POMHEX可抑制小鼠精子运动和获能

目的 探究抗肿瘤药物POMHEX对成熟小鼠精子功能的影响。方法 将小鼠精子在体外暴露于POMHEX(0.1～100μmol/L),通过计算机辅助精液分析系统评估精子活动率和前向运动精子百分率；伊红-苯胺黑染色法检测精子存活率；荧光素-荧光素酶系统检测精子ATP水平；蛋白质印迹实验检测精子获能相关蛋白质酪氨酸磷酸化；考马斯亮蓝G250染色检测精子顶体反应。结果 在不影响存活率的条件下，0.1μmol/L及以上浓度POMHEX可降低小鼠精子活动率(P<0.01)和前向运动精子百分率(P<0.05);1μmol/L及以上浓度可抑制小鼠精子ATP水平(P<0.01)和获能过程蛋白质酪氨酸磷酸化的增加。POMHEX虽然不影响小鼠精子的自发顶体反应，但在5μmol/L及以上浓度会抑制由钙离子载体A23187诱导的顶体反应(P<0.01)。结论 抗肿瘤药物POMHEX在体外可抑制小鼠精子运动和获能，对小鼠精子造成生殖毒性。提示接受POMHEX治疗的患者可提前进行生育力保存。     

钙调蛋白抑制剂对小鼠精子获能影响的研究

目的:探讨钙调蛋白是否参与小鼠精子获能过程。方法:用50、100、200μmol/L浓度的钙调蛋白抑制剂W7和10、20、30μmol/L浓度的钙调蛋白抑制剂卡米达佐(CZ)分别与小鼠精子孵育2h,通过金霉素染色法计算出B型精子百分率。并用100μmol/L钙调蛋白抑制剂W7和10μmol/LCZ分别与小鼠精子孵育2h后,再加入5μmol/L孕酮诱发顶体反应,计算精子顶体反应百分率。结果:不同浓度的W7和CZ作用小鼠精子,B型精子百分率呈浓度依赖性方式下降,与对照组比较,均有显著性差异(P<0.05)。顶体反应率与对照组相比均有极显著差异(P<0.01)。结论:钙调蛋白参与小鼠精子获能,是精子获能过程中的关键蛋白。     

Phalloidin对钙离子载体A23187诱导的人精子顶体反应的作用

目的:探讨F-肌动蛋白在人精子顶体反应(AR)过程中的重要作用及可能机制。方法:将每例标本分为A、B、C、D、E 5组,共30例。以链球菌溶血素O(SLO)、Phalloid in、钙离子载体A23187分别处理各实验组人精子,其中A:A23187 3μmol/L;B:Phalloid in 40μmol/L+A23187 3μmol/L;C:SLO 0.5 U/m l+A23187 3μmol/L;D:SLO0.5 U/m l+Phalloid in 40μmol/L+A23187 3μmol/L;E:不添加任何试剂。分别采用罗丹明标记山豌豆凝集素(Rhodam ine-PSA,10μg/m l)荧光染色检测其AR,计算各组AR发生率(AR%)。结果:在5个实验组中,除A组与B组比较差异无显著性(P>0.05)外,其余各组两两比较差异均具有显著的统计学意义(P<0.01)。结论:Phalloid in对质膜完整的人精子AR发生率无影响。而在添加SLO的人精子模型中,Phalloid in较对照组能显著降低人精子AR发生率,提示F-肌动蛋白的聚合作用对人精子AR的发生具有重要意义,并且主要发生在精子顶体的内部。     

