X染色体连锁基因RSK4在乳腺癌中的表达及进展

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一.肿瘤的发生、发展是多种基因共同作用的结果 .与常染色体上的抑癌基因相比,X染色体连锁的抑癌基因更容易因甲基化或突变等而失活.核糖体S6蛋白激酶4(ribosomal protein S6 kinase 4,RSK4)作为一个X染色体连锁基因,可抑制细胞的生长、增殖和分化.RSK4 过表达可使细胞增殖下降,使停滞在G0～G1期的细胞增加.RSK4可能是乳腺癌的一个与X染色体连锁的抑癌基因.     

RNA干扰RSK4基因表达对裸鼠移植瘤生长与转移影响观察

目的：应用慢病毒干扰载体（RSK4-RNAi—LV）干扰RSK4基因在乳腺癌细胞株MCF-7中的表达,研究RSK4基因被干扰后对裸鼠移植瘤生长及转移的影响。方法：将转染了siRNA（RSK4-RNAi—LV）的MCF-7细胞组（实验组）、转染了siRNA（NC—GFP-LV）的MCF_7细胞组（阴性对照组）和未转染的MCF-7细胞组（空白对照组）分别接种至裸鼠乳腺脂肪垫下,建立裸鼠移植瘤模型,观察每纽裸鼠移植瘤生长情况;应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测3组移植瘤组织中RSK4mRNA及其蛋白的表达;HE染色观察3纽裸鼠内脏转移情况。结果：实验纽的移植瘤平均体积为（2264．08±367．47）mm2,明显大于阴性对照组（843．67±318．13）mm。及空白对照组的（720．45±241．35）mm。差异有统计学意义,F=112．425,P=0．02;实验组瘤体平均体质量为（1．44±0．25）g,明显重于阴性对照组（0．73±0．20）g及空白对照组的（0．70±0．21）g,差异有统计学意义,F=89．54,P=0．01。实验组裸鼠移植瘤肺转移6只,空白对照及阴性对照组各1只。实验组肿瘤组织RSK4mRNA的相对表达量为0．140±0．843,明显低于阴性对照组的1000±0．000（P=0．008）和空白时照组的0．878±0．689（P=0．005）。实验组、阴性对照组和空白对照组RSK4蛋白的表达量分别为0．138±0．023、0．532±0．032和0．465±0．057,3组间差异有统计学意义,F=73．1,P=0．003;实验组RSK4蛋白表达量明显低于阴性对照组（P=0．006）和空白对照组（P=0．012）。结论：慢病毒干扰MCF-7细胞中RSK4基因表达能促进MCF-7细胞裸鼠移植瘤的生长及转移。     

肾透明细胞癌组织中RSK4的表达及临床意义

目的:检测核糖体S6蛋白激酶4（RSK4）在肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,ccRCC）中的表达,探讨其高表达与预后及对肾癌细胞系增殖的影响。方法:采用免疫组织化学EnVision法检测48例ccRCC标本及20例肾盂积水标本中RSK4蛋白的表达,用统计学方法分析RSK4的表达与患者临床病理特征及预后的关系;建立过表达RSK4的肾癌细胞系,检测RSK4过表达对肾癌细胞周期及增殖的影响。结果:48例ccRCC肿瘤组织标本中,RSK4的阳性率为75%（36/48）;在20例肾盂积水患者中,RSK4的阳性率为25%（5/20）,二者具有统计学差异（P＜0.05）;经统计学分析,RSK4的表达与ccRCC患者的年龄、性别之间未见明确相关性（P＞0.05）,但与肾透明细胞癌的WHO/ISUP分级显著相关（P=0.019）;单因素及多因素生存分析发现,RSK4的表达及WHO/ISUP分级与患者预后相关（P＜0.05）;过表达RSK4的肾癌细胞系增殖能力显著增强,对细胞周期也有明显的影响（P＜0.05）。结论:RSK4在ccRCC中的表达显著升高,与预后相关;RSK4过表达对肾癌细胞系的周期、增殖均有显著影响,提示RSK4在肾透明细胞癌中高表达,可能通过促进细胞增殖导致预后不良,而其具体作用机制尚有待进一步研究。     

