磷脂酰肌醇-3激酶抑制剂LY294002增加紫杉醇对肺癌裸鼠移植瘤的治疗作用

背景与目的目前越来越多的证据表明PI3K/AKT的异常活化参与人类肿瘤的发生发展,因此针对PI3K/AKT路径有望成为肿瘤治疗的策略。此研究旨在观察PI3K抑制剂LY294002联合紫杉醇对肺癌裸鼠移植瘤的抗肿瘤作用,初步探讨其可能的作用机制,为临床有效治疗肺癌提供实验资料。方法将实验动物随机分为3组,即肺癌模型组、紫杉醇治疗组及LY294002与紫杉醇联合治疗组。皮下接种A549肺腺癌细胞建立肺癌裸鼠皮下移植瘤模型,定期测量动物体重及肿瘤直径;应用免疫组织化学方法分析CyclinD1及bcl-2,bax蛋白水平的表达。结果LY294002与紫杉醇联合治疗组对肺癌裸鼠移植瘤抑制作用较对照组及紫杉醇治疗组均明显增强(P<0.01);瘤组织bax蛋白表达水平较对照组及紫杉醇治疗组均增强(P=0.021,P=0.001),而bcl-2蛋白表达水平较对照组明显降低(P=0.014)。CyclinD1表达较对照组及紫杉醇治疗组均明显降低(P=0.000,P=0.002)。结论LY294002可显著增强紫杉醇对肺癌的治疗作用。LY294002增强bax、抑制CyclinD1表达可能是肿瘤细胞增殖受抑的重要原因。     

米非司酮对子宫内膜癌裸鼠移植瘤细胞凋亡调控的研究

目的探讨抗孕激素米非司酮对人子宫内膜癌HHUA细胞裸鼠移植瘤细胞凋亡的调控作用。方法体外培养人子宫内膜癌HHUA细胞,裸鼠皮下接种HHUA细胞建立裸鼠移植瘤动物模型,随机分为2组,分别应用米非司酮、精制花生油治疗4周,应用流式细胞术(FCM)检测各组裸鼠移植瘤细胞周期时相和凋亡率;免疫组化技术检测凋亡基因bcl2、Fas和FasL蛋白的表达情况。结果米非司酮治疗组裸鼠移植瘤细胞G0/G1期比例升高,S期细胞比例(SPF)降低(P<0.05),移植瘤细胞凋亡率为15.03%±2.19%,明显高于对照组(3.06%±1.13%)(P<0.01);移植瘤细胞bcl2蛋白表达水平明显下降,而Fas蛋白表达水平升高,与对照组比较,均有显著性差异(P<0.05)。结论抗孕激素米非司酮通过调节移植瘤细胞周期分布和凋亡基因,抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

去势后人子宫内膜癌裸鼠移植瘤模型的建立

目的:研究建立去势后人子宫内膜癌裸鼠移植瘤模型的方法.方法: 将裸鼠在麻醉情况下切除双侧卵巢,随机分成3组,采用细胞悬液法和肿瘤组织块法建立人子宫内膜癌的裸鼠皮下移植瘤模型.结果: 细胞悬液法5×106 /0.2ml/只,瘤块法1.5mm×1.5mm×2mm和1.0mm×1.0mm×1.0mm,三种植瘤法成瘤率无统计学意义,但不同的植瘤法成瘤时间有差异;各组肿瘤体积大小不同,差异有统计学意义.结论: 选择适当的方法建立人子宫内膜癌去势裸鼠移植瘤模型是可行的,可为开展人子宫内膜癌的基础和临床研究提供理想的动物模型.     