白藜芦醇对人精子冷冻损伤的保护作用

目的:通过在人精子冷冻保护液中添加白藜芦醇,研究其对冻融后精子质量和功能的影响。方法:选择正常精液与少弱精子症样本各50例,液化后的精液样本分别与甘油-卵黄-柠檬酸盐(GEYC)冷冻保护液或含有30μmol/L白藜芦醇的GEYC冷冻保护液混匀。冷冻复苏前后,进行精子活力、存活率及顶体反应分析。采用丙二醛(MDA)及活性氧(ROS)检测试剂盒评估精子脂质过氧化程度及ROS水平。通过罗丹明123(Rh123)染色法及TUNEL试验检测精子线粒体膜电位及DNA损伤。结果:在正常精液和少弱精子症样本组中,与各组冷冻前新鲜精液相比,冻融后前向运动精子百分率、总活力、存活率、线粒体膜电位及顶体反应率均显著下降(P0.05),而精子ROS、MDA水平和DNA碎片指数(DFI)均显著升高(P0.05)。冷冻保护液中添加30μmol/L白藜芦醇后,正常精液组前向运动精子百分率[(43.1±6.3)%]、总活力[(56.9±7.4)%]、存活率[(67.5±5.6)%]、线粒体膜电位[(63.4±7.5)%]及顶体反应百分率[(26.3±4.7)%]较冷冻对照(未加白藜芦醇)的前向运动精子百分率[(32.7±4.8)%]、总活力[(44.8±6.9)%]、存活率[(52.3±6.1)%]、线粒体膜电位[(56.5±7.0)%]及顶体反应百分率[(16.6±3.8)%]均显著提高(P0.05),而精子ROS、MDA水平和DFI较冷冻对照均显著降低(P0.05)。在少弱精子症组中,添加白藜芦醇也均显著地提高了冷冻后精子前向运动百分率、总活力百分率、存活率、线粒体膜电位及顶体反应百分率,尤其是DFI[28.5±4.8)%]较冷冻对照[(36.3±5.7)%]显著降低(P0.01)。结论:在精液冷冻保护液中添加白藜芦醇可以通过降低精子内ROS水平减少精子冷冻损伤,从而改善解冻后精子质量和功能。     

线粒体氧化磷酸化抑制剂FCCP体外对人精子动力学和线粒体功能的影响

目的通过线粒体氧化磷酸化(OXPHOS)特异性抑制剂FCCP对人精子活动力及其线粒体功能影响的研究,探讨氧化磷酸化在精子能量代谢中的作用。方法选择来自捐精志愿者的正常精液8份,优选后制备精子悬液,将每份精子悬液分为4组,分别与终浓度为0μmol/L(对照组)、2.5μmol/L、5μmol/L和10μmol/L的FCCP共孵育1h、3h、5h,以精子动力学参数、线粒体膜电位、精子细胞内ATP含量、精子质膜完整性作为评价指标,分析比较各组间的差异。结果 (1)各组精子活动率和其他各项运动参数随着FCCP浓度增高呈下降趋势:孵育1h后,与对照组相比,仅10μmol/L组的精子活动率、前向运动百分率和精子头侧摆幅度(ALH)显著下降(P0.05),其余指标无显著性变化,而其余浓度处理组的各指标变化均无统计学意义(P0.05);孵育3h后,10μmol/L组的精子活动率、前向运动百分率、平均路径速率(VAP)、直线速率(VSL)、曲线速率(VCL)、ALH和鞭打频率(BCF)均显著降低(P0.05),5μmol/L组的ALH和BCF指标显著下降(P0.05);孵育5h后,与对照组相比,10μmol/L组的前述指标继续显著性下降(P0.05),5μmol/L组的精子活动率和前向运动百分率也出现显著降低(P0.05),而2.5μmol/L组各指标差异均无统计学意义(P0.05)。(2)精子线粒体膜电位(MMP)和ATP含量随FCCP浓度增加逐渐降低,10μmol/L组的MMP和ATP含量显著低于对照组(P0.05)。(3)质膜完整性比较中,10μmol/L组比对照组显著降低(73.94%vs.84.53%)(P0.05)。(4)随着FCCP孵育时间延长,各组精子活动率和前向运动百分率呈下降趋势。结论不同浓度的FCCP体外处理精子后,精子活动率和其他各项运动参数,以及反映线粒体活性的线粒体膜电位和ATP含量呈浓度依赖性下降,FCCP所抑制的线粒体氧化磷酸化是精子能量代谢的重要途径。     

