不同浓度染铅大鼠海马神经元Ca_(2 )浓度与LTP关系的研究

目的 :探讨铅对大鼠海马神经元 Ca2 浓度的影响及其与长时程增强 (L TP)的关系。方法 :断乳后 Wistar大鼠自由饮用不同浓度醋酸铅溶液 (0 .0 15 % ,0 .10 % ,0 .15 % ) ,建立慢性染铅动物模型。高频刺激 (HFS)海马区诱发长时程变化后 ,分离海马神经元 ,测定 [Ca2 ]i。结果 :各染铅组大鼠海马神经元 [Ca2 ]i与对照组比较均明显增高(P <0 .0 5 ) ;血铅浓度 (3.2 8± 0 .88) μm ol/ L 以上时海马 L TP产生率下降 ,三染铅组 PS幅值均降低 ,L TP阴性组 [Ca2 ]i 明显高于 L TP阳性组 (P <0 .0 5 )。结论 :慢性染铅可使 HFS后大鼠海马神经元 [Ca2 ]i 升高 ,损害海马区 L TP的在体诱导 ;铅致 L TP发生率下降与海马神经元 [Ca2 ]i 增高有关     

三氧化二砷对海马神经元细胞内钙离子浓度的影响

目的 研究三氧化二砷(As2O3)对海马神经元细胞内钙离子([Ca2 ]i)浓度的影响与其神经毒性的可能机制.方法 用激光共聚焦显微镜结合Fluo-3-AM观察As2O3对大鼠原代培养的海马神经元[Ca2 ]i的影响.结果 有钙液中10 μmol/L、100 μmol/L As2O3升高海马神经元[Ca2 ]i与对照组相比[Ca2 ]i分别提高了0.24±0.09和0.41±0.08.20 μmol/L的维拉帕米不能阻断10 μmol/L As2O3升高[Ca2 ]i作用.无钙液中10 μmol/L、100 μmol/Ls2O3升高海马神经元[Ca2 ]i与对照组相比[Ca2 ]i分别提高了0.12±0.06和0.30±0.07.100 μmol/L 2-APB阻断了10 μmol/L As2O3升高[Ca2 ]i作用.结论 As2O3可以升高海马神经元[Ca2 ]i,IP3信号转导途径可能参与As2O3升高海马神经元[Ca2 ]i.     

睫状神经营养因子对N-甲基-D-天冬氨酸引起海马神经元内钙离子浓度升高的影响

①目的　研究睫状神经营养因子 (CNTF)对谷氨酸 (Glu)受体激动剂N 甲基 D 天冬氨酸 (NMDA)引起的海马神经元内游离Ca2 + 浓度 ([Ca2 + ]i)升高的影响 ,并探讨G蛋白是否参与此作用。②方法　原代培养海马神经元 ,用活细胞内荧光探针Fura 2 /AM实时检测应用CNTF和G蛋白抑制剂百日咳毒素 (PTX)后由NMDA引起的海马神经元 [Ca2 + ]i 的变化。③结果　用CNTF孵育经NMDA刺激的海马神经元后 ,细胞内 [Ca2 + ]i 升高的程度较单独NMDA刺激细胞引起的 [Ca2 + ]i 升高程度低 (t=2 .97～ 4 .86 ,P <0 .0 5 ) ,加入PTX可减弱CNTF的抑制作用。④结论　G蛋白可能参与CNTF调节NMDA引起的海马神经元内 [Ca2 + ]i 升高的快速作用途径     

双苯氟嗪对谷氨酸致海马神经元损伤的保护作用

目的 观察双苯氟嗪(Dipfluzine,Dip)对谷氨酸损伤海马神经元的保护作用,并探讨其作用机制.方法 以原代培养的海马神经元作为研究对象,用谷氨酸建立海马神经元损伤模型,通过测定细胞存活率,乳酸脱氢酶(LJ)H)泄漏率和胞内游离钙浓度(Ca2+)变化,观察双苯氟嗪对谷氨酸致海马神经元损伤的保护作用.结果 双苯氟嗪可显著提高谷氨酸损伤海马神经元存活率,降低LDH泄漏率,对谷氨酸诱导的海马神经元细胞内ca2+升高有明显的抑制作用.结论 双苯氟嗪对谷氨酸致海马神经元损伤具有保护作用,其机制可能与其抑制谷氨酸诱导的细胞内钙超载有关.     