RSK4与p63在食管鳞状细胞癌中的表达及其与患者临床病理特征的相关性研究

目的:研究核糖体S6蛋白激酶4(RSK4)和p63在食管鳞癌中的表达,探索其与患者临床病理特征的关系,并分析两者在肿瘤组织中表达的相关性。方法:采用免疫组织化学EnV ision法检测RSK4和p63在72例食管鳞癌标本中的表达,并用统计学方法分析两种蛋白表达的相关性及与其中66例住院患者临床病理特征的关系。结果:正常食管鳞状上皮中RSK4与p63主要表达于基底层细胞,而在食管鳞癌中RSK4和p63则表达于大部分肿瘤细胞,其阳性率分别为62.5%和83.8%。RSK4的阳性表达与肿瘤病理分期呈正相关(P<0.05);RSK4与p63的表达在食管鳞癌中呈正相关(r=0.327,P=0.003),且大多在同一肿瘤细胞中共同表达。结论:RSK4与p63在食管鳞癌中存在异常表达,且RSK4与p63之间可能存在相互调控关系,研究RSK与p63表达及其相互关系将有助于探索食管鳞癌的发病机制,为其临床诊断及治疗提供一定理论依据。     

RSK4基因表达及其对U87细胞增殖的影响

背景与目的:RSK4是非生长因子依赖的丝/苏氨酸蛋白激酶,参与多种信号通路。本研究构建了人RSK4基因的真核表达系统,研究其对胶质瘤的调控作用,为阐明RSK4功能奠定基础。方法:采用RT-PCR法从人正常乳腺上皮细胞MCF-10A细胞中扩增获得RSK4基因的编码区,定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)上,构建真核表达载体pcDNA3.1(-)/RSK4。脂质体法介导pcDNA3.1(-)/RSK4质粒转染至U87细胞中,RT-PCR和Western blot检测表达情况。采用MTT法检测RSK4基因对U87细胞生长的影响。结果:转染pcDNA3.1(-)/RSK4组U87细胞增殖明显被抑制(P<0.05)。结论:RSK4可以抑制胶质瘤细胞的增殖。     

RSK4与恶性肿瘤

核糖体S6蛋白激酶4（ribosomal protein S6 kinase 4,RSK4）属于X性连锁基因,与肿瘤细胞的信号通路、增殖及多种恶性肿瘤的发生、发展和预后有关。本文就RSK4与恶性肿瘤关系的研究现状作一综述。     

RSK4与TRAF4在不同乳腺细胞中的表达及分子作用通路研究

目的 研究抑癌基因p90核糖体S6蛋白激酶4（p90 ribosomal protein S6 kinase4,RSK4）相互作用蛋白与肿瘤坏死因子受体相关因子4（tumor necrosis factor receptor associated factor 4 ,TRAF4）在不同乳腺细胞株中的表达,探讨RSK4-TRAF4相互作用蛋白所在分子作用通路对乳腺癌侵袭转移的影响。方法 采用实时荧光定量PCR 法检测 RSK4和TRAF4在 HBL-100正常乳腺细胞株和MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231人乳腺癌细胞株中的表达情况。用蛋白质免疫印迹法（Western-blot）检测RSK4和TRAF4以及MAPK通路下游蛋白ERK1/2在HBL-100、MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231 4种乳腺细胞株中的表达。结果 RSK4 mRNA 、TRAF4 mRNA 在4种细胞中均表达,RSK4 mRNA在HBL-100表达量最高,在MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231 细胞中含量依次降低;TRAF4 mRNA在4种细胞中的表达量由低到高依次为HBL-100、MCF-7、Her-2阳性型、MDA-MB-231 细胞,RSK4 mRNA 、TRAF4 mRNA 在4种细胞中两两比较,差异有统计学意义（P<0.05）。RSK4与TRAF4在4种细胞中蛋白表达水平与mRNA表达水平相一致,具有高度相关性（r_RSK4=0.92,P< 0.01;r_TRAF4=0.82,P< 0.01）;ERK1/2蛋白表达量由高到低依次为MDA-MB-231、Her-2阳性型、MCF-7、HBL-100。在mRNA转录水平,RSK4和TRAF4 表现出负相关（r₁=-0.81,P< 0.01）;在蛋白翻译水平,RSK4和TRAF4 同样呈现出高度负相关（r₂=-0.84,P< 0.01）。结论 RSK4和TRAF4具有较高的负相关性,RSK4与TRAF4相互作用后可能通过MAPKs下游信号通路ERK起分子调控作用。     

全反维甲酸对人肺癌细胞株A549细胞间黏附分子-1表达及体外侵袭力的影响

细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)的表达在肿瘤的诊断、判断病程进展、转移潜能与预后方面有很大的潜在价值,受到众多学者关注.ICAM-1高表达的肿瘤细胞可能更易于脱离瘤体,随淋巴细胞游走而发生转移[1].流行病学、动物实验及临床研究均已证实全反式维甲酸(ATRA)类可用于肺癌的化学预防及治疗[2].我们研究了ATRA对肺癌细胞株A549体外增殖、侵袭力及ICAM-1、sI-CAM-1表达水平的影响,旨在阐明ATRA对肿瘤转移潜能的影响及ICAM-1分子在肿瘤侵袭中的作用,探讨ATRA对肿瘤的化学防治作用的可能机制.     

