EYA1 通过调控PTEN/PI3K/AKT信号通路抑制胃癌SGC-7901 细胞的恶性生物学行为

[摘要] 目的:探讨EYA1(eyes absent 1)通过调控PTEN/PI3K/AKT信号通路抑制胃癌SGC-7901细胞的恶性进展及其相关机制。方法:收集2016年6月至2018年6月陆军军医大学附属西南医院全军普通外科中心29例胃癌组织及其癌旁组织标本,采用Wb和qPCR实验检测胃癌组织和癌旁组织中EYA1 mRNA和蛋白的表达水平。人胃癌细胞株SGC-7901培养完成后,采用过表达EYA1质粒或siRNA干扰质粒转染胃癌SGC-7901细胞;分别采用MTT、流式细胞术、划痕愈合和Transwell实验检测胃癌SGC-7901细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力。结果:胃癌组织中EYA1 mRNA 和蛋白表达水平较癌旁组织均明显降低（P<0.01）;过表达EYA1可明显提高SGC-7901 细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.05）、抑制细胞凋亡（P<0.05）。过表达EYA1 可明显促进PTEN的表达、抑制PI3K/AKT通路的激活（均P<0.05或P<0.01）;但在PTEN干扰后以上作用均受到了明显抑制（均P<0.05或P<0.01）。结论:EYA1可通过促进PTEN的表达抑制PI3K/AKT信号通路,从而抑制胃癌SGC-7901细胞的恶性生物学行为。     

PI3K/AKT信号通路阻断药联合小檗碱对前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用

目的 探讨采用磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制药——LY294002抑制磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)信号通路联合小檗碱对前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用.方法 采用MTT法检测细胞增殖情况;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期分布情况;采用Western blot检测细胞中PI3K、p-AKT、cyclin D1、bcl-2、BAX蛋白表达情况.结果 随着小檗碱作用浓度的增加,DU145细胞的增殖率逐渐降低;不同浓度小檗碱与LY294002联合处理对DU145细胞增殖的抑制作用均较相同浓度小檗碱单独处理增强(P﹤0.05).与空白对照组相比,小檗碱组DU145细胞的凋亡率增高(P﹤0.05),G0/G1期细胞所占比例增高(P﹤0.05),PI3K、p-AKT、cyclin D1、bcl-2蛋白表达水平均下调(P﹤0.05),BAX蛋白表达水平上调(P﹤0.05).与小檗碱组和空白对照组相比,小檗碱+LY294002组DU145细胞的凋亡率增高(P﹤0.05),G0/G1期细胞所占比例增高(P﹤0.05),PI3K、p-AKT、cyclin D1、bcl-2蛋白表达水平均下调(P﹤0.05),BAX蛋白表达水平上调(P﹤0.05).结论 小檗碱能够抑制DU145细胞增殖,并促进细胞凋亡和细胞周期阻滞,采用LY294002阻断PI3K/AKT信号通路能够明显增强小檗碱对前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用.     

PI3K/AKT信号通路与前列腺癌关系的研究进展

近年来针对前列腺癌靶向治疗的研究作为新的热点受到越来越多的关注,主要集中在非AR途径的通路及靶点的探索,其中较为成熟且具有明显研究价值的途径之一是磷脂酰肌3-羟激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路.研究表明,该信号通路的异常活化与疾病的发展和转归有显著相关性,在机体细胞的生长、增殖、凋亡以及炎症反...     

PI3K/Akt抑制剂LY294002对大肠癌细胞化疗增敏作用的探讨

目的 探讨PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002与化疗药物联合使用对大肠癌细胞(HCT-8)化疗效果的影响.方法 将LY294002联合化疗药物作用于大肠癌细胞系HCT-8,MTT法检测单独使用5-Fu、奥沙利铂及联合PI3K抑制剂LY294002,对体外培养的大肠癌细胞系HCT-8增殖的抑制作用,流式细胞术检测HCT-8的凋亡率.结果 联合LY294002作用后,5-Fu、奥沙利铂对大肠癌细胞系HCT-8增殖的抑制作用明显增强(P<0.05),且能提高其凋亡率(P<0.05).结论 LY294002能有效提高化疗药物5-Fu、奥沙利铂体外对HCT-8细胞抑制作用的敏感性,抑制PI3K介导的信号转导通路,可明显提高大肠癌的化疗效果.     

