γ刀照射对荷胶质瘤大鼠C-myc蛋白表达的抑制

目的观察荷胶质瘤大鼠γ刀照射后,C-myc蛋白表达的变化。方法建立颅内种植胶质瘤C6细胞的荷瘤大鼠模型。3周后,实验组给予γ刀治疗。计数荷瘤大鼠生存时间。免疫组化SP染色及计算机图像分析检测C-myc基因蛋白水平表达。结果实验组及对照组荷瘤大鼠生存时间分别为(36.5±3.1)d和(28.0±2.4)d,两组相较,差异显著(P<0.01)。实验组及对照组荷瘤大鼠C-myc基因蛋白阳性表达率分别为(40.98±15.46)%和(77.62±12.11)%,二者差异显著(P<0.01)。结论γ刀诱导胶质瘤凋亡的机制可能与抑制肿瘤细胞C-myc基因蛋白水平表达有关。     

γ刀照射对胶质瘤细胞基因蛋白水平表达的影响

目的观察胶质瘤C6细胞伽玛刀治疗后基因蛋白水平表达的变化.方法胶质瘤C6细胞在培养瓶中培养,接受不同剂量(5.0 Gy和6.22 Gy)的伽玛刀照射,应用免疫组化技术和图像分析研究p16基因和C-myc基因的表达.结果伽玛刀治疗显著地抑制了C-myc基因蛋白水平的表达,激活了p16基因蛋白水平的表达.实验组C6细胞C-myc基因灰度值为154.4±4.7(5.0 Gy),161.7±5.8(6.22 Gy);对照组为130.28±2.4.实验组C6细胞p16基因灰度值为155.4±2.0(5.0 Gy),124.9±7.1(6.22 Gy);对照组为167.1±6.2.结论胶质瘤C6细胞的凋亡与激活了p16基因蛋白水平的表达和抑制了C-myc基因蛋白水平的表达相关.     

地塞米松治疗放射性脑水肿与erb-B1基因转录水平的关系

目的 研究地塞米松治疗放射性脑水肿与erb-B1基因转录水平的关系. 方法60只大鼠建立脑胶质瘤模型后按照随机数字表法分为3组:A组(种植C6细胞15 d后给予Co<'60>照射并于照射前后给予地塞米松治疗)、B组(种植C6细胞15 d后仅给予Co<'60>照射)、C组(种植C6细胞后既不给予照射也不给予地塞米松治疗),各组均为20只.所有大鼠种植C6细胞16 d后将大鼠处死,测量大鼠脑水肿情况和erb-B1转录水平. 结果种植C6细胞21 d后3组大鼠脑水肿情况:B组脑水肿情况最严重,其次为A组、C组,任两组比较差异均有统计学意义(P<0.05).erb-B1转录水平:B组表达水平最高,其次为A组、C组,任两组比较差异均有统计学意义(P<0.05). 结论地塞米松可以有效防治放射性脑水肿.地塞米松可以通过抑制erb-B1基因转录水平来治疗放射性脑水肿.     

Cyclin D1/D2/D3在大鼠脑胶质瘤组织中的表达

目的 探讨cyclin D1/D2/D3在大鼠脑胶质瘤组织中的表达.方法 将体外培养的大鼠C6胶质瘤细胞(细胞数为3×105个)借助动物立体定向仪接种于Wistar大鼠左侧尾状核区,解剖标本,行组织病理学检查及GFAP、cyclin D1/D2/D3免疫组化检测.结果 cyclinD1/D2/D3均呈阳性表达.cyclin D1/D3主要在细胞胞核表达,cyclin D2主要在胞浆表达,部分在胞核表达,不同存活期荷瘤鼠瘤组织中cyclin D1/D2/D3表达量不同.结论 cyclinD1/D2/D3过分表达参与调节大鼠脑胶质瘤增殖.荷瘤鼠生存期与cyclin D家族蛋白的表达呈负相关关系.     