依西美坦联合多烯紫衫醇对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤抑制作用的实验研究

目的：探讨第三代芳香化酶抑制剂依西美坦和多烯紫衫醇单独及联合用药对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其相应机制。方法：将处于对数生长期的人子宫内膜腺癌Ishikawa细胞接种于裸鼠皮下, 建立裸鼠的移植瘤动物模型, 将荷瘤裸鼠随机分为4组, 每组5只, 依西美坦和多烯紫衫醇分别单独及联合处理裸鼠移植瘤模型3周, 对照组予以生理盐水3周,计算各组移植瘤体积、 抑瘤率及裸鼠体重情况, 肿瘤组织标本进行HE染色病理检查, 并用TUNEL法 （脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法） 检测细胞凋亡情况。结果： 依西美坦组、 多烯紫衫醇组的抑瘤率分别为25.59%和27.41%, 联合用药组的抑瘤率则为47.09%, 联合用药组与单独用药组及对照组比较差异均有统计学意义 （P<0.05）; TUNEL法检测联合用药组肿瘤细胞凋亡率为 （40.14±3.44） %, 明显高于单独用药组 ［依西美坦组 （30.92±2.95） %、 多烯紫衫醇组 （32.65±2.72） %］ 和对照组 （13.52±1.42） %, 差异有统计学意义 （P<0.05）。结论： 依西美坦、 多烯紫衫醇均可抑制人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的生长, 两者联合应用较两药单独应用对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的抑制作用更为显著。     

阿霉素联合他莫昔芬对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的：分别研究阿霉素、他莫昔芬及两者联合用药对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及相应机制;方法：建立裸鼠活体二次移植肿瘤的动物模型,并随机分为4组,每组5只.分别为阿霉素用药组、他莫昔芬用药组、阿霉素他莫昔芬联合用药组及对照组;用药处理裸鼠移植瘤模型3周.对照组予以注射生理盐水3周.计算各组移植瘤体积、抑瘤率及裸鼠体重情况,肿瘤组织标本进行免疫组化检测Ki67蛋白的表达,并用TUNEL法检测细胞凋亡情况.结果：联合用药组与单独用药组及对照组的瘤体积比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;用药前各组裸鼠体重差异无统计学意义（P＞0.05）,用药后对照组与单独用药组及联合用药组的体重比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;联合用药组与单独用药组及对照组的抑瘤率比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;用药组的Ki67表达阳性率明显低于对照组,联合用药组Ki67表达最低;TUNEL法检测联合用药组肿瘤细胞凋亡率为（32.33 ±3.68）％,明显高于阿霉素组（17.40±2.58）％、他莫昔芬（15.40±6.05）％和对照组（3.50±1.50）％,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：阿霉素、他莫昔芬均可抑制人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的生长,两者联合应用较两药单独应用对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的抑制作用更为显著.     

晚期糖基化终末产物受体促进子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤的生长

目的:探讨晚期糖基化终末产物受体（RAGE）是否能促进子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤的生长。方法:利用腺病毒介导的RNAi干扰技术下调HEC-1A细胞中RAGE的表达,将干扰前后的HEC-1A细胞接种到裸鼠皮下构建移植瘤模型,观察RAGE对裸鼠皮下移植的子宫内膜癌细胞生长的影响。结果:RAGE shRNAi腺病毒干扰的HEC-1A细胞不再表达RAGE蛋白,干扰后的HEC-1A细胞形成的移植瘤体积及质量显著小于干扰前细胞形成的肿瘤(P<0.01)。结论:RAGE促进子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤的生长。     

小干扰RNA沉默CXCR4和CXCR7对人子宫内膜癌Ishikawa细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:探讨针对趋化因子受体基因CXCR4和CXCR7的小干扰RNA(siRNA)对人子宫内膜癌Ishikawa细胞裸鼠移植瘤生长的影响.方法:将子宫内膜癌Ishikawa细胞株注射于裸鼠肩胛背部皮下建立动物模型,待肿瘤最长径达5～7mm后,将所有荷瘤裸鼠随机分组,分别给予CXCR4-siRNA和CXCR7-siRNA单独或联合瘤体内注射,并以阴性对照siRNA和生理盐水作为对照组,每3d治疗一次,共6个治疗周期.观察各组裸鼠移植瘤的生长,比较各组移植瘤的体积和质量的差异,并以实时荧光定量RT-PCR、Western blotting和免疫组化技术验证CXCR4和CXCR7的基因沉默效果.结果:成功建立Ishikawa细胞裸鼠移植瘤模型,与阴性对照siRNA组和空白对照组相比,CXCR4siRNA治疗组、CXCR-siRNA治疗组和CXCR4-siRNA+ CXCR7-siRNA治疗组的肿瘤的生长均明显受到抑制(均P＜0.05);CXCR4-siRNA和/或CXCR7-siRNA瘤体内直接注射能显著下调CXCR4、CXCR7 mRNA(均P＜0.05)和蛋白(均P＜0.01)的表达.结论:siRNA干扰CXCR4和CXCR7表达能够有效抑制人子宫内膜癌Ishikawa细胞裸鼠移植瘤的生长.     

