毛果芸香碱对大鼠蓝斑核痛反应神经元电活动的影响

目的 本实验观察大鼠侧脑室内加入外源性乙酰胆碱(Ach)后,蓝斑核(Locus ceruleus,LC)痛反应神经元的电变化,以及M受体激动剂毛果芸香碱(Pilocarpine)的激动效应,进一步研究Ach和LC在痛觉调制中的作用及其相互关系.方法 以电脉冲刺激右侧坐骨神经作为伤害性痛刺激,用玻璃微电极细胞外记录痛反应神经元放电的变化.结果 1)侧脑室注入Ach能够使正常大鼠LC中痛兴奋神经元(PEN)痛诱发放电频率增加、潜伏期缩短,痛抑制神经元(PIN)痛诱发放电频率减少,诱发放电完全抑制时程延长,而后逐渐恢复;2)侧脑室注入毛果芸香碱能够产生与Ach相似的效应.结论 外源性Ach可使正常大鼠LC中痛反应神经元对伤害性刺激的反应增强,表现为致病效应;M受体激动剂毛果芸香碱可使正常大鼠LC中痛反应神经元对伤害性刺激的反应增强,与Ach产生相似的效应;揭示了Ach的这种致痛作用主要是通过M受体介导的.     

阿托品对大鼠蓝斑核痛反应神经元电活动的影响

目的 研究侧脑室注射乙酰胆碱(ACh)对正常大鼠蓝斑核(LC)痛反应神经元放电的影响.方法 以电脉冲刺激坐骨神经作为伤害性刺激,用玻璃微电极引导LC中痛反应神经元的电变化.结果 ①侧脑室注入ACh能使大鼠LC中痛兴奋神经元(PEN)痛诱发放电频率增加、潜伏期缩短;痛抑制神经元(PIN)痛诱发放电频率减少、完全抑制时程延长;②侧脑室注入ACh 的M受体拮抗剂阿托品能够阻断ACh的上述效应.结论 ①外源性ACh可使正常大鼠LC中痛反应神经元对伤害性刺激的反应增强,表现为致痛效应;② ACh的这种致痛作用主要是通过M受体介导的.该结果揭示,ACh和LC在痛觉调制中具有非常重要的作用.     

GABA对大鼠束旁核痛抑制神经元电活动的影响

目的本实验采用电生理学方法,通过观察侧脑室注射γ-氨基丁酸(GABA)、荷包牡丹碱(Bicuculline,Bic)对大鼠束旁核(PF)痛抑制神经元(PIN)电变化的影响,从而进一步研究GABA与PF在痛觉调制中的作用及其相互关系。结论本实验结果证明:1)外源性GABA可使正常大鼠PF中痛反应神经元对伤害性刺激的反应减弱,表现为镇痛效应;2)GABA的这种镇痛作用主要是通过GABAA受体介导的。该结果揭示,GABA和PF在痛觉调制中具有非常重要的作用。     

M受体亚型阻断剂对大鼠尾核痛抑制神经元放电的影响

目的 研究侧脑室注射M1、M3、M4受体亚型阻断剂对乙酰胆碱(ACh)引起的大鼠尾核痛抑制神经元(PIN)电活动的影响.方法 以电脉冲刺激左侧坐骨神经作为伤害性刺激,用玻璃微电极细胞外记录大鼠尾核PIN放电的变化,观察侧脑室注射不同M受体亚型阻断剂对其影响.结果 ①脑室注射ACh(20μg/10μL)加强了尾核痛抑制神经元的电活动;②M1受体阻断剂哌仑西平(10μg/10μL)可部分阻断ACh的作用.而M3受体阻断剂4-DAMP和M4受体阻断剂托品酰胺对ACh的镇痛效应无明显作用.结论 乙酰胆碱在尾核中起镇痛作用,其镇痛机制主要涉及M1受体.     

乙酰胆碱对白细胞介素2生成的影响

目的：观察乙酰胆碱（ACh)对大鼠淋巴细胞由刀豆素A（ConA)诱导的白细胞介素2（IL-2）生成的影响。方法：取大鼠的脾脏制成单个细胞悬液进行体外培养，用ConA诱导脾细胞的IL-2生成，然后以MTT比色法间接测定IL-2的生成。结果：ACh,M型胆碱能受体激动剂毛果芸香碱和N型胆碱能受体激动剂烟碱在10^-10-10^-6mol/L浓度范围都能显著增强ConA诱导的IL-2生成，M型胆碱能受体阻断剂阿托品（10^-10和10^-9mol/L)能阻断同浓度ACh的增强作用；N型胆碱能受体阻断剂筒箭毒碱（10^-10和10^-9mol/L)可部分阻断同浓度ACh的增强作用。结论：在机体内副交感神经兴奋可导致T淋巴细胞的功能增强，其免疫调节作用由免疫细胞上的M和N受体介导，可能M受体的作用占主导地位。     

