人脐带间充质干细胞对脊柱关节炎患者外周血T细胞产生IL-17的抑制作用

本研究通过观察人脐带间充质干细胞(hUCMSC)对脊柱关节炎(SpA)患者外周血T细胞产生IL-17的抑制作用,初步探索hUCMSC在SpA治疗领域的应用前景。体外分离SpA患者及健康志愿者外周血单个核细胞(PBMNC),PBMNC单独培养或与hUCMSC共培养,应用流式细胞仪检测T细胞中CD3+CD4+IL-17+(Th17)及CD3+γδTCR+IL-17+细胞比例;应用ELISA检测细胞培养上清中IL-17的浓度。结果表明,SpA患者外周血T细胞中Th17细胞占(3.42±0.82)%,CD3+γδTCR+IL-17+细胞占(0.30±0.10)%,分别是健康对照组(0.75±0.25)%和(0.06±0.02)%的4.5倍及5倍(P<0.01);SpA患者PBMNC与hUCMSC共培养后,T细胞中Th17细胞下降为(1.81±0.59)%,CD3+γδTCR+IL-17+细胞下降为(0.16±0.06)%(P<0.01);ELISA检测结果表明,SpA患者PBMNC培养上清IL-17的浓度显著高于健康对照组[(573.95±171.68)pg/ml vs(115.53±40.41)pg/ml(P<0.01)];SpA患者PBMNC与hUCMSC共培养后,细胞上清IL-17的浓度下降至(443.20±147.94)pg/ml(P<0.01)。结论:hUCMSC能够抑制SpA患者外周血T细胞产生IL-17,在SpA临床治疗中具有应用前景。     

过敏性紫癜患儿Th17细胞表达及意义

目的 探讨Th17细胞在儿童过敏性紫癜(henoch-schonlein purpura,HSP)免疫发病机制中的作用.方法 过敏性紫癜急性期患儿55例,采用流式细胞分析法检测外周血Th17细胞的比例,ELISA法检测血浆相关细胞因子IL-17和IL-6的水平,并进行相关性分析.同期选取20例同龄健康儿童作为对照.结果 HSP患儿外周血Th17/CD4+T细胞比例显著高于对照组[(1.91±0.78)% vs(0.52±0.24)%,(P＜0.01)];HSP患儿血浆IL-17和IL-6的水平亦明显高于对照组[IL-17:(47.4±17.6)pg/ml vs (15.6±11.2) pg/ml;IL-6:(273.8±42.4)pg/ml vs(228.7±37.4)pg/ml,(P＜0.01)].患儿血浆IL-17和IL-6的水平呈正相关(r=0.762,P＜0.01).结论 过敏性紫癜急性期患儿Th17细胞比例增加,IL-17和IL-6水平升高,提示Th17细胞可能参与了HSP的发病及其炎性反应过程.     

Th17细胞/Treg细胞失衡在儿童过敏性紫癜发病机制中的作用

目的:探讨Th17细胞、CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)及其特异性转录因子RORγt和FoxP3在儿童过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura,HSP)发病机制中的作用,为儿童HSP的治疗从调控Th17/Treg失衡作为切入点提供一条新思路。方法:以2012年2月——2013年3月我院(四川省人民医院)儿科诊治的初次发病的HSP急性期患儿40例作为研究对象,以及同期来我院体检的健康儿童40例作为对照,采用SYBR Green I实时荧光定量PCR技术测定外周血单个核细胞中RORγt mRNA和FoxP3 mRNA的表达水平;用流式细胞术测定外周血T淋巴细胞中Th17细胞和Treg细胞的表达水平;用双抗夹心ABC-ELISA技术测定血清IL-17A、TGF-β1、IL-2和IL-6浓度。结果:HSP组Th17细胞(2.75±0.60%)及RORγt mRNA(1.11±0.51)明显高于对照组Th17细胞(1.41±0.29%)及RORγt mRNA(0.65±0.24)(P0.01),而Treg细胞(4.56±1.26%)及FoxP3 mRNA(1.15±0.45)明显低于对照组Treg细胞(7.85±1.97%)及FoxP3 mRNA(2.32±1.13)(P0.01);HSP组血清IL-17A(40.40±11.81 pg/ml)、IL-6(75.38±27.19 pg/ml)、TGF-β1(309.41±81.03 pg/ml)与对照组IL-17A(20.32±10.70 pg/ml)、IL-6(25.16±8.31 pg/ml)、TGF-β1(236.34±66.01 pg/ml)相比明显升高(P0.01),而血清IL-2(25.60±13.19 pg/ml)水平与对照组(34.42±11.69 pg/ml)比较则降低(P0.01);在HSP组Th17细胞表达与RORγt mRNA、IL-17A、IL-6表达呈正相关,相关系数分别为0.887,0.938,0.934(P0.01);Treg细胞表达与FoxP3 mRNA,IL-2表达呈正相关,相关系数分别为0.834,0.932(P0.01)。结论:急性期HSP患儿存在Th17细胞、RORγt mRNA及IL-17A表达水平升高,Treg细胞和FoxP3 mRNA表达水平降低,Th17/Treg细胞的失衡;急性期HSP患儿存在血清TGF-β1、IL-6水平增高,IL-2水平降低,且Th17细胞表达水平与IL-6表达呈正相关,Treg细胞表达水平与IL-2表达呈正相关。     

