PCR技术克隆SD大鼠全长长细胞内段形式瘦素受体基因cDNA

目的:探讨瘦素作用机制、了解瘦素及瘦素受体对代谢的影响,为下一步实验,表达重组体的构建提供了方便。方法:以逆转录多聚酶链扩增(RT-PCR)克隆长细胞内段形式瘦素受体(OBRb)基因cDNA。结果:成功克隆长细胞内段形式瘦素受体(OBRb)基因cDNA。结论:为进一步研究瘦素与瘦素的生理作用和作用机制的系列研究打下实验基础。     

大鼠全长OBRb cDNA克隆及真核表达重组体的构建

目的克隆SD大鼠全长长胞内段瘦素受体基因cDNA(OBRb cDNA)及构建其真核表达重组体,为进一步研究该基因打下基础.方法应用RT-PCR方法分段扩增全长OBRb cDNA,再将它们连接起来,并获得载有全长OBRb cDNA的阳性克隆质粒.将上述质粒中全长OBRb cDNA定向插入真核表达质粒pcDNA3中,筛选出阳性克隆.通过限制性内切酶酶切和核苷酸序列测定进行鉴定.结果重组的克隆质粒和真核表达质粒经限制性内切酶酶切后获得的片段大小均与理论值一致.结论成功地克隆了SD大鼠全长OBRb cDNA,并构建了真核表达重组体.     

瘦素受体基因变异对儿童肥胖的影响

目的探讨单纯性肥胖儿童及健康儿童不同基因型瘦素受体(Leptin receptor,LEPR)第20外显子基因变异的发生率,为疾病预防提供理论依据。方法选择6～14岁单纯性肥胖儿童50例,同时选择50例健康儿童,年龄6～14岁。受试者禁食12 h,抽取外周静脉血,与相同条件下测身高、体重,按公式计算体重指数(BMI)。用改良的聚合酶链式反应-限制性片断长度多态(PCR-RFLP)及聚丙烯酰胺凝胶电泳方法分析单纯性肥胖儿童及健康儿童LEPR基因的20外显子基因变异频率。等位基因频率计算采用平衡法。分类资料用频数表示,组间比较采用χ2检验。以P0.05为有统计学意义。结果本试验检出3种LEPR基因第20外显子的基因型,其酶切片段分别为:A/A型:201 bp,75 bp;A/G型:201 bp,173 bp,75 bp,28 bp;G/G型:173 bp,75 bp,28 bp。健康儿童及肥胖儿童均有第3057位核苷酸G→A突变,但肥胖儿童突变频率增高,差异有显著性(P0.05)。结论单纯性肥胖儿童及健康儿童瘦素受体基因第20外显子存在基因变异,肥胖儿童的基因变异频率明显高于健康儿童。     

瘦素mRNA和瘦素受体mRNA在乳腺癌合并肥胖症患者乳腺癌组织中的表达及其与临床病理的关系

目的 检测瘦素mRNA和瘦素受体mRNA在乳腺癌合并肥胖症患者乳腺癌组织中的表达情况,并探讨二者之间及其与临床病理之间的关系.方法 采用逆转录多聚合酶链反应(RT-PCR)法,检测48例乳腺癌合并肥胖症和36例乳腺良性病变合并肥胖症患者乳腺组织中瘦素mRNA和瘦素受体mRNA的表达,分析二者之间及其与临床病理之间的关系.结果 瘦素mRNA、瘦素长型受体[Leptin receptor long form,Lep-R(L)]mRNA及瘦素短型受体[Leptin receptor short form,LeP-R(S)]mRNA在乳腺癌合并肥胖症患者乳腺组织中的表达水平分别为(0.71±0.32)、(0.64±0.29)和(0.57±0.21),明显高于乳腺良性病变合并肥胖症患者[(0.41±0.26)、(0.34±0.19)和(0.30±0.17)],(P＜0.05).乳腺组织中瘦素mRNA的表达水平与Lep-R(L)及Lep-R(S)mRNA水平呈显著正相关分别为(r=0.4030,P=0.0002;r=0.3502,P=0.0014).瘦素mRNA和瘦素受体mRNA的表达与腋窝淋巴结转移、绝经、TNM分期及病理类型均无显著相关性.结论 瘦素可能以自分泌的方式参与了乳腺癌的发生.     