侧脑室注射阿托品东莨菪碱对兔呼吸心率的影响

给兔侧脑室注射阿托品有兴奋呼吸作用,且可增强毛果芸香碱、氨甲酰甲胆碱、槟榔碱兴奋呼吸效应;东莨菪碱对呼吸影响不明显,但却可拮抗毛果芸香碱、氨甲酰甲胆碱、槟榔碱兴奋呼吸效应。阿托品与东莨菪碱对呼吸影响不同的原因可能与选择性阻滞中枢不同亚型M受体有关。侧脑室注射阿托品似有减慢心率倾向,东莨菪碱对心率影响不明显,但均可拮抗以上拟胆碱药的心率减慢作用。     

M3受体激动剂毛果芸香碱对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的 研究M3受体激动剂毛果芸香碱对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用.方法 采用Langendorff灌注系统,建立离体大鼠心肌缺血再灌注损伤模型.观察毛果芸香碱5μmol·L-1对复灌后冠脉流量、心肌丙二醛(MDA)含量、心肌超氧化物歧化酶(SOD)活性和心肌梗死面积的影响.结果 毛果芸香碱改善缺血再灌注后的冠脉流量,其中5 min(P＜0.01)和10min(P＜0.05)的冠脉流量增加显著;降低心肌MDA含量(P＜0.05)并提高心肌SOD活性(P＜0.05);缩小心肌梗死面积(P＜0.05).上述作用可被选择性M3受体阻断剂4-diphenylacetoxy-N-methylpiperidine-methiodide(4-DAMP)3 nmol·L-1所逆转.结论 M3受体激动剂毛果芸香碱通过激动心肌M3受体而对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤起保护作用.     

P物质对慢痛引起的脊髓背角神经元电活动的影响

目的：观察Ｐ物质（ＳＰ）及其受体阻断剂Ｓｐａｎｔｉｄｅ对Ｗｉｓｔａｒ大鼠脊髓背角神经元自发放电和伤害性慢痛放电的影响。方法：采用多管微电极细胞外记录和离子微电泳方法。结果：①电泳ＳＰ可使脊髓背角神经元单位放电增多，其效应可被Ｓｐａｎｔｉｄｅ阻断。②电泳ＳＰ又可抑制福尔马林引起的神经元伤害性痛放电，此效应可被纳洛酮和Ｓｐａｎｔｉｄｅ翻转。结论：在痛觉调制过程中，脊髓内ＳＰ起着传递痛觉信息和镇痛的双重作用。     

针刺家兔足三里穴对亢进性和抑制性胃肠肌电的作用

本研究重点观察了针刺足三里穴对毛果方香碱和阿托品所致的兴奋性和抑制性胃、结肠电活动的影响。结果表明，对毛果芸香碱组呈明显的抑制效应，而对阿托品组呈明显的兴奋效应，针前针后效应差异非常显著（Ｐ＜０．０１）试验结果进一步解释了足三里穴的多功能，多环节的双向调整作用。     

毛果芸香碱对血小板聚集作用影响的初步观察

山茛菪碱被证明既是血小板聚集的抑制剂,又是节后神经纤维支配的效应器上的M胆碱能受体阻滞剂。为此,我们试图观察M胆碱能受体的兴奋剂毛果芸香碱,对血小板聚集会有何种影响。结果发现毛果芸香碱也是血小板聚集的抑制剂。     

乙酰胆碱甘氨酸及其拮抗剂对大鼠旁巨细胞外侧核神经元自发放电的影响

用多管微电极技术，在麻醉、自主呼吸的大鼠旁巨细胞外侧核尾半侧（ｃＰＧＣＬ）观察了微电泳乙酰胆碱（ＡＣｈ）、甘氨酸（Ｇｌｙ）及其拮抗剂阿托品、士的宁对神经元自发放电的效应及阿托品对ＡＣｈ、士的宁对甘氨酸效应的影响。发现ＡＣｈ可使大多数被测试神经元（７９．６％）兴奋，少数（２０．４％）无反应；甘氨酸可使大多数被测试神经元（９１．５％）抑制，少数（８．５％）无反应；阿托品可使神经元兴奋（占被测试神经元的８％）、抑制（４８％）和无反应（４４％）；士的宁可引起神经元兴奋（２１．９％）、抑制（６．３％）和无反应（７１．８％）。ＡＣｈ的兴奋效应，甘氨酸和阿托品的抑制效应均呈量效依赖关系。阿托品可部分或完全阻断大多数被测试神经元（８０．３％）对ＡＣｈ的兴奋反应；士的宁可阻断大多数被测试神经元（９２．６％）对甘氨酸的抑制反应。以上结果提示，ｃＰＧＣＬ区存在着内源性ＡＣｈ和甘氨酸，某些神经元上存在着Ｍ受体及甘氨酸受体     