PI3K/AKT/mTOR信号通路介导乳腺癌内分泌治疗耐药的研究进展

内分泌治疗在激素受体阳性乳腺癌患者中的地位越来越受到重视,可以明显改善患者预后.内分泌治疗耐药严重制约着其临床应用,但耐药机制仍不明确,目前认为多信号通路激活参与耐药形成,其中PI3K/AKT/mTOR信号通路在耐药机制中发挥重要作用.临床试验提示,在内分泌治疗的基础上阻断信号通路可以逆转耐药,研究结果令人鼓舞.本文对PI3K/AKT/mTOR信号通路在内分泌耐药机制中的作用进行综述.     

EBV-BZLF1通过激活PI3K/AKT信号通路促进胃癌细胞生长

  目的   明确EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）BZLF1基因（EBV-BZLF1）对EB病毒阴性胃癌细胞生物学行为的影响及可能的分子机制。   方法   运用过表达BZLF1的慢病毒感染胃癌细胞系AGS和HGC27,分别采用CCK8、细胞凋亡检测、细胞迁移和侵袭实验及Western blot法检测细胞的增殖能力、细胞凋亡与迁移侵袭能力及细胞信号通路变化情况。将过表达BZLF1的胃癌细胞HGC27注射于非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷（NOD/SCID）小鼠背部皮下构建移植瘤模型,观察BZLF1对肿瘤生长的影响。   结果   过表达BZLF1的慢病毒感染组AGS-BZLF1与HGC27-BZLF1相比亲本细胞,细胞中BZLF1蛋白表达明显上调;体外细胞增殖与小鼠体内成瘤能力均显著增强（P < 0.05）;细胞凋亡受到BZLF1蛋白的抑制,其中AGS-BZLF1和HGC27-BZLF1凋亡率为（2.40± 0.14）%和（3.90±0.14）%,显著低于AGS和HGC细胞的（5.75±0.35）%和（9.70±0.42）%（P < 0.05）;但细胞迁移和侵袭能力无明显改变。深入分子机制研究发现,BZLF1表达上调后,PI3K/AKT信号通路明显激活,表现为pAKT和pS6蛋白表达上调。使用BEZ235抑制剂阻断PI3K/AKT信号通路后,HGC27-BZLF1和AGS-BZLF1细胞的生长均受到抑制。   结论   EBV-BZLF1可通过激活PI3K/ AKT信号通路促进胃癌细胞生长,靶向PI3K/AKT通路抑制剂或可成为EBV阳性胃癌的治疗选择。      

PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂在淋巴瘤中的研究进展*

磷脂酰肌醇-3 激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI 3K）- 蛋白激酶B（protein kinaseB ,PKB ,又称AKT ）- 雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of  rapamycin,mTOR）信号通路与细胞的生长、增殖、分化、凋亡、代谢等密切相关,在多种实体肿瘤中已发现该信号通路的异常。近年来,以抑制该通路特定位点的靶向治疗已成为抗肿瘤的研究热点。许多该位点新型抑制剂也已进入淋巴瘤的临床试验中,本文就该通路在淋巴瘤中的活化状态及各个分子靶点抑制剂的研究进展做一综述。     

PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂治疗结直肠癌的研究进展

PI3K/AKT/mTOR通路的异常活化在结直肠癌的发生发展中起到重要作用,以此通路为靶点的药物已成为结直肠癌治疗的研究热点,临床前和临床试验研究证明,针对PI3K/AKT/mTOR通路的多种抑制剂具有抗肿瘤活性。越来越多的临床数据显示,PTEN缺乏或PIK3CA基因突变对PI3K/AKT/mTOR通路抑制剂敏感,KRAS突变则预示着耐药;寻找针对这一通路抑制剂敏感的优势人群也成为结直肠癌的研究热点;此外,PI3K/AKT/mTOR通路也会影响常规治疗的疗效,因此PI3K/AKT/mTOR通路抑制剂联合细胞毒治疗方案在结直肠癌中可能起到协同作用。     