特异性细胞因子对T辅助17细胞和T调节性细胞表达的调节作用

目的 探讨多种细胞因子包括转化生长因子β(TGF-β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素2(IL-2)对CD+4T淋巴细胞的分化调节作用.方法 将人外周血T淋巴细胞、鼠脾脏T淋巴细胞在不同的刺激条件下进行体外培养,采用流式细胞仪分析活化T淋巴细胞中CD+4IL-17+T辅助17细胞(Th17细胞)、C+4IL-17+T淋巴细胞、CD+4CD+25FOXP+3T调节性细胞(Treg细胞)的表达情况.结果 鼠脾脏T淋巴细胞培养液中有TGF-β存在时可促进Treg细胞、rh17细胞和CD+8;IL-17+T淋巴细胞分化,表达水平分别为(7.8±2.2)%、(12.6±3.1)%、(10.1±2.6)%.无细胞因子培养的同类细胞为实验对照组,表达水平分别为(4.8±0.6)%、(1.7±0.5)%、(1.0±0.4)%,差异均有统计学意义(q=4.09、8.80、9.61,P<0.05或P<0.01).TGF-β与IL-6细胞因子共同存在时可促进Th17和CD+8IL-17+T淋巴细胞分化,表达水平分别为(17.8±5.3)%、(15.0±4.2)%,而分化受抑制的Treg细胞的表达水平为(4.I±1.2)%,与TGF-β组同类细胞表达水平比较差异均有统计学意义(q=5.03、5.17、5.04,P均<0.01).在TGF-β刺激的T淋巴细胞中加入IL-2细胞因子可使Th17细胞、CD+8;IL-17+T淋巴细胞表达减少,同时伴有Treg细胞表达量的增加;在加入抗IL-2后结果相反,即Th17细胞、CD+8IL-17+T淋巴细胞表达水平增加,Treg细胞表达水平减少.人外周血T淋巴细胞上Th17、CD+8IL-17+、Treg细胞表达水平变化趋势与鼠脾脏淋巴细胞相似.结论 不同细胞因子对于调控Th17细胞和Treg细胞之间的平衡起着十分重要的作用.     

流式细胞术研究间充质干细胞对人Th1细胞的作用

本研究应用流式细胞术(FCM)探究胚胎骨髓来源的间充质干细胞(FBM-MSC)对人Th1细胞的作用。体外分离、培养、扩增人FBM-MSC,并对其进行免疫表型及分化潜能的鉴定。CD4+T细胞单独培养或与FBM-MSC共培养(FBM-MSC/CD4),通过FCM和酶联免疫吸附试验(ELISA)方法分别测定单独培养的CD4+T细胞和FBM-MSC/CD4中Th1细胞(干扰素-γ+)的数量。结果表明,FBM-MSC的免疫表型及分化潜能均符合间充质干细胞(MSC)的标准。FBM-MSC对Th1细胞的发育具有抑制作用。FCM检测发现,FBM-MSC/CD4中Th1细胞数量明显低于单独培养的CD4+T细胞。ELISA检测结果表明,IFN-γ的蛋白水平在FBM-MSC/CD4中亦低于单独培养的CD4+T细胞;同时,FBM-MSC/CD4中IL-6的表达水平明显高于单独培养的CD4+T细胞或FBM-MSC细胞中的水平。而IL-6中和抗体能够增加FBM-MSC/CD4中的Th1细胞数量和IFN-γ的水平。结论:FBM-MSC对人Th1细胞具有抑制作用,IL-6信号通路可能是该抑制作用的机制之一。     

