荧光原位杂交在产前诊断Down′s综合征中的应用

目的探讨应用13/21α卫星探针荧光原位杂交(FISH)技术行产前诊断Down′s综合征(21-三体综合征)的价值。方法选择5例经细胞遗传学检查证实为孕正常胎儿孕妇的羊水细胞(对照组),5例经细胞遗传学检查证实为孕Down′s综合征胎儿孕妇的羊水细胞(观察组),用13/21α卫星探针对羊水细胞间期核进行荧光原位杂交。结果对照组和观察组总杂交率分别为34.6%和35.3%,无显著性差异(P>0.05)。两组含4个杂交信号的核平均百分比分别为30.1%和2.4%,含5个杂交信号的核平均百分比分别为2.2%和31.4%,有极显著性差异(P<0.01),。结论13/21α卫星探针间期FISH用于未培养的羊水细胞可以快速、准确地用于产前诊断Down综合征。     

PCR法制备的人染色体13/21α卫星探针在产前诊断中的应用研究

目的评估PCR法制备的人21/13α卫星探针进行荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)的特异性及敏感性,并探讨和建立该探针的临床诊断价值和产前诊断方法。方法利用PCR方法制备的人21/13α卫星探针与中期淋巴细胞染色体杂交以确定其杂交位点特异性及敏感性;并将探针与50例妊娠16～26周抽取的未培养的羊水细胞进行FISH,同时进行常规细胞培养及染色体核型分析以检测该探针进行产前诊断的特异性和敏感性。结果探针与中期淋巴细胞染色体的FISH结果显示,杂交点位于21/13号染色体的着丝粒,正常组和唐氏组细胞21号和13号染色体的平均检出率为96%;探针与羊水细胞FISH结果显示,其检出率为85.6%,准确率100%。结论制备的人21/13α着丝粒特异DNA探针能简便、快速、准确的检测羊水细胞间期核中21号或13号染色体的数目的异常,该探针可用于Downs综合征与Patau综合征的诊断。     

61例21三体综合征细胞遗传学分型与间期FISH分析

目的：探讨13／21α卫星探针细胞间期FISH分析在不同类型的21碱体征表达特点及相互关系。方法：采用核型分析后,对3种不同类型的21三体进行间期FISH。结果：按照核内含5个荧光杂交信号的细胞比例大于81.5%定为21三体诊断标准,标准型均可确诊,易位型诊断率为50％,嵌合型只要三体细胞系的比例大于50％也可确诊。结论：13／21α卫星探针间期FISH诊断21三体与染色体核型分析基本一致。     

应用羊水细胞间期荧光原位杂交技术诊断胎儿Down综合征

目的 建立以未培养的羊水间期细胞直接制片进行荧光原位杂交(FISH)的简便方法并应用于Down综合征产前诊断。方法 Down综合征患者外周血染色体标本,以及10例产前诊断的孕妇,在妊娠16～20周行羊膜腔穿刺术,羊水细胞制片并以胃蛋白酶进行简单处理后,用位于染色体21q22.3区域的人类基因组BAC克隆探针进行荧光原位杂交。结果 全部杂交成功,信号强,背景低。讨论 该技术简便、稳定、易掌握,适用于检测胎儿Down综合征的快速产前诊断。     

两种快速诊断21三体综合征的方法

目的利用间期FISH技术和PCR相关技术,探讨它们在快速诊断 21三体综合征中的应用;方法一是对观察组患者外周血淋巴细胞进行间期FISH 检测,观察细胞核内杂交信号数目;二是对观察组21号染色体上的两个短串联重复多态性位点(D21S 1446和D21S1435),进行PCR扩增,观察聚丙烯酰胺凝胶电泳中特异性扩增条带数目和密度 .结果观察组患者外周血淋巴细胞核中杂交信号数目比重和其两个多态性位点扩增后条带数目与密度与对照组相比均有显著性差异;结论利用间期FISH技术和短串联重复标志多态性可以快速简便准确诊断21三体综合征.     