吉西他滨对肺癌细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨吉西他滨对肺癌细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法选取对数生长期的肺癌NCI-H292细胞随机分为吉西他滨组、阿霉素组和对照组,分别采用7μmol/L的吉西他滨、阿霉素与生理盐水处理,采用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞迁移与侵袭,Annexin V-PI双标记法检测细胞凋亡,Western blot实验检测PI3K和AKT蛋白表达。结果细胞处理后24h和48h,吉西他滨组和阿霉素组的细胞增殖指数均低于对照组,吉西他滨组低于阿霉素组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。细胞处理后24h和48h,吉西他滨组和阿霉素组的细胞迁移与侵袭指数均低于对照组,吉西他滨组低于阿霉素组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。细胞处理后24h和48h,吉西他滨组和阿霉素组的细胞凋亡指数均高于对照组,吉西他滨组高于阿霉素组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。细胞处理后24h和48h,吉西他滨组和阿霉素组PI3K和AKT蛋白表达水平均低于对照组,吉西他滨组低于阿霉素组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。结论吉西他滨可促进肺癌...     

顺铂通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞自噬

目的：探讨顺铂对子宫内膜癌Ishikawa细胞自噬的影响,并初步探讨PI3K/AKT/mTOR信号通路在其中的作用。方法：透射电镜观察自噬泡形成,免疫荧光检测微管相关蛋白1轻链3融合蛋白II（microtubule-associated protein 1 light chain 3II,LC3II） 的荧光聚集情况。采用Westerblot检测mTOR通路中的PI3K、AKT及mTOR蛋白的表达。结果：顺铂（20μg/mL）能诱导Ishikawa细胞发生自噬,其中24h组明显高于12h组（P<0.05）;与对照组（20μg/mL-0h组）相比较,自噬相关蛋白-LC3的表达随着时间延长表达增加（P<0.05）。磷酸化AKT1、磷酸化mTOR及PI3Kp85蛋白表达水平随着时间延长表达下降。胰岛素样生长因子-1（insulin-like growth factors-1,IGF-1）与顺铂共培养组自噬小体及LC3蛋白表达少于顺铂组,但高于对照组。结论：顺铂可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路,从而诱导子宫内膜癌细胞发生自噬。     

抑制PI3 K/ Akt 通路提高肺腺癌细胞化疗的 效果

 目的　探讨PI3 K/ Akt 信号转导通路抑制剂L Y294002 对肺腺癌细胞株A549 及裸鼠移植瘤化 疗的增敏作用。方法　采用MTT 法及流式细胞仪检测L Y294002 、紫杉醇、L Y294002 联合紫杉醇对 A549 细胞增殖及凋亡的影响;通过裸鼠移植瘤模型检测L Y294002 、紫杉醇、L Y294002 联合紫杉醇对 A549 细胞成瘤性的影响。结果　L Y294002 可增强紫杉醇对A549 细胞的抑制作用,并且可提高其凋亡 率。裸鼠移植瘤实验显示,L Y294002 与紫杉醇均可抑制移植瘤的生长,联用后抑瘤率增加。结论　 L Y294002 可增强紫杉醇对A549 细胞、裸鼠移植瘤的化疗的敏感性,抑制PI3 K/ Akt 信号转导通路可提 高肺腺癌化疗的效果。     

左金丸与反左金丸诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的比较

目的比较左金丸（Zuojin Pill,ZP）和反左金丸（Retro-zuojin Pill,RZP）对人胃癌细胞（SGC-7901）生长的活性抑制和凋亡诱导作用。方法采用MTT比色法观ZP与RZP对SGC-7901的生长抑制情况;流式细胞仪PI单染亚二倍体峰分析细胞凋亡率;Hoechst 33258染色观察细胞形态学变化。结果0.1mg/ml ZP与RZP分别作用SGC-7901细胞后,均能抑制细胞活性,且与时间呈依赖关系。0.1、0.5和1.0mg/ml RZP作用SGC-7901细胞48h,细胞凋亡率为(5.52±.54)％、(6.91±2.31)%、(8.50±1.02)%,0.1、0.5和1.0mg/ml的ZP对细胞的凋亡率分别为(11.60±1.24）％、(21.80±0.28）%、(36.40±1.59）%,与对照组(1.69±1.91)%比较差异均有统计学意义（P＜0.01）。Hochest染色细胞出现核固缩状和颗粒状荧光等典型的凋亡学特征。结论左金丸和反左金丸对SGC-7901生长都有明显的抑制作用并可诱导SGC-7901的凋亡,同一浓度的ZP和RZP作用SGC-7901相同时间,ZP的作用效果更为明显。     