流式细胞微球阵列术检测肝癌组织中细胞因子水平及其意义

目的应用流式细胞微球阵列术(CBA)检测原发性肝细胞癌组织中细胞因子的表达水平,探讨细胞因子改变在肝癌组织免疫微环境中的意义。方法收集36例原发性肝细胞癌的癌组织及非癌组织标本,采用流式细胞术检测组织中浸润免疫细胞的比例,CBA检测肝癌组织和非癌组织中Th1(IL-2、TNF-α、IFN-γ)、Th2(IL-4、IL-6、IL-10)、IL-17A细胞因子水平,并比较分析。结果肝癌组织中IL-6、IL-10和TNF水平分别为(292.49±325.29)pg/ml、(6.09±3.88)pg/ml和(9.55±5.60)pg/ml,比正常非癌组织的(6.82±2.69)pg/ml、(2.99±0.60)pg/ml和(3.50±0.77)pg/ml显著升高(P均<0.01),肝癌组织IL-2、IL-4及IL-17A水平分别为(4.73±0.26)pg/ml、(3.25±0.26)pg/ml和(2.05±0.29)pg/ml,显著低于正常非癌组织(P均<0.01)。而IFN-γ水平虽然较正常非癌组织高,但差异无统计学意义(P>0.05)。肝细胞癌患者CD3+T细胞、CD4+Th细胞在癌组织中的比例均高于相应的非癌组织,而CD8+细胞在癌组织中的比例较低(P<0.05);不同病理分期的细胞因子水平无统计学差异(P>0.05)。结论肝癌组织中抗肿瘤效应性细胞比例下降,Th1/Th2比例失衡,且向Th2方向漂移,导致肿瘤的发生、发展。肝癌组织微环境中细胞因子水平与肿瘤病理分期无关。     

晚期非小细胞肺癌增殖状态对细胞免疫影响的探索与分析

目的研究晚期非小细胞肺癌患者(NSCLC)肿瘤增殖状态对细胞免疫功能的影响。方法选择89例初发未治疗的Ⅲ~Ⅳ期晚期NSCLC患者,用免疫组化法测定活检组织中细胞核增殖抗原(ki-67)的表达程度;用流式细胞仪检测外周血中细胞免疫功能的水平,其中包括CD3+CD4+辅助性T细胞(Th)、CD3+CD8+细胞毒性T细胞(Tc)及CD4+CD25+调节性T细胞(Treg);用CBA法测定外周血血清中IFN-γ、IL-2和TNF-α水平。结果 ki-67阳性组较ki-67阴性组Treg水平显著增高,(7.62±1.28)%vs.(4.17±1.85)%,P<0.01,差异具有统计学意义;ki-67阳性组较ki-67阴性组Th、Tc、IFN-γ、IL-2、TNF-α水平均低,分别为(32.08±9.73)%vs.(36.94±7.66)%,P<0.05;(28.11±10.02)%vs.(33.68±11.57)%,P<0.05;(8.07±1.64)pg/ml vs.(11.41±2.60)pg/ml,P<0.01;(6.22±2.84)pg/ml vs.(8.11±4.92)pg/ml,P<0.05;(4.74±1.66)pg/ml vs.(6.17±2.53)pg/ml,P<0.01,差异均具有统计学意义;Treg、Th、Tc、IL-2、IFN-γ和TNF-α水平在不同临床特征晚期NSCLC患者中均无明显差异;在ki-67阳性组Th与Tc之间相关系数为-0.30,P<0.05,IL-2与TNF-α之间相关系数为0.75,P<0.01;在ki-67阴性组IL-2与TNF-α之间相关系数为0.93,P<0.01。结论晚期NSCLC患者肿瘤细胞增殖活跃时,细胞免疫功能明显降低;增殖活跃的肿瘤细胞通过上调Treg数量和下调Th、IFN-γ、IL-2、TNF-α水平打破正常细胞免疫平衡,细胞因子间又相互作用、相互影响,从而加速肿瘤进展。     

调节性T细胞和Th17细胞比值的变化与特发性血小板减少性紫癜发病关系的研究

目的 探讨调节性T细胞和Th17细胞比值在特发性血小板减少性紫癜(ITP)发病机制中的作用.方法 应用流式细胞术检测29例ITP患者和28名正常人外周血中CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25high T细胞、CD4+IL-17A+T细胞的数量,ELISA法测定血浆中IL-10、IL-17水平;RT-PCR法检测外周血Foxp3和RORc mRNA的表达水平.结果 与正常对照组比较,ITP患者外周血CD4+CD25+T细胞/CD4+T细胞比值升高(P＜0.05),CD4+CD25high T细胞/CD4+T细胞比值下降(P＜0.05),CD4+IL-17A+T细胞/CD4+T细胞比值差异无统计学意义(P＞0.05),CD4+CD25highT细胞/CD4+IL-17+T细胞比值从11.42±5.09降低为1.08±0.84(P＜0.05).ITP患者血浆IL-10水平明显低于正常对照组(P＜0.05),IL-17水平与对照组比较无显著差异(P＞0.05).ITP患者较正常对照组外周血中Foxp3 mRNA水平明显降低(P＜0.05),而RORc mRNA表达则较对照组明显升高(P＜0.05).结论 ITP患者存在调节性T细胞/Th17细胞比例平衡失调,其可能在ITP免疫发病机制中起一定作用.     