阿托品对氢化可的松快速作用的影响

在离体灌注的牛蛙交感神经节上,氢化可的松一方面通过Ｎ受体介导,快速抑制Ｂ细胞的快尖奋性突触后电位,引起Ｂ细胞突触 传递的阻断。氢化可的松的又同时通过Ｍ受体介导,快速增强Ｂ细胞的慢兴奋性突触 后电位,提高Ｂ细胞的兴奋性,使重复放电增加。     

脑缺血时乙酰胆碱加强谷氨酸的神经兴奋毒性及受体机制研究

分别用ＴＴＣ染色和ＨＥ染色观察大鼠大脑中动脉闭塞后乙酰胆碱（ＡＣｈ） 和谷氨酸（Ｇｌｕ） 对梗塞面积及细胞形态的影响; 采用皮质脑电图记录方法, 观察大鼠双侧颈总动脉夹闭后, Ｇｌｕ、ＡＣｈ 及ＡＣｈ 受体激动剂、拮抗剂对脑电图恢复时间的影响。结果发现： Ｇｌｕ 可使梗塞面积扩大, ＡＣｈ 可使Ｇｌｕ 的这种效应放大３０％ （Ｐ＜ ０．０１）; 脑缺血后Ｇｌｕ 使缺血区细胞破坏加重,ＡＣｈ 可加剧细胞的崩解,Ｇｌｕ 致缺血性皮质神经元兴奋性存在量效关系,其阈值为１０－ ２ｍ ｏｌ／Ｌ, ＡＣｈ 可使之降为１０－ ３ ｍ ｏｌ／Ｌ, ＡＣｈ 的这种作用可被阿托品所阻断而不被六羟季胺拮抗, 可被氨甲酰胆碱呈浓度－ 效应模拟, 而不被烟碱模拟。可见, 脑缺血时, 乙酰胆碱通过Ｍ 型受体降低谷氨酸兴奋毒性的阈值而表现出加强谷氨酸的神经兴奋毒性作用。     

乙酰胆碱的α受体效应

ACh 在10~(-7)～10~(-3)mol/L 时,可使以α受体为主的离体小鼠输精管收缩,呈量-效关系(pD_2=4.2257);与同样浓度的 NE 无显著差异;M 受体激动剂匹罗卡品则使其舒张.该作用在利血平耗竭 CA 后制备的标本上,或以箭毒阻断 N 受体时依然存在;但可被阿托品(pA_2=8.3146)、酚妥拉明(pA_2=5.3526)和异博定(pA_2=5.3377)阻断.表明 ACh 可作用于输精管的α受体使其收缩.     

锂-匹鲁卡品致痫大鼠杏仁核神经元损伤及Mg2+的脑保护作用

目的:观察锂-匹鲁卡品(LPC)致痫大鼠杏仁核神经元的形态学改变,并观察Mg2 的脑保护作用。方法:选用成年雄性Wistar大鼠75只,并随机分为LPC组、Mg2 组和生理盐水对照组。用LPC诱发癫痫持续状态(SE)3h,在痫性发作终止后第72h将动物处死。将大鼠脑组织制成切片,分别用光镜和电镜观察杏仁核神经元形态学改变。而Mg2 组大鼠在注射匹鲁卡品前腹腔内注射硫酸镁100mg/kg,其余处理同LPC组。结果:两组大鼠在第72h时杏仁核区均出现了嗜酸性神经元,但Mg2 组神经元损伤程度明显低于LPC组。结论:LPC诱导的SE激活了促进程序性细胞死亡的机制,导致杏仁核神经元坏死,而Mg2 对杏仁核神经元具有保护作用。     