短发夹RNA沉默S100A4基因对乳腺癌MCF-7细胞体外增殖和迁移力的抑制

目的观察靶向S100A4的shRNA对MCF-7细胞增殖和迁移力的影响。方法构建S100A4基因特异性shRNA表达载体,使用QRT-PCR和Western blot检测转染后MCF-7细胞中S100A4的表达水平,运用MTT法和流式细胞术检测转染后MCF-7细胞增殖水平和凋亡率的变化。将S100A4- shRNA表达载体转染入MCF-7细胞,G418筛选及克隆化培养,并运用划痕实验检测其迁移力的变化。结果经测序鉴定证实成功构建S100A4-shRNA表达载体。转染48h后,所构建的S100A4-shRNA表达载体能够有效抑制MCF-7细胞中S100A4的表达,并且可以显著降低MCF-7细胞增殖水平以及诱导细胞进入晚期凋亡;稳定转染S100A4-shRNA表达载体的MCF-7细胞形态无显著变化,但是迁移力明显下降。结论S100A4-shRNA表达载体能有效地抑制乳腺癌MCF-7细胞中S100A4的表达,从而降低细胞增殖水平和迁移力。     

槲皮素对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S增殖及侵袭力的影响

 目的 探讨槲皮素对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S 增殖及侵袭能力的影响。 方法 人乳腺癌细胞MDA-MB-435S以12.5、25、50、100、200μM 终浓度的槲皮素处理后,台盼蓝拒染法检测细胞的增殖状况、流式细胞术法检测细胞的凋亡率、Boyden小室法检测细胞的侵袭能力。 结果 人乳腺癌细胞MDA-M-435S经槲皮素处理后,其体外增殖及侵袭能力明显下降的同时凋亡率明显上升,且与药物的剂量呈正相关,当槲皮素终浓度达到200μM时,MDA-MB-435S细胞的生长及侵袭能力几乎完全受到抑制。 结论 槲皮素在体外剂量依赖性的抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-435S的增殖及侵袭能力并能诱导其凋亡,为槲皮素用于乳腺癌的预防和治疗提供了部分依据。     

抑癌基因PTEN在乳腺癌组织中的表达

目的 探讨10号染色体有缺失且与tensin同源的磷酸酯酶基因（PTEN）在乳腺癌组织中的表达及其意义。方法 采用免疫组织化学S－P法，检测71例乳腺癌组织中PTEN蛋白的表达水平。结果 正常乳腺组织中PTEN呈高表达；有腋淋巴结转移的乳腺癌组织中PTEN高表达率为37．8％，明显低于无腋淋巴结转移者（P＜0．05）；ER阳性者PTEN高表达率明显低于ER阴性者（P＜0．05）；出现远处转移的乳腺癌组织其PTEN高表达率也显著降低（P＜0．01）。PTEN表达水平与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级及临床分期无关，但随组织学分级和临床分期的增高，PTEN高表达率呈下降趋势。结论 PTEN表达异常与乳腺癌发生发展密切相关，PTEN低表达的乳腺癌恶性程度高、转移潜能大。     