蛇葡萄素对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的观察蛇葡萄素(APS)体内抗人胃癌作用。方法采用人胃癌细胞裸鼠移植瘤模型,将裸鼠随机分成5组,APS三个剂量连续灌胃给药10天,观察肿瘤体积、相对肿瘤体积(RTV)、相对肿瘤增殖率（T/C）、瘤重、抑瘤率(IR),以此评价APS的抗肿瘤作用。结果在人胃癌细胞株SGC-7901裸鼠移植瘤的抑瘤实验APS 600mg/kg、300mg/kg、150mg/kg灌胃给药10天,其相对肿瘤增殖率为52.84%、71.12%、62.14%,其抑瘤率分别为38.8%、27.5%、27.3%。结论APS对人胃癌细胞株SGC-7901裸鼠移植瘤有明显的抑制作用。     

Xanthoxyletin,a Coumarin Induces S Phase Arrest and Apoptosis in Human Gastric Adenocarcinoma SGC-7901 Cells

This study was conducted to explore the novel anticancer compounds from Chinese herbs. During the processof screening, to evaluate the potential chemopreventive effect of natural compounds, Xanthoxyletin was isolatedfrom Erythrina variegata. It has been reported that Xanthoxyletin possesses antibacterial, fungicidal, and algicidalproperties. In this study, we examined the antiproliferative effects of Xanthoxyletin against SGC-7901 cells andits ability to induce apoptosis and cell cycle arrest for the first time. We observed that its inhibitory effects oncells were associated with the DNA damage, apoptosis through mitochondrial dysfunction, and cell cycle arrestat S phase in a dose-dependent manner. Additionally, Xanthoxyletin also increased the production of reactiveoxygen species in SGC-7901 cells. These results suggest that Xanthoxyletin may be promising anticancer agentand has worth for further mechanistic and therapeutic studies against gastric cancer.     

鞘内注射PI3K特异性抑制剂LY294002对小鼠骨癌痛的影响

[目的]了解鞘内注射PI3K特异性抑制剂LY294002对小鼠股骨癌痛的影响。[方法]C3H／HeJ小鼠32只,随机分为对照组、假手术组、骨癌组和鞘内LY294002＋骨癌组（抑制剂组）,每组8只,分别于造模前和模型建立后的第8、10、12、14、17、21d测定各小鼠机械痛敏（机械缩腿阈值,mechanieal withdrawal threshold,MWT）和热痛敏（热缩腿潜伏期,thermal withdrawal latency,TWL）,LY294002术前鞘内注射。[结果]与术前相比较,骨癌组小鼠术后12、14、17、21d MWT明显下降（t=4．527,P=0．003;t=3．698,P=0．008;t=4．043,P=0．005;t=4．309,P=0．004）,TWL明显降低（t=5．946,P=0．001;t=5．214,P=0．001;t=6．786,P=0．000;t=5．758,P=0．001）;与假手术组相比较,骨癌组小鼠术后12、14、17、21d MWT明显下降（P=0．027;P=O．000;P=0．000;B=0．000）,TWL明显降低（P=0．000;P=0．000;P=0．000;P=0．000）。与骨癌组相比较,抑制剂组小鼠在12、14、17、21dMWT明显升高（P=0．031;P=0．001;P=0．002;P=0．000）,TWL明显延长（P=0．002;P=0．000;P=0．000;P=0．000）：与术前和对照组相比较,假手术组在各时间点的MWT和TWL均无明显变化（19〉0．05）。[结论]鞘内注射PI3K特异性抑制剂LY294002能明显减轻骨癌痛小鼠机械痛敏和热痛敏,提示PI3K在脊髓水平参与了骨痛痛信息侍涕．     