荧光原位杂交技术研究在染色体异常中的应用

目的建立稳定的荧光原位杂交技术并用于染色体异常的研究.方法用地高辛标记的PY3.4探针、X-α着丝粒探针、生物素标记的特异区域单拷贝序列21q22.3探针对3例正常男性、3例正常女性及2例turner综合征、2例21三体综合征标本进行了原位杂交.结果间期细胞和分裂相中可见特异的荧光点.结论 FISH技术不仅可用于中期分裂相,还可在间期细胞显示杂交信号,是当今的一项分子细胞遗传学先进技术.     

口腔脱落细胞结合荧光原位杂交方法诊断Pallister-Killian综合征一例

目的 通过1例 Pallister-Killian综合征(Pallister-Killian syndrome,PKS)的临床报道,介绍利用口腔脱落细胞结合荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术对PKS进行无创性快速临床诊断的方法.方法 用棉签拭子取患者两侧颊黏膜口腔脱落细胞,用Abbott/Vysis LSI TEL(12p13)/ AML1(21q22)以及CEP 12荧光探针进行荧光原位杂交检测.结果 患者双侧颊黏膜LSI TEL/AML1探针杂交区93%～95%(186/200～190/200)细胞核可见4个绿色荧光信号;CEP12探针杂交区93%～95.5%的细胞核(186/200～191/200)可见3个绿色荧光信号.结论 在接到标本15 h内准确得到FISH检测结果,显示为嵌合型12号短臂等臂染色体.确诊该患儿为 Pallister-Killian综合征.用FISH方法对口腔脱落细胞进行检测,为该类疾病进行准确、快速、无创性诊断提供了新的检测途径.     

用荧光原位杂交技术产前诊断唐氏综合征

目的 用荧光原位杂交技术（Fluorescence in situ hybridization,FISH)快速产前诊断唐氏综合征。方法 采集23名孕妇14～24周的羊水标本，应用荧光标记的针对21号染色体特殊位点的探针（locus-sperifie probe,LSI）及X/Y染色体着丝粒探针（centromeric probe,CEP）对未培养的羊水间期细胞进行FISH；同步进行羊水细胞培养，行常规细胞遗传学染色体核型分析，以核型分析为标准，对FISH技术进行评价。结果 23份标本发生母血污染2例，培养失败1例，将其余20份羊水标本的FISH杂交结果与其染色体核型分析结果进行了比较。FISH分析羊水间期细胞性染色体数目正常者19例（XX11例，XY8例）与羊水中期细胞染色体核型分析结果一致，有1例羊水间期细胞FISH结果为X/XY，染色体核型分析结果为46，XY，因此，FISH与染色体核型分析结果的符合率为95%（19/20）；LSI21探针的FISH结果中21号染色体数目异常者1例，核型分析为典型的21三体，取脐血行G显带染色体核型分析得以验证为47，XY， 21。产前诊断染色体正常者追踪至分娩，新生儿行外周血染色体检查结果皆为正常核型。结论 荧光原位杂交技术可用于羊水间期细胞快速产前诊断唐氏综合征。     

应用荧光原位杂交技术对精子染色体非整倍性的研究

目的探讨人类精子染色体数目异常与自然流产的相关性. 方法采用多色荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)方法,利用CEP(chromesome enumeration DNA probes)X、Y、18及LSI(locus specific identifier DNA probes)13、21两种探针混合液与二硫苏糖醇处理过的自然流产者丈夫的精子核杂交,记数杂交信号,与对照组进行比较.结果经卡方检验,自然流产组丈夫精子染色体X、Y、18、13、21双体型及其它数目异常明显高于正常对照组(P<0.005),说明流产者丈夫精子染色体异常是流产的重要原因之一.结论 FISH技术是一种快速、准确、简单、实用性强的检测精子染色体的好方法.     

唐氏综合征快速PRINS基因诊断方法的研究

目的为建立唐氏综合征快速PRINS基因诊断方法.方法采用21号染色体α-卫星序列,并合成18bp的引物,在外周血淋巴细胞间期核中进行21号染色体的快速诊断.结果 6例正常对照组外周血分裂间期淋巴细胞中显示两个明显的标记信号,10例典型21三体型唐氏综合征患者分裂间期淋巴细胞中均显示三个明显的标记信号.结论采用PRINS技术进行唐氏综合征的快速基因诊断是可行的.     