大鼠心脏TRPV1受体激活对心血管活动的抑制作用

目的：探讨大鼠心脏瞬时受体电位香草酸受体1（TRPV1）激活诱发的心血管反射及该反射的心血管中枢部位c-Fos蛋白阳性神经元及其外周神经递质的表达,阐明心脏TRPV1受体介导的心血管反射活动的中枢及外周神经机制。方法： 60只健康雄性SD大鼠随机分为对照组、树胶脂毒素（ido-RTX）组、阿托品组、免疫荧光组和神经束路追踪组,每组12只。各组大鼠麻醉后行心包插管术;对照组、ido-RTX组和阿托品组大鼠动脉插管观察心率和血压的变化;免疫荧光组大鼠心包内注射辣椒素1 h后灌注取材,利用免疫荧光技术观察辣椒素诱发的c-Fos阳性神经元与胆碱酯酶阳性神经元在延髓的共表达;神经束路追踪组大鼠心包内注射羰花青荧光染料（Dil）作为神经束路逆行追踪剂,1周后荧光显微镜下观察Dil阳性细胞在延髓的分布。结果：对照组大鼠心包内注射辣椒素后血压和心率均明显降低（P<0.05）;与对照组比较,ido-RTX组和阿托品组大鼠心包和静脉分别注射TRPV1受体拮抗剂ido-RTX和M受体拮抗剂后心包内注射辣椒素后血压和心率无明显变化（P>0.05）,心包内注射辣椒素后延髓孤束核、迷走神经背核和疑核内c-Fos阳性神经元数量明显增多（P<0.05）,其中大部分神经元为胆碱酯酶阳性神经元;大鼠心包内注射Dil后延髓孤束核、迷走神经背核和疑核内出现大量红色荧光标记神经元和神经末梢。结论：心包内注射辣椒素可选择性激活心脏TRPV1受体,使延髓心血管中枢的胆碱能神经元兴奋性增加,外周释放乙酰胆碱增加,通过激活M受体产生对心血管活动的抑制效应。     

Effects of adenosine and ATP on the membrane potential and synaptic transmission in neurons of the rat locus coeruleus

Effects of adenosine (Ado) and adenosine 5'-triphosphate (ATP) on the membrane potential and synaptic transmission in neurons of the rat locus coeruleus (LC) were examined, in vitro. Ado (30-300 microM) produced a hyperpolarizing response and inhibited spontaneous firing activity in neurons of the rat LC. Ado decreased input resistance of LC neurons. The Ado-induced hyperpolarization reversed polarity near the equilibrium potential of K+ (EK). Ado (100-300 microM) depressed both excitatory postsynaptic potential (EPSP) and inhibitory postsynaptic potential (IPSP). Ado (300 microM) did not alter the hyperpolarization induced by norepinephrine (30 microM). N6-Cyclopentyladenosine (CPA, 100 microM), an A1 receptor agonist, also produced a hyperpolarizing response and depressed both the EPSP and IPSP. Another A1 receptor agonist, adenosine amine congener (ADAC, 30 microM) also produced a hyperpolarizing response and consistently depressed the EPSP and IPSP. Application of ATP (100 microM) to LC neurons caused a depolarizing response associated with an increase in the firing rate of spontaneous action potential in LC neurons. The ATP-induced depolarization was accompanied by an increased input resistance and reversed polarity at--91 mV. ATP (100 microM) consistently depressed the IPSP, while it did not change the amplitude of the EPSP in a majority of neurons. alpha, beta-Methylene ATP (alpha, beta-meATP, 30 micro/M), a P2 receptor agonist, mimicked these effects of ATP. Adenosine 5'-(beta, gamma-imido) triphosphate (AMP-PNP, 100 microM), a non-metabolizable analogue of ATP, produced a depolarizing response in LC neurons, but it produced no obvious depression of the EPSP and IPSP. These results suggest that Ado and ATP cause inhibitory and excitatory modulation, respectively, of neuronal activity and synaptic transmission in the rat LC.     

棘突形态及功能重塑在癫痫形成中的研究

目的 研究癫痫形成过程中棘突形态、功能变化以及棘突重塑在癫痫形成过程中的可能作用.方法 ①20只SD大鼠随机数字表法分为癫痫组及对照组,建立锂-匹罗卡品慢性癫痫模型,高尔基染色观察大鼠海马齿状回棘突形态变化,qRT-PCR及Western blot检测海马PSD95及SYP表达变化.②选择SD胎鼠海马神经元进行原代培养,建立无镁癫痫模型.检测细胞内钙离子浓度及神经元棘突数量变化情况统计两者相关性.结果 ①与对照组相比,癫痫模型组大鼠齿状回(dentate gyrus,DG)区棘突平均密度增加,但正常功能棘突数量减少,PSD95及SYP表达增加(P＜0.01)②癫痫组细胞内钙离子浓度增加(P＜0.01),且与神经元棘突密度变化呈正相关(r=0.613,P＜0.05).结论 癫痫形成过程中突触重塑活跃.但形态及功能异常,为癫痫形成提供基础,可作为棘突重塑的重要标志.