壬基酚对体外培养大鼠睾丸间质细胞分泌雄激素影响的研究

目的:探讨壬基酚(NP)对大鼠睾丸间质细胞分泌雄激素的影响。方法:建立体外培养大鼠睾丸间质细胞原代培养体系,并采用3β-HSD染色对间质细胞进行鉴定;以不同浓度的NP(分别为较低浓度0.005、0.015、0.025、0.05、0.1μmol/L及稍高浓度0.5、5.0、10.0、15.0、25.0μmol/L)作用于间质细胞,采用3β-HSD染色观察间质细胞形态的变化,并检测间质细胞分泌睾酮含量的变化。结果:间质细胞经NP处理后,细胞形态发生变化,细胞密度降低,NP作用浓度达到25μmol/L时,细胞发生裂解。0.005及0.015μmol/L NP处理后,间质细胞睾酮分泌量增加,与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。NP浓度达到0.5μmol/L后,睾酮分泌量与对照组相比显著下降(P<0.05),且当NP浓度为5,10,15,25μmol/L时睾酮分泌量下降极为明显(P<0.01)。结论:低浓度NP能促进间质细胞分泌睾酮,而高浓度NP抑制睾酮分泌,且高浓度NP能诱导间质细胞坏死。     

白藜芦醇对环磷酰胺诱导的人精子氧化损伤的保护作用乜照燕1,张亚楠2,花蕊2,陈丽君1,李亮1,吴海峰

目的 探讨白藜芦醇(RES)对环磷酰胺诱导的人精子氧化损伤的保护作用。方法 收集2018年1月至4月在河北医科大学第四医院生殖医学中心就诊男性患者的正常精液标本。将用密度梯度离心法处理后的正常精液标本用不同浓度(0、1.0、2.5、5.0、7.5μmol/L)环磷酰胺活性代谢产物4-过氧化氢环磷酰胺(4-HC)对精子进行体外毒性试验,继续培养24h,通过精子活力和精子存活率筛选4-HC作用半抑制浓度(IC50)。将处理后的正常精液用不同浓度RES(5、10、25、50、75μmol/L)预处理2h,再加入IC50浓度4-HC,测定精子活力和精子存活率选择RES最佳保护浓度。选择4-HC和RES浓度后,该实验分为四组:对照组(CON)、环磷酰胺组(4-HC)、环磷酰胺+白藜芦醇组(4-HC+RES)、白藜芦醇组(RES),检测各组精子活力、活率、氧化应激指标以及精子凋亡指标。结果 随4-HC浓度增加,精子活力和存活率降低,呈剂量依赖关系,依据IC50,2.5μmol/L4-HC为后续实验药物浓度。RES预处理后,精子活力和精子活率均得到改善,50μmol/L RES效果最佳,确定为后续实验药物浓度。结果显示:4-HC组较CON组,精子活力和存活率下降,氧化应激水平上升,精子凋亡增加,4-HC+RES组与4-HC组相比精子活力和存活率升高,氧化应激水平降低,精子凋亡降低。结论 RES可以减少化疗药物导致的精子氧化应激水平增加,能预防和缓解化疗药物对人精子造成的损伤。     

邻苯二甲酸单乙基己基酯对原代培养大鼠睾丸Leydig细胞睾酮合成的影响

目的:探讨邻苯二甲酸二乙基己基酯(DEHP)的代谢产物邻苯二甲酸单乙基己基酯(MEHP)对SD大鼠体外培养睾丸间质细胞(Leydigcells)睾酮合成的影响。方法:建立SD大鼠睾丸Leydig细胞体外原代培养模型,MEHP染毒剂量组分为对照(0μmol/L)、62.5、125、250、500、1000μmol/L,通过噻唑蓝(MTT)法观察线粒体活性,放射免疫法测定睾酮浓度,RTPCR法测定Leydig细胞类固醇合成急性调节蛋白(StAR)mRNA表达。结果:MEHP染毒24h后,Leydig细胞线粒体活性在250μmol/L时显著上升,1000μmol/L时显著下降,与对照组比较,差异均有显著性(P<0.01)。基础状态及人绒毛膜促性腺激素(hCG)刺激状态下,Leydig细胞睾酮合成水平均呈上升趋势,与对照组相比,250、500μmol/L剂量组差异均有显著性(P<0.01)。Leydig细胞StARmRNA的表达在62.5、125、250μmol/L时与对照组相比均未见有显著性改变,在500、1000μmol/L时显著下降(P<0.01)。结论:MEHP直接影响原代培养Leydig细胞线粒体活性及睾酮合成,胆固醇跨膜转运的调节因子StAR与MEHP引起睾酮合成上升的原因可能无关。     