白细胞介素24对大鼠脑胶质瘤细胞Survivin表达的影响

目的探讨白细胞介素24(IL-24)基因对荷瘤大鼠脑胶质瘤细胞Survivin表达的影响。方法 48只SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组24只,分别接种IL-24/C6细胞(转染IL-24基因的C6鼠脑胶质瘤细胞)和C6鼠脑胶质瘤细胞。接种21 d后,采用RT-PCR、Western blot和免疫组化方法检测两组大鼠脑肿瘤组织中Survivin mRNA和蛋白的表达,采用流式细胞学检测肿瘤细胞凋亡率。结果 RT-PCR检测显示:实验组大鼠脑肿瘤组织中Survivin mRNA表达水平明显低于对照组(P<0.01)。Western blot及免疫组化法检测显示:实验组大鼠脑肿瘤组织中Survivin的蛋白水平明显低于对照组(P<0.01)。流式细胞学结果显示:实验组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01)。结论 IL-24可抑制大鼠胶质瘤中Survivin mRNA和蛋白的表达,促进细胞凋亡,抑制肿瘤生长。     

大剂量伽玛刀照射后脑组织一氧化氮合酶亚型表达改变及其与急性脑水肿的关系

目的探讨大剂量伽玛刀(γ刀)照射后脑组织一氧化氮合酶(NOS)亚型表达改变及其与急性脑水肿的关系。方法200Gy量γ刀照射正常大鼠脑,采用光镜、电镜、免疫组化及原位杂交技术研究照射后急性脑水肿的发生发展及脑组织NOS亚型表达变化。结果①照射后30min出现急性脑水肿病理改变,照射后2h出现明显血管源性脑水肿,照射后6h出现明显细胞性脑水肿,照射后3d急性脑水肿达高峰。②脑组织NOS亚型表达在照射后30min开始增高,内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达分别于照射后2h及6h显著增高,神经元型一氧化氮合酶(nNOS)表达亦增高,但nNOS阳性表达细胞数量较少。3种NOS亚型表达增高持续时间长,伴行于脑水肿的急性发展阶段。结论大剂量γ刀照射后脑组织NOS亚型表达增高与急性脑水肿的发生发展有关。     

褪黑素减少对Aβ诱导海马细胞凋亡相关基因的表达影响

目的 :探讨松果体功能减退致褪黑素 (MT)分泌减少对 β-淀粉样蛋白 (Aβ)诱导海马细胞凋亡相关基因表达的影响。方法 :将 SD大鼠随机分两组 ,实验组摘除松果体 ,对照组给假手术 ,两组均在术后 40 d给 Aβ1～ 40 右侧海马注射 10 μg(10 μg/ μl) ,7d后标本用 SABC法检测凋亡相关基因 Bax,Bcl- 2、Fos蛋白表达。结果 :实验组 Aβ周围海马细胞凋亡相关基因 Bax(14.2 8± 4.18)和 Fos表达 (2 8.2 9± 6 .91)均比对照组 Bax(7.6 9± 2 .81)和 Fos表达 (0 .87± 0 .15 )增强 (P<0 .0 1) ;而 Bcl- 2在两组中表达 (7.48± 3.2 6 ,7.19± 3.37)无明显差别 (P>0 .0 5 )。结论 :褪黑素减少可加强 Aβ诱导海马细胞凋亡倾向     

立体定向微量灌注PDGF-B链基因的三链形成寡核苷酸抑制大鼠脑胶质瘤生长

目的　观察在荷瘤大鼠脑内立体定向原位注射血小板源生长因子 (platelet derivedgrowthfactor,PDGF)B链基因的三链形成寡核苷酸 (triplexformingoligonucleotide,TFO)对胶质瘤生长的抑制效果。 方法　在立体定向导引下所有大鼠右尾状核区微量灌注接种 1× 10 6C6胶质瘤细胞 ,其中实验Ⅰ和Ⅱ组在细胞接种后的第 8天 ,开始分别立体定向原位注射TFO 1.5mg/2 0 μl和 3.0mg/2 0 μl的生理盐水 ,以后每隔 72小时原位注射相同剂量的TFO ,共注射 3次。对照组仅在相同时间原位注射 2 0 μl的生理盐水。实验 3周时处死大鼠 ,解剖出全脑 ,观察肿瘤的生长情况 ,测量肿瘤大小 ,标本做常规HE染色和免疫组织化学检查观察肿瘤PDGF B的表达。结果　实验组大鼠有较好的生存状态 ,而对照组在实验 2周时开始出现颅内高压 ,至 3周时大鼠多处于濒危状态。实验Ⅰ组的成瘤抑制率为 6 6 .0 % ,实验Ⅱ组为 92 .2 %。TFO对荷瘤大鼠胶质瘤细胞PDGF B的表达有明显的抑制作用。结论　PDGF B链基因是胶质瘤生长的重要因素 ,应用TFO能取得很好的抗胶质瘤生长的治疗效果。     

