恢复野生型PTEN基因表达对炎性乳腺癌MDA-MB-468体外生物学行为的影响

目的研究野生型PTEN基因转染对人炎性乳腺癌MDA—MB-468细胞体外生物学行为的影响及机制。方法应用基因重组技术构建重组质粒pcDNA3．1-PTEN，用脂质体转染乳腺癌细胞株MDA—MB-468，用RT—PCR、免疫组化及免疫印迹方法分析目的基因及其蛋白表达，并用免疫印迹方法检测转染后，在表皮生长因子的诱导下，磷酸化蛋白激酶B（PKB／Akt）的表达，四甲基唑蓝（MTT）法分析细胞增殖。Annexin V—FITC和PI双染流式细胞术检测细胞凋亡。结果RT—PCR、免疫组化及免疫印迹显示pcDNA3．1-PTEN转染组有PTEN mRNA及其蛋白表达，且显示转染组在表皮生长因子的诱导下，p-Akt蛋白表达下调。MTT检测表明pcDNA3．1-PTEN转染组活细胞数较其它各组均低（P〈0．01），流式细胞分析其凋亡率达21．68％。结论野生型PTEN基因依赖其磷酸酶活性可诱导乳腺癌MDA—MB-468细胞凋亡。     

外源性PTEN基因诱导人乳腺癌MDA468细胞凋亡

目的 研究外源性PTEN基因依赖其磷酸酶活性诱导人乳腺癌MDA468细胞凋亡。方法 应用分子克隆技术构建重组质粒pcDNA3．1-PTEN,以脂质体转染法转染人乳腺癌细胞株MDA468,对照组为pcDNA3．1(-)空载体质粒转染组和未转染组。应用RT-PCR、Western印迹法分析目的基因的表达;在表皮生长因子(EGF)的诱导下,采用Western印迹方法检测转染后磷酸化蛋白激酶B(PKB／Akt)的表达及细胞在黏附和失黏附状态下的黏着斑激酶的表达;膜联蛋白V-FITC和P1双染流式细胞术检测细胞凋亡。结果 RT-PCR、Western印迹显示pcDNA3．1-PTEN转染组有PTEN mRNA及PTEN蛋白表达,且在EGF的诱导下,p-Akt及p-FAK蛋白表达下调。流式细胞术则显示其凋亡率达21．68％。结论 外源性PTEN基因依赖其磷酸酶活性可诱导人乳腺癌MDA468细胞凋亡。     

外源性PTEN基因稳定转染对大肠癌LS1747细胞周期及凋亡的影响

目的 :研究外源性基因PTEN对人类大肠癌LS174 7细胞周期及凋亡的影响。方法 :以携带有PTEN基因的真核表达载体体外转染人类大肠腺癌细胞LS174 7,筛选阳性克隆的细胞并扩增培养 ,鉴定转染成功后采用流式细胞仪、透射电镜、DNA琼脂糖电泳 ,检测转染PTEN基因后LS174 7细胞的凋亡以及观察三种细胞生长曲线。结果 :流式细胞仪显示 ,细胞周期从G1期到S期发生抑制 ,并在G1期峰前出现 1个明显的凋亡峰。透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞浆浓缩、核碎裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表现。细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞特有的“梯状”条带。转染空载体及未转染的LS174 7细胞未见凋亡表现。转染PTEN的LS174 7细胞与空白质粒载体转染的LS174 7细胞和LS174 7细胞的生长速度相比 ,后两者生长速度较快。结论 :将外源性PTEN基因导入LS174 7细胞后 ,可以抑制细胞周期 ,并可诱导细胞凋亡 ,这可能是PTEN基因抑制大肠癌细胞增殖的重要机制之一。     

PTEN基因转染对胶质瘤细胞粘附力的影响

目的：观察转入正常PTEN基因的胶质瘤细胞体外粘附力改变，探索PTEN基因对胶质瘤细胞影响方式。方法：构建携带正常PTEN基因的pcDNA3．1／Hygro(-)真核质粒载体。并用之转染PTEN失活的U251细胞系，采用层粘连蛋白、纤粘连蛋白粘附模型，观察转染前后的细胞的粘附力的改变。结果：转染PTEN基因可以明显抑制U251细胞的粘附力。结论：PTEN基因可通过抑制胶质瘤细胞本身的粘附力而达到抑制肿瘤生长     