镉离子对公牛精子功能损伤的机制

目的:重金属比如镉(Cd)作为工业污染物广泛分布在环境中,研究人员已经鉴定了这些污染物能影响男性生殖系统。本文研究的目的是测试Cd在10~1000μmol/L的浓度范围在体外对荷斯坦(Holstein)公牛精子膜和DNA完整性、活动率和精子顶体胞吐能力的影响。方法:用PBS处理公牛精液样本后进行精液分析。脂质过氧化试验评估精子膜完整性。明胶消化试验测定公牛精子顶体胞吐作用的能力。单细胞凝胶电泳(SCGE)检测单个细胞内DNA断裂和不耐碱的破坏。结果:脂质过氧化(LPO)显著增加,表明了Cd对精子膜完整性的破坏作用。这种影响在Cd浓度为1000μmol/L时特别明显。LPO与活动精子百分率之间呈负相关(r=-0.94,P<0.001)。明胶消化试验表明Cd引起公牛精子顶体胞吐作用的百分率下降。发现在LPO率和消化环百分率之间呈负相关(r=-0.97,P<0.001)。彗星试验获得的数据表明Cd能诱导精子核中的DNA断裂。接近93%的DNA损伤为双股断裂。LPO氧化率与DNA断裂百分率之间的相关性为0.95(P<0.001)。结论:总体上,Cd诱导公牛精子膜损伤、活动率降低、DNA断裂、以及顶体反应率降低而导致精子功能损伤。进入雄性性腺和精浆的Cd可能对动物精子产生了破坏作用。     

卡托普利体外对人精子运动参数的影响

目的:探讨卡托普利体外对人精子运动参数的影响。方法:将卡托普利注射液配制成1×10-5、1×10-6及1×10-7mol/L 3组浓度,分别在体外作用于取自正常生育男性并经Percoll梯度离心处理的精子。分别将3组卡托普利溶液各20μl与180μl精子悬液混匀,均于作用5 m in后采用计算机辅助精液分析系统检测精子运动参数。结果:3组不同浓度卡托普利溶液与精子作用5 m in后,精子活率和前向运动精子百分率明显降低(P<0.05);其他运动参数无明显变化。结论:卡托普利能显著降低精子活率和前向运动精子百分率,对其他运动参数无显著影响。     