Cyclin D1/D2/D3 在大鼠脑胶质瘤组织中的表达

目的探讨细胞周期素(cyclin)D1/D2/D3在大鼠脑胶质瘤动物模型肿瘤组织中的表达.方法将体外培养大鼠C6胶质瘤细胞(细胞数为3×105个),借助动物立体定向仪接种于Wistar大鼠左侧尾状核区,解剖标本,行组织病理学检查,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化定性监测.随后检测肿瘤组织中cyclin D1/D2/D3蛋白表达.结果 cyclinD1/D2/D3均呈阳性表达.cyclin D1/D3主要在细胞核表达;cyclinD2则主要在胞浆表达,部分细胞核呈阳性,不同存活期荷瘤鼠其瘤组织中cyclin D1/D2/D3表达量不同.结论 cyclinD1/D2/D3的过分表达,对大鼠脑胶质瘤细胞增殖的失控起着一定的调节作用.荷瘤鼠生存期与cyclin D族的表达量呈负相关关系.     

伽玛刀治疗后C-myc蛋白在复发胶质瘤中表达的变化及意义

目的探讨伽玛刀（γ-刀）治疗后C—myc蛋白在复发胶质瘤中表达的变化及意义。方法用免疫组化SP法检测29例复发胶质瘤患苦（γ-刀治疗组12例,非伽玛刀治疗组17例）在初发肿瘤组织和复发肿瘤组织中C—myc蛋白的表达。结果非γ-刀治疗组中,C—myc蛋白在初发胶质瘤中的表达明显低于其在复发胶质瘤中的表达（P〈0．05）。γ-刀治疗组中,C—mye蛋白在初发胶质瘤中的表达明显高于其在复发胶质瘤中的表达（P〈0．05）。γ-刀治疗组肿瘤复发时间的中位数为10．5个月,非γ-刀治疗组肿瘤复发时间的中位数为6个月,两组复发时间比较有显著性差别。结论γ-刀治疗胶质瘤,可能通过抑制C—mye的表达产生作用,并延长肿瘤的复发时间。     

DF-521巴曲酶对大鼠脑出血后脑水肿区补体表达的影响

目的 :观察降纤酶制剂对大鼠脑出血后脑水肿形成及血肿周边脑组织补体C3d和C9表达的影响。方法 :一侧基底节区注射自体血 10 0 μL制作大鼠脑出血 2 4、72h模型 ,一组给予腹腔注射降纤酶制剂DF 5 2 1巴曲酶处理 ,一组不给 ,另设一组空白对照脑内注射生理盐水 10 0 μL。用干湿重法 ,测定大鼠脑组织的含水量 ;免疫组化法检测C3d的表达 ,免疫Westernblot方法研究脑组织补体C9表达情况。结果 :大鼠脑出血后 ,血肿侧脑组织含水量上升 ,同时出血侧脑组织内C3d和C9的表达量增加 ;给予DF 5 2 1巴曲酶制剂处理后 ,血肿侧脑水肿减轻〔2 4h由 (81 8± 1 14 ) %降至 (79 46± 0 68% ) ,P <0 0 1;72h由 (83 14± 0 3 6) %降至 (81 0 9±0 3 4) % ,P <0 0 1〕 ;并且脑组织C3d和C9的表达较对照组有所下降。结论 :降纤酶制剂能下调脑出血后血肿周边脑组织补体C3d和C9的表达并减轻大鼠脑出血后脑水肿的程度。     

