小鼠白介素-12在人卵巢癌SKOV3中的抗肿瘤作用

目的观察转染至SKOV3卵巢癌细胞中小鼠IL-12全长基因的质粒能稳定表达相关细胞因子基础上,在脾细胞存在的情况下对SKOV3肿瘤细胞的杀伤作用.方法MTT方法检测对SKOV3卵巢癌细胞增殖的影响,免疫组化法检测SKOV3卵巢癌细胞表面IL-12蛋白的表达.结果转染后癌细胞免疫组化可见IL-12表达,在脾细胞的作用下,MTT结果显示IL-12对SKOV3卵巢癌细胞有抑制其增殖的作用,P＜0.05.结论成功地将IL-12基因转染至SKOV3卵巢癌细胞中并稳定表达相关细胞因子,在脾细胞存在情况下对SKOV3细胞有抑制其增殖作用,从而杀伤卵巢癌细胞,具有抗肿瘤作用.     

小鼠IL-12基因转染对人卵巢癌Skov3细胞的生长及细胞因子的表达

目的:观察含小鼠IL-12全长基因的质粒转染到Skov3人卵巢癌细胞中,在脾细胞存在的情况下对肿瘤细胞的影响及相关细胞因子的表达. 方法:脂质体转染技术将基因转染至Skov3人卵巢癌细胞中,ELISA方法检测IL-12及INF-γ的表达,MTT方法检测对Skov3卵巢癌细胞增殖的影响. 结果:转染后48 h检测到IL-12的高表达,约(473±38) ng/L;而未转染组约13～17 ng/L,两者比较差异有统计学意义(P＜0.05). 在脾细胞作用下产生INF-γ,以作用后24 h表达量高,约(173±18) ng/L,较未转染组高,比较有统计学意义(P＜0.05). 转染后癌细胞免疫组化可见IL-12表达,在脾细胞的作用下,IL-12对Skov3卵巢癌细胞有抑制其增殖的作用(P＜0.05). 结论:可以将IL-12基因转染至Skov3人卵巢癌细胞中并表达IL-12,脾细胞检测其活性并有相应的细胞因子产生,对Skov3细胞有抑制其增殖作用,从而杀伤卵巢癌细胞,具有抗肿瘤作用.     

携带mIL-12基因的增殖腺病毒在鼻咽癌细胞中增殖及mIL-12高效表达

目的联合选择性增殖腺病毒溶肿瘤细胞和小鼠白细胞介素12(mouse interleukin-12, mIL12)免疫治疗的作用,提高对肿瘤细胞的杀伤作用。方法用携带mIL12的选择性增殖腺病毒CNHK200-mIL12转染鼻咽癌细胞株CNE3和915,测定其在鼻咽癌细胞株中的增殖能力和mIL12的表达水平。结果CNHK200-mIL12转染鼻咽癌细胞后,免疫组化染色显示大部分细胞腺病毒六联体蛋白(hexon)阳性,用流式细胞仪检测,转染24 h 后CNE3和915细胞的阳性率分别比0 h增高39%和4%,转染72 h后,病毒增殖超过1 000倍,增殖能力同dl1520相似,并能高水平表达mIL12,在1×104个CNE3和915细胞中分别达到(84.5±4.6)和(75.6±3.4)ng/105空斑形成单位(plaque forming unit, PFU)。结论携带mIL12 的CNHK200在p53缺陷的鼻咽癌细胞中增殖,并且高效表达mIL12,为进一步研究体内外对肿瘤杀伤作用奠定基础。     

mIL-12基因转染促进小鼠树突状细胞混合淋巴细胞反应

目的 观察ｍＩＬ－１２基因转染的小鼠树突状细胞（ＤＣ）功能的改变。方法 分离小鼠骨髓单个核细胞与ｒｍＧＭ－ＣＳＦ和ｒｍＩＬ－４培养１周,对培养的细胞进行形态学观察,ＦＡＣＳ检测细胞表面ＤＥＣ２０５、ＣＤ８６表达。以ｍＩＬ－１２重组腺病志染培养的ＤＣ,ＥＬＩＳＡ测定培养上清中ｍＩＬ－１２的水平。混合淋巴细胞反应检测转染细胞的功能。结果培养１周后,得到具有典型ＤＣ形态的细胞,以ｍＩＬ－１２重组腺病毒为     