建立人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型及其生物学特性的探讨

目的建立人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型,为人子宫内膜癌的诊断和治疗提供理想的在体研究工具.方法体外培养人子宫内膜癌细胞株HEC-1B,采用皮下注射接种至裸鼠体内,待肿瘤直径达0.8～1.0cm时,将其切下剪成直径为1～2mm小块,再接种至另一裸鼠皮下进行传代.病理组织学检查,光镜、电镜、流式细胞术分析,检测皮下瘤组织和肿瘤细胞系ER、PR、CK表达.结果成功建立了人子宫内膜癌细胞株HEC-1B裸鼠皮下移植瘤模型,并传至第二代,形成的肿瘤具备人肿瘤生物学特点.HEC-1B、皮下移植瘤DI(DNA index)值分别为1.81±0.46、1.95±0.53,均示异倍体.可见裸鼠皮下移植瘤与HEC-1B细胞的恶性肿瘤生物学特性基本一致.结论通过此细胞系建立的人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型的组织病理学免疫组化表型,超微结构,DNA倍体水平特点与来源肿瘤细胞相一致,而且肿瘤的移植生长率为100%,说明该模型系统的生物学特性是稳定的.建立的人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型具有人子宫内膜癌特征,可用于研究子宫内膜癌的生物学特性,为进一步开展子宫内膜癌的实验研究提供理想的动物模型.     

Comparison of Seven Iodine-Labelled Monoclonal Antibodies in Nude Mice with Human Colon Carcinoma Xenografts

The biokinetics of seven ¹³¹I-labelled monoclonal antibodies (MAbs), directed against human colon carcinoma and one ¹²⁵I-labelled unspecific MAb have been examined. the study in nude mice, carrying human colon carcinoma, was intended to be a step in the selection of the most suitable antibody for clinical scintigraphy. the biological half-life in blood was found to be between 1.3 and 7.4 days for the different MAbs. Chromatography of plasma samples showed that the radioiodine was mainly bound to IgG-sized molecules. the (normal tissue)/blood ratios were similar for all the MAbs. the tumour/blood ratio was 0.41 for the unspecific MAb and 0.49-1.1 for the specific MAbs, and the tumour/muscle ratio was between 3.2 and 6.8 for the specific MAbs 6 days after injection. for one MAb tumour/blood and tumour/muscle ratios were 3.9 and 9.8 respectively 9 days after injection. Localization indices were at their highest 2.6 6 days after injection. for at least two of the monoclonal antibodies the tumour/blood and tumour/ muscle ratios found are high enough to justify clinical trials regarding their usefulness for scintigraphy of colon cancer in man.     

蜂毒素对人肝癌裸鼠移植瘤的抗血管生成作用

目的探讨蜂毒素对人肝癌裸鼠移植瘤生长的影响及其抗血管生成作用。方法建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,观察蜂毒素对肿瘤生长的影响。采用免疫组织化学法,检测肿瘤组织微血管密度（microvessel density,MVD）及碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）、缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）和核转录因子κB（nuclear factorκB,NF-κB）的水平。结果蜂毒素低、中、高剂量组相对肿瘤增殖率分别为48.78%、38.33%和33.82%。与生理盐水组比较,蜂毒素处理组肿瘤体积明显缩小（P〈0.01）。免疫组化结果显示,蜂毒素可降低肿瘤组织MVD,且蜂毒素处理组bFGF、HIF-1α和NF-κB蛋白水平明显低于生理盐水组（P〈0.01）。结论蜂毒素可抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,其作用机制可能是降低NF-κB活性,抑制HIF-1α转录,进而下调bFGF表达,最终阻碍肝癌血管生成。     