肿瘤抗原MAGE-A4在乳腺癌组织和细胞系中的表达及其作用

目的检测正常乳腺组织及乳腺癌组织中MAGE-A4 (melanoma antigen-A4) mRNA的表达,探讨其与乳腺癌临床参数、生物学行为的关系以及对乳腺癌细胞增殖的影响。方法用RT-PCR方法检测77例正常乳腺组织及乳腺癌组织中MAGE-A4 mRNA的表达状况,用χ2检验分析其表达与乳腺癌临床参数及生物学行为的关系;用集落形成实验研究MAGE-A4对乳腺癌细胞增殖的影响。结果77例正常乳腺组织中没有检测到MAGE-A4 mRNA的表达;77例乳腺癌组织有33例MAGE-A4 mRNA阳性表达,阳性率为42.9%。60（含60岁）岁以上乳腺癌患者MAGE-A4 mRNA阳性表达率明显高于60岁以下患者(P<0.05);但MAGE-A4 mRNA表达与乳腺肿瘤的大小、临床分期、病理类型、组织学分级、淋巴结转移、有无瘤栓、ER/PR及HER-2状态之间无明显相关性 (P>0.05)。乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231均不表达MAGE-A4 mRNA,而乳腺癌细胞系MDA-MB-436中MAGE-A4 mRNA呈高表达。转染MAGE-A4基因可以抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞克隆的形成(P<0.05)。结论MAGE-A4在正常乳腺组织不表达,在乳腺癌组织中表达率为42.9%,提示MAGE-A4是一种肿瘤特异性抗原。该基因的表达与乳腺癌患者的年龄有关,与其他临床参数及生物学行为无明显相关性。在MAGE-A4阴性表达的乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中转染MAGE-A4基因可抑制该细胞的克隆形成。     

凋亡抑制基因AVEN mRNA在乳腺癌中的表达差异

  目的  探讨乳腺癌患者肿瘤组织中凋亡抑制基因AVEN mRNA的表达情况, 分析其在临床诊治中的意义。  方法  采用SYBR?Green实时荧光定量PCR方法, 检测在89例乳腺癌患者癌组织和癌旁组织中的AVEN mRNA表达。AVEN mRNA的表达与临床病理学和危险因素的关系采用t检验和单因素方差分析。  结果  AVEN mRNA的表达在服用避孕药的患者中明显低于未服用避孕药的乳腺癌患者(P=0.02), 而与肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期、ER、PR等临床特征无关(P > 0.05), 与患者的年龄、BMI指数、怀孕次数、是否绝经、月经初潮年龄、是否母乳喂养、累积行经年数、初产前行经年数等危险因素亦无关(P > 0.05)。  结论  口服避孕药与乳腺癌患者肿瘤AVEN mRNA的表达呈负相关。      

应用自制组织芯片研究抑癌基因PTEN 在口腔鳞癌中的表达

 目的 从蛋白水平探讨口腔鳞癌组织中肿瘤抑制基因PTEN的表达及临床病理意义。方法 应用SP免疫组化染色法和组织芯片技术，检测10例正常口腔粘膜、10例口腔上皮单纯增生、15例口腔粘膜白斑及72例OSCC（其中高分化30例、中分化26例、低分化16例）组织中PTEN蛋白的表达，同时分析PTEN的表达与患者临床病理资料的关系。结果 PTEN基因在口腔鳞癌、口腔粘膜白斑、口腔上皮单纯增生和正常口腔粘膜组织中的阳性率分别为72．2％（52／72）、93．3％（14／15）、100％（10／10）和100％（10／10），口腔鳞癌组与其他各组间有显著性差异（P〈0．05）；PTEN的阳性表达率在不同性别、年龄和TNM分期等临床病理参数间无显著性差异（P〉0．05），但与淋巴结转移、组织分化程度等临床病理参数间有显著性差异（P〈0．05）。结论 PTEN基因表达的下调在OSCC的发生、发展中起着重要作用，其表达的异常可作为判断预后的参考指标之一。     

Spectrum of p53 Tumor Suppressor Gene Mutations and Breast Cancer Survival

CONTEXT. p53 mutation is associated with poor prognosis in breast cancer patients. Mutations in different structural and functional domains of p53 have different effects on its biological activities. Nevertheless, few studies have examined the full spectrum of p53 gene mutations in relation to breast cancer survival. OBJECTIVE. To evaluate the prognostic significance of the types, localizations, and multiplicity of p53 gene mutations in breast cancer patients. DESIGN, SETTING, AND PARTICIPANTS. Prospective cohort study of a consecutive series of 271 women with histologically confirmed primary breast cancer who underwent breast resection at the Jackson Memorial Hospital, Miami, FL, between 1984 and 1986.Main outcome measures. Ten year overall and breast-cancer-specific deaths. RESULTS. After adjustment for tumor stage, treatment regimen, and the number of mutations, patients with p53 mutations had significantly greater breast-cancer-specific mortality than did patients without p53 mutations (hazard ratio = 2.86; 95% confidence interval: 1.15-7.11). Further analysis of mutation characteristics showed that patients with the following mutations had significantly poorer breast cancer disease-free survival: silent/missense mixed mutations (7.95; 1.28-49.62), nonsense mutations (9.43; 1.29-69.12), transitions (3.79; 1.46-9.88), mutations in which guanine changed (3.32; 1.01-10.35), and mutations on exon 7 (6.46; 1.78-23.45). CONCLUSIONS. Breast-cancer-specific and all-cause mortality are increased in female breast cancer patients with the following p53 mutation characteristics: silent and missense mixed mutations, transitional mutations, mutations in which guanine changed, mutations on exon 7, or multiple mutations occurring within 60 codons. These findings indicate that not just p53 mutation per se but the full spectrum (i.e., different types, locations, and numbers) of p53 mutation needs to be examined when it is used as a prognostic marker of survival in breast cancer patients.     

