DNA甲基转移酶与早期胚胎发育

哺乳动物胚胎中存在两种类型的DNA 甲基转移酶(DnmT):一种是维持型的DnmT1,用于保持子代细胞与母细胞相同的DNA特异性甲基化模式;另一种是新发型的Dnmt3,主要负责建立胚胎发育分化过程中的组织特异性甲基化模式,在卵母细胞中母本印记基因的建立等方面也起一定作用.DnmT对胚胎的正常发育至关重要,其表达缺失或异常表达均可导致胚胎、胎儿的发育异常.     

辅助生殖技术对印记基因失调疾病及表观遗传影响的研究进展

基因组印记是指不同亲本来源的一对等位基因之间存在功能上的差异,属于表观遗传修饰的一种。普遍认为与甲基化有关。印记是正常发育珏不可少的调控机制,其异常表达必然引起多种相关疾病。而目前研究表明,印记基因失调相关疾病（Beckwith—Wiedemann syndrome）作为辅助生殖技术的副作用,在子代中发病率增高。本研究就辅助生殖技术下的印记基因相关疾病研究进行综述,介绍辅助生殖子代中印记基因相关疾病的发病状况及导致该疾病发生的机理,总结辅助生殖技术对配子印记基因甲基化的影响及临床意义。     

孕期限食对子代生长发育及卵母细胞印记基因H19甲基化的影响

目的 建立孕期限食的小鼠模型,探究宫内营养不良对子代生长发育及卵母细胞印记基因H19甲基化水平的影响。方法 正常交配见栓的雌鼠随机分为实验组和对照组,d_0.5~d_12.5监测孕鼠每日消耗食物量。实验组小鼠自d_12.5到分娩,给予日常消耗食量的一半食物量,对照组不做任何处理。两组孕鼠在分娩后给予正常食物量。观测子代小鼠的出生数量、出生体重、性别比,同时监测子代小鼠在不同生长时期的体重。子代小鼠性成熟后,取雌鼠的卵母细胞,检测印记基因H19的甲基化水平。结果 （1）孕期限食的母鼠状态差,体型偏小,活动量极少,个别孕鼠在分娩前死亡,早产发生率明显增加（P<0.05）。（2）限食孕鼠的子代小鼠出生体重明显低于正常孕鼠的子代（P<0.05）,低体重现象持续至3周龄。3周龄时,限食孕鼠的子代开始了追赶式生长,并在8周龄时,体重明显高于正常子代小鼠（P<0.05）。（3）重亚硫酸盐处理结合限制性内切酶反应结果显示,孕期限食的子代卵母细胞印记基因H19的甲基化水平与对照组一致,未见异常。结论 孕期限食明显增加早产率,并且造成子代低出生体重。在性成熟后,子代有明显的肥胖趋势,但子代卵母细胞印记基因H19甲基化水平正常。     

膀胱癌中IGF-2和H19基因特异表达模式及印记缺失分析

目的：探讨胰岛素样生长因子-2（IGF-2）和H19等位基因在膀胱癌中特异性表达的模式及基因组印记丢失的分析。方法：结合PCR和限制性片段长度多态性分析RFLP技术以及DNA甲基化检测技术分析我院收集的膀胱癌标本IGF-2和H19等位基因进行杂合子筛选并进一步研究基因印记缺失与膀胱癌两者之间的关系。结果：在40例膀胱癌中IGF-2等位基因筛选出21例杂合子现象的标本,在这21例杂合子标本中有12例发生了基因组印记缺失;H19等位基因筛选出19例杂合子现象的标本,在这19例杂合子标本中有10例发生了基因组印记缺失。H19基因缺失现象与H19DMR区域的高度去甲基化正相关,而IGF-2基因缺失现象与H19DMR区域的高度甲基化正相关。结论：膀胱癌中IGF-2和H19的基因印记缺失与H19DMR区域的甲基化状态有高度的相关性。     

癌症中基因外表型遗传性改变的研究与潜在应用

随着人类基因组测序工作的基本完成,进入了功能基因组学时代,高等生物的复杂性并不在于有更多的结构蛋白基因编码,而在于基因外调控机制更为复杂。深入研究在各种生命过程中基因表达的调控及其在疾病发生中的异常,已成为这一领域的关键课题之一。多细胞有机体的生命过程中,有两大类基因外修饰在决定基因外调控中起非常重要的作用:组蛋白的乙酸化及胞嘧啶的甲基化。许多研究发现基因外表型改变在癌     