瘦素受体长胞内段mRNA表达增加对骨骼肌细胞葡萄糖氧化的影响

目的：研究原代骨骼肌细胞中瘦素受体长胞内段mRNA表达增加对葡萄糖氧化的影响。方法：RT－RCR扩增瘦素受体长胞内段cDNA，将扩增产物插入真核表达质粒，构建重组体，重组表达质粒经脂质体介导转染原代骨骼肌细胞，转染后48h加瘦素和D-[U-^14C]葡萄糖，收集^14CO2,液体闪烁检测其放射性。另经RT－PCR半定量方法检测瘦素受体长胞内段mRNA在骨骼肌细胞的表达。结果：扩增的瘦素受体长胞内段cDNA及其重组体在限制性内切酶酶切后所得各片段大小均与理论值一致。在重组表达质粒转染组，空带积分光密度比值较后两者升高（均P＜0．05）；但3组细胞间葡萄糖氧化差异无显著性。结论：成功构建含有瘦素受体长胞内段cDNA的重组真核表达质粒。单纯增加瘦素受体长胞内段mRNA表达不能改善瘦素对骨骼肌细胞的葡萄糖氧化作用。     

瘦素（Leptin）的研究进展

简要系统介绍了瘦素及其受体，以及与体重调节相关的新激素-格锐林(Ghrelin)的结构、功能、作用机理及其与肥胖症发生的相互关系，并指出肥胖症是心血管疾病的危险因素。     

免疫瘦素受体胞外近跨膜区重组融合蛋白对SD大鼠脂肪沉积的影响

目的原核表达瘦素受体（OBR）近跨膜区重组融合蛋白并进行SD大鼠免疫实验,观察其对SD大鼠脂肪沉积的影响。方
法设计1对带有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点特异性引物,扩增OBR胞外近跨膜区基因片段（1705~2364 bp）,经酶切后连接到
表达载体pRSETA的BamHⅠ和HindⅢ两酶切位点之间,构建OBR胞外近跨膜区重组表达质粒并在大肠杆菌E.coli BL21
（DE3）中表达,SDS-PAGE电泳分析和western blotting鉴定表达产物。随后制备OBR胞外近跨膜区重组融合蛋白并免疫SD大
鼠,观察其对SD大鼠体质量、采食量、体长、Lee’s指数、腹脂率、肝脏脂肪沉积、皮下脂肪沉积的影响。结果SDS-PAGE电泳分
析和Western blotting鉴定结果显示,在IPTG诱导下OBR胞外近跨膜区重组表达菌表达了相对分子质量27 600左右的融合蛋
白。对SD大鼠免疫OBR胞外近跨膜区重组融合蛋白后,体质量、体长、Lee’s指数、腹脂率、肝脏脂肪沉积与对照组无明显差异,
而采食量显著增加、皮下脂肪细胞体积减小。结论成功表达西藏小型猪瘦素受体胞外近跨膜区重组融合蛋白,免疫SD大鼠可
促进采食和抑制皮下脂肪沉积。
     

胎儿舌下腺内瘦素和瘦素受体免疫组织化学观察

的　观察胎儿舌下腺内瘦素和瘦素受体的表达、分布及发育规律。方法　HE和免疫组织化学SABC染色法。结果　胎儿舌下腺纹状管、小叶间导管上皮细胞呈瘦素及瘦素受体免疫反应阳性 ,免疫反应产物分布于导管上皮细胞胞质内 ,细胞核呈阴性反应。在胚胎发育的不同阶段 ,免疫反应强度亦不等。结论　胎儿舌下腺导管上皮呈瘦素和瘦素受体免疫反应阳性 ,可能与胎儿舌下腺的发育及功能活动的调节有关。     