骨髓单个核细胞Coombs试验(+)血细胞减少症患者Th17细胞数量及功能研究

目的 研究骨髓单个核细胞(BMMNC)-Coombs试验(+)血细胞减少症(又称免疫相关性血细胞减少症,IRP)患者骨髓Th17细胞数量及功能,探讨Th17细胞在IRP发病中的作用.方法 选取初诊IRP患者43例、血常规恢复正常IRP患者34例及正常对照13名.采用流式细胞术(FCM)检测骨髓白细胞介素(IL)-23受体(IL-23R)+CD4+/CD4+细胞比例;酶联免疫吸附(ELISA)法测定骨髓上清液IL-6、IL-23和IL-17水平;RT-PCR技术检测BMMNC视黄酸相关孤核受体γt(RORγt)及信号转导转录激活子3(STAT3)mRNA的相对表达水平.结果 IRP初诊组IL-23R+CD4+/CD4+细胞比例[(3.6±3.1)%]明显高于恢复组[(2.0±1.0)%]和正常对照组[(1.9±1.4)%](P值均＜0.05);初诊组骨髓上清液IL-6、IL-23和IL-17水平[分别为(26.21±14.55)、(2.23±0.99)和(2.54±1.33)μg/L]明显高于恢复组[分别为(9.08±6.36)、(0.91±0.76)和(1.28±0.18)μg/L]和正常对照组[分别为(14.63±7.66)、(1.19±0.98)和(1.50±0.28)μg/L](P值均＜0.05);初诊组RORγtmRNA、STAT3mRNA表达水平(0.25±0.08、1.10±0.16)明显高于恢复组(0.12±0.08、0.97±0.12)和正常对照组(0.07±0.05、0.95±0.13)(P值均＜0.05).IRP组IL-23R+CD4+/CD4+细胞比例与CD5+CD19+/CD19+细胞比例呈正相关(P＜0.05);IRP组骨髓液IL-17水平与骨髓CD5+CD19+/CD19+细胞比例、自身抗体数量呈正相关(r分别为0.494、0.377,P值均＜0.05);IRP组RORγt mRNA表达水平与骨髓CD5+CD19+/CD19+细胞比例及自身抗体数量呈正相关(r分别为0.741、0.541,P值均＜0.05);IL-23R+CD4+/CD4+细胞比例与骨髓上清液IL-17水平及STAT3 mRNA表达水平呈正相关(r分别为0.438、0.448,P值均＜0.05).结论 Th17细胞在IRP患者中数量增加,功能活跃;Th17细胞有望成为该类疾病干预治疗的新靶点.     

维持性血液透析患者外周血Th17细胞与Treg表达水平的研究

目的 探讨维持性血液透析患者外周血CD4+T淋巴细胞、Th17细胞及CD4+CD25+CD127-调节T细胞(Treg)变化及意义.方法 采用流式细胞术检测23例血液透析患者(透析组)和25例健康志愿者(健康对照组)外周血中CD4+T细胞比例及Th17细胞、Treg细胞占CD4+T细胞的比例.结果 透析组的CD4+T细胞的比例为(43.89±7.72)%,明显高于对照组(31.14±4.89)%(P<0.01);透析组的Th17/CD4+T细胞的比例为(1.23±0.84)%,明显低于对照组(1.99±1.22)%(P<0.05);透析组的Treg/CD4+T细胞的比例为(4.79±1.39)%,明显低于对照组(8.90±2.30)%(P<0.01);透析组的Th17/Treg细胞的比值为(0.29±0.22)%,明显高于对照组(0.21±0.10)%(P<0.05).结论 维持性血液透析患者外周血中存在Th17/Treg失衡,Th17/Treg失衡可能参与了患者的免疫异常从而导致透析患者的并发症发生和发展.     