环境内分泌干扰物对胚胎发育调控基因DNA甲基化的影响

 DNA甲基化(DNA methylation)是一种重要的遗传修饰,是表观遗传学研究的重要内容。许多研究证实环境内分泌干扰物能够影响DNA甲基化的水平,有关环境内分泌干扰物对DNA甲基化的影响已经成为当前胚胎发育学的研究热点。本文就环境内分泌干扰物（environmental endocrine disruptor,EED）对胚胎发育调控基因DNA甲基化的影响进行综述,为今后的机制性研究提供参考。     

Tet基因家族与DNA去甲基化

人Tet基因家族包含Tet1～3。该家族通过催化5-甲基胞嘧啶化学修饰参与DNA去甲基化和基因表达调控。此家族可能在胚胎发育、机体造血、造血系统疾病与肿瘤发生中起重要作用。本文就此领域研究进展作一综述。     

新生儿Beckwith-Wiedemann综合征1例并文献复习

<正>Beckwith-Wiedemann综合征（BWS）是一种罕见的印记基因疾病,大多于生后确诊,且由于该病易患胚胎性肿瘤,需长期随访观察。现将湖北医药学院附属十堰市人民医院于2020年3月收治的1例经基因确诊的BWS患儿病史资料报道如下。     

人类胚胎发育、精子发生与DNA甲基化关系的研究进展

表观遗传是指基因的核苷酸序列不发生变化,但基因表达却发生了可遗传的改变。DNA甲基化是表观遗传重要的调控机制,它参与了动物胚胎发育、基因印迹和X染色体失活等过程,在基因表达的调控中具有重要作用。DNA甲基化可引起基因组中相应区域染色质结构变化,使染色质高度螺旋化,凝缩成团,失去转录活性。现对DNA甲基化与人类胚胎发育与精子生成的关系等进行综述。     

印记基因H19在不同质量精子和胚胎中的甲基化状态

目的 对印记基因H19在三种不同质量的精子中的甲基化状态以及精卵结合后形成胚胎的甲基化状态进行比较, 初步探索精子甲基化状态与受精后胚胎甲基化状态的关系.方法 收集在云南省第一人民医院生殖医学科行IVF-ET治疗中废弃的精子91份和D3期低质量胚胎171份, 依据WHO第5版根据精子参数将精子样本分为3组, 分别分析3组的精子及受精后胚胎H19的甲基化状态.结果 B组在精子中和胚胎中H19甲基化状态异常比例显著高于另外2组 (P<0.05) .结论 印记基因H19甲基化状态异常主要集中在异常参数精子组中, 提示其异常状态与精子质量降低有关;通过IVF、ICSI受精后的胚胎都出现同等比例的异常状态, 没有显著差异;异常精子的胚胎未出现异常, 这可能与胚胎自身的自我修复功能有关;而个别正常精子受精后的胚胎出现甲基化印记异常的原因可能与体外培养条件有关, 也有可能与卵子质量本身有关.     

基因组印记与基因组印记病

基因组印记(又称遗传印记)是指基因根据亲代的不同而有不同的表达。印记基因的存在能导致细胞中两个等位基因的一个表达而另一个不表达。基因组印记是一正常过程,此现象在一些低等动物和植物中已发现多年。印记的基因只占人类基因组中的少数,可能不超过5%,但在胎儿的生长和行为发育中起着至关重要的作用。基因组印记病主要表现为过度生长、生长迟缓、智力障碍、行为异常。目前在肿瘤的研究中认为印记缺失是引起肿瘤最常见的遗传学因素之一。本文就基因组印记及基因组印记病进行综述。     