体外转染PTEN基因对人结肠癌细胞生长的影响

目的 探讨野生型PTEN基因表达对结肠癌细胞体外生长的影响.方法 应用脂质体转导技术,将含野生型PTEN基因重组真核表达质粒pBp-PTEN转染Lovo细胞并稳定表达.Western blotting鉴定后,观察Lovo细胞转染前后生长、细胞周期、凋亡的改变.结果 转染后细胞生长曲线提示转染组曲线平缓,无明显对数生长期,生长速度较对照组明显降低(P《0.01);细胞周期测定显示转染组细胞G1期比例上升,提示PTEN可能对G1/S期转换点起阻滞作用;转染组细胞凋亡比率增高(P《0.01),尤其是早期凋亡.结论 外源性PTEN基因的转染可以抑制结肠癌细胞的体外生长.     

PTEN基因转染对人膀胱癌细胞BIU-87凋亡的影响

目的：研究外源性抑癌基因PTEN转染对人膀胱癌细胞系BIU-87凋亡的影响,探索膀胱癌基因治疗的新途径.方法：将携有PTEN基因的真核表达载体体外转染BIU-87细胞,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,用逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）检测PTEN的表达情况,应用细胞原位凋亡检测试剂盒和流式细胞仪分别研究PTEN基因转染前、后膀胱癌细胞凋亡的变化.结果：转染PTEN基因的膀胱癌细胞系BIU-87中PTEN mRNA能稳定表达,肿瘤细胞凋亡明显增多,与对照组比较有显著性差异.结论：转染外源性PTEN基因能显著诱导膀胱癌细胞凋亡,从而达到抑制肿瘤发生、发展的目的.     

PTEN体外转染对乳腺癌细胞ZR-75-1细胞周期和增殖的影响

目的探讨外源野生型PTEN基因对人乳腺癌细胞ZR-75-1细胞周期和增殖的影响,阐明PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法利用脂质体介导法将重组质粒pBP-wt-PTEN导入人乳腺癌细胞ZR-75-1中,嘌呤霉素筛选稳定表达细胞株并扩增培养;采用细胞计数法检测肿瘤细胞增殖速度;流式细胞术检测细胞周期的变化。结果经嘌呤霉素筛选得到稳定表达细胞株;重组质粒pBP-wt-PTEN稳定转染可明显抑制ZR-75-1细胞的体外增殖,细胞周期明显改变,细胞从G1期到S期发生抑制,并在G1期峰前出现1个较为明显的凋亡峰。结论转染外源性野生型PTEN基因可使ZR-75-1细胞周期阻滞于G1期,并可抑制肿瘤细胞增殖。     

体外瞬时转染野生型PTEN过表达对乳腺癌MCF-7细胞的影响

目的：研究野生型FTEN基因过表达对乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用。方法：应用携带野生型FTEN的真核表达载体pEGFP-C1-FTEN,以脂质体介导的方法体外瞬时转染乳腺癌MCF-7细胞,利用流式细胞术检测抗凋亡蛋白bcl-2的表达,通过相差显微镜、细胞生长曲线、MTT、DNA琼脂糖凝胶电泳等方法,观察FTEN基因过表达对MCF-7细胞生物学特性的影响。结果：荧光显微镜观察、免疫细胞化学和RT-PCR检测证实,转柒后MCF-7细胞中PTEN呈高水平表达;相差显微镜观察到MCF-7／FTEN细胞出现典型的凋亡形态学改变;细胞生长曲线低平;流式细胞检测显示,G-期细胞比例比空载体组增加14.79％,并出现凋亡峰;DNA琼脂糖凝胶电泳可见梯状条带;同时还检测到转染PTEN后细胞bcl-2表达下降。结论：外源性FTEN基因过表达可显著抑制MCF-7细胞的周期进程并诱导细胞凋亡。     

抑癌基因ING4转染对乳腺癌细胞MDA-MB-435S生物学行为的影响

目的 研究转染抑癌基因ING4对乳腺癌细胞系MDA-MB-435S生物学行为的影响.方法 携带ING4基因的真核表达质粒pcDNA3.0(+)-ING4利用脂质体瞬时转染乳腺癌MDA-MB-435S细胞,以转染pcDNA3.0(+)空载体和未转染的MDA-MB-435S作为阴性对照和空白对照.转染72 h后,RT-PCR检测转染前后ING4基因mRNA表达水平,MTT法检测转染各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞周期的变化,TUNEL实验检测各组细胞凋亡水平的变化.结果 转染ING4基因的MDA-MB-435S细胞ING4 mRNA表达水平明显上调;细胞增殖活力较空白组和阴性对照组下降(P＜0.05);细胞发生G2/M期阻滞(P＜0.05);细胞凋亡比例明显增加(P＜0.01).结论 ING4基因通过G2/M期阻滞和诱导细胞凋亡的方式抑制乳腺癌细胞生长.     