大鼠正常脑组织伽玛刀照射后VEGF表达的实验研究

目的研究伽玛刀(γ-刀)立体定向放射外科照射大鼠正常脑组织后亚急性期血管内皮细胞生长因子(VEGF)随时间变化的表达,探讨VEGF与放射损伤的关系。方法30只Wistar大鼠,随机分为6组,每组5只。其中1组为假照射组,其余5组行γ-刀照射。运用Leksell23004B型γ-刀4 mm准直器以50Gy照射大鼠右侧尾壳核。不同组别的大鼠分别在照射后1、2、4、8、12周深度麻醉下断头取出脑组织,行免疫组织化学染色观察VEGF的表达。结果假照射组及照射后1、2周靶区内无VEGF阳性细胞：照射后4周靶区发现有少数细胞呈弱阳性表达；照射后8周时可见照射侧VEGF阳性细胞数目增加；照射后12周可见VEGF阳性细胞进一步增多。结论γ-刀放射外科以50Gy照射大鼠单侧尾壳核后,照射靶区VEGF出现阳性表达,并且随时间延长呈增高趋势。     

U0126对缺血性脑损伤大鼠脑内水通道蛋白-4表达的影响

目的研究水通道蛋白-4(aquaporin4,AQP4)在缺血性脑损伤大鼠脑内的表达,及丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号转导通路抑制剂U0126对其表达的影响。方法用线栓法建立缺血性脑损伤大鼠模型,测定脑组织含水量及伊文斯蓝含量,并采用免疫组织化学、Westernblot和逆转录-聚合酶链反应技术,检测AQP4的表达。测定预先经侧脑室给予U0126后MAPKs信号通路关键蛋白ERK1/2和ELK1磷酸化水平,同时观察U0126对脑水肿和AQP4表达的影响。结果正常组AQP4表达较低[蛋白(吸光度值,下同):123·1±1·0,mRNA(吸光度比值,下同):0·173±0·017],在缺血损伤后表达升高(蛋白:153·6±0·8,mRNA:0·400±0·015),脑组织含水量及伊文斯蓝含量增加,给予U0126后AQP4的表达和脑组织含水量降低(蛋白:149·0±1·1,mRNA:0·328±0·010,P<0·01),同时ERK1/2和ELK1磷酸化水平降低。结论缺血性损伤后AQP4表达上升,脑水肿明显,预先给予U0126可抑制AQP4的表达,减轻脑水肿。     

胶质瘤氩氦冻融产物负载树突状细胞对颅内胶质瘤大鼠的免疫治疗研究

目的 观察C6胶质瘤细胞经氩氦冷冻后,冻融产物对Wistar大鼠骨髓源性树突状细胞(BM-DCs)成熟的影响,以及致敏的树突状细胞(DCs)对胶质瘤模型大鼠的抗肿瘤作用. 方法 体外常规培养C6胶质瘤细胞,双循环氩氦冷冻法冻融C6细胞悬液为实验组,只插入探针不作冷冻为阴性对照组,双循环氩氦冷冻法冻融等量PBS为空白对照组;应用重组大鼠白细胞介素-4(rmIL-4)、重组大鼠粒一巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导Wistar大鼠骨髓DCs成熟,培养第7天分别加入各组冷冻产物,48 h后光镜下观察DCs细胞形态,流式细胞仪检测各组DCs细胞表面共刺激分子CD80和CD86的表达,ELISA法检测各组上清液中IL-12含量;将C6细胞接种于Wistar大鼠建立荷脑胶质瘤模型,第3、10天分别皮下注射空白对照组、阴性对照组、实验组DCs疫苗,比较各组大鼠的中位生存期. 结果 培养第7天未成熟DCs加入冷冻产物48 h后实验组具有成熟DCs形态学特征,表面分子CD80、CD86阳性表达率、上清中[L-12的分泌量高于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);实验组DCs疫苗治疗后荷脑胶质瘤大鼠中位生存期高于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 胶质瘤氩氦冻融产物可以诱导DCs成熟,介导大鼠脑胶质瘤的免疫治疗,为冷冻免疫机制提供一定理论基础,同时该DCs疫苗为胶质瘤个体化治疗的研究提供一种新的方法.     