荧光原位杂交技术用于羊水直接制片的研究

目的 为杜绝畸形儿出生。方法 应用简单重复序列DNA特异性探针，借助于荧光原位杂交技术，对3例孕妇行羊水穿刺，抽取10ml羊水直接制片，用FITC-AVIDIN检测，计数进行荧光原位杂交。分别做了21号，X，Y3种探针。同时作对照，以探讨孕早期产前诊断的新方法。结果 1例羊水间期细胞核中可见1个黄绿色X杂交信号，未见Y杂交信号，证明45，X，1例羊水间期细胞核中可见Y杂交信号。1例可见X，X杂交信号，3例均未见21号杂交信号。结论 FISH用于产前诊断，羊水直接制片方法快捷，准确。     

间期FISH分析中细胞类型及探针的选择

荧光原位杂交已成为医学遗传学领域中一项极为重要的研究手段。为了摸索不同来源的产前诊断材料的间期核进行荧光原位杂交的可行性，选择了α重复序列ＤＮＡ及ＣｏｓｍｉｄＤＮＡ为探针，分别与未培养的绒毛间质细胞、羊水细胞及外周血白细胞的间期核杂交。结果表明：各种材料的间期核均见杂交信号，１３／２１α重复序列探针用于未培养的绒毛间质细胞及外周血白细胞的杂交信号最为特异，能有效的检出染色体非整倍体，羊水细胞则远不如绒毛细胞，绒毛组织是最理想的产前诊断材料。     

应用荧光原位杂交技术对染色体病进行诊断

本文应用生物素标记的X -α着丝粒探针、特异区域单拷贝序列探针 2 1q2 2 .3;地高辛标记的重复序列探针pY3.4分别对 7例性腺发育不全、5例唐氏综合症患者外周血染色体及间期细胞核进行单色及双色荧光原位杂交 (FISH)。用染色体成像系统摄影并后期处理 ,显示的异常核型有 :45 ,XX/4 7,XXX ;45 ,XO/4 6 ,Xi(Xq) ;45 ,XO/4 6 ,XX ;47,XX 2 1;47,XY 2 1;47,XXY。中期分裂相FISH杂交结果与染色体G显带核型分析一致 ,间期细胞中荧光信号的数目与预期一致。     

荧光原位杂交技术产前诊断唐氏综合征

目的应用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术,简便、快速、准确产前诊断唐氏综合征.方法采用染色体特殊位点的特异性探针(LSI21)对30例羊水细胞和6例绒毛细胞标本进行未培养间期细胞荧光原位杂交.结果检测出21三体儿1例, 21三体和二倍体的嵌合体1例.检测结果与染色体核型分析及随访相符.结论 FISH技术应用于未培养间期细胞产前诊断唐氏综合征,可使诊断时间提早到孕50～70d,并且具有简便、快速、准确、灵敏度高、特异性强的独特优势.     

应用荧光原位杂交技术对精子染色体非整倍体的研究

目的 探讨人类精子染色体数目异常与自然流产的相关性。方法 采用多色荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH)方法，利用CEP（chromesome enumeration DNA probes)X、Y、18及LSI（locus specific identifier DNA probes)13、21两种探针混合液与二硫苏糖醇处理过的自然流产者丈夫的精子核杂交，记数杂交信号，与对照组进行比较。结果 经卡方检验，自然流产组丈夫精子染色体X、Y、18、13、21双体型及其它数目异常明显高于正常对照组（P＜0．005），说明流产者丈夫精子染色体异常是流产的重要原因之一。结论 FISH技术是一种快速、准确、简单、实用性强的检测精子染色体的好方法。     

荧光原位杂交技术在骨髓增生异常综合征患者5号和7号染色体异常检测中的应用

目的评价荧光原位杂交（FISH）术在骨髓增生异常综合征（MDS）患者5号和7号染色体异常检测中的应用。方法 40例MDS患者,采用间期FISH,选取4种探针组合检测-5/5q-和-7/7q-。结果利用FISH技术,5号、7号染色体异常检出率分别为15.0%、20.0%。结论 FISH技术可以用于骨髓增生异常综合征（MDS）患者5号和7号染色体异常的检测,采用组合探针的FISH更为敏感和特异。     