人乳腺癌裸鼠移植瘤的体外抗生素诱导基因治疗

目的探讨Tet调控下体外抗生素诱导基因治疗人乳腺癌裸鼠移植瘤的可行性。方法构建人乳腺癌BALB/C裸鼠移植瘤模型,制备有感染活性的重组逆转录病毒RevTRE/HSVtk与RevTet-On。观察体外强力霉素(Dox)诱导,丙氧鸟苷(GCV)和逆转录病毒作用后移植瘤生长的变化及组织病理改变,分析其对乳腺癌裸鼠移植瘤的调控性治疗作用。结果乳腺癌裸鼠治疗后,肿瘤体积明显减小,生长受抑,生存周期延长,组间比较有显著性差异(P<0.05)。瘤体HE染色显示治疗组肿瘤局部有炎性细胞浸润和强嗜酸性细胞。RT-PCR结果显示Dox诱导后瘤体组织HSVtk表达较明显。结论通过逆转录病毒介导Tet调控,可以在体外抗生素Dox诱导下对人乳腺癌裸鼠移植瘤模型进行基因治疗,杀伤肿瘤细胞。     

内皮抑素治疗人骨肉瘤裸鼠模型的实验研究

目的:观察内皮抑素(ES)对裸鼠骨肉瘤皮下移植模型血管生成和肿瘤生长的抑制作用及其机制。方法:Transwell双室模型观察ES对骨肉瘤细胞9901诱导内皮细胞迁徙的影响;随机将30只骨肉瘤荷瘤裸鼠分为对照组、ES低剂量组[0.75mg(kg·d)-1]和高剂量组[1.5mg(kg·d)-1],瘤体及瘤体周围注射ES,1次/d,连续给药14d,观察肿瘤生长情况,计算抑瘤率。肿瘤组织进行病理学观察及免疫组化染色,计数坏死组织百分比,微血管密度以及细胞增殖和凋亡指数;动物处死前3个小时尾静脉注射EF5,激光共聚焦显微镜观察组织缺氧及血管标记。结果:ES低剂量组(350ng·ml-1)和高剂量组(700ng·ml-1)对内皮细胞迁徙有明显抑制作用,且高剂量组明显高于低剂量组(P<0.01);高剂量组和低剂量组平均瘤重明显小于对照组,抑瘤率分别为35.83%和22.92%(P<0.01);正常对照组、低剂量组、高剂量组的坏死百分比分别为2.40%、4.68%和9.52%(P<0.01),细胞增殖指数(PI)分别为66.44%、46.11%和25.11%(P<0.01),细胞凋亡指数(AI)分别为2.69%、7.58%和11.53%(P<0.01)。激光共聚焦观察ES治疗组绿色荧光量减少,血管稀疏;肿瘤细胞缺氧增加,呈弥漫的强红色。结论:ES可显著地抑制骨肉瘤细胞诱导的内皮细胞迁徙,以及人骨肉瘤的生长和发展,且呈剂量依赖效应,其可能机制为抑制血管生成,增加肿瘤细胞缺氧和凋亡。     

裸小鼠人骨肉瘤细胞移植瘤株建立及其特性观察

将人骨肉瘤细胞株移植到NC和BALB/c-nu/nu裸鼠体内,已传20代,移植成功率99％。移植瘤的病理学形态和超微结构均和原骨肉瘤细胞相似,连续传代后也未发生变异。将~(125)Ⅰ标记的OS-McAb注射到荷瘤裸鼠体内,72h后γ-扫描移植瘤显像清楚。该瘤株具有局部浸润和转移能力。     