瘦素及瘦素受体与高血压的研究进展

1994年肥胖(ob)基因被成功克隆,随后发现了其蛋白质产物瘦素(leptin)。瘦素是脂肪细胞分泌的一种脂源性内分泌多肽激素,由167个氨基酸组成,在分泌入血的过程中,N末端的21个氨基酸的信号肽被去除,形成活性瘦素,含146个氨基酸,相对分子质量为16×103。它主要由白色脂肪组织产生,以单体形式存在于血浆中,但需与载体蛋白结合才能在血液中运输。其生理作用主要是抑制食欲,减少能量摄取,增加能量消耗,抑制脂肪合成。影响瘦素分泌的主要因素有:体内脂肪含量、年龄、性别、胰岛素等,其中体内脂肪含量与瘦素呈正相关。女性的瘦素水平几乎是男性的2倍…     

Q开关Nd:YAG 1064 nm和532 nm波长激光照射对豚鼠血液流变性的影响

【目的】研究Q开关Nd :YAG 10 6 4nm和 5 32nm波长激光照射对豚鼠血液流变性的影响 ,了解所产生的生物学效应。【方法】波长为 10 6 4nm和 5 32nm各自 3种不同剂量的激光体外照射豚鼠。测定豚鼠血液黏度等 6项血液流变学指标。【结果】波长 10 6 4nm的两种大剂量和波长 5 32nm的最大剂量Q开关Nd :YAG激光体外照射豚鼠使高、中、低切变率下的全血黏度和血浆黏度升高 ,红细胞变形指数下降和聚集指数升高 ,其余 3种剂量的激光体外照射对血液流变性无显著改变。【结论】 10 6 4nm波长的Q开关Nd :YAG激光照射在一定剂量下可以改变血液流变性 ,选择合适的剂量可将血液流变性的影响降至最低     

口服氨甲环酸片联合Q开关1064 nm Nd:YAG激光治疗黄褐斑临床疗效观察

目的 观察口服氨甲环酸片联合Q开关1064 nm Nd:YAG激光对面部黄褐斑的临床疗效及应用价值。方法选取在本院确诊的黄褐斑患者200例为研究对象,采用回顾性分析的方法将其分为治疗组和对照组,每组各100例。治疗组采用口服氨甲环酸片加Q开关1064 nm Nd:YAG激光联合治疗,对照组仅予以Q开关1064 nm Nd:YAG激光治疗。每次激光治疗间隔周期为4周,共治疗6个周期,并随访6个月,观察治疗后临床疗效、复发及不良反应等情况,并对结果进行统计分析。结果治疗组总有效率为81%,对照组为52%,治疗组对黄褐斑的治疗疗效较对照组占明显优势(P<0.05),且无明显不良反应。治疗组复发率为4%,对照组复发率为12%,治疗组的远期疗效优于对照组。结论口服氨甲环酸片联合Q开关Nd:YAG激光治疗面部黄褐斑疗效佳,值得临床推广应用。     

可变脉宽倍频激光在治疗皮肤血管异常性疾病中的应用

目的　观察可变脉宽倍频Nd :YAG5 32nm波长激光治疗皮肤血管异常性疾病的疗效。方法　通过对 348例皮肤血管异常性疾病患者 (男 10 4例 ,女 2 4 4例 ;年龄由 3个月～ 5 2岁 ,平均 19岁 )应用该激光系统 (辅以动力冷却系统 )进行治疗 ,将治疗结果按颜色变化程度分级 ,比较不同疾病类型和不同部位疾病对激光的反应程度。结果　可变脉宽倍频Nd :YAG5 32nm波长激光对皮肤血管异常性疾病 ,特别是草莓样血管瘤和血管痣疗效最佳 ,满意率达 10 0 % ,葡萄酒色斑的治疗效果较好 ,满意率达78.1% ,面颊部毛细血管扩张及下肢病变疗效较差。结论　可变脉宽倍频Nd :YAG5 32nm波长激光治疗皮肤血管异常性疾病疗效较好 ,但要严格掌握适用证。     