引物原位标记技术在Down′s综合征产前诊断中的意义

Down’s综合征,又称先天愚型或21三体综合征,由英国医生Langdon Down首先描述,该综合征主要以精神发育迟滞和智力低下为突出临床表现,并伴有某些组织器官畸形等。患者平均寿命仅有16.2岁,50%的患儿在5岁以前即已死亡。Down′s综合征在新生儿的发病率为1/700[1],且男性多于女性,     

荧光原位杂交技术在产前诊断中的应用价值探讨

目的探讨荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)在羊水产前诊断中的应用价值。方法 2644例符合羊水产前诊断指征的孕妇在抽羊水行染色体检查的同时,用常见非整倍体探针对未培养的羊水间期细胞行FISH检查,其中1661例唐氏高风险孕妇采用LSI 21(红色)、71例18三体高风险孕妇采用CEP 18(天蓝色)、912例高龄或超声异常征象及其它早孕用药、不良孕史等因素孕妇采用LSI 21(红色)/LSI 13(绿色)/CEP 18(天蓝色)/CEP X(绿色)/CEP Y(红色)探针,对2644例羊水核型分析和FISH结果进行比较。结果 FISH检出染色体数目异常102例,检出率3.9%(102/2644),核型分析发现异常病例124例,检出率4.7%(124/2644),两者比较无显著差异(P0.05)。124例异常核型中99例为染色体数目异常,占异常核型的79.8%(99/124),FISH全部检出,其中97例两种方法结果完全一致,两例结果不符(一例FISH:18三体,核型分析:三倍体;另一例FISH:13、18、21、X三体,核型分析:三倍体)。124例异常核型中22例染色体结构异常,占异常核型的17.7%(22/124),分别为:罗氏易位5例,相互易位8例,倒位4例,X长臂等臂1例,1号染色体部分重复1例,标记染色体1例,20号染色体长臂双着丝粒1例,9号染色体含不明来源物1例,FISH未能检出,假阴性率0.8%(22/2644)。124例异常核型中3例存在染色体结构和数目双重变化,为罗氏不平衡易位,FISH检出其数目异常。结论 FISH在羊水产前诊断中对于常见非整倍体具有快速、准确的特点,但需严格掌握指征。     

FISH在产前诊断及遗传咨询中的应用

荧光原位杂交(FISH)是近年发展起来的一种分子生物学、细胞遗传学及免疫学技术相结合的全新技术,在基础生物学领域和临床研究中得到广泛应用。FISH是一种非放射原性杂交法,它利用特殊的荧光素标记DNA探针,在染色体制片、细胞滴片或组织切片上进行DNA杂交,经免疫荧光显色,可以检测细胞内DNA或RNA存在与否,既可以显示染色体中期分裂相,又能显示未培养的间期核[1]。可用于性别鉴定、染色体非整倍体诊断、染色体结构异常诊断、基因定位、间期细胞遗传学及肿瘤遗传学方面的研究。一、FISH在产前诊断中的应用1.用于绒毛样本(CVS)的染色体分析绒毛细胞是胚胎外胚层细胞,其遗传信息与胎儿相同。因为绒毛膜绒毛取材获取的绒毛量相对较少,有时不能得到足够可够分析的染色体中期分裂相,给诊断带来困难,故同时应用FISH进行分析以提供更多的遗传信息,可及早做出诊断。孕早期的早检查、早诊断,可及时发现胎儿染色体异常,使孕妇在早期终止妊娠。当孕早期对绒毛检测无结果时,还可进一步于孕中期羊水细胞检测。Toth[2]等人为研究FISH技术用于诊断Down综合征,取331份标本,至少分析了50个细胞,无1例假阳性与假阴性。间期细胞FISH所分析...     

应用荧光原位杂交技术诊断未培养羊水细胞染色体异常

目的建立运用荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测未培养羊水细胞染色体异常的方法。方法对24例未培养羊水细胞进行FISH检测,其中用21号染色体荧光探针检测19例,X/Y染色体探针检测3例,13、18号染色体探针各检测1例。结果24例产前诊断者未培养羊水细胞检测出一例21三体。X/Y染色体探针检测时1例为2个绿色的X信号,2例均为1个红色Y信号和1个绿色X信号。检测结果与培养后羊水细胞检测结果一致,并与外周血染色体核型检测结果相符。结论本研究方法快速、简便、准确可靠,适于临床运用推广。