脂肪乳剂、肾上腺素及脂肪乳剂复合肾上腺素对布比卡因诱导离体大鼠心脏停搏的复苏作用比较

背景目前对于脂肪乳剂复合肾上腺素治疗布比卡因的心脏毒性是否优于单纯脂肪乳剂或肾上腺素尚不清楚。我们比较了在治疗布比卡因引起的离体大鼠心脏停搏中脂肪乳剂、肾上腺素及复合物的作用。同时也测定了脂肪乳剂、肾上腺素及其复合物对布比卡因在心脏组织中浓度的影响。方法从Sprague—Dawley雄性大鼠游离出心脏并进行再灌注建立Langendofrr离体心脏灌注模型。以100μmol／L布比卡因诱导心脏停搏后继续灌注3分钟。脂肪乳剂组含2％脂肪乳剂复合30μmol／L布比卡因;肾上腺素组含0．15μg／ml肾上腺素复合30μmol／L布比卡因;脂肪乳剂复合肾上腺素组含2％脂肪乳剂复合0．15μg／ml肾上腺素及30μmol／L布比卡因;单独以30μmol／L布比卡因灌注为对照组。心脏复跳的定义为有自主规则的心律,恢复后心率血压乘积（rate．pressureproduct,RPP）值〉基础值的10％且持续1分钟以上。我们比较每组100μmol／L布比卡因输注结束至心脏复跳的时间。复跳后对心功能变化继续观察40分钟。4组中能复跳的心脏于试验末截取心尖心肌采用高效液相色谱法测定心肌组织中布比卡因的浓度。结果脂肪乳剂组和复合组的心脏复跳时间（Trecovery）显著短于肾上腺素组和对照组（P〈0．001）,肾上腺素组的T短于对照组（P〈0．）。心脏复跳后分钟内4组平均值从高到低依次排序为复合组〉脂肪乳剂组、肾上腺素组〉对照组（P〈0．01）。心脏复跳过程中RPP的最大值（RPPmaximum）、RPPmaximum与基础值之比（RPPmaximum／RPPbaselinc）从最高到最低的依次排序为复合组〉脂肪乳剂组、肾上腺素组〉对照组（P〈0．01）。RPPmaximum 、RPPmaximum／RPPbaseline在脂肪乳剂组和肾上腺素组之间无显著差异。肾上腺素组和对照组中的心肌组织中布比卡因的浓度高于脂肪乳剂组和复合组（P〈0．001）。结论脂肪乳剂复合肾上腺素治疗布比卡因诱导的离体大鼠心脏停搏,较单纯使用脂肪乳剂或肾上腺素能更好地改善复苏后的心脏功能。     

广西防城地区男性人群体重指数与血清前列腺特异性抗原水平相关性研究

目的:分析体重指数(BMI)对广西防城地区男性血清PSA水平的影响。方法:选择在2009年9月至2011年12月健康体检男性作为研究对象,测量身高、体重,并计算BMI,静脉血血清检测PSA水平。将研究对象分为低体重(BMI18.5 kg/m2)、正常(BMI 18.5~22.9 kg/m2)、超重(BMI 23.0~27.4 kg/m2)、肥胖(BMI≥27.5 kg/m2)4组;进一步按年龄分为20~29、30~39、40~49及≥50岁4组,方差分析分别比较各BMI组内PSA水平差异。结果:符合标准、资料完整者2 397例,年龄(37.4±11.0)岁,BMI(23.3±3.4)kg/m2,PSA(0.98±0.93)μg/L。各BMI组PSA水平差异有统计学意义(P均0.05)。各年龄组按照BMI分组比较,除≥50岁年龄组外,其余3组中PSA水平均随BMI增加而降低,但仅30~39岁和40~49岁年龄组内各BMI组别间的PSA水平差异有统计学意义(P0.01)。结论:PSA随着BMI的增加而降低,这种趋势在中青年人群中比较明显。因此针对中青年群体,在依据PSA水平判断是否需要取前列腺组织行前列腺癌早期诊断时,更有必要考虑BMI的影响。     

精液采集地点对精液质量影响的实验研究

目的:调查在医院门诊和在家中通过自慰法收集的精液质量之间的差异。方法:对342例男性患者在医院门诊和在家中通过手淫法收集的精液样本,按WHO第5版操作标准常规分析精液,并测量反映附睾、前列腺和精囊腺功能状态的精浆标志物,即精浆中性α-葡糖苷酶(NAG)、锌(Zn)和果糖(FRU)含量。按照取精地点分成两组:在医院门诊和在家中,软件分析取精地点与精液参数的关系。结果:在家中收集的精液在精液量、精子浓度、精子总数和前向运动精子百分率(PR)方面均明显优于在医院门诊收集的精液;而精子形态、NAG、Zn和FRU在两组之间无显著性差异。精子浓度异常(20×106/ml)和精子活动率异常[PR32%]的精液样本,在家中获得的样本率[18%(62/342);64%(219/342)]均明显低于在医院门诊取精室获得的样本率[30%(103/342);75%(256/342)],两组之间均有显著差异。结论:与在医院门诊取精液相比,在家中手淫法取精液能获得更好的精液质量。在不孕症评估过程中,应该考虑取精液的环境因素。     

