上海市浦东地区淋病奈瑟菌分型与耐药性的相关分析

目的了解上海市浦东地区淋病病原体奈瑟双球菌的不同基因分型及各基因型与耐药性之间的对应关系。方法运用随机扩增多态性DNA(RAPD)指纹图谱对78株分离自不同患者淋球菌菌株进行区分，从分子水平对淋球菌进行基因分型，并在此基础上探讨不同的基因分型与耐药性之间的关系。结果78株淋球菌分离株RAPD图谱上相似，但各菌株基因图谱之间有明显不同DNA多态性，可将菌株区分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三种基因分型，对此三种基因分型与A、B、C、D四种不同的耐药类型进行对应分析，发现耐药类型与基因型别之间存在对应关系。结论通过研究发现浦东地区淋球菌流行株有着不同的耐药特点及基因型别，耐药性与不同的基因分型之间存在着一定相关性。     

白色假丝酵母菌的随机扩增多态性DNA分型研究

目的建立医院感染白色假丝酵母菌的基因多态性DNA分型方法,了解白色假丝酵母菌医院感染的分子流行病学情况,并探讨其基因多态性与真菌药物敏感性检测结果的可能关系。方法收集临床各病区送检的住院患者白色假丝酵母菌感染标本30份和其相应患者资料、抗真菌药物敏感性检测结果,采用经优化的随机扩增多态性(RAPD)DNA方法,对30株白假丝酵母菌进行基因多态性分型,利用Phylip3.67聚类分析软件分别用邻接法和算术平均数的非加权成组配对法,对RAPD扩增条带结果进行聚类分析。结果随机引物OPE-03进行RAPD扩增的指纹图谱清晰,带型稳定,多态性丰富,可以作为分型引物;30株不同来源的菌株可大致分为3种亲缘关系;两种聚类分析结果相同,提示该实验结果可靠。结论白色假丝酵母菌基因多态性分布可能与菌株的来源有关;RAPD多态性可能与其耐药性有关;不同聚类分析方法的RAPD图谱分析结果相同。     

阴沟肠杆菌随机扩增多态性DNA法基因分型

目的建立阴沟肠杆菌(ECL)随机扩增多态性DNA(RAPD)法基因分型图谱.方法以优化的随机引物和反应体系对临床分离的159株ECL进行RAPD法基因分型,并按DNA条带数及片段大小绘制指纹图谱.结果 159株临床分离ECL共得121种RAPD指纹图谱.结论 RAPD技术可将临床分离ECL分型121种.     

重庆市老年中心铜绿假单胞菌流行病学分型研究

目的对重庆市老年中心引起医院感染的铜绿假单胞菌(PAE)进行流行病学分型研究,了解其流行与耐药,以便更好地控制其引起的医院感染.方法采用随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型方法对重庆市老年中心分离的24株PAE进行RAPD基因分型.结果24株PAE共得RAPD 14型,分型率100%;同一病区不同患者分离出的PAE未检出相同基因型的PAE,3个不同病区间未检出相同RAPD型别的PAE;7例感染个体连续收集的PAE有5例RAPD指纹图谱完全一致,2例出现跳跃性指纹图谱,且与其他分型指纹图谱不相同.结论RAPD能满足对PAE进行分子流行病学分型;通过分型可判断内原性、外源性或突变PAE引起的感染.     

肺炎克雷伯菌随机DNA多态性分型研究

目的 建立肺炎克雷伯菌随机扩增DNA多态性分型技术,以应用于临床菌株流行病学调查。方法 对临床分离的29株肺炎克雷柏菌进行Etest检测,并用酚氯仿法提取其DNA后行RAPD分型。结果 29株临床分离菌有7株ESBL阳性,24株有稳定的RAPD带型,其中ICU分离的5株ESBL阳性株的4株RAPD指纹图谱相同。结论 RAPD基因分型技术不需已知核酸序列,分型率高,分辨力强,简便快捷可为肺炎克雷伯菌株提供分型标志,是分子流行病学研究的有效方法。     

随机引物扩增技术对变形菌DNA多态性分型研究

目的建立变形菌随机扩增DNA多态性分型技术,应用于临床菌株流行病学调查. 方法优化随机扩增DNA多态性指纹技术(RAPD)的实验条件,利用RAPD技术成功地检测21株变形菌DNA指纹图谱. 结果 21株变形菌分为18型别,其中16株奇异变形菌分为13个型,5株普通变形菌分为5个型. 结论 RAPD分型技术可简便、快速为变形菌提供分型标志,是分子流行病学研究的有效方法.     