睫状神经营养因子对毒胡萝卜素所致大鼠海马神经元[Ca2+]i升高的抑制作用

目的:观察睫状神经营养因子(CNTF)对内质网钙泵特异性抑制剂毒胡萝卜素(thapsigargin,Tg)引起海马神经元内胞质游离Ca2 浓度([Ca2 ]i)升高的抑制作用.方法:出生24 h以内SD大鼠海马神经元原代培养10～14 d备用,以活细胞内荧光探针Frua2/AM 实时检测[Ca2 ]i.实验分3组:A组(n=20),EGTA(3 mmol/L);B组(n=40),EGTA(3 mmol/L) Tg(10 μmol/L);C组(n=12),EGTA(3 mmol/L) Tg(10 μmol/L) CNTF(500 U/μl).结果:用足量EGTA螯合细胞外Ca2 后,测得[Ca2 ]i≤(30.73±7.25) nmol/L;加入EGTA Tg后,[Ca2 ]i显著升高([Ca2 ]i≥[91.55±12.24] nmol/L);加入EGTA Tg CNTF后,升高的[Ca2 ]i明显降低([Ca2 ]i≤[26.09±7.16] nmol/L,P<0.01).结论:CNTF可明显减弱Tg的钙库质膜钙泵抑制作用,使胞质[Ca2 ]i降低.提示CNTF通过增加胞内钙库对细胞内游离Ca2 的吸收作用来降低海马神经元的Ca2 负荷.     

CNTF对AMPA和NMDA引起海马神经元Ca2+浓度升高的作用

①目的探讨睫状神经营养因子(CNTF)对两种谷氨酸(Glu)离子型受体激动剂(α-氨基羧甲基异哑恶唑丙酸,AMPA;N-甲基-D-天冬氨酸,NMDA)激发的海马神经元内游离Ca2+([Ca2+]i)升高的作用.②方法原代培养海马神经元,在有或无CNTF条件下用活细胞内荧光探针Fura-2-AM实时检测AMPA和NMDA引起海马神经元内[Ca2+]i变化的情况.③结果 AMPA和NMDA均可引起细胞内[Ca2+]i升高,并呈量效依赖性;CNTF可快速抑制NMDA引起的海马神经元内[Ca2+]i升高(t=2.97～4.86,P＜0.05),而对AMPA的作用无影响(t=0.22～0.74,P＞0.05).④结论 CNTF可能通过与NMDA型受体相互作用而快速启动Ca2+信号的途径,保护因Glu引起的海马神经元损伤.AMPA型受体可能与CNTF的快速作用无关.     

五味子酮对β-淀粉样蛋白诱导大鼠海马神经元内游离钙离子浓度变化的影响

目的观察中药五味子酮对β-淀粉样蛋白(Aβ25~35)诱导的大鼠海马神经元内游离钙离子浓度([Ca2+]i)变化的影响。方法采用大鼠海马神经元原代培养技术,运用双激发波荧光指示剂Fura-2/AM标记胞内相对[Ca2+]i的变化并进行比较。结果1μmol/L Aβ25~35作用于海马神经元48 h后,[Ca2+]i为0.5951±0.0311,明显高于空白对照组的0.3617±0.0197(P<0.05);1μmol/L Aβ25~35和100μmol/L五味子酮共同作用于海马神经元48 h后,[Ca2+]i为0.4168±0.0468,仍明显高于空白对照组(P<0.05),但较单纯Aβ25~35作用后明显下降(P<0.05)。结论中药五味子酮可以通过抑制Aβ诱导的神经元[Ca2+]i增加,维持细胞内钙稳态,对神经元有一定的保护作用。     

尼莫地平对戊四氮慢性点燃癫癎大鼠学习记忆的影响

目的 探讨尼莫地平(nimodipine,NIM)对戊四氮(Pentylenetetrazole,PTZ)慢性点燃癫癎大鼠学习记忆能力及海马细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+] i)的影响.方法 120只动物随机分为正常对照组(A组)、PTZ单纯致癎组(B组)、NIM1.25 mg/kg干预组(C组),NIM2.5 mg/kg干预组(D组),通过腹腔注射PTZ建立慢性癫癎动物模型并用尼莫地平进行干预,应用Morris水迷宫和Y迷宫观察各组大鼠学习记忆能力的变化,运用流式细胞仪检测海马细胞内[Ca2+] i浓度变化.结果 与B组比较,C组和D组大鼠在水迷宫中的逃避潜伏期[(5.94±1.19)s、(5.69±1.03)s]vs [(7.71±1.30)s]缩短(P ＜0.05),穿越平台区域的次数[(8.58±2.12)次、(7.51±2.05)次 vs (5.73±2.14)次]明显增多(P ＜0.01),在Y迷宫的错误反应次数[(8.75 ± 2.22)次、(8.00 ± 3.16)次 vs (12.75±2.50)次]减少(P ＜0.05), 其海马细胞内[Ca2+] i浓度[(1.32±0.26)、(1.31±0.35) vs (1.94±0.33)]下降(P ＜0.05).结论 NIM腹腔注射可以降低癫癎大鼠海马细胞内[Ca2+] i,减轻钙超载,改善癫癎大鼠的学习记忆能力.     