体外L02肝细胞氧化损伤模型的构建

目的探讨L02肝细胞氧化损伤模型的构建方法。方法将L02肝细胞培养后分为损伤3 h组、6 h组和12 h组,每组再根据加入不同浓度的过氧化氢(H2O2)分为100、200、300、500、750、1 000μmol/L 6个亚组,对照组不加入H2O2,分别在培养箱中继续孵育3 h、6 h或12 h后进行细胞计数试剂盒(CCK)-8检测。另1组L02肝细胞培养后分为损伤3 h组、6 h组和12 h组,损伤3 h组再根据加入H2O2浓度不同分为100、200、300、500、750μmol/L 5个亚组,损伤6 h组分为100、200、300、500μmol/L 4个亚组,损伤12 h组分为100、200、300μmol/L 3个亚组,对照组不加入H2O2,分别在培养箱中继续孵育3 h、6 h或12 h后进行Annexin V-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染流式细胞检测。损伤模型的建立及鉴定:L02肝细胞培养后损伤组加入200μmol/L H2O2,对照组不加入H2O2。在培养箱中继续孵育6 h后检测细胞线粒体膜电位、丙二醛(MDA)、活性氧自由基(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)等指标。结果损伤3 h组中,200、300、500、750、1 000μmol/L等各亚组的细胞存活率与对照组比较,差异有统计学意义(均为P0.01);损伤6 h组中,各亚组细胞存活率与对照组比较差异均有统计学意义(均为P0.01);损伤12 h组中,各亚组存活率与对照组比较差异均有统计学意义(均为P0.01)。3 h H2O2浓度与细胞存活率的相关系数为-0.993,6 h组为-0.955,12 h组为-0.819。Annexin V-FITC/PI双染检测不同浓度、不同作用时间的H2O2损伤情况下细胞凋亡/坏死率:损伤3、6、12 h组中,损伤各亚组与对照组比较,差异均有统计学意义(均为P0.01)。3 h组H2O2浓度与细胞凋亡或坏死率的相关系数为0.971,6 h组为0.992,12 h组为0.986。与对照组比较,200μmol/L H2O2作用6 h处理L02肝细胞损伤组的线粒体膜电位、MDA、ROS、SOD、ALT、AST差异均有统计学意义(均为P0.01)。结论 200μmol/L H2O2作用6 h处理L02肝细胞是体外模拟缺血-再灌注或氧化损伤的良好模型。     

植物雌激素对体外培养的大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的作用

目的:研究植物雌激素(大豆苷元、染料木素)对睾丸间质细胞分泌睾酮的刺激作用,并初步研究其可能的分子作用机制。方法:采用Percoll不连续密度梯度离心,分离获得3月龄Sprague-Dawley(SD)大鼠的睾丸间质细胞。以人绒毛膜促性腺激素(hCG)为阳性对照药物,测定不同浓度(0、0.02、0.1、0.5、1、5μmol/L)大豆苷元、染料木素对睾丸间质细胞分泌睾酮的影响。RT-PCR检测睾酮生物合成过程中胆固醇侧链裂解酶细胞色素P450(P450scc)的表达。结果:0.1μmol/L的染料木素能显著刺激原代大鼠睾丸间质细胞的睾酮分泌,RT-PCR结果显示染料木素能显著上调睾酮合成过程中P450sccmRNA的表达。在较高浓度下(5μmol/L),大豆苷元和染料木素均能抑制睾丸间质细胞分泌睾酮。结论:染料木素在低浓度下(0.1μmol/L)显著促进睾丸间质细胞分泌睾酮,但随着浓度的增加(5μmol/L),大豆苷元和染料木素均显著抑制Leydig细胞的睾酮分泌。     