γH_2AX对胶质瘤放射敏感性预测效果的实验研究

目的观察高级别胶质瘤细胞系(U87、U251和LN229)γH2AX蛋白表达变化,据此判断胶质瘤对放射线的敏感程度。方法选择胶质瘤细胞系U87、U251和LN229细胞株,通过细胞克隆形成实验,检测经不同剂量(0、2、4、6、8和10 Gy)X线照射后胶质瘤细胞克隆形成率,并绘制细胞存活曲线、测定放射敏感性;采用Western blotting法检测经剂量为2 Gy的X线照射后不同时间点(0 min、30 min、1 h、2 h、6 h、12 h、24 h、36 h和48 h)各胶质瘤细胞系γH2AX蛋白表达变化。结果细胞克隆形成实验显示,随着X线照射剂量的增加,胶质瘤细胞存活分数逐渐降低、细胞克隆形成率减少,放射增敏比自高至低依次为U87、LN229和U251细胞(均P=0.000)。Western blotting法显示,随着X线照射时间的延长,各胶质瘤细胞系γH2AX蛋白表达呈现先上升后下降的时间效应曲线,U87、LN229和U251细胞γH2AX蛋白表达峰值时间依次为2、1和1 h(P=0.000、0.000、0.015);γH2AX蛋白相对衰减速度(r=0.733,P=0.025)和升高程度(r=0.672,P=0.047)均与放射增敏比呈正相关。结论γH2AX蛋白有望成为检测高级别胶质瘤细胞系放射敏感性的一项预测指标。     

注射维生素C治疗脑胶质瘤的实验研究

目的探讨维生素C治疗脑胶质瘤的作用机制,为胶质瘤的临床治疗提供实验室依据。方法制作大鼠C6脑胶质瘤模型。荷瘤7d后将Wistar大鼠随机分为5组,每组10只,即对照组;维生素C低剂量组（2．0g／kg）;维生素C中剂量组（4．0g／kg）;维生素C高剂量组（8．0g／kg）;5-Fu组（20mg／kg）。于用药结束后次日处死各组小鼠,计算肿瘤体积和抑瘤率;流式细胞术检测各组肿瘤组织细胞凋亡率;免疫组化法检测各组肿瘤组织Ki-67蛋白表达情况。结果维生素C可抑制大鼠肿瘤生长,且呈剂量依赖性,实验组肿瘤体积与对照组相比有显著差异（P〈0.05）,维生素C高剂量组与5--Fu组肿瘤体积比较无统计学差异（P〉0.05）。维生素C可诱导大鼠肿瘤细胞凋亡,维生素C各组与对照组相比均有极显著性差异（P〈0.01）,维生素C高剂量组凋亡率高于5-Fu组（P〈0.05）。免疫组化法检测肿瘤组织细胞Ki-67蛋白表达中,维生素C各组与对照组相比均有极显著性差异（P〈0.01）,维生素C高剂量组与5-Fu组细胞凋亡率比较无统计学差异（P〉0.05）。结论维生素C在-定剂量范围内可抑制C6大鼠脑胶质瘤的生长,诱导肿瘤细胞发生凋亡是其机制之一;药理剂量的维生素C能降低C6大鼠脑胶质瘤细胞增殖活性,具有-定的抗肿瘤作用。     

脑动静脉畸形γ刀放射治疗后脑水肿发生情况分析

目的 探讨脑动静脉畸形γ刀放射治疗后不同随访阶段放射性脑水肿的发生率.方法 回顾性分析广州医学院第二附属医院放射科自1995年1月至2010年12月十余年间内经γ刀治疗的脑动静脉畸形患者的临床资料,共经磁共振检查随访351例次.统计γ刀术后不同随访阶段放射性脑水肿发生率并采用采用x2检验分析. 结果 γ刀放射治疗后本组患者放射性脑水肿阳性率为36.2％;不同随访阶段放射性脑水肿阳性率分别为:≤12月43.0％,13～36月45.3％,37～60月23.1％,61～120月13.6％,＞120月5.9％;各随访阶段间放射性脑水肿的发生率比较差异有统计学意义(x2=26.514,P=0.000). 结论 放射性脑水肿是脑动静脉畸形γ刀治疗后最常见的并发症之一,部分患者可出现顽固性放射性脑水肿.γ刀治疗后第一阶段(≤12月)、第二阶段(13～36月)放射性脑水肿发生率较高,应临床密切关注.     