RAPD技术在唐山市结核分枝杆菌指纹分型研究中的应用

[目的]RAPD DNA指纹分型方法的建立及其在分枝杆菌基因分型中的应用。[方法]收集结核病患者痰标本,分离培养获得分枝杆菌,进行表型鉴定及耐药性检测;提取基因组DNA,在建立RAPD DNA指纹分型方法的基础上对分枝杆菌进行DNA指纹图谱分析。[结果]RAPD指纹图谱分析将102株分枝杆菌分为7种菌型,其中Ⅰ型35株（34.31%）,Ⅱ型28株（27.45%）,Ⅲ型24株（23.53%）,Ⅳ型6株（5.88%）,Ⅴ型3株（2.94%）,Ⅵ型4株（3.92%）,Ⅶ型2株（1.97%）,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型是主要的3种类型。RAPD扩增特征条带大小为201～1 018 bp。分组统计显示,3种主要的RAPD DNA指纹的分布与患者的居住地、职业、结核菌耐药性有关,而与患者的性别、年龄、结核接触史等无关。[结论]RAPD DNA指纹分型方法是一种简单、快速的分枝杆菌的分型方法;3种主要类型的结核分枝杆菌在唐山地区流行。     

吸毒人群口腔念珠菌的DNA多态性及其与耐药性的分析

目的 了解吸毒人群口腔念珠菌的DNA多态性以及与耐药性的关系.方法 选择4种随机引物对75株吸毒人群口腔念珠菌进行DNA多态性分析,并优化试验条件,用聚类分析方法对其进行基因分型.结果 筛选出两条随机引物进行RAPD,念珠菌基因组DNA在100～200 ng/μL,引物浓度在5～10 μmoL/L时,得到的PCR指纹图最丰富和清楚.聚类分析显示,吸毒人群口腔念珠菌同种不同株间存在着基因多态性,不同种间具有一定的基因型特点,某些耐唑类和耐5-氟胞嘧啶药物菌株单独聚为特殊的基因型.结论 RAPD基因分型可作为念珠菌种间鉴定的参考方法.吸毒人群口腔念珠菌中某些菌株的耐药性与其DNA多态性有一定关系,某些特殊PCR指纹图可能与耐唑类药物基因和5-FC基因有一定关系.     

嗜麦芽窄食单胞菌随机扩增多态性DNA基因分型及同源性分析

目的采用一种快速,准确的基因分型方法,针对嗜麦芽窄食单胞菌导致的医院内感染进行流行病学调查,为预防院内交叉感染提供理论依据。方法收集南京市某医院住院患者痰液样本,并分离嗜麦芽窄食单胞菌,采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术获得指纹图谱,并利用SAS9.2软件对其进行聚类分析。结果 39株嗜麦芽窄食单胞菌菌株根据其DNA条带聚类分析,可分为A、B、C、D、E、F和G 7个型,A、B、D、E均有2个亚型,其中A型为优势型别。同源性分析结果表明在神经内科与呼吸内科,ICU与呼吸内科分别有同一克隆株的传播,科室之间可能存在交叉感染。结论 RAPD是一种简单快速,低成本的基因分型方法,适合临床病原菌的分型及医院感染分子流行病学研究。     

潮汕地区幽门螺杆菌DNA指纹图谱46例分析

目的通过检测潮汕地区消化性溃疡及胃炎患者幽门螺杆菌的感染情况,对病人胃内分离的Hp进行DNA指纹图谱分析,探讨本地区Hp基因型与疾病的相互关系。方法收集我院消化内科内镜检查显示胃黏膜尿素酶试验阳性患者46例(消化性溃疡30例,单纯性胃炎16例),取胃窦黏膜组织进行Hp培养、总DNA的提纯和纯化、随机扩增多态性DNA指纹法(RAPD)分析,采用聚类分析作基因分型,同时采用免疫印迹法测定血清空泡毒素VacA抗体。结果46例临床分离菌株指纹各不相同,分为3个基因型别(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型),Ⅰ型以胃炎多见,Ⅲ型以溃疡多见,有显著性差异(p<0·05);血清VacA抗体阳性率在各疾病组和基因型组间无显著性差别(p>0·05)。结论提示不同基因型别的Hp与不同的疾病类别有关,RAPD是有效的基因分型方法。     

