组织工程化神经修复周围神经缺损的实验研究

目的通过人工神经修复神经缺损的实验研究，为神经组织工程的进一步研究和临床应用提供实验依据。方法分3组修复大鼠1cm长坐骨神经缺损：（A组）含许旺细胞的移植体；（B组）无许旺细胞的移植体；（C对照组）自体神经移植。术后10周内，进行肌肉湿重、电生理等测定以及组织学观察、图像分析。结果许旺细胞能与PLGA纤维构成活性细胞-材料复合物；神经修复术后10周，A、C两组电生理特性、组织学变化以及肌肉湿重等测定均明显优于B组，A组与C组之间无显著差别。结论许旺细胞能与PLGA纤维在体外构建具有活性的神经移植体并能够促进神经再生，其修复效果接近于自体神经移植。     

同种异体神经与自体神经瘤联合修复周围神经缺损的实验研究

目的 探讨用优化法处理后的脱细胞同种异体神经和自体神经瘤组成的联合体修复大鼠坐骨神经缺损的效果. 方法 30只SD大鼠随机分为2组(每组15只):A组(自体神经瘤模型组),行同种异体神经与自体神经瘤联合移植;B组(坐骨神经缺损模型组),做自体神经移植.将30只成年Wistar大鼠作为神经供体,取其单侧坐骨神经,制备为脱细胞同种异体神经.在术后的8周、16周进行坐骨神经功能指数评价、神经电生理和组织学检查. 结果 两组模型制备成功后,术后8周时大鼠均出现肢体躲避反应;术后16周时均有大量神经纤维通过移植体,两组再生神经的纤维数量、直径及髓鞘比较,差异无统计学意义;术后8周电生理检测发现A组再生神经的传导速度明显慢于B组(P<0.05),术后16周两组比较,差异无统计学意义(P>0.05);术后16周A组和B组坐骨神经功能指数比较,差异无统计学意义(P>0.05). 结论 同种异体神经与自体神经瘤组成的联合体能修复周围神经缺损,恢复神经的传导功能,有效地促进神经的再生,此联合体是一种良好的自体神经移植替代材料.     

化学萃取的异种神经修复神经缺损的可行性研究

目的 探讨联合应用十二烷基硫酸钠(Sodium dodecyl sulfate,SDS)和脱氧胆酸钠(Sodium deoxycholate)的化学萃取方法,对异种神经移植段进行脱细胞处理,构建异种神经去细胞基质膜管,应用于修复周围神经缺损的可行性.方法 取新鲜兔坐骨神经,切成长10mm的神经段,用十二烷基硫酸钠(Sodium dodecyl sulfate,SDS)和脱氧胆酸钠(Sodium deoxycholate)反复处理新鲜的兔神经段构建成异种神经去细胞基质膜管,修复大鼠坐骨神经缺损.结果 4个月后异种神经基质膜管与大鼠坐骨神经缝合处愈合良好,未见有神经瘤及粘连,HE染色显示异种神经基质膜管组桥接处再生神经结构连续性良好,移植段可见神经纤维及新生的血管.S-100免疫组织化学染色可见阳性的雪旺氏细胞沿神经纤维分布成条带状.电镜超微结构观察可见再生的神经纤维较粗大,排列紧密,呈均匀一致圆型或椭圆型,髓鞘较厚,轴突结构完整.结论 联合应用十二烷基硫酸钠(Sodium dodecyl sulfate,SDS)和脱氧胆酸钠(Sodium deoxycholate)的化学萃取方法构建的异种神经去细胞基质膜管可以修复大鼠坐骨神经缺损.     