体外转染PTEN基因对人结肠癌细胞生长的影响

目的探讨野生型PTEN基因表达对结肠癌细胞体外生长的影响。方法应用脂质体转导技术,将含野生型PTEN基因重组真核表达质粒pBp-PTEN转染Lovo细胞并稳定表达。Western blotting鉴定后,观察Lovo细胞转染前后生长、细胞周期、凋亡的改变。结果转染后细胞生长曲线提示转染组曲线平缓,无明显对数生长期,生长速度较对照组明显降低(P<0.01);细胞周期测定显示转染组细胞G1期比例上升,提示PTEN可能对G1/S期转换点起阻滞作用;转染组细胞凋亡比率增高(P<0.01),尤其是早期凋亡。结论外源性PTEN基因的转染可以抑制结肠癌细胞的体外生长。     

PTEN基因在乳腺癌中的研究进展

在过去的50年中乳腺癌发病率急速上升,乳腺癌已在女性恶性肿瘤中占首位.其发病原理是由多种癌基因和（或）抑癌基因异常表达所致.抑癌基因PTEN的表达异常在乳腺癌中常见,PTEN基因失活与乳腺癌的发病机理,浸润、转移,恶性转化及无限制生长及临床预后有一定关系.     

Exogenous PTEN Gene Induces Apoptosis in Breast Carcinoma Cell Line MDA468

The effects and mechanisms of exogenous phosphatase and tensin homolog deleted from chromosome ten (PTEN) gene on phosphatase activity-dependent apoptosis of breast cancer cell line MDA468 were investigated. PTEN gene packaged with lipofectin was transferred into breast cancer cell line MDA468 and parental MDA468 cells served as controls. RT-PCR and Western blot were done to detect the expression of target genes. The expression of phosphospecific protein kinase B (PKB/Akt) and focal adhesion kinase (FAK) protein stimulated by epidermal growth factor (EGF) was also detected. Apoptosis was determined by flow cytometry with a double-staining method using FITC-conjugated annexin V and PI. MDA468 cells transfected with PTEN gene could express PTEN mRNA and protein. PTEN decreased the phosphorylation level of AKT protein and down-regulated FAK protein expression in MDA468 stimulated by EGF. The apoptosis rate was 21.68%. PTEN in-duced breast cancer apoptosis phosphatase activity-dependently. The mechanism is possibly related with phosphoinositide 3-kinase (PI3K)/protein kinase B (PKB)/AKT signaling pathway. Those results may provide new clues on the gene therapy in breast cancer.     

乳腺癌组织抑癌基因PTEN的表达及其意义

目的研究抑癌基因PTEN在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化技术（S-P）检测72例乳腺癌中PTEN的表达情况。结果PTEN总的表达缺失率为62.5%（45/72）。PTEN表达缺失率与乳腺癌的组织学分级,TNM临床分期,腋窝淋巴结转移和生存时间有关（P〈0.05）,而与肿瘤的大小和ER、PR状况无关。结论检测乳腺癌PTEN在蛋白水平的表达缺失状况可能有助于对其预后的判断。     

抗增殖蛋白TOB1影响乳腺癌细胞MDA-MB-231体外转移的作用研究

目的研究抗增殖蛋白家族成员TOB1对乳腺癌细胞MDA-MB-231体外侵袭与转移的生物学作用与机制。方法采用脂质体介导的质粒转染和G418筛选培养法获得稳定高表达TOB1的高转移性乳腺癌细胞系MDA-MB-231。通过人工基底膜侵袭实验和划痕实验检测TOB1过表达对MDA-MB-231细胞体外侵袭能力和转移能力的影响。采用super array基因芯片法检测TOB1引起的肿瘤转移相关基因表达的变化。结果与对照组相比,外源性TOB1高水平表达使MDA-MB-231的体外侵袭能力显著降低（P〈0.05）,同时抑制MDA-MB-231的体外迁移能力;TOB1表达水平的增加引起MDA-MB-231细胞中肿瘤转移抑制基因BRMS1表达的明显增加,同时显著抑制肿瘤转移相关基因HSP90、FXYD5、RHOC、S100A4等的表达（均P〈0.05）。结论 TOB1过表达抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的体外侵袭、转移,涉及的机制可能与TOB1对多种重要的肿瘤转移相关基因的表达调控有关。     