5-ALA介导的光动力治疗鼠C6胶质瘤的实验研究

目的研究以5-氨基乙酰丙酸（5-ALA）作为光敏剂的光动力治疗（PDT）对大鼠C6胶质瘤移植瘤的效果。方法通过皮下接种C6胶质瘤细胞建立大鼠移植胶质瘤模型。将24只荷瘤大鼠平均随机分成3组：A组按剂量20mg／kg在瘤内注射5-ALA，2h后在肿瘤局部行激光照射；B组行单纯激光照射，不予任何光敏剂；C组为荷瘤空白对照组，不给任何治疗。PDT后不同时间，测量肿瘤体积并观察其组织学变化。结果治疗后第4、8和14天A组肿瘤体积与B、C组相比明显缩小（P〈0．05），组织学上可见大量肿瘤细胞坏死。结论5-ALA作为光敏剂介导的PDT能使大鼠C6胶质瘤移植瘤组织坏死，生长速度明显减慢，有望成为胶质瘤治疗的新途径。     

伽玛刀治疗后脑水肿相关因素的临床分析

目的:确定伽玛刀(γ-刀)治疗后脑水肿发生的相关因素.方法:回顾一年内有完整随访资料的伽玛刀患者47例.先探讨γ刀治疗后脑水肿临床特征,然后采用χ2检验从治疗病灶平均直径是否大于2.5cm、是否有流空效应、治疗前有无病灶周围水肿、靶区内能否确切除外正常脑组织、边缘剂量是否大于15Gy诸变量中确定与脑水肿相关者.结果:γ刀治疗后一年内脑水肿总的发生率为17%,多在治疗后半年内发生,对糖皮质激素反应良好、无症状性或一过性居者多,少数为顽固性或致死性.与脑水肿发生显著相关的因素为病灶平均直径大于2.5cm、靶区内不能确切除外正常脑组织.结论:放射性脑水肿是γ-刀治疗后的重要并发症之一.在剂量-容积关系的指导下,选择合适病理类型和大小的病灶对于减少γ刀术后脑水肿的发生具有重要意义.     

表皮生长因子受体反义RNA联合γ-刀治疗大鼠C6胶质瘤的实验研究

目的研究表皮生长因子受体（EGFR）反义RNA联合γ-刀治疗对鼠C6胶质瘤的生长抑制作用。方法将1×10^6／15mL C6胶质瘤细胞（每只15mL）接种至SD大鼠右侧尾状核头部，建立SD大鼠C6脑胶质瘤模型。6d后进行MRI检查，确定成瘤后随机分为4组（A：对照组；B：EGFR反义RNA基因治疗组；C：γ-刀治疗组；D：EGFR反义RNA＋γ-刀治疗组），每组12只。B、D组在第6、8天进行脂质体介导的反义EGFR质粒治疗。C、D组第10天进行γ-刀放射外科治疗，给予边缘剂量15Gy。A组未作任何治疗。第11天每组处死2只大鼠进行生物学特性检测，包括PCNA（免疫组化法）、凋亡（TUNEL法）；其余10只在γ-刀治疗后1、2、4及8周进行MRI检查，并观察生存期。结果EGFR反义RNA联合γ-刀治疗组较单一治疗组动物生存期显著延长（P〈0．05），肿瘤细胞PCNA阳性率下降、凋亡率增加，MRI检查证实肿瘤生长缓慢。结论γ-刀放射外科联合EGFR反义RNA治疗C6胶质瘤大鼠，具有更高的肿瘤生长抑制率及肿瘤细胞凋亡率，动物生存时间显著延长。