聚乳酸复合NGF/TGF -β1对同种异体神经移植修复周围神经缺损影响的实验研究

目的 研究外消旋聚乳酸(PDLLA)—神经生长因子(NGF)—转化生长因子β1(TGFβ1)药物缓释系统对同种异体神经移植修复神经缺损的影响.方法 32只大鼠随机分成A、B、C、D4组,每组8只,所有大鼠左侧坐骨神经段性切除后,移植经过化学脱细胞处理后的同种异体神经段,A组在移植区域应用PDLLA- NGF -TGFβ1缓释膜,B、C两组分别应用PDLLA-NGF缓释膜、PDLLA-TGFβ1缓释膜,D组为空白对照组,术后观察各组大鼠的大体形态、步态、关节活动情况.术后12w进行电生理、组织学、免疫学等各项指标观测.结果 A组大鼠坐骨神经的复合肌肉动作电位波幅、运动神经传导速度及小腿三头肌湿重恢复率均高于对照组;光镜观察A组再生神经纤维数量和口径及髓鞘厚度均优于其他三组(P＜0.05).结论 PDLLA- NGF- TGFβ1药物缓释系统在同种异体神经移植修复周围神经段性缺损中,具有明显促神经再生作用.     

小肠黏膜下层复合雪旺细胞粗制品桥接周围神经缺损

目的 观察小肠黏膜下层(SIS)复合雪旺细胞粗制品修复周围神经缺损的效果.方法 选取健康雄性SD大鼠36只,随机平均分为3组(n=12).致大鼠坐骨神经12 mm缺损后,分别用SIS桥接修复(A组),SIS复合雪旺细胞粗制品修复(B组)和自体神经移植修复(C组).术后16周取材,通过组织学观察、肌肉湿重测量、计算机图像分析、Trueblue逆行示踪和透射电镜观察来评价神经再生效果.结果 组织学观察、Trueblue逆行示踪和透射电镜观察证实三组均有再生神经纤维通过缺损区;B组和C组大鼠的小腿三头肌湿重、单位面积轴突数量和神经组织面积均显著优于A组(P＜0.05),B、C两组间的差异则无统计学意义(P＞0.05).结论 SIS复合雪旺细胞粗制品修复周围神经缺损可达到自体神经移植的效果,有望替代自体神经移植.     

小肠黏膜下层复合雪旺细胞粗制品桥接周围神经缺损

目的观察小肠黏膜下层(SIS)复合雪旺细胞粗制品修复周围神经缺损的效果。方法选取健康雄性SD大鼠36只,随机平均分为3组(n=12)。致大鼠坐骨神经12 mm缺损后,分别用SIS桥接修复(A组),SIS复合雪旺细胞粗制品修复(B组)和自体神经移植修复(C组)。术后16周取材,通过组织学观察、肌肉湿重测量、计算机图像分析、Trueb lue逆行示踪和透射电镜观察来评价神经再生效果。结果组织学观察、Trueb lue逆行示踪和透射电镜观察证实三组均有再生神经纤维通过缺损区;B组和C组大鼠的小腿三头肌湿重、单位面积轴突数量和神经组织面积均显著优于A组(P<0.05),B、C两组间的差异则无统计学意义(P>0.05)。结论SIS复合雪旺细胞粗制品修复周围神经缺损可达到自体神经移植的效果,有望替代自体神经移植。     

HRP法对异种神经移植后再生纤维恢复的形态学研究

目的用辣根过氧化酶(HRP)逆行追踪技术探讨异种神经移植后神经纤维的再生.方法将多次冻融处理后的兔胫神经移植于大鼠坐骨神经,术后第2、4、6、8和10周,将HRP注人大鼠坐骨神经吻合部远侧端.结果移植术后第4周起在L4～5脊神经节见到HRP标记细胞,从第6周在腰段脊髓前角内见到标记细胞,其数量随术后存活期延长而增多.术后4周在移植神经内见少量再生神经纤维,6周后再生神经纤维穿过异种移植神经进入大鼠坐骨神经远侧端.结论自移植术后4周起,移植神经内已有再生纤维并部分恢复了轴浆流,证实了用HRP法可反映移植后神经纤维的再生情况.     