精子DNA完整性与体外受精-胚胎移植临床结局的相关性研究

目的 探讨精子DNA完整性与精液参数及体外受精-胚胎移植（IVF-ET）/卵胞浆内单精子注射（ICSI）临床结局的关系.方法 选择2008年6月～2009年6月在解放军105医院生殖医学中心接受IVF/ICSI治疗的179对不育夫妇作为研究对象,采用吖啶橙试验（AOT）对116例实施IVF和63例实施ICSI治疗的男性患者进行精子DNA完整性分析,根据精子DNA碎片指数（DFI）将患者分为DFI≤30%组和DFI＞30%组,比较两组间精液参数、受精率、卵裂率、优胚率、胚胎冷冻率、着床率和临床妊娠率.结果 DFI ＞30%组精子畸形率显著高于≤30%组（P＜0.01）,但两组间精子密度、活动率、前向运动精子（a＋b）均无显著性差异（P＞0.05）;DFI＞30%组IVF和ICSI的优胚率、ICSI的胚胎着床率和临床妊娠率均显著低于DFI≤30%组（P＜0.01,P＜0.05）.结论 精子DNA完整性与精子形态密切相关,精子DNA损伤在IVF/ICSI过程中对胚胎质量有负面影响,并显著影响ICSI的胚胎着床率和妊娠率,建议行ICSI前应对精子DNA完整性进行评估.     

腹腔镜活体供肾切取术中皮质肾单位及间质损伤的实验研究

目的研究腹腔镜猪活体供肾切取术中气腹高压、超声刀声热效应、机械挤压对皮质肾单位及肾间质的影响。方法将26只猪分成3组:腹腔镜下行左侧活体供肾切取术20只(腹腔镜组),采用14 mmHg CO2气腹压,根据手术时间长短又分为两组,其中手术时间300～360 min的10只设为A组,手术时间60～120 min的10只设为B组;余6只为C组(对照组),行开放手术切取左肾,手术时间60～120 min。手术结束时切除每只猪右肾保留左肾。三组均于开始手术时、手术结束时、术后30 d穿刺取左肾肾皮质组织于光镜及电镜下观察组织及其超微结构的改变,并比较三组间术后1 d、15 d、30 d血清肌酐水平。结果手术结束时A组、B组、C组每高倍视野有病理改变的肾小球中位数分别为3.5个、0、0.5个(H=13.475,P0.01);术后30 d分别为0.5个、0、0(H=0.325,P0.05)。手术结束时A组、B组、C组肾小管与肾间质有病变的猪只数分别为8只、2只、1只和8只、1只、0。电镜观察A组有阳性病变的肾组织:肾小球毛细血管袢血管腔扩张、其内有大量的红细胞,上皮细胞足突肿胀;肾近曲小管上皮细胞线粒体明显肿胀、嵴模糊断裂、空泡化;间质少量淋巴细胞浸润、毛细血管明显扩张、充血;肾小球及肾小管基底膜均完好。术后30 d均恢复正常。A组、B组、C组血清肌酐值在不同时间分别为术后1 d:(159±21)μmol/L、(110±10)μmol/L、(98±5)μmol/L(P0.05);术后15 d:(121±15)μmol/L、(101±8)μmol/L、(96±11)μmol/L(P0.05);术后30 d:(98±20)μmol/L、(112±12)μmol/L、(94±10)μmol/L(P0.05)。结论长时间(300～360 min)CO2高压气腹、超声刀声热效应、机械挤压可引起皮质肾单位轻微损伤,间质水肿、炎性浸润,上述损伤在无热、冷缺血及免疫因素影响时可自行修复逆转。     

膜联蛋白5对人精子膜及DNA完整性的影响

目的:研究膜联蛋白5(Annexin5)对人精子细胞膜及DNA完整性的影响。方法:①精子膜完整性测定:按精子浓度>20×106/ml;活率>60%选取标准收集精液标本53份,分为3组,实验组为47.5μl精液中加入2.5μl10-6mol/L的Annexin5;阴性对照组为47.5μl精液标本中加入2.5μl1mol/L的Tris-HCl(pH8.0,25℃);空白对照组为47.5μl精液标本中加入2.5μl0.01mol/L的PBS(pH7.4),作用20min后,通过精子低渗肿胀试验(HOS)检测精子膜的完整性。②DNA完整性测定:同方法①,3组实验标本作用20min后,每份标本加入2.5μl0.02mol/L的H2O2,作用60min,通过吖啶橙(AO)荧光染色检测精子核DNA的完整性。结果:An-nexin5处理20min后低渗肿胀精子百分率与空白对照组及阴性对照组比较均具有极显著差异[(66.17±12.02)%vs(58.13±13.08)%,P<0.01;(66.17±12.02)%vs(59.94±11.91)%,P<0.01];空白对照组与阴性对照组比较无显著性差异。加入H2O2后,Annexin5组的DNA碎片指数与空白对照组及阴性对照组比较均具有极显著差异[(6.39±1.07)%vs(11.16±1.16)%,P<0.01;(6.39±1.07)%vs(10.86±1.05)%,P<0.01],空白对照组与阴性对照组比较无显著性差异。结论:Annexin5蛋白能在体外提高低渗肿胀精子百分率,对精子膜的完整性具有保护作用,同时对HO作用引起的精子核DNA破坏起保护作用。     