RUNX3基因在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中的表达及意义

[目的]探讨乳腺癌组织和细胞系中RUNX3基因mRNA与蛋白表达及在乳腺癌发生中的作用。[方法]运用RT-PCR、WesternBlot方法研究5种乳腺癌细胞系、1种正常乳腺细胞系和30对新鲜乳腺癌及癌旁对照组织中RUNX3mRNA和蛋白表达。[结果]5种乳腺癌细胞系中有3种(T47D、MCF7和SKBR3)RUNX3mRNA和蛋白表达阴性。30例新鲜的乳腺癌组织中RUNX3mRNA和蛋白表达明显低于癌旁正常对照组织,差异具有统计学意义。RUNX3蛋白表达与乳腺癌临床分期、淋巴结转移相关,而与患者的年龄、病理分级无关。[结论]RUNX3基因可能作为一个抑癌基因参与乳腺癌的发生。     

食管和贲门癌组织中肿瘤抑制基因maspin的表达

 采用免疫组织化学（ABC）法检测食管癌高发区55例食管和贲门癌组织中肿瘤抑制基因maspin的表达。结果表明,食管癌组织中maspin免疫阳性表达率为10%（3/30）,免疫阳性反应主要位于癌组织的细胞浆中;贲门癌组织中maspin免疫阳性表达率为24%（6/25）,免疫阳性反应主要位于癌组织的细胞核中。提示：肿瘤抑制基因maspin可能在食管和贲门癌变过程中起一定的作用。     

人肺癌细胞株化疗敏感性与基因表达的关系

目的探讨人肺癌细胞株对化疗药物的敏感性与多药耐药相关基因和凋亡调控基因表达的关系。方法采用MTT法检测5株肺癌细胞SPCA1、NCI-H446、SH-77、95C和95D对阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)、丝裂霉素(MMC)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、卡氮芥(BCNU)的敏感性。流式细胞术检测多药耐药基因P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽-S-转移酶-π(GST-π)、肺耐药蛋白(LRP)、多药耐药相关蛋白(MRP)和甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)等耐药相关基因和Fas、bcl-2、p53和p16等凋亡调控基因的表达。结果不同肺癌细胞株对同一药物敏感性有较大差异。相关分析显示,肺癌细胞株对MMC的敏感性与GST-π和bcl-2的表达呈负相关,P值分别为0.040和0.030,GST-π和bcl-2的表达水平较高者,MMC的IC50较高,敏感性较低;对DDP的敏感性与p53蛋白表达水平呈负相关(P=0.036);对其余药物的敏感性与所检基因的表达水平无关(P>0.05)。结论人肺癌细胞株对不同化疗药物敏感与否有不同的机制,对MMC的敏感性与GST-π和bcl-2的表达有关,对DDP的敏感性与p53的表达有关。     

抑癌基因P~(53)在肺癌中表达的意义

应用免疫组织化学技术—ＳＰ法，检测了１０６例原发性肺癌组织中Ｐ５３蛋白的异常表达，阳性表达率为５２．８％，其中鳞癌Ｐ５３蛋白阳性表达率为５２．８％，腺癌为４７．１％，未分化癌为６３．２％，其与组织学分型、分级及临床ＰＴＮＭ分期无关。Ｐ５３蛋白表达与肺腺癌有无肺门或纵隔淋巴结转移呈显著正相关（Ｐ＜０．０１），而在肺鳞癌和未分化癌中则未见．Ｐ５３蛋白表达与肺门或纵隔淋巴结转移间有相关性（Ｐ＞０．０５）。提示Ｐ５３抑癌基因突变在不同类型肺癌的演变过程中可能发挥不同的作用。