调Q开关1064激光联合口服复方甘草酸苷片治疗黄褐斑疗效观察

目的研究调Q开关1064 nm Nd:YAG激光联合口服复方甘草酸苷片治疗黄褐斑的疗效观察。方法选取江苏大学附属常州市武进人民医院皮肤科门诊黄褐斑患者79例,随机分成观察组与对照组。观察组38例,对照组41例。两组患者均予调Q开关1064 nm Nd:YAG激光治疗(每6周1次,共治疗5次);观察组在使用调Q开关1064 nm Nd:YAG激光治疗的基础上,加服复方甘草酸苷片(美能片)每日3次,每次3片,4周为1个疗程,共3个疗程。总疗程结束后对两组患者进行疗效观察。结果观察组治愈15例,有效37例,治愈率为39.47%,总有效率为97.37%。对照组治愈11例,有效34例,治愈率为26.83%,有效率为80.49%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。在治疗期间,观察组有5例患者诉全身有轻度浮肿,3例出现轻度乏力,停药后症状消失。治疗组和对照组在激光术后分别有12例、16例患者面部出现红斑,该症状在冷敷治疗后缓解消失。随访6个月后记录两组患者复发情况:观察组有6例复发(15.79%),对照组有14例复发(34.15%)。结论使用调Q开关+1064激光联合口服复方甘草酸苷片治疗黄褐斑的疗效高于单纯调Q开关1064 nm Nd:YAG激光治疗且复发率低。     

低能量Q开关Nd:YAG1064nm激光治疗黄褐斑疗效与安全性的评价

目的 评价低能量Q开关Nd:YAG1064nm激光治疗黄褐斑的临床疗效和安全性。 方法 检索Cochrane Libraray、PubMed、EMbase、SinoMed、万方、维普及中国知网数据库中相关随机对照研究,按照Jadad评分表,逐一评价纳入研究质量,提取有效数据,采用RevMan 5.0对同质研究进行Meta分析。 结果 本研究共纳入8篇文献,其中包含109例患者,对低能量Q开关Nd:YAG1064 nm激光与对照组治疗的总有效率进行Meta分析,差异有统计学意义(OR=6.00,95%CI:4.02~8.94)。亚组分析中,与口服活血疏肝中药相比,差异有统计学意义(OR=4.19,95%CI:2.27~7.73),其余因存在临床异质性,均做描述性分析。 结论 低能量Q开关Nd:YAG1064nm激光能在一定程度上改善黄褐斑的临床症状,尤其是短期疗效,但仍存在炎症和色素沉着等不良反应,且可能复发。     

激光治疗复发性翼状胬肉的临床研究

目的观察Nd:YAG激光联合半导体532nm激光治疗复发性翼状胬肉的临床效果。方法将88只眼随机分为手术组和激光治疗组,其中手术组以常规手术切除法治疗,激光组先用Nd:YAG激光治疗,1周后再用半导体532nm激光治疗。结果随访2年,复发率手术组为20.46%,激光组为4.55%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论Nd:YAG激光联合半导体532nm激光治疗复发性翼状胬肉是一种有效的新的方法。     

Nd:YAG激光与后发性白内障

目的观察Nd:YAG激光对后发性白内障的治疗效果。方法对560眼分别诊断为Elschnig珍珠样小体性、皱褶性及纤维化性后发性患者行白内障YAG激光治疗,对与Elschnig珍珠样小体性、皱褶性后发性白内障采用十字形切开法,对纤维化性后发性白内障视纤维化程度采用开罐式切开术或十字形切开法。根据不同的病变类型选择不同的激光参数,激光后分别于1周、1个月和3～6个月,进行眼压、视力及眼部情况随访。平均随访时间2.5个月。结果 Elschnig珍珠样小体性后发性白内障180眼,激光后眼压保持正常者180眼,视力有所提高者178眼(99.0%);皱褶性后发性白内障290眼,激光后眼压保持正常者290眼,视力提高289眼(99.7%);纤维化性后发性白内障90眼,激光后眼压保持正常者90眼,视力提高者88眼(98.8%)。结论根据后囊膜混浊的程度和视力的情况灵活选择激光参数,确保高比例有效的脉冲能量,是YAG激光治疗后发性白内障的关键。     