卵泡液中血管内皮生长子和甾体激素水平对卵母细胞成熟和受精的影响

目的 探讨卵胞浆内单精子注射（ICSI）周期取卵日卵泡液中血管内皮生长因子（VEGF）和甾体激素水平与卵母细胞成熟和受精的关系.方法 收集在本中心接受ICSI治疗的男方因素不育患者取卵日卵泡液105例,采用电化学发光法（ECLIA）检测卵泡液中雌二醇（E2）、孕酮（P）、睾酮（T）水平,酶联免疫吸附法（ELISA）检测VEGF水平.卵泡液按照相应卵母细胞成熟度及激素VEGF水平分别进行分组.结果 成熟组卵母细胞对应的卵泡液中VEGF水平高于未成熟组（P〈0.05）,而低于退化组（P〈0.05）;卵泡液VEGF水平在500～650 ng/L时卵母细胞成熟率、受精率最高（P〈0.05）;E2水平在退化组显著低于成熟组（P〈0.05）;P水平三组比较均无显著性差异（P〉0.05）;T水平在未成熟组和退化组均显著高于成熟组 （P〈0.05）;10≤P/E2≤30组卵子成熟率最高（91.11%）（P〈0.05）.结论 卵泡液中,VEGF水平在500～650 ng/L时卵母细胞成熟率、受精率较高.卵母细胞的成熟及退化与卵泡液中甾体激素环境关系密切,卵泡液P/E210～30范围时卵母细胞成熟率较高.     

TURP对BPH患者血清PSA水平的影响

目的:通过经尿道前列腺电切术(TURP)的BPH患者血清前列腺特异抗原(PSA)的近、远期变化,探讨TURP前后PSA变化的价值及PSA变化与切除程度的相关性。方法:前瞻性队列研究209例接受TURP的BPH患者术前、术后5天、术后1个月、术后3个月、术后半年的血清PSA水平变化及PSA变化与切除程度的相关性。结果:术前PSA水平为(9.82±9.60)μg/L,术后5天为(5.40±4.04)μg/L,术后1个月为(3.5±3.15)μg/L,术后3个月为(2.56±1.13)μg/L,术后半年为(3.47±1.04)μg/L。术后5天与术前相比,PSA下降约(4.42±8.78)μg/L,术后1个月降至术前的35%,5段时间PSA水平互相对比,差异均有统计学意义(P0.01)。PSA4μg/L组PSA下降后仍高于PSA≤4μg/L组。TURP的实际切除质量与应该切除质量相减的均数±标准差,总样本为(-0.941±9.56)μg/L,PSA≤4μg/L组为(0.13±10.53)μg/L,PSA4μg/L组为(-3.83±5.41)μg/L。PSA的变化与切除程度呈正相关(P0.01,R=0.91),并且PSA≤4μg/L组与PSA4μg/L组PSA的变化均与切除程度呈正相关(P0.01,1=0.986,R2=0.924),两组间差别无统计学意义。结论:PSA在TURP后呈下降趋势,于1个月左右降至正常水平,并且TURP切除的范围越足够,PSA下降的幅度越大。术后长期随访BPH患者TURP后血清PSA水平,能减少前列腺癌的误诊及漏诊。对于监测术前PSA4μg/L的BPH患者应以其术后自身PSA基线为准,衡量其前列腺穿刺活检的指征及前列腺癌的诊断。