小鼠白介素-12体外基因转染成功与瘤基因疫苗的应用

目的 探讨小鼠白介素-12基因体外转染至人卵巢癌细胞SKOV3中与瘤基因疫苗应用的可行性。方法 以脂质体外转染法将含有小鼠白介素-12全长基因的质粒转染至人卵巢癌细胞SKOV3中，转染后以ELISA法检测上清中mIL-12细胞因子的表达。结果 小鼠白介素-12基因可以转染至人卵巢癌SKOV3中，转染后可以检测到mIL-12的表达。结论 体外转染mIL-12基因的成功为瘤基因疫苗的应用提供了体外实验基础及可行性。     

IL—2基因转染细胞激活非特异性免疫杀伤细胞的抗肿瘤作用

以ＮＩＨ３Ｔ３细胞作为载体细胞，用基因转染的方法建立了持续分泌白细胞介素２（ＩＬ－２）的细胞株，在体外此细胞上清可以增强小鼠脾细胞和腹腔巨噬细胞对黑色素瘤Ｂ１６细胞的杀伤作用（与对照组比较，均为Ｐ〈０．０１），体内注射基因转染细胞则可以抑制黑色素瘤细胞在体内的生长（与对照组比较，均为Ｐ〈０．０１）。结果表明，分泌ＩＬ－２的成纤维细胞可以通过激活非特异性免疫杀伤细胞而达到抗肿瘤的作用，是一种有较大潜     

新城疫病毒疫苗对人卵巢癌细胞株治疗作用的研究

目的：研究新城疫病毒疫苗（ATV-NDV）对人卵巢癌细胞株体外生长的抑制作用.方法：制备人卵巢癌细胞株3A0 ATV-NDV瘤苗,将不同浓度的ATV-NDV、白细胞介素12（IL-12）、白细胞介素15（IL-15）、ATV-NDV＋IL-12、ATV-NDV＋IL-15分别与正常人外周血淋巴细胞混合培养,MTT法测定其刺激淋巴细胞增殖的程度及对肿瘤细胞的生长抑制率；HE染色法观察效靶比为50：1时活化的淋巴细胞与3A0细胞共同培养24～96 h后细胞形态学的变化.结果：活化的淋巴细胞与靶细胞共培养可杀死肿瘤细胞,并具有时效性（P＜0.05）；不同细胞间细胞生长抑制率（GIR）差异无显著性（P＞0.05）；IL-15、IL-12与ATV-NDV在活化淋巴细胞方面具有协同作用，与单独作用差异有显著性（P＜0.01）；IL-15与ATV-NDV作用差异无显著性（P＞0.05）。淋巴细胞作用48 h后3AO细胞即出现凋亡形态。结论：经ATV-NDV、IL-12、IL-15、ATV-NDV＋IL-12、ATV-NDV＋IL-15混合培养的正常人外周血淋巴细胞可有效地抑制3AO细胞株的生长,并具有时间、浓度依赖性,其作用机制是诱导细胞凋亡。     

姜黄素对人卵巢癌细胞株SKOV3的抗增殖作用

目的:探讨姜黄素对人卵巢癌细胞株SKOV3的抑制增殖作用及其机制.方法:采用MTT法测定姜黄素在不同浓度、不同时间对SKOV3的抑制增殖效应,流式细胞术分析细胞周期分布及凋亡率,透射电镜观察细胞的超微结构变化,免疫细胞化学法检测凋亡相关基因蛋白的表达.结果:姜黄素可抑制SKOV3细胞的生长,其抑制率与药物浓度和作用时间呈依赖关系,72h的中效浓度(IC50)为79.96μmol/L,流式细胞仪分析证实姜黄素能使SKOV3细胞聚积在G2/M,电镜观察发现姜黄素可诱导细胞凋亡,姜黄素作用72h后,免疫细胞化学表明突变型P53蛋白(MTP53)及Bcl-2表达减弱,Bax及Fas表达增强.结论:姜黄素对SKOV3细胞有抑制增殖作用,通过下调MTP53、Bcl-2的表达及上调Bax、Fas的表达而诱导细胞凋亡.     

携带白细胞介素12基因逆转录病毒载体包装细胞株体内直接注？…

目的 研究体内直接注身携带白细胞介素１２（ｍＩＬ－１２）逆转录病毒载体包装细胞株对体内肝癌细胞生长抑制作用,探索基因治疗新途径。方法 构建携带ｍＩＬ－１２的逆转录病毒载体,将载体转染包装细胞株,用该细胞株分别在大鼠腹腔内与肝癌细胞株混合接种,在肝癌局部及脾内直接注射,观察对肝癌生长抑制作用及其对大鼠毒性反应、免设功能变化。结果 应用该细胞株与肝癌细胞株在腹腔进行混合接种,１：１０以下治疗组可使大鼠     