化学去细胞同种异体神经修复家兔面神经缺损

目的探索修复面神经缺损的一种新的有效替代材料。方法24只兔子随机分成实验组(化学萃取同种异体腓神经移植组,12只)和对照组(自体新鲜面神经移植组,12只)。每只兔子右侧面神经下颊支被切断以造成面神经缺损1 cm的模型,同时两组兔子分别以去细胞同种异体神经和自体面神经桥接修复。术后3个月行肌电图、电镜、图像分析仪以及靶肌肉运动终板染色检查。结果术后3个月两组在神经传导速度、有髓神经纤维计数、靶肌肉运动终板计数上的差异没有统计学意义,电镜检查结果相似。结论化学去细胞的同种异体神经在面神经缺损修复上是自体神经的一种有效替代物。     

聚乙二醇改性聚乳酸神经导管修复大鼠坐骨神经缺损

背景 组织工程有望替代自体神经移植,成为修复周围神经缺损的新途径,而组织支架神经导管正是组织工程三要素之一,针对组织支架神经导管的改进方法是目前的研究热点.目的 制备用于神经修复及再生的聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)改性聚乳酸(poly lactic acid,PLA)神经导管支架并用其修复大鼠坐骨神经缺损.方法 利用溶剂挥发法制备PLA神经导管支架,用丙烯酰氯与PEG发生酰氯酯化反应合成聚乙二醇双丙烯酸酯(PEGDA),用PEGDA通过化学交联的方式对导管内壁进行改性.电镜观察其微观形貌,利用CCK-8实验检测大鼠神经施万细胞RSC96在聚乙二醇改性的聚乳酸神经导管(PEG-PLA)预处理培养基中的增殖情况.取SD大鼠30只,随机分为自体神经移植组(ANG)、聚乙二醇改性聚乳酸神经导管组(PEG-PLA)、单纯聚乳酸神经导管组(PLA),每组10只.制作大鼠坐骨神经10 mm缺损模型,分别采用自体神经移植、PEG-PLA导管和PLA导管桥接修复.术后行大体观察,术后2周行移植段神经再生速度评价;术后4周、8周、12周行步态分析,测定坐骨神经功能指数;术后12周取材行移植段再生神经组织学评价、腓肠肌湿重恢复率测量和组织学检查.结果 扫描电镜可见制备的PEG-PLA神经导管内壁质地疏松,有取向性排列整齐的纹路;各组神经导管的浸提液与RSC96细胞共培养后,RSC96细胞增殖未受到抑制,提示各组神经导管的生物相容性良好;术后2周移植段神经免疫荧光染色结果可见PEG-PLA组轴突再生情况优于PLA组,低于ANG组;术后12周,PEG-PLA组的步态分析、腓肠肌肌肉湿重恢复率以及Masson染色等结果均明显优于PLA神经导管组,更接近自体神经移植的修复效果.结论 聚乙二醇改性聚乳酸神经导管具有良好的组织相容性,神经修复效果良好.     

脱细胞异种神经移植体复合BMSCs修复大鼠坐骨神经缺损的研究

目的：对脱细胞异种神经的生物相容性进行评价,证明应用其复合BMSCs促进神经再生和功能恢复的效果。方法：采用化学萃取法制备兔的脱细胞神经,应用扫描电镜观察其超微结构;将BMSCs种植到神经支架构建神经移植体,体外培养后观察细胞形态;用构建的异种神经移植体桥接大鼠坐骨神经缺损,术后8周,检测胫前肌湿重比率,对再生神经进行组织形态学分析;并应用免疫荧光染色检测神经内NGF的表达。结果：脱细胞异种神经较完整地保留了天然立体的施万细胞基底膜管结构,完全地移除了神经内的施万细胞、轴突和髓鞘成分;在体外培养中支持种植的BMSCs黏附和生长。神经移植术后,与单纯异种脱细胞神经移植组相比,复合BMSCs的异种神经移植体移植能使胫前肌湿重比率增加、有髓神经纤维数目、髓鞘厚度和轴突直径增加;增加再生神经内NGF的表达。结论：异种脱细胞神经移植体具备天然的立体结构,移除了施万细胞、髓鞘等抗原成分;神经支架无细胞毒性,具有良好的细胞相容性;复合BMSCs的异种神经移植体可显著地促进神经再生及功能恢复。     