手足口病患儿T淋巴细胞亚群和相关细胞因子水平变化的临床意义分析

目的 观察手足口病患儿T淋巴细胞亚群和相关细胞因子水平的变化.方法 选取本院收治的HFMD患儿56例作为病例组,年龄8个月～6岁;另外选取48例健康幼儿作为对照组.采用流式细胞技术检测外周血T淋巴细胞亚群,采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测血清IL-17、IL-22、IL-23和TNF-α水平.结果 与对照组T淋巴细胞总数（61.22±8.68）％、CD4^＋ （42.46±7.53）％、CD8^＋（22.82±7.82）％、CD4 ^＋/CD8^＋ （2.78±0.38）％比较,病例组T淋巴细胞总数（46.26±12.32）％、CD4^＋ （25.56±6.86）％、CD8^＋（13.22±4.67）％、CD4^＋/CD8^＋（1.62±0.21）均下降（P＜0.05或P＜0.01）;与对照组血清IL-17水平（12.32±1.05）μg/L、IL-22（15.14±3.65）pg/mL、IL-23（16.46±0.96） pg/mL和TNF-α（1.87±0.23） pg/mL比较,病例组IL-17水平（33.21±3.56） μg/L、IL-22（48.18±7.83） pg/mL、IL-23（38.2±1.66） pg/mL和TNF-α（3.02±0.46） pg/mL均升高（P＜0.05或P＜0.01）.结论 T淋巴细胞亚群和相关细胞因子IL-17、IL-22、IL-23和TNF-α参与手足口病免疫机制与炎症反应,对手足口病的发生发展和预后有重要的预测意义.     

湿疹患者外周血CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋调节性T细胞和血清IL-4，IL-10，TGF—β检测及临床研究

目的通过对湿疹患者外周血单个核细胞（PBMC）中转录调节因子3（FOXP3）阳性的天然调节性T细胞（nTreg,CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋）表达率及其血清白介素4（IL-4）、白介素10（IL-10）、转化生长因子β（TGF—β）水平的检测结合心理评定并与对照组进行对比分析,探讨其在湿疹发病过程中的作用及患者发病的可能机制。方法应用流式细胞术（flow cytometry,FCM）和ELISA法对湿疹患者（n=32）、对照组（n=32）分别进行PBMC中nT表达率及血清IL-4,IL-10,TGF-β水平进行检测,同时应用症状自评量表（SCL-90）进行心理评定。结果湿疹患者PBMC中nTreg细胞表达率（％）为4．86±1.69,明显低于对照组6．10±2．21;血清IL-4（96．21±20．07pg／ml）,IL-10（12．6±1．95pg／ml）含量高于对照组相应检测值53．93±13．10,9．82±1．34pg／ml;TGF-β 15．76±3．11ng／ml含量明显低于对照组（24．39±4．44ng／ml）,各项检测指标两纽之间比较差并均有统计学意义（P〈0．01）,患者心理健康状态与对照组比较也有显著性差异。结论nTreg数量降低减弱了对Th2细胞的抑制作用是湿疹患者发病的关键环节,Th1／Th2失衡、细胞因子分泌异常在疾病的发生发展中起重要作用,是湿疹发病和慢性化的重要原因,加强对湿疹患者的心理疏导以减少对患者精神、躯体造成的伤害,提高疗效具有重要临床意义。     

Th17细胞在系统性红斑狼疮伴发心血管疾病中的意义探讨

目的：分析 Th17细胞在系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）并发心血管疾病（cardiovascular disease,CVD）中的意义。方法按照1997年美国风湿病协会修订的 SLE分类标准收集河北医科大学第二医院2011年9月～2013年3月住院的 SLE患者共61例,同时以性别年龄匹配的健康对照组20例作对照。SLE实验组分为 SLE并发CVD患者22例,SLE不并发CVD患者39例。采用流式细胞分析技术测定 Th17细胞,酶联免疫吸附法检测 IL-17,并分析与疾病活动的相关性。结果①SLE并发 CVD组、SLE不并发 CVD组和健康对照组 Th17细胞的检测结果分别为（2.09±0.98）％,（1.75±0.75）％和（0.89±0.44）％,健康对照组与 SLE并发 CVD组、SLE不并发 CVD组相比,差异有统计学意义（t＝4.717～5.030,P值均＜0.001）;IL-17在 SLE并发 CVD组、SLE不并发 CVD组和健康对照组的水平分别为85.64±20.76 pg／ml,75.25±28.14 pg／ml和35.06±6.58 pg／ml,健康对照组与 SLE并发 CVD组和 SLE不并发CVD组相比,差异有统计学意义（t＝6.275～9.954,P 值均＜0.001）;两组 SLE之间 Th17细胞和 IL-17水平差异无统计学意义（t＝1.520,1.513,P＞0.05）。②SLE患者血浆 IL-17水平与 SLEDAI积分和抗 ds-DNA抗体滴度之间呈正相关（r＝0.393,P＝0.008;r＝0.558,P＜0.001）,与补体 C3水平呈负相关性（r＝－0.423,P＝0.005）。SLE患者中 Th17细胞在CD4＋T细胞中所占的比例与 SLEDAI评分和抗 ds-DNA抗体滴度之间呈正相关（r＝0.681.P＜0.001;r＝0.492,P＝0.015）,而与C3水平呈负相关（r＝－0.534,P＝0.027）。结论 Th17细胞和 IL-17在 SLE中表达均升高,且与疾病活动性相关。心血管因素并未影响 SLE患者中Th17细胞和 IL-17的表达水平。     