PTEN基因及其在甲状腺癌中的研究

大约有4%～7%的人口在他们的一生中会形成临床上明显的甲状腺结节,大多数情况下术前诊断通过针吸活组织检查(Needle Biopsy)是不确定的。因此,对甲状腺良恶性肿瘤的诊断检测的改进成为迫切的需求。PTEN基因是新发现的抑癌基因,在大量的实验研究中已经证实。它的失活或突变与人类多种肿瘤的发生、发展及预后有关。对于PTEN基因在甲状腺肿瘤中的研究,成为目前研究的焦点。     

白藜芦醇对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长、迁移及侵袭的影响

目的 研究白藜芦醇对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长、迁移及侵袭的影响.方法 采用MTr法和软琼脂集落形成实验测定白藜芦醇对MDA-MB-231细胞生长的影响;采用Transwell小室迁移、侵袭实验检测白藜芦醇对细胞迁移、侵袭能力的影响.结果 白藜芦醇浓度在25～200μmol/L时,作用6,12,24,48,72 h后,抑制MDA-MB-231细胞增殖,抑制作用呈时间和浓度依赖性(P＜0.01).白藜芦醇抑制MDA-MB-231细胞在软琼脂中的集落形成能力随着白藜芦醇浓度的增大集落形成率减小.25、50、100、200 μmol/L的白藜芦醇作用24 h可以明显抑制MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力(P＜0.01).结论 白藜芦醇能有效抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长,并通过抑制细胞对细胞间基质的降解作用抑制其侵袭和迁移能力.     

吉西他滨诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的 研究吉西他滨诱导人乳腺癌细胞系MCF-7细胞产生凋亡。方法 应用MTT法、DNA电泳技术及流式细胞术观察吉西他滨诱导人MCF-7细胞凋亡。结果 吉西他滨作用后，MTT结果显示细胞生长抑制率随药物浓度的增加而逐渐增大；DNA断裂电泳可见典型的梯形DNA条带，大小约180～200bp的整倍数递增，随吉西他滨作用时间延长和浓度的增加而逐渐增强；流式细胞术分析，吉西他滨1．0μg／ml和10．0μg／ml作用24h后，凋亡细胞比例分别为8％和14％；作用48h后分别增加到15％和29％。结论 吉西他滨可以诱导乳腺癌细胞产生凋亡，呈时间和剂量依赖性。     

长春瑞滨联合外照射对人乳腺癌MCF-7细胞作用的研究

目的　研究长春瑞滨联合外照射对人乳腺癌MCF - 7细胞的抗肿瘤机制。方法　采用MTT法检测长春瑞滨对MCF - 7细胞毒作用 ,流式细胞仪检测各组细胞周期分布、细胞凋亡指数 ,电子显微镜观察MCF - 7细胞凋亡的形态学特征。结果　MTT检测表明 ,长春瑞滨给药 2 4h的IC50 为 7.2 0 μg/ml。流式细胞仪细胞周期分析显示 :C组细胞大多处于G1～S期 ,V组G2 相细胞明显高于对照组 ,V组G2 相细胞与C组及R组相比均差异显著 (均P <0 .0 5 )。流式细胞仪检测各组MCF - 7细胞凋亡结果显示 :R组、V组、V +R组在不同时间内的平均凋亡指数分别为 2 .98± 3 .90 %、8.0 1± 1.87%、15 .5 7± 5 .2 3 % ,(V +R)组与V组及R组相比均差异显著 (均P <0 .0 5 )。透射电镜观察到MCF - 7细胞凋亡的形态学表现为染色质边集 ,胞浆浓缩 ,核固缩 ,可见有膜包绕的凋亡小体脱落。结论　长春瑞滨对乳腺癌MCF - 7细胞具有显著的细胞毒作用。它可诱导乳腺癌MCF - 7细胞生长阻止在G2 期 ,并能诱导它的凋亡。在照射前使用 ,能增强放疗对MCF - 7细胞凋亡的诱导作用