PI3K/AKT特异性抑制剂LY294002对卵巢癌化疗增敏作用的研究

目的:探讨磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)抑制剂LY294002对卵巢癌化疗效果的影响.方法:将LY294002单独或与顺铂、紫杉醇联合作用于卵巢癌A2780、SKOV3细胞.MTT法检测DDP、顺铂单独或联合LY294002处理后对A2780、SKOV3细胞的抑制率;采用流式细胞技术检测药物单独或联合作用对A2780和SKOV3细胞凋亡的影响;应用Western blot检测A2780和SKOV3细胞中AKT及磷酸化AKT(p-AKT)蛋白表达的变化.结果:联合应用LY294002能够显著提高DDP、paclitaxel对A2780和SKOV3细胞抑制率;LY294002与DDP、paclitaxel的协同治疗指数小于1,二者起协同治疗作用;联合LY294002能够增加A2780和SKOV3细胞的凋亡水平.LY294002干预组与对照组相比p-AKT蛋白的表达降低,差异有统计学意义(P<0.01).结论:LY294002能够有效提高卵巢癌A2780和SKOV3细胞对化疗药物DDP和paclitaxel的敏感性,抑制PI3K/AKT介导的信号传导通路,可明显提高卵巢癌细胞的化疗效果.     

蜂胶黄酮 pinobanksin-3-acetate对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响及机制

[目的]探讨蜂胶黄酮pinobanksin-3-acetate对体外培养的胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及部分基因表达的影响.[方法]采用四甲基偶氮唑盐(MTr)显色法检测不同浓度PB3A作用不同时间对SGC-7901细胞生长所产生的影响,计算生长抑制率和IC50值;倒置显微镜观察PB3A干预后细胞的形态变化;Annexin V-FITC/PI双染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测PB3A(40、80μg/ml)干预24h后SGC-7901细胞FOS、GEM、RGS2、GADD45G及HSPA6的蛋白表达水平,利用Spearman进行候选基因相关性分析.[结果]PB3A可明显抑制SGC-7901细胞的增殖(P＜0.05),且抑制作用呈时间和剂量依赖性.随PB3A剂量的增多,SGC-7901细胞的凋亡率渐增,细胞的早期凋亡率从25.6％提高到50.2％.通过40μg/ml和80μg/ml PB3A干预胃癌SGC-7901细胞24h后与对照组相比,高浓度组GADD45G、HSPA6、GEM、RGSR及FOS蛋白表达有极显著性差异(P＜0.01),而低浓度组GADD45G、GEM和HSPA6蛋白表达有显著性差异(P＜0.05).[结论]PB3A在体外可明显抑制胃癌SGC-7901细胞增殖并诱导凋亡的作用,并呈剂量依赖性变化趋势.机制可能与其诱导GEM、RGSR、FOS及HSPA6蛋白的上调表达有关,以上基因可能相互协同导致肿瘤细胞增殖信号通路的抑制并促进胃癌细胞的凋亡.     

内皮抑素30肽对SGC-7901细胞增殖及转移能力的影响

目的研究经RGD修饰的人内皮抑素（endostatin）N-端的30肽对胃癌SGC-7901细胞增殖及转移能力的影响。方法人工合成人内皮抑素1～30位氨基酸(30肽,序列25～31由RGIRGAD改为RGDRGD)所对应的核苷酸序列,连接到质粒pTYB2中,再转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中表达。用WST-1试剂检测30肽对SGC-7901细胞增殖的影响;细胞划痕实验和迁移实验观察30肽对细胞运动迁移的影响;明胶酶谱实验观察其对肿瘤转移相关基因MMP-2、MMP-9表达和分泌的影响。结果30肽能够有效抑制SGC-7901细胞的增殖、侵袭和迁移,同时还抑制了MMP-2和MMP-9的活性。结论30肽可能是通过下调MMP-2和MMP-9的活性而抑制SGC-7901细胞的转移,其在胃癌的临床治疗上具有潜在的应用前景。