Nd:YAG Laser and After-cataract

目的 观察Nd:YAG激光对后发性白内障的治疗效果.方法 对560眼分别诊断为Elschnig珍珠样小体性、皱褶性及纤维化性后发性患者行白内障YAG激光治疗,对与Elschnig珍珠样小体性、皱褶性后发性白内障采用十字形切开法,对纤维化性后发性白内障视纤维化程度采用开罐式切开术或十字形切开法.根据不同的病变类型选择不同的激光参数,激光后分别于1周、1个月和3~6个月,进行眼压、视力及眼部情况随访.平均随访时间2.5个月.结果 Elschnig珍珠样小体性后发性白内障180眼,激光后眼压保持正常者180眼,视力有所提高者178眼(99.0%);皱褶性后发性白内障290眼,激光后眼压保持正常者290眼,视力提高289眼(99.7%);纤维化性后发性白内障90眼,激光后眼压保持正常者90眼,视力提高者88眼(98.8%).结论 根据后囊膜混浊的程度和视力的情况灵活选择激光参数,确保高比例有效的脉冲能量,是YAG激光治疗后发性白内障的关键.     

新型波长(1.44μm)脉冲Nd:YAG激光治疗机对犬膀胱组织作用的量效关系研究

目的 研究国产医用新型波长(1.441μm)脉冲Nd:YAG激光治疗机对犬膀胱组织作用的量效关系,以评价该机在膀胱手术治疗中的应用前景.方法 采用脉宽640μs、频率5Hz、最大单脉冲能量1J的1.44μm脉冲Nd:YAG激光治疗机,按单脉冲能量0(对照)、0.2J、0.5J、0.8J,每次照射脉冲数1、5、10、20、40、80进行动物分组,每组5只比格犬.对犬的膀胱后壁进行活体照射.标本经组织切片制作,显微镜观察,计算机成像与测量,获取汽化宽度、汽化深度、凝固宽度与凝固深度等数据,经统计学处理,绘制量效关系曲线,分析作用机制.结果 试验可观测到各剂量组组织效应表现,最大汽化带宽度是1098.5±74.0μm,最大凝同带宽度是2078.2 4±70.9μm,最大汽化带深度是514.4±19.8μm,出现在单脉冲能量0.8J、脉冲数/次80剂量组;最大凝固带深度是512.7±11.6μm,出现在单脉冲能量0.8J、脉冲数/次20剂量组.结论 国产新型1.44μm脉冲激光治疗机对犬膀胱粘膜作用的组织效应程度与单脉冲能量、每次照射脉冲数呈正相关趋势,该机对膀胱组织有较强汽化作用,凝固层足以保证试验中创面清洁、粘膜无活动出血.提示该国产治疗机具有临床膀胱手术的良好开发意义.     

长脉宽1064 nm Nd：YAG激光治疗趾甲真菌病的疗效及安全性

目的：探讨长脉宽1064 nm Nd：YAG激光治疗趾甲真菌病的疗效及安全性。方法对确诊的104例（461个趾甲）趾甲真菌病患者,根据年龄段分为Ⅰ组（≥60岁）和Ⅱ组（<60岁）,按照SCIO评分及病甲位置的差异分为不同亚组;所有患者病甲均使用长脉宽1064 nm Nd：YAG激光进行每周1次、共10~12次的治疗,随访至初次治疗后的48周,观察疗效及不良反应。结果所有病人随访至48周,总体临床有效率为72.5%。Ⅱ组的临床有效率和真菌学治愈率均高于Ⅰ组,差异有统计学意义（P<0.05）。不同SCIO亚组之间的临床有效率无统计学差异（P>0.05）。第2~4趾甲亚组的临床有效率优于第1、第5趾甲亚组,差异有统计学意义（P<0.05）;所有患者无明显不良反应。结论长脉宽1064 nm Nd：YAG激光是一种安全微创有效的治疗甲真菌病的方法,可在临床推广使用。