2007-2010年岳阳市淋病流行病学分析及溯源研究

目的了解岳阳市淋病流行趋势,并追踪岳阳市淋病的传染源和优势菌株,为有效控制淋病提供科学依据。方法对全市2007-2010年疫情资料进行统计学分析,通过随机扩增多态性DNA技术（RAPD）对收集的83株淋球菌进行分子分型。结果 2007-2010年岳阳市共报告淋病492例,年平均发病率为2.44/10万,男性淋病发病率均高于女性。淋病病例主要集中在20~50岁的青壮年;职业构成以农民为主。83株淋球菌均产生了较多条带,经聚类分析,可分为8型,以A、B型为主;有3株淋球菌与其他菌株同源性低,各自单独组成RAPD型。结论岳阳市淋病的传染源主要有2个,同时,可能存在淋病的外源输入。应进一步加强对淋病的监测,并采取有针对性的措施,以有效控制淋病。     

不同地区草原革蜱基因组DNA多态性研究

目的研究我国不同地区草原革蜱是否有种型差异。方法从新疆阿尔泰、甘肃省武威、平凉地区采集草原革蜱标本，并分别提取它们的DNA，选取9条随机排列碱基序列片段，利用随机扩增多态DNA技术(Random Amplifted Polymorphic DNA，RAPD)，确定聚合酶链反应(PCR)总体积、反应条件。将扩增产物制备成DNA图谱，比较不同地区草原革蜱基因组DNA的多态性，从分子水平对不同地区草原革蜱进行差异分析。结果3个地区的草原革蜱部分DNA条带相同，但也有完全不同的DNA条带。结论3个地区的草原革蜱DNA存在差异。     

沙门菌REP-PCR分子分型技术的优化及其在耐药菌株中的应用

目的优化沙门菌REP-PCR分子分型技术,并在沙门菌耐药菌株分型研究中应用,为构建沙门菌同源性追踪体系提供数据。方法以肠炎沙门菌510041基因组DNA为模板,根据参考文献确定REP引物,PCR扩增其基因组中靶序列。对反应体系模板量、Mg2+浓度和引物浓度的优化,采用对优化项目设置梯度,其它条件不变的方法进行。以优化的REP-PCR法分析24株沙门菌流行耐药株REP-PCR指纹图谱。根据指纹图谱条带对菌株进行分型,并将分型结果与菌株耐药谱分型结果作比较。结果PCR反应体系DNA模板量100ng/25μl,Mg2+浓度2.0mmol/L,上下游引物浓度各0.4μmol/L时,指纹图谱条带最清晰、明亮;不同血清群和血清型沙门菌株间REP-PCR指纹图谱差异较大,可在0.5kb到2.5kb范围内出现2至6条条带;24株沙门菌流行耐药株用该法可分为15型,根据耐药谱可分为7型。结论建立了优化的沙门菌REP-PCR分子分型技术;REP-PCR指纹图谱分型比耐药谱分型更加敏感。     

两个地理株青海血蜱基因组DNA差异研究

目的研究青海血蜱是否有种型差异.方法分别提取青海血蜱两个地理株的DNA,选取8条不同的随机排列碱基顺序的多聚核苷酸单链为引物,进行RAPD-PCR扩增反应.将扩增产物制备成DNA图谱,比较青海血蜱两个地理株基因组DNA多态性.从DNA水平对青海血蜱两个地理株进行差异分析.结果青海血蜱两个地理株大部分DNA条带是相同的,少数DNA条带不同.结论两个地理株青海血蜱DNA存在着差异.     