转染白细胞介素－12基因的脐带间充质干细胞对胃腺癌细胞的影响

目的：探讨转染白细胞介素－12（IL－12）基因的脐带间充质干细胞（UCMSCs）对胃腺癌细胞的影响。方法原代分离培养和鉴定人UCMSCs;利用重组构建的IL－12和绿色荧光蛋白（ GFP）融合表达的慢病毒载体（LV－IL－12－GFP）感染UCMSCs,酶联免疫法（ELISA）检测细胞中IL－12的表达。用转染了LV－IL－12－GFP的UCMSCs与胃腺癌细胞SGC－7901共培养,Transwell双室培养体系检测胃腺癌细胞SGC－7901的侵袭能力,原位细胞凋亡方法检测胃腺癌细胞SGC－7901的凋亡情况,Cylinder方法检测48 h后转染了LV－IL－12－GFP的UCMSCs向胃腺癌细胞SGC－7901的迁移能力。结果成功分离得到UCMSCs;ELISA结果显示,经IL－12基因转染的UCMSCs可稳定表达持续高水平的IL－12;Transwell结果显示,与转染了LV－IL－12－GFP的UC-MSCs共培养的胃腺癌细胞SGC－7901的侵袭能力明显下降（P＜0.05）,凋亡率明显增加（P＜0.05）;Cylinder柱结果显示,转染了LV－IL－12－GFP的UCMSCs向胃腺癌细胞SGC－7901的定向迁移能力明显下降（ P＜0.05）。结论 UCMSCs可作为IL－12基因载体靶向追踪胃腺癌细胞,发挥肿瘤治疗作用。     

白细胞介素-12基因治疗肿瘤及抑制肝转移

[目的]探讨经静脉转染表达mIL-12的DNA质粒在肿瘤的治疗及抑制肝转移中的作用.[方法]经皮下和腹腔接种M5076细胞建立荷瘤模型,用水流动力学方法将mIL-12基因转染荷瘤C57BL/6小鼠,观察实验组与对照组的生存率及肿瘤转移灶数目,用ELISA法检测血清中细胞因子水平,用小鼠脾细胞的细胞毒性实验评价CTL和NK细胞活性.[结果]转染pGEG.mIL-12小鼠血清中白细胞介素-12(IL-12)及IFN-γ水平明显升高.经皮下接种肿瘤细胞建立荷瘤模型的转染pGEG.mIL-12小鼠组抑制肿瘤细胞作用、抑制肿瘤细胞肝转移和生存时间与对照组相比较差异均有统计学意义.经腹腔接种肿瘤细胞建立荷瘤模型转染pGEG.mIL-12小鼠组与对照组相比较明显抑制腹腔内肿瘤播散,延长生存时间,差异有统计学意义.M5076细胞对转染pGEG.mIL-12小鼠脾细胞的CTL和NK细胞破瘤细胞活性均不敏感.[结论]用水流动力学方法转染小鼠细胞因子基因产生的高水平IL-12对CTL不敏感的M5076肿瘤有治疗和抑制肝转移的作用.     

携带白细胞介素12基因逆转录病毒载体包装细胞株体内直接注射治疗肝癌的实验研究

目的研究体内直接注射携带白细胞介素12（mIL-12）逆转录病毒载体包装细胞株对体内肝癌细胞生长抑制作用,探索基因治疗新途径。方法构建携带mIL-12的逆转录病毒载体,将载体转染包装细胞株,用该细胞株分别在大鼠腹腔内与肝癌细胞株混合接种,在肝癌局部及脾内直接注射,观察对肝癌细胞生长抑制作用及其对大鼠毒性反应、免疫功能变化。结果应用该细胞株与肝癌细胞株在腹腔进行混合接种,1：10以下治疗组可使大鼠长生存,而大于1：10治疗组则只能延长生存期。肝癌局部和脾内治疗组中第1天、第3天治疗能使大鼠长期生存,第5天、第7天治疗组则生存期明显延长,二者疗效无明显差别,但脾内治疗组副作用明显减少。免疫学分析与对照组相比,治疗组肝癌组织中浸润的淋巴细胞明显增多,以NK细胞及细胞毒T细胞为主。病理学结果治疗组肿瘤组织血管壁明显增厚,管腔狭窄。结论体内直接注射携带白细胞介素12的逆转录病毒包装细胞株可抑制肝癌细胞生长,早期治疗优于晚期治疗,脾内直接注射治疗是一条安全且有效的肝癌基因治疗的新途径。     