胞内Ca2+、Na+和ATP的稳定性介导NMDA诱导兴奋保护作用

目的:研究N甲基D天冬氨酸(NMDA)诱导大鼠小脑颗粒神经元兴奋毒性保护作用的机制。方法:分别用Ca2 和Na 敏感的染料Fura2/AM和SBFI/AM测定胞内Ca2 和Na 浓度[(Ca2 )i,(Na )i]。并用反向高效液相色谱法测定胞内三磷酸腺苷(ATP)的含量。结果:①在NMDA预处理组与非处理组,谷氨酸均迅速触发胞内Ca2 反应高峰,两者无显著性差异。而后在NMDA处理组,胞内Ca2 迅速下降,并维持在高于静息Ca2 水平的平台状,撤离谷氨酸后,[Ca2 ]i迅速下降并恢复至静息水平;而NMDA非处理组则相反。②谷氨酸均诱发上述两组神经元[Na ]i升高,在NMDA非处理组,[Na ]i均高于NMDA预处理组。③谷氨酸消耗胞内ATP,而NMDA预处理组则减少胞内ATP的耗竭。结论:NMDA诱导兴奋毒性保护作用是通过减少ATP的消耗而增强胞内Ca2 和Na 的自稳态。     

Na+,K+-ATP酶参与缺氧所致大鼠皮质神经元内钙升高

目的:探讨Na ,K -ATP酶对缺氧所致大鼠皮质神经元内钙升高的影响.方法:采用激光共聚焦显微镜及可视化动缘探测系统,测定培养大鼠皮质神经元在缺氧不同时间和双氢哇巴因(DHO,一种Na -K -ATP酶抑制剂)不同浓度时细胞内钙离子浓度([Ca2 ]i)和细胞内钠离子浓度([Na ]i),并观察DHO对缺氧后神经元[Ca2 ]i和[Na ]i升高作用的影响.结果:DHO(10-9～10-3mol/L)和缺氧(4～20 min)均可显著升高正常皮质神经元[Ca2 ]i和[Na ]i,并分别具有剂量依赖性和时间依赖性.在缺氧4 min时皮质神经元[Ca2 ]i和[Na ]i即明显升高,此时给予DHO 10-3mol/L可使二者进一步升高;但当皮质神经元缺氧15 min后,再给予相同剂量的DHO则不能使[Ca2 ]i和[Na ]i进一步增加;若对DHO(10-3mol/L)预先升高[Ca2 ]i的正常神经元再进行缺氧灌流,则[Ca2 ]i不继续升高.结论: Na ,K -ATP酶抑制是缺氧所致大鼠皮质神经元[Ca2 ]i升高的机制之一.     

高效液相色谱法测定氨甲苯酸对甲基苯甲酸和对羧基苯甲酸含量

目的 建HPLC法同时测定氨甲苯酸中杂质对甲基苯甲酸和对羧鲞苯甲酸含量.方法 采用高效液相色谱法[1],色谱柱c18柱,流动相,甲醇:乙睛:水:冰乙酸(25:15:60:1.5),检测波长为230 nm.结果 氨甲苯酸浓度在1.01～5.04 μg/mL内与峰面积呈良好线性关系,最低检测限为0.86 μg/mL.结论 本法简便,准确,可用于控制氨甲苯酸原料药的质量.     