树突状细胞疫苗调节慢性乙型肝炎患者细胞因子诱导的杀伤细胞相关免疫功能的研究

目的研究树突状细胞（DC）疫苗对培养的慢性乙型肝炎（CHB）患者细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）免疫功能的调节作用。方法采用体外细胞培养的方法培养30例CHB患者CIK细胞,分为DC疫苗组和无DC疫苗组,培养14d后用流式细胞术检测各组ClK中CD3’CIM’、CD3’CD8’及CD3’CD56’T细胞的所占比例,ELISA方法检测培养上清中自细胞介素-12（IL-12）、γ干扰素（IFN-1）及白细胞介素-4（IL4）的浓度。结果DC疫苗组CD3^＋CIM^＋、CD3^＋CD8^＋及CD3^＋CD56^＋T细胞所占比例分别为18．27％、64．36％和20．00％,无DC疫苗组则分别为17．79％（P〉0．05）、54．69％（t=4．130,P〈0．01）和13．39％（t=5．601,P〈0．01）。DC疫苗组的CIK培养上清中IL．12、IL4及IFN-1的浓度分别为（177．82±130．06）、（31．774-9．52）、（86．99±56．30）ng/L,无DC疫苗组分别为（80．83±50．15）n∥L（t=3．811,P〈0．01）、（40．33±19．74）ng／L（t=2．141,P〈0．05）和（42．07±19．68）ng／L（t=4．125,P〈0．01）。结论CIK细胞培养中加入DC疫苗进行诱导,增强了所培养CIK细胞的杀伤活性。     

间充质干细胞调控趋化因子配体2对系统性红斑狼疮作用的机制探讨

目的:探讨趋化因子配体2[chemokine(C-C motif)ligand 2,CCL2]在间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植治疗系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)中的作用。方法:采用酶联免疫吸附试验检测SLE患者及正常对照者的血清、尿液及骨髓MSCs培养上清中的CCL2及白细胞介素(interleukin,IL)-17的表达水平,并采用流式细胞术检测外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中Th17-CD4+IL-17+的百分率及其表面CCR2的表达。将18只雌性MRL/lpr SLE小鼠随机分为SLE小鼠组(n=6)(未治疗组)、脐带MSCs移植联合CCL2中和抗体治疗SLE小鼠组(n=6)及脐带MSCs移植联合同型对照IgG2B治疗SLE小鼠组(n=6),另选6只同周龄雌性C57BL/6小鼠作为健康阴性对照组。采用酶联免疫吸附试验检测各组血清CCL2及IL-17的水平,流式细胞术检测各组PBMCs中CD4+CCR2+IL-17+细胞百分率。结果:SLE患者血清[(839.0±160.5)pg/mL]、尿液[(881.8±162.7)pg/mL]及骨髓MSCs培养上清[(22 935±2 304)pg/mL]的CCL2含量均显著高于正常对照者[(433.0±31.0)pg/mL、(222.7±52.8)pg/mL、(8 394±5 125)pg/mL];SLE患者PBMCs中CD4+CCR2+IL-17+细胞百分率较正常对照者显著升高(P<0.01)。脐带MSCs移植联合CCL2中和抗体治疗SLE小鼠组血清CCL2浓度显著低于未治疗组,PBMCs中CD4+T细胞亚群IL-17、CCR2表达较未治疗组显著降低。结论:MSCs移植治疗SLE的效果可能通过抑制CCL2表达,进而下调患者Th17细胞水平来实现。     