基因印迹与胚胎生长发育

基因印迹为近年来新发现的遗传规律 ,与胚胎的生长发育 ,罕见的遗传病 ,肿瘤发生有着密切的联系 ,且解释了许多孟德尔规律无法企及的现象 ,其意义正逐渐被认识 ,研究也日趋深入。传统的孟德尔规律指出 :胚胎从父亲和母亲遗传的两个拷贝即等位基因 (Ａｌｌｅｌｅｓ)均有同等的机会表达而与其亲代来源无关 ,但近年来发现一小部分基因的表达取决于这些基因是源自父亲还是源自母亲 ,这种等位基因表达取决于亲本来源的现象即是基因印迹 (Ｇｅｎｏｍｉｃｉｍｐｒｉｎｔｉｎｇ) ,也称亲代印迹 (Ｐａｒｅｎｔａｌｉｍｐｒｉｎｔｉｎｇ)或配子印迹 (…     

胃癌中E-cadherin基因5'端CpG岛甲基化研究

目的:检测胃癌组织中E-cadherin基因5'端CpG岛启动子区域的甲基化状况,探讨该基因甲基化与胃癌组织学类型、淋巴结转移、年龄、性别之间的关系,研究该基因甲基化在胃癌发生发展过程中的作用.方法:采用甲基化特异性PCR方法对胃黏膜中E-cadherin基因5'端CpG岛启动子区域甲基化状况进行研究.结果:胃癌中E-cadherin基因甲基化率为34.6%(28/81),而正常胃黏膜中均未检测到该基因异常甲基化.E-cadherin基因甲基化与肿瘤组织学类型、淋巴结转移及性别均无相关性,但与年龄有关,随着年龄增加患者甲基化率呈增高趋势.结论:E-cadherin基因5'端CpG岛启动子区域甲基化与年龄有关.E-cadherin基因5'端CpG岛启动子区域异常甲基化是胃癌细胞常见的分子事件,可能参与了胃癌的发生发展过程.     

乳腺癌及癌旁组织中PTEN基因5’CpG岛甲基化状态研究

目的：检测乳腺癌及癌旁组织中PTEN基因5’端CpG岛启动子区域的甲基化状况。方法：采用甲基化特异性聚合酶链反应（Methylation-specific PCR,MSP）方法对乳腺癌及癌旁组织中PTEN基因5’端CpG岛启动子区域甲基化状况进行研究。结果：乳腺肿瘤组织中PTEN基因甲基化率为31.5%（29/92）,显著高于癌旁组织和正常组织（P〈0.05）,而癌旁组织和正常乳腺组织中甲基化率均比较低,分别为8.3%（2/24）、6.2%（1/16）,两者差异无统计学意义（P〉0.05）;PTEN基因甲基化与肿瘤组织学类型、年龄及肿瘤大小均无相关性,但与淋巴结转移相关（P〈0.05）,淋巴结转移组PTEN基因甲基化率显著高于无淋巴结转移组。结论：PTEN基因5’端CpG岛启动子区域甲基化可能是散发性乳腺癌PTEN基因失活的主要机制,参与了乳腺癌的发生发展过程;PTEN基因甲基化可能是乳腺癌发生发展过程中的晚期事件,提示可以考虑将PTEN基因甲基化作为评价乳腺癌肿瘤细胞转移潜能的分子标记。     

体外受精-胚胎移植中胚胎形态与发育潜能的关系

①目的探讨不同形态胚胎的发育潜能。②方法对222对夫妇242个周期的胚胎着床率进行了分析。③结果4～5细胞胚胎着床率为10．34％，6～7胚胎着床率为15．84％，8细胞胚胎着床率为34．95％，≥9细胞胚胎着床率为11．11％。8细胞胚胎着床率高于其他细胞组。无碎片胚胎着床率为33．89％，碎片〈20％胚胎着床率为17．81％，碎片〈50％胚胎着床率为11．11％。无碎片胚胎着床率高于其他组。④结论胚胎中卵裂球数目及胚胎内碎片对着床率有明显的影响。胚胎形态可作为评估胚胎发育潜能的参数。     

印迹基因H_(19)在少弱精子症中印迹状态的检测

目的:通过研究印迹基因H19在少弱精子症中的印迹状态,探讨H19与精子发生障碍的相关性。方法:采用聚合酶链式反应与逆转录-聚合酶链式反应,结合限制性片段长度多态性分析法(RFLP),对36例异常精液和15例正常精液标本进行H19印迹状态检测。结果:15例正常精液没有发现印迹丢失,36例异常精液检测出3例印迹丢失,印迹丢失率为8.3%。结论:H19印迹丢失与精子发生障碍有关,可能影响精子的数量。     