NK细胞对人鼻咽癌细胞CNE2裸鼠皮下移植瘤的抑制作用

 目的 研究同种异体NK细胞对人鼻咽癌细胞（CNE2）裸鼠皮下移植瘤的抑制作用。方法PCR-SSP法检测CNE2细胞HLA-A、B、Cw表型、NK细胞KIR表型（选择3例健康者为试验对象）,磁珠分离法分离NK细胞并进行体外培养扩增,LDH释放法测定NK细胞对CNE2细胞的体外杀伤活性。12只BALB/c裸鼠分为两组,每组6只,对照组裸鼠每只皮下接种1×106CNE2细胞,治疗组裸鼠每只皮下接种1×106CNE2细胞,同时每只经尾静脉注入3×107NK细胞,观察两组裸鼠成瘤时间、成瘤率、肿瘤体积变化、计算抑瘤率。结果 CNE2细胞表面HLA-A、B、Cw表型为A2,24;B18,35;Cw4,7,3例健康者均表达KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1、KIR3DL2。效靶比5∶1、10∶1、20∶1、30∶1时,NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性分别为（9.37±2.14）%、（27.14±1.82）%、（36.40±4.28）%and（54.67±2.80）%。对照组和NK细胞治疗组肿瘤出现时间分别为（10.00±2.68）d、（18.80±1.64）d,（P〈0.01）,成瘤率分别为100%（6/6）、83.33%（5/6）,对照组和NK细胞治疗组裸鼠的瘤重分别为（2.22±0.09）g、（1.42±0.09）g,（P〈0.01）,NK治疗组的抑瘤率为36.04%。肿瘤组织石蜡切片病理学鉴定为低分化鳞状上皮细胞癌,NK细胞治疗组可见角化肿瘤细胞,较多的淋巴细胞浸润和大量细胞坏死区。结论 NK细胞对鼻咽癌裸鼠皮下移植瘤有明显的抑制作用,有希望成为治疗鼻咽癌的新方法。     

三氧化二砷诱导人鼻咽低分化鳞癌BALB/C裸鼠移植瘤的细胞分化和凋亡的研究

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对人鼻咽低分化鳞癌可移植瘤在BALB/C裸鼠体内生长的抑制作用并探讨其机制,重点观察其对鼻咽癌细胞的分化诱导作用。方法 CSNE-1鼻咽癌细胞株接种于裸鼠体内构建移植瘤模型。腹腔注入As2O3(5 mg/kg)。光镜及电镜观察移植瘤的形态学变化,TUNEL染色计算凋亡率,应用免疫组化法检测PCNA,p53,Bcl-2和bax基因的表达。结果 腹腔注射As2O3后,鼻咽癌BALB/C裸鼠移植瘤生长抑制,瘤组织中癌细胞密度减少,细胞皱缩,胞浆红染,瘤组织分化渐成熟,出现角化细胞和角化珠;间质结缔组织增多。透射电镜下肿瘤细胞出现成熟分化及明显角质化,细胞表面微小突起增多,细胞间桥粒增多并以桥粒互相连接,细胞核浆比例减少,胞浆中出现大量张力原纤维并围绕核周。TUNEL检查提示凋亡细胞增多;用药 后野生型p53及baX高表达,PCNA低表达,Bcl-2无变化。 结论As2O3能诱导人低分化鼻咽裸鼠移植瘤分化和凋亡,可能与p53及bax高表达相关,与Bcl-2无关。     

三氧化二砷诱导人鼻咽低分化鳞癌BALB/C裸鼠移植瘤的细胞分化和凋亡的研究(英文)

目的探讨三氧化二砷(As_2O_3)对人鼻咽低分化鳞癌可移植瘤在 BALB/C 裸鼠体内生长的抑制作用并探讨其机制,重点观察其对鼻咽癌细胞的分化诱导作用。方法 CSNE-1鼻咽癌细胞株接种于裸鼠体内构建移植瘤模型。腹腔注入 As_2O_3(5 mg/kg)。光镜及电镜观察移植瘤的形态学变化,TUNEL 染色计算凋亡率,应用免疫组化法检测 PCNA,p53,Bcl-2和 bax 基因的表达。结果腹腔注射 As_2O_3后,鼻咽癌 BALB/C 裸鼠移植瘤生长抑制,瘤组织中癌细胞密度减少,细胞皱缩,胞浆红染,瘤组织分化渐成熟,出现角化细胞和角化珠;间质结缔组织增多。透射电镜下肿瘤细胞出现成熟分化及明显角质化,细胞表面微小突起增多,细胞间桥粒增多并以桥粒互相连接,细胞核浆比例减少,胞浆中出现大量张力原纤维并围绕核周。TUNEL 检查提示凋亡细胞增多;用药后野生型 p53及 bax 高表达,PCNA 低表达,Bcl-2无变化。结论 As_2O_3能诱导人低分化鼻咽裸鼠移植瘤分化和凋亡,可能与 p53及 bax 高表达相关,与 Bcl-2无关。