水流动力学注射介导的IL-12基因对小鼠恶性腹水的治疗作用

目的：应用水流动力学注射基因转移法转移白细胞介素12（IL-12）基因，观察其对小鼠恶性腹水的治疗效果。方法：通过小鼠腹腔注射H₂₂肿瘤细胞建立恶性腹水模型。将小鼠分为3组，接种后第3天通过水流动力学注射方法分别注射质粒pCMV-mIL-12、pCMVβ和生理盐水(NaCl)进行治疗。治疗后一定时间点取血检测血清中IL-12、干扰素-γ（IFN-γ）和一氧化氮（NO）的含量。注射后第14天各组分别处死3只小鼠，测量腹水体积，腹水细胞进行HE和AO/EB染色。其余小鼠用于观察生存期。结果：与只注射pCMVβ或生理盐水的小鼠相比，接受pCMV-mIL-12治疗的小鼠的生存时间明显延长（P<0.01），而且小鼠血清中IL-12、IFN-γ和NO水平明显升高（P<0.01或P<0.05），小鼠腹水中有活力的肿瘤细胞明显减少（P<0.01），凋亡的细胞增多（P<0.01）。结论：水流动力学注射介导的IL-12基因表达减少了恶性腹水小鼠的血性腹水生成并诱导肿瘤细胞凋亡，从而延长了小鼠生存期。     

IL-2和IL-12的单/联合基因治疗对肝癌大鼠体内IL基因表达和T细胞亚群的影响

目的:探讨大鼠诱发性肝癌模型中脾内直接注射IL-2和(或)IL-12基因对血清IL-2和IL-12,以及T细胞活性的影响.方法:全部肝癌大鼠(以二乙基亚硝胺诱发制备)48只分为4组(空载对照组、IL-2单基因治疗组、IL-12单基因治疗组、IL-2/IL-12联合基因治疗组),构建携带IL-2和(或)IL-12基因的逆转录病毒载体及其包装细胞,含IL-2和(或)IL-12基因的包装细胞于不同时间对诱发性肝癌大鼠进行脾内注射转染细胞,比较大鼠血清IL-2和IL-12浓度、T细胞活性和毒性反应.结果: IL单基因治疗后血清IL-2或IL-12明显增高,IL-2/IL-12基因联合治疗组中血清IL较单基因组显著增高(P<0.01),病理示肝癌组织中淋巴细胞浸润明显增多.IL单基因治疗组T细胞活性较对照组显著增高,IL-2/IL-12基因联合组T细胞功能较IL单基因组增强,且持续时间长.结论: 脾内直接注射IL-2和(或)IL-12基因可增强T细胞活性,IL基因联合治疗优于IL单基因治疗.     

大鼠肝癌模型脾内转染IL-2和(或)IL-12基因对NK细胞的激活作用

目的 :研究脾内直接注射携带 IL- 2和 (或 ) IL- 1 2基因的逆转录病毒包装细胞株对血 IL- 2和 IL- 1 2以及 NK细胞活性的影响。方法 :构建携带 h IL- 2和 (或 ) m IL- 1 2基因的逆转录病毒载体。将肝癌细胞 CBRH3注入大鼠腹腔 ,形成肿瘤 ,断颈处死 ,剖腹取出肿瘤组织 ,剪碎后接种于 5 0只 Wistar大鼠肝脏一叶 ,制备肝癌模型。模型大鼠随机分为生理盐水对照组、空载体对照组、IL- 1 2基因治疗组、IL- 2基因治疗组及 IL- 2 / IL- 1 2联合基因治疗组 ,每组 1 0只。含 IL- 2和 (或 ) IL- 1 2基因的包装细胞于肝癌接种后 1、3、5、7d进行脾内注射转染脾细胞。 EL ISA法检测大鼠血 IL- 2和 IL- 1 2浓度 ,放射性活度测定法检测 NK细胞活性 ,并进行病理学和免疫组化检查。结果 :IL基因治疗后 3d,IL - 2 / IL - 1 2联合基因组血清 h IL - 2与单基因治疗组相比无显著差异。病理示治疗后肝癌组织中淋巴细胞浸润明显增多。 IL治疗组 NK细胞活性较对照组显著增高 (P<0 .0 1 )。治疗后 3d血清 IL达高峰 ,以后逐步下降。 IL - 2 / IL - 1 2联合基因组较 IL单基因组增高 (P<0 .0 5 )。 结论 :脾内直接注射携带 IL -2和 (或 ) IL - 1 2基因的逆转录包装细胞株可明显增强 NK细胞活性 ,IL联合基因治疗优于 IL单基因