新疆维吾尔族静脉血栓患者Th17/Treg 细胞及相关细胞因子和细胞黏附分子整合素β 表达水平及临床意义

目的　探讨辅助性T 细胞 17（T helper 17 cells,Th17）/ 调节性T 细胞（regulatory T cells,Treg）及相关细胞因子和细胞黏附分子整合素β 在新疆维吾尔族静脉血栓患者中的表达及其对静脉血栓栓塞症（venous thromboembolism,VTE）的临床诊断价值分析。方法　回顾性选择2017 年1 月～ 2019 年6 月喀什地区第二人民医院确诊的新疆维吾尔族VTE 患者63 例作为研究对象;同时以70 例健康体检人群作为对照。观察Th17/Treg 细胞及其相关细胞因子IL-2,IL-6,IL-10,IL-17,TNF-α 以及细胞黏附分子整合素β 的表达情况;分析Th17/Treg 细胞及细胞黏附分子整合素β 对VTE 的临床预测价值。结果　VTE 组患者Th17（32.65%±11.56%）和Treg 细胞（12.16%±5.84%）及相关细胞因子IL-2（7.58±3.61pg/ml）,IL-6（10.64±5.12 pg/ml）,IL-10（8.15±3.87 pg/ml）,IL-17（9.37±4.36 pg/ml）,TNF-α（10.95±5.83 pg/ml） 表达及Th17/Treg 比例（2.68±1.23） 均较对照组（20.98%±10.14%,9.85%±4.27%,6.45±2.34pg/ml,5.32±2.48pg/ml,6.49±2.85pg/ml,3.15±1.84pg/ml,8.12±3.98pg/ml,2.02±0.95） 明显升高, 差异均有统计学意义（t=2.163 ～ 10.909,均P<0.05）。VTE 组患者细胞黏附分子整合素β1（16.59%±8.42%）,β2（96.58%±28.64%）,β3（15.75%±5.26%）均较对照组（10.53 %±4.16%, 85.75 %±19.83%,8.45 %±2.01%）明显升高,差异均有统计学意义（t=2.556 ～ 10.774,均P<0.05）。ROC 曲线显示,Th17 和Treg 细胞及Th17/Treg 比值诊断VTE 的AUC 值分别为0.826,0.809 和0.745,当最佳截断值分别取27.45%,11.26% 和2.51 时,诊断灵敏度分别为76.19%,79.36% 和69.84%,特异度分别为87.30%,82.54% 和80.95%。整合素β1,β2 和β3 诊断VTE 的AUC值分别为0.723,0.706 和0.698,当最佳截断值分别取13.97%,93.75% 和12.88% 时,诊断灵敏度分别为73.02%,77.78% 和71.43%,特异度分别为68.25%,63.49% 和66.67%。结论　维吾尔族静脉血栓患者存在Th17/Treg 平衡失调及相关细胞因子和细胞黏附分子整合素β 表达增高;Th17/Treg 细胞和细胞黏附分子整合素β 对VTE 具有较高的诊断价值,可将其作为VTE 的辅助诊断指标。     

腹腔镜下直肠癌手术对免疫平衡及CD4^＋CD45RA^＋和CD4^＋CD45RO^＋T细胞的影响

目的通过分别测定腹腔镜手术和开腹手术直肠癌患者Th1／Th2平衡偏移情况及CD4^＋CD45R细胞的比例变化,以比较两种术式对直肠癌患者免疫功能的影响。方法分别采用流式细胞学和酶联免疫吸附法方法检测行腹腔镜下直肠癌手术和常规开腹手术2组患者术前1d、术后2、7d的外周血中CD4^＋IFN-γ^＋T和CD4^＋IL4^＋T细胞比率及IFN-γ和IL-4血清浓度,同时检测CD4^＋CD45RA^＋T细胞和CD4^＋CD45RO^＋T细胞在不同手术影响下的比例变化。结果开腹组术后2、7d的Th1细胞[（4．51±1．52）％,（7．26±2．59）％]与术前[（12．06±1．82）％]相比明显减少（P均〈0．05）,Tha2细胞[（6．70±2．41）％,（6．70±2．41）％]与术前[（4．47±1．90）％]相比明显增加（P均〈0．05）;开腹组术后2、7d的IFN-γ[（57．15±23．64）ng／L,（72．70±27．31）ng／L]与术前（123．47±32．52）ng／L相比明显下降（P均〈0．05）,而术后2、7d的IL-4[（55．55±7．29）ng／L,（57．56±7．13）ng／L]与术前[（41．87±5．83）ng／L]相比明显升高（P均〈0．05）;腹腔镜组Th1细胞、Th2细胞、IFN-γ和IL-4手术前后数量无明显变化（P均〉0．05）;术后7d开腹组CD4^＋CD45RA^＋T细胞（35．11±7．82）与术前（31．11±6．72）相比明显增加（P均〈0．05）,开腹组术后CD4^＋CD45RO^＋T细胞（61．21±9．13）较术前（68．11±11．42）减少（P〈0．05）。结论腹腔镜下直肠癌手术较开腹手术对机体免疫平衡影响较小,有利于保护直肠癌患者的细胞免疫功能。     