沙门菌基因间共有重复序列-PCR分子分型方法的优化及应用初探

目的优化沙门菌基因间共有重复序列-PCR(ERIC-PCR)分子分型方法,分析沙门菌标准菌株及流行分离株基因组DNA ERIC-PCR指纹图谱。方法提取鼠伤寒沙门菌基因组DNA作为模板,根据ERIC核心片段设计引物,运用ERIC-PCR技术扩增沙门菌基因组中的靶序列,PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后用凝胶成像分析仪对图谱进行观察分析。反应体系中模板量、Mg2+浓度、引物浓度和退火温度的优化实验则采用对优化项目设置梯度、其它条件不变的方法进行。以优化好的ERIC-PCR方法对16株沙门菌及1株大肠杆菌进行分析。结果在总体积为25μl的反应体系中,选择DNA模板量为100ng/25μl,Mg2+浓度为2.0mmol/L,引物ERIC1R、ERIC2浓度分别为0.4μmol/L,退火温度为52℃时,扩增产物的电泳图谱条带最清晰完整。不同血清群、型和来源的沙门菌株间基因组DNA ERIC-PCR指纹图谱带型差异较大,可在250～5000bp范围内出现3～13条条带,并在250bp处出现一条特征条带。结论优化了沙门菌ERIC-PCR的重要反应条件。ERIC-PCR法能区分不同来源的沙门菌,可用于沙门菌病的流行病学调查和同源性追踪,弥补传统分型方法的不足。     

不同地区嗜人按蚊基因组DNA差异分析

目的：为进一步确定我国嗜人按蚊是否存在不同的种型提供依据。方法;通过随机引物多态性DNA（RAPD）技术获取四川、云南、江苏3个不同地区嗜人按蚊的DNA指纹图谱,比较嗜人按蚊不同地区基因组DNA的多态性,从分子水平上对不同分布区嗜人按蚊进行差异分析。结果：不同地区嗜人按蚊之间的DNA片段在绝大部分相同的情况下存在差异,3个不同地区基本上具有共同的扩增片段,反映了各地理区域基因组DNA的同源性;同时各个地区所特有的片段及条带亮度（扩增片段强度）又有差别。结论：不同地区嗜人按蚊在DNA水平绝大部分相同的前提下存在差异,这种差异的发现将为鉴定形态学上无法区分的嗜人按蚊地理种型提供水平的分类依据。     

不同地区嗜人按蚊基因组DNA差异分析

[目的]为进一步确定我国嗜人按蚊是否存在不同的种型提供研究依据。[方法]通过随机引物多态性DNA(RAPD)技术获取四川、云南、江苏3个不同地区嗜人按蚊的DNA指纹图谱,比较嗜人按蚊不同地区基因组DNA的多态性,从分子水平上对不同分布区嗜人按蚊进行差异分析。[结果]不同地区的嗜人按蚊之间的DNA片段在绝大部分相同的情况下存在差异,3个不同地区基本上具有共同的扩增片段,反映了各地理区域基因组DNA的同源性;同时各个地区所特有的片段及条带亮度(扩增片段强度)又有差别。[结论]不同地区的嗜人按蚊在DNA水平绝大部分相同的前提下存在差异,这种差异的发现将为鉴定形态学上无法区分的嗜人按蚊地理种型提供分子水平的分类依据。     

随机扩增多态性DNA分型法在铜绿假单胞菌流行病学研究方面的应用

目的摸索适于铜绿假单胞菌随机扩增多态性DNA分型法(RAPD)分型的最佳实验条件,并对我院临床分离到的34株铜绿假单胞菌进行分型研究。方法从随机引物筛选、镁离子浓度、模板量、引物浓度4方面对RAPD反应体系进行优化。结果不同病区分离到的铜绿假单胞菌的指纹图谱互不相同;从烧伤病房分离到的8株高度耐药的铜绿假单胞菌中,其中7株为同一指纹图谱,另外1株为独特的指纹图谱,而外科重症监护病房、肺科病房、干部病房同一病区内分离到的铜绿假单胞菌均为同一指纹图谱。结论铜绿假单胞菌在病区内存在交叉感染的情况,但未出现病区间感染同一流行株。     

1 874份前列腺分泌物标本病原学检测与药敏分析

目的了解某地区前列腺炎的病原体种类及其对抗菌药物的敏感性。方法收集前列腺炎患者的前列腺分泌物标本1874份进行病原学检测，并对检出的72株淋病奈瑟菌进行药敏试验（K-B法）。结果共检出452份阳性标本，阳性率为24．12％；其中检出单种病原体的标本334份，检出2种病原体的标本118份，两者所检出病原体以淋病奈瑟菌比率最高，分别占31．14％和55．09％。72株淋病奈瑟菌对环丙沙星、氧氟沙星和青霉素、四环素耐药率较高，分别为90．28％，83．33％，55．56％，25．00％；对壮观霉素100％敏感。结论该地区前列腺炎分泌物病原体检出率高，以淋病奈瑟菌为主。环丙沙星、氧氟沙星、青霉素和四环素已不宜作为该地区治疗淋病奈瑟菌感染的常规药物。