微囊化神经组织联合脱细胞神经移植修复犬坐骨神经缺损

目的 了解微囊化神经组织与脱细胞神经联合移植桥接犬坐骨神经30 mm缺损后腓肠肌的变化.方法 将健康成年杂种犬12只随机分为A、B、C、D 4组(n=3):A组截取双侧坐骨神经行化学萃取制备脱细胞神经;B、C组使用脱细胞神经移植修复犬的坐骨神经30 mm缺损,B组同时辅以微囊化神经组织移植;D组行自体神经移植修复缺损.术后定期观察术侧肢体运动功能恢复情况,6个月时检测神经移植段运动传导速度,并取术侧及健侧腓肠肌行琥珀酸脱氢酶(succinic dehydrogenase,SDH)、突触素和运动终板染色,以及取距远端吻合口以远1 cm的坐骨神经神经行Masson、固蓝及NF-200染色.结果 B、C、D组实验动物均纳入实验动物数量分析、无脱失.图像分析表明B组腓肠肌SDH光密度、肌纤维截面积、突触素及运动终板光密度及面积等与C组有明显统计学差别,而与D组无明显统计学差别,运动功能恢复、电生理及坐骨神经形态学检测均与腓肠肌检测结果相符合.结论 微囊化神经组织细胞与脱细胞神经联合移植修复缺损神经后,重新支配靶器官,使腓肠肌萎缩明显减弱,效果优于单纯脱细胞神经移植,有望代替自体神经移植.     

有活性的人工神经导管修复大鼠面神经的实验研究

目的探讨胶原细胞源性神经生长因子（GDNF）基因转染的许旺细胞与聚乳酸／聚羟基乙酸（PLGA）管复合构建的人工神经导管在修复面神经缺损方面的优势。方法利用乳鼠臂丛神经和坐骨神经取材,双酶消化法培养许旺细胞,PcDNA3．1（＋）／GDNF质粒通过脂质体转入许旺细胞。与PLGA管构建有生物活性的人工神经导管。将30只sD大鼠随机分成3组,分别用直接缝合（A组）,未转染的许旺细胞与PLGA管（B组）,转染的许旺细胞与PLGA管修复面神经缺损（C组）。术后2周,1个月,2个月,3个月分别进行大体观察、面神经肌电图、有髓神经纤维计数和髓鞘厚度测量。结果C组的面神经肌电图较A,B组恢复快,且差异有统计学意义;A,B组之间神经肌电图差异无统计学意义。C组的有髓神经纤维计数和髓鞘厚度均较A,B组高,差异有统计学意义。结论GDNF基因转染的许旺细胞复合PLGA管构建的具有生物活性的人工神经导管在修复面神经缺损方面优势明显。     

小针刀配合局部阻滞治疗臀上皮神经卡压症

目的观察小针刀疗法配合局部药物阻滞治疗臀上皮神经卡压症的临床疗效。方法对52例臀上皮神经卡压症患者采用小针刀疗法配合局部注射2%利多卡因3 ml、维生素B_(12) 500μg、曲安奈德20 mg及红花注射液5 ml混合液。结果痊愈39例,好转13例,总有效率100%,经3月～1年随访,痊愈47例,好转5例。结论小针刀疗法配合局部药物阻滞治疗臀上皮神经卡压症有可靠的疗效。     