唑来膦酸

商品名：Reclast 研制公司：诺华公司 新增适应证：用于治疗变形性骨炎（Paget’s Disease of Bone）     

HPLC法测定复方水杨酸擦剂中水杨酸和苯甲酸的含量

目的:建立以反相高效液相色谱法测定复方水杨酸擦剂中水杨酸和苯甲酸含量的方法。方法:色谱柱为C18,流动相为甲醇-水(40:60),流速为1.5mL.min-1,检测波长为226nm,柱温为25℃。结果:水杨酸和苯甲酸在12μg.mL-1~96μg.mL-1(r=0.9998)的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率分别为99.83%(RSD=0.82%)和99.26%(RSD=0.98%)。结论:本方法方便,准确,重现性好,可作为该制剂的质控标准。     

UPLC法同时测定胆木注射液中原儿茶酸、新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸

目的 建立同时测定胆木注射液中原儿茶酸、新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸的方法。方法 采用UPLC法,色谱柱Waters Acquity UPLC BEH C₁₈（50 mm×2.1 mm,1.7 μm）,流动相为甲醇（A）-0.1%乙酸水溶液（B）,梯度洗脱;检测波长为260 nm（原儿茶酸）和325 nm（新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸）;体积流量0.4 mL/min;柱温35 ℃。结果 原儿茶酸、新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸分别在3.984～159.400、1.440～57.600、1.204～48.160、1.056～42.240 μg/mL内具有良好的线性关系;平均回收率分别98.66%、96.76%、101.1%、103.6%。结论 UPLC分离效果及重复性好,且快速、准确,可作为胆木注射液的质量控制方法。     

高效液相色谱法测定复方苯甲酸凝胶中苯甲酸和水杨酸的含量

目的:研制复方苯甲酸凝胶,建立高效液相色谱(HPLC)测定制剂中苯甲酸和水杨酸含量的方法。方法:以卡波姆-940为基质,用常规方法制备。以Ultrasphere-ODS柱(5μm,4.6mm×250mm)为固定相;以甲醇-水(40:60v/v)为流动相;检测波长227nm。结果:制剂稳定性好,平均回收率分别为苯甲酸100.31%,相对标准偏差(RSD)1.10%;水杨酸99.75%,RSD1.53%。苯甲酸和水杨酸的线性范围分别为:16～75mg·L-(1r=0.9992),7.5～40mg·L-1(r=0.9990)。结论:本制剂工艺简单、质量稳定,含量测定方法准确、快捷、适用。     

医学教育改革、创新与发展

医学教育的根本目的是为人民的健康事业培养合格人才,在医学教育改革中注重医学教育的特点,遵循医学教育的规律,结合实际进行创新,通过创新推动医学教育的发展,是医学教育发展的根本所在。     

绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸与人白蛋白的分子对接研究

目的：比较可疑致敏原绿原酸、异绿原酸与人血清白蛋白（human serum albumin,HSA）的分子结合模式和结合能力。方法：采用Molegro Virtual Docker（MVD）软件,以华法令、地西泮和HSA共结晶复合物作为受体模板,比较绿原酸和异绿原酸（3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸）在HSA载药位点Ⅰ和Ⅱ的分子对接情况,以对接评分、关键氨基酸基团和氢键作用确定分子的结合模式。结果：绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸在HSA位点Ⅰ的分子对接分值为-112.3、-155.3和-153.1,在HSA位点Ⅱ的对接分值为-101.7、-138.5和-133.4。在位点Ⅰ,两个异绿原酸分子与关键脂溶性基团Ala291和Leu238的疏水力明显大于绿原酸;异绿原酸、绿原酸与该位点入口和内部不同的极性氨基酸基团形成氢键;与绿原酸分子相比,异绿原酸的第2个咖啡酰基占居该位点右侧亲脂区。在位点Ⅱ,异绿原酸的第2个咖啡酰基增加了其与极性氨基酸的作用。结论：异绿原酸与绿原酸相比,有更高的HSA分子对接评分,其多出的一个咖啡酰基增加了与HSA载药位点的结合能力。     

高效液相色谱法测定叶酸水解制备蝶酸的含量

目的研究叶酸水解制备蝶酸并建立测定蝶酸含量的方法。方法采用高效液相色谱法测定含量,色谱柱:PhenomexneC18(250 mm×4.6 mm),流动相为甲醇和水25︰75,水中含2%醋酸、0.2%三乙胺。流速1 ml/min。紫外检测器检测波长:285 nm处最大吸收。结果得到含量为73%的蝶酸粗品,蝶酸在1.6～9.6μg/ml有好的线性关系,相关系数为0.9991;稳定性实验结果 RSD=0.42%;样品加标回收率平均值为98.9%。结论建立的高效液相色谱法具有良好的精密度和准确度,适用于测定蝶酸的含量。