小鼠的遗传分析技术及疾病模型

小鼠作为人类理想的疾病生物模型，不仅同人类具有生理相似性，而且为建立人类疾病模型提供了大量的遗传资源.“人类基因组和小鼠基因组计划”完成后，转基因动物、基因剔除和基因剔入、大规模突变、特异位点检测系统等一些新技术的出现，提高了克隆新易感基因和建立人类疾病小鼠模型的能力、本文对一些与小鼠疾病模发展有关的最新技术进行了总结。     

槲皮素拮抗大气细颗粒物PM2.5对大鼠胚胎毒性的体外研究

目的：探讨槲皮素对大气细颗粒物（fine particulate matter,PM2.5）发育毒性的拮抗作用及可能机制。方法：于2015年12月至2016年3月以大气采样器将北京市某地区采暖期PM2.5收集在石英滤膜上,超声震动后将洗脱液过滤,冷冻干燥后得到PM2.5样品。采用体外全胚胎培养模型,将胎龄9.5 d的SD大鼠胚胎以50 mg/L PM2.5染毒,然后用不同剂量（0.1、0.5、1.0、5.0 μmol/L）的槲皮素干预,培养48 h后对大鼠胚胎生长发育和组织器官形态分化进行评分。染毒结束后,剥离卵黄囊,制备胚胎单细胞悬液,通过流式细胞仪检测细胞线粒体内活性氧（reactive oxygen species,ROS）的生成情况。结果：PM2.5染毒后,大鼠体外胚胎的卵黄囊直径、头长、颅臀长和体节数明显减少,各组织器官形态学评分明显降低,细胞线粒体内ROS水平显著升高。槲皮素干预后,对PM2.5致胚胎生长发育阻滞有明显改善作用,可使胚胎卵黄囊直径、颅臀长、头长增大,体节数增多,卵黄囊血管分化情况得到改善,并对PM2.5所致的尿囊、体屈、心脏、后脑、中脑、前脑、听觉、视觉、嗅觉、腮弓、上颌突、前肢芽及后肢芽分化抑制均有不同程度的改善,细胞内线粒体ROS含量也显著降低。1.0 μmol/L槲皮素干预效果最佳,其他3个剂量组的槲皮素干预也有一定的保护作用,但效果均不及1.0 μmol/L剂量组。结论：适量补充槲皮素对PM2.5致胚胎发育毒性有拮抗作用,清除线粒体内ROS可能是其机制之一。     

ICR小鼠胚胎成纤维细胞的培养及饲养层的制作

目的：建立ICR小鼠胚胎成纤维细胞饲养层培养体系，用于胚胎干细胞建系及研究。方法：选取不同胎龄的鼠胚原代细胞分离成纤维细胞，制作饲养层，使用不同浓度丝裂霉素C处理，以细胞形态、生长曲线、囊胚种植情况为饲养层评价指标。结果：ICR小鼠胚胎成纤维细胞可在胎龄12．5～14．5d进行原代细胞分离；12．5d为最佳分离时间；13．5和14．5d分离的细胞需在3代以后使用；6代以前细胞可用于饲养层制作；20mg/L丝裂霉素C作用2．5h可达到较好的处理效果。结论：ICR小鼠可用来分离、培养胚胎成纤维细胞，用于胚胎干细胞饲养层的制作。     

牛磺酸对大鼠胚胎期海马发育的影响

目的:探讨牛磺酸对大鼠胚胎期海马发育的影响.方法:大鼠自受孕开始喂以实验饲料,分为对照组和0.6％牛磺酸组.观察新生仔鼠海马中蛋白质、DNA和RNA的含量及海马超微结构的变化.结果:0.6％牛磺酸组新生仔鼠海马蛋白质、DNA和RNA的含量显著高于对照组(P＜0.01).电镜下见0.6％牛磺酸组新生仔鼠海马神经元核仁明显,有丰富的粗面内质网、核糖体和线粒体等细胞器,线粒体嵴清晰可见.结论:母体在妊娠期间补充牛磺酸,有利于仔鼠海马的发育.