带血运的尺神经移植加端侧吻合治疗大段正中神经和尺神经缺损的实验研究

目的:探讨用带血运的尺神经移植加端侧吻合治疗大段正中神经和尺神经缺损的可行性.方法:用SD大鼠30只,将前臂尺神经、正中神经造成1. 5 cm的缺损,将两神经近端行端端吻合,尺神经距断端1.5 cm处保留血运切断神经,术后4周将尺神经血运切断与正中神经远断端吻合,并在远侧正中神经外膜开窗与尺神经远断端行端侧吻合.然后在第二次术后第4、6、8周(A、B、C)三个时间组进行大体观察并对两端端一个端侧吻合口行显微镜下、组织学观察及电生理检查.结果:术后功能逐渐恢复,术后第8周功能基本正常.镜下观察,第二次手术后4周吻合口愈合良好,直径略粗、外膜增厚,端侧吻合处愈合良好.神经光滑,弹性好.电生理检查,第二次术后第4周(A)桡、尺侧屈腕肌有再生电位,小鱼际肌无再生动作电位;术后6周(B)桡、尺侧屈腕肌运动单位电位为单纯相,小鱼际肌有再生电位;术后8周(C)桡、尺侧屈腕肌呈混合相电位,小鱼际肌呈单纯混合相电位.组织学观察,两端端吻合口处有神经束通过,端侧吻合处轴突排列有序像一条神经两个分支.结论:带血运的尺神经移植加尺神经、正中神经端侧吻合是一种可行的治疗前臂正中神经、尺神经大段缺损的方法.     

带血管肋间神经转位重建截瘫患者的部分感觉功能

目的：重建胸腰段脊柱骨折所致感觉平面位于Ｔ９￣１１脊髓节段安全性截瘫患者的臀、股外侧和外阴、股内侧区皮肤感觉功能。方法：６例截瘫患者均为男性，磁共振检查证实脊髓损伤达Ｔ１０￣１１。切除截瘫平面以上１￣２个节段的肋间神经外侧皮支（一般为第７／８或８／９肋间神经），带肋间动静脉转位经皮下隧道引至腹壁外侧，与切断的髂腹股沟神经和股外侧皮神经远端用移植的腓肠神经桥接吻合。结果：６例均恢复了大粗隆及臀、股外     

PHB导管复合神经生长因子在大鼠坐骨神经损伤模型中的疗效研究

目的研究应用PHB复合神经生长因子在大鼠坐骨神经损伤模型的疗效。方法SD雄性大鼠随机分为PHB神经导管移植组、自体神经移植组、免疫抑制下的异体神经移植组和PHB复合应用神经生长因子导管移植组,采用坐骨神经功能指数检测和神经电生理测定进行神经功能测试。病理学检测和电镜观察神经解剖结构。结果PHB导管复合神经生长因子组坐骨神经功能指数和神经传导速度显著优于异体神经移植组和PHB神经导管移植组;病理学和电镜检测显示PHB导管复合神经生长因子组髓鞘再生与自体神经移植组相似,而显著优于其余两组。结论在坐骨神经损伤修复中PHB导管复合应用神经生长因子神经修复效果与自体神经移植相似,而显著优于异体神经移植和PHB神经导管移植。     

联合引导腰丛- 坐骨神经阻滞的临床应用

目的 评价超声联合神经刺激仪引导腰丛- 坐骨神经阻滞的效果及安全性。方法 择期拟行美国麻醉医师协会（ASA）Ⅲ、Ⅳ级患者单侧下肢手术患者60 例随机分为3 组（n =20）,联合组于超声联合神经刺激仪引导下完成,超声组、神经刺激仪组分别于超声、神经刺激仪引导下完成腰丛- 坐骨神经阻滞后缓慢推注0.5% 盐酸罗哌卡因25 ml。记录3 组不同时刻血液动力学指标、神经阻滞完成时间、麻醉起效时间、镇痛维持时间、麻醉效果、辅助用药使用率及不良反应发生率。结果 3 组患者同时点比较及与同组T0 时刻比较,平均动脉压（MAP）及心率（HR）差异无统计学意义（P >0.05)。与神经刺激仪组比较,联合组及超声组神经阻滞完成时间、麻醉起效时间均降低,且术后镇痛维持时间均增加（P <0.05）;与超声组比较,联合组麻醉起效时间均降低,术后镇痛维持时间增加（P <0.05）。与神经刺激仪组比较,联合组及超声组不良反应发生率均降低（P <0.05）;与超声组比较,联合组不良反应差异无统计学意义（P >0.05)。结论 超声联合神经刺激仪引导腰丛- 坐骨神经阻滞应用于ASA Ⅲ - Ⅳ级患者单侧下肢手术效果较佳,可缩短操作时间、麻醉起效时间,且血流动力学平稳,并不增加不良反应发生率,临床应用安全。