CD69的表达

本文用超抗原葡萄球菌肠毒素B(SEB)诱导外周血淋巴细胞增殖。结果显示出微量超抗原能诱导外周血淋巴细胞的增殖,大量的增殖反应发生在SEB刺激后的第5天,增殖的细胞是CD4~+T细胞,它们由刺激前的27％增加到42％。外周血活化的T细胞不依赖外源性IL-2:大量内源性IL-2的存在抑制T细胞的增殖反应。伴随CD4~+T细胞的增殖,CD25和CD69分子表达明显增加。提示SEB能改变外周血T细胞表面的分子表达。     

粒细胞集落刺激因子调节T淋巴细胞免疫功能的实验研究

目的研究粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对T淋巴细胞免疫功能的调节作用。方法以15例健康供者为对象,在其应用G-CSF前后,用流式细胞仪(FCM)检测外周血T淋巴细胞表面免疫标记、Annexin V及细胞内细胞因子的表达,用淋巴细胞转化试验检测T淋巴细胞的增殖反应。结果供者用G-CSF后,CIM^ 、CD8^ 细胞数无明显变化,CIM^ 、CD8^ 细胞内IFN-γ表达降低,IL-4表达增高;T细胞对丝裂原的增殖反应降低。Th1和Th2细胞表面Annexin V的表达无显著性差异。结论G-CSF制了丝裂原刺激T细胞的功能,使供者T细胞向Th2型细胞转化,细胞凋亡不是Th1／Th2转化的机制。     

青霉素类过敏病人血清中特异性IgE与IL-4RαQ576R等基因多态性

目的 :探讨青霉素类过敏病人血清中特异性IgE与IL 4RαQ5 76R等多态性位点之间的关系。方法 :采用RAST法检测了 2 48例青霉素类过敏病人和 1 0 1例正常人血清中的八种特异性IgE抗体 (BPO PLL、PVO PLL、APO PLL、AXO PLL、BPA PLL、PVA PLL、APA PLL、AXA PLL) ;采用聚合酶链反应 限制性片段多态性法 (PCR RFLP)检测了 1 5 8例过敏病人和 90例正常对照的IL 4RαQ5 76R、IL 4C 5 89T、IL 1 3R1 3 0Q、IL 4 IL 1 3 SNP3、IL 4 IL 1 3 SNP4、FcεRIβE2 3 7G多态性位点的基因型。结果 :过敏病人特…     

口腔鳞癌患者淋巴细胞对人疱疹病毒6型增殖应答受损

目的研究口腔鳞癌患者淋巴细胞对人疱疹病毒6型（HHV-6）特异性增殖应答,初步探讨HHV-6在口腔鳞癌发病机制中的作用。方法间接免疫荧光法（IIF）检测血浆中抗HHV-6IgG;免疫微磁珠分离CD4^＋T及CD8^＋T细胞;3H-TdR法检测CD4^＋T和CD8^＋T细胞及PBMCs的增殖水平;FACS分析CD4^＋C25^＋调节性T细胞（Treg）的比例。结果口腔鳞癌组血浆中抗HHV-6IgG阳性数为8/8,正常对照组为12例（12/20）;口腔鳞癌组PBMCs及CD4^＋T细胞对HHV-6的增殖水平显著低于HHV-6潜伏感染组与未感染组（P〈0.05）;HHV-6潜伏感染组PBMCs及CD4^＋T细胞对HHV-6的增殖水平显著低于未感染组（P〈0.05）;口腔鳞癌组外周血中CD4^＋C25^＋Treg比例明显高于HHV-6潜伏感染组与未感染组（P〈0.05）。结论口腔鳞癌患者的HHV-6特异性CD4＋T细胞增殖应答减弱,可能在口腔鳞癌的发生发展中起一定作用。     

哮喘患者外周血T淋巴细胞对VIP反应性的研究

目的:比较哮喘患者和正常对照者外周血T淋巴细胞对血管活性肠肽(VIP)的反应性差异。方法:分离缓解期哮喘患者和正常对照者外周血T淋巴细胞,以[³H]-TdR掺入率测定T淋巴细胞的增殖反应,以放射免疫法测定细胞内cAMP浓度(i),探讨VIP对ConA刺激细胞增殖反应的影响及其对i的调节作用在两种不同来源T淋巴细胞间的异同;此外还观察了Forskolin和NaF对上述来源细胞i影响差异。结果:两种来源T淋巴细胞对ConA的增殖反应相似(P＞0.05),然而,VIP对正常对照者T淋巴细胞的这种增殖反应的抑制效应却明显大于哮喘者T淋巴细胞(P＜0.01);这两种来源T淋巴细胞在静息时i基本相近,但VIP和NaF分别作用后对照组T淋巴细胞i增加幅度显著大于哮喘者T淋巴细胞;Forskolin作用后上述两种细胞i增加幅度相似(P＞0.05)。结论:在哮喘者VIP抑制ConA所致T淋巴细胞增殖能力减弱,可能与Gsα功能低下致其受体功能不全有关。     

毛细胞白血病(HCL)NK活性减低:细胞水平分析

毛细胞白血病(HCL)是以毛细胞(HC)浸入骨髓、外周血和脾脏为特征的淋巴细胞增殖性疾病。仅仅最近,人们才提出足够的根据证明HC是B淋巴细胞产生的。尽管在这一增殖性疾病中含有大量的相当成熟的B淋巴细胞,但在未治疗的HCL病人,其T细胞亚群的分布却明显的不平衡。著者用~(51)Cr释放试验和单细胞毒性试验     

CD80分子共刺激T细胞联合苯乙酸钠抗肿瘤的实验研究

目的:研究分化诱导剂苯乙酸钠处理肝癌细胞后,其对CD80(B7-1)分子活化的T细胞杀伤敏感性的变化。方法:将CD80共刺激的人T淋巴细胞与苯乙酸钠处理的肝癌细胞共同培养,用噻唑蓝法(MTT)检测T细胞粘附肿瘤细胞和杀伤肿瘤细胞活性,取上清测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)。结果:苯乙酸钠处理肝癌细胞BEL-7402和SMMC-7721后,T细胞对其杀伤敏感性明显增加(P＜0.01),明显增加T细胞与肿瘤细胞之间的粘附性(P＜0.05)和T细胞产生TNF-α的能力(P＜0.05)。结论:苯乙酸钠处理肝癌细胞能增加T细胞对其杀伤活性。     

直接免疫荧光技术对人体B淋巴细胞膜表面免疫球蛋白检测的探讨及其应用

本文就检测B淋巴细胞SmIg的若干方法学和某些影响因素进行了探讨,用直接免疫荧光技术鉴定了由AET-SRBC-玫瑰花法和尼龙毛法分离的人外周血中的T和B淋巴细胞,胎儿脐带血中的T和B淋巴细胞,中期培养建株的人淋巴细胞,以及部分病人包括系统性红斑狼疮(SLE)和进行性系统性硬化症(PSS)外周血中的SmIg~ 细胞百分率。 结果表明,16例正常人外周血B淋巴细胞百分