高效抗逆转录病毒疗法治疗24周AIDS患者Th17和Treg细胞的表达特 点简

目的：观察高效抗逆转录病毒疗法（HAART）治疗24周后获得性免疫缺陷综合征（AIDS）患者辅助性17（Th17）细胞和调节性T（Treg）细胞表达水平的变化。方法选取HAART治疗的45例AIDS患者,将其按CD4＋T细胞计数分成1～100 cells/μl、101～200 cells/μl和201～350 cells/μl三组,于抗病毒前和抗病毒24周后采集静脉血,运用流式细胞仪检测外周血中CD4＋T细胞、Th17和Treg细胞的表达水平,并比较分析其相互关系。结果 AIDS患者治疗24周时Th17细胞在CD4＋T细胞中的表达频率为（1.91±0.84）%,而治疗前为（1.31±0.45）%,差异有统计学意义（t=3.67, P＜0.05）; Treg细胞表达频率在治疗24周时和治疗前分别为（5.97±0.93）%和（8.32±1.12）%,差异有统计学意义（t=3.32,P＜0.05）。治疗24周时,Th17细胞明显升高,CD4＋T细胞基数为201～350 cells/μl患者组其Th17细胞表达频率显著高于101～200 cells/μl和1～100 cells/μl组患者（t分别=2.68、4.51,P均＜0.05）。 Treg细胞表达频率经治疗后显著下降,CD4＋T细胞基数为201～350 cells/μl组患者Treg细胞表达频率下调程度显著高于101～200 cells/μl和1～100 cells/μl组患者（t分别=2.47、3.89,P均＜0.05）。治疗前CD4＋T细胞数与Th17表达的百分率呈正相关（r=0.48, P＜0.05）,与Treg表达的百分率呈负相关（r=-0.30,P＜0.05）。结论 AIDS患者Th17表达水平下降,Treg表达则上升;HAART治疗能有效地上调Th17表达频率,下调Treg细胞水平;CD4＋T细胞基数高的患者较基数低的患者对抗病毒治疗其免疫反应更有效,提示Th17和Treg细胞表达频率可作为HAART治疗有效性的一项判断依据。     

慢性ITP患儿调节性B细胞与效应Th细胞的相关性研究

目的：研究慢性特发性血小板减少性紫癜（CITP）患儿外周血调节性 B 细胞数量与相关细胞因子的变化,分析它们之间的相关性,研究这些细胞的分化在 CITP 发病机制中的作用。方法选择30例 CITP 患儿,外周血单个核细胞被分离,Breg细胞以及 Th1、Th22、Th17的比例变化通过流式细胞术检测;并体外培养 PBMC 细胞,上述培养液中 IL-10水平以及 IFN-γ、IL-17、IL-22运用 ELISA 法检测,与同期选择的健康组比较。结果与健康组比较,CITP 患儿外周血中 Th1、Th17、Th22细胞亚群的比例均升高（18．4±4．7 vs 10．82±4．4;2．42±1．02 vs 1．23±0．42;0．79±0．24 vs 0．26±0．11,％）,调节性 B 细胞（Breg）的比例降低（0．83±0．21 vs 1．89±0．12,％）,差异均有统计学意义（P ＜0．05）,Breg 细胞分别与 Th 效应细胞亚群的变化呈负相关（P ＜0．05）,细胞因子 IL-10水平与 IFN-γ、IL-17、IL-22水平也呈负相关（P ＜0．05）。结论调节性 B 细胞比例下调可能参与CITP 患儿效应 T 细胞免疫紊乱机制,为 CITP 患儿的免疫调节治疗提供了新思分路。     

养阴清热方对严重脓毒症患者免疫功能及预后的影响

目的 观察养阴清热方对严重脓毒症患者疾病预后的影响并探讨其作用机制.方法 2010至2012年入住清远市中医院ICU的严重脓毒症患者64例,排除恶性肿瘤、妊娠患者,随机分为基线资料均衡的中药组（n=34）和对照组（n=30）.在相同基础治疗条件下,中药组增加养阴清热方治疗.分别于治疗前及治疗第7天、14天清晨空腹抽取外周静脉血,直接免疫荧光法检测血CD4＋、CD8＋、CD4＋/CD8＋、NK细胞水平,酶联免疫吸附法检测IL-1β、IL-6、TNF-α水平;计算急性生理和慢性健康评分（APACHEⅡ评分）,对比各指标治疗前后的变化及组间的差异;于治疗第28天比较两组的病死率.结果 治疗第7天两组各项指标已有不同程度的变化.治疗第14天评价：（1）中药组CD4＋、CD4＋/CD8＋、NK细胞水平回升,分别为（31.60±6.10）％、1.96±0.67、（27.63 ±7.06）％,较对照组的（17.50±4.98）％、0.39±0.35和（14.99±7.87）％上升明显（P均＜0.01）.（2）中药组CD8＋、IL-6及TNF-α水平下降,分别为（20.52±9.53）％、（707.65±308.92） pg/ml、（15.44±3.12） pg/ml,较对照组的（32.84±6.13）％、（1065.87±92.73） pg/ml和（20.13±3.63） pg/ml下降明显（P均＜0.05）.（3）中药组APACHE Ⅱ评分（21.44±4.94）低于对照组（26.03±3.91） （P＜0.01）.第28天病死率中药组（20.6％）低于对照组（46.7％）（P＜0.05）.结论 养阴清热方治疗有助于调整严重脓毒症患者免疫失衡、抑制炎症细胞因子,降低病死率、改善预后.