香椿子多酚提取物对6-OHDA诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究香椿子多酚提取物(polyphenols from toona sinensis seeds,PTSS)对神经毒素6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法:体外培养PC12细胞,实验分为对照组、PTSS组、6-OHDA组及PTSS+6-OHDA组,倒置显微镜下观察各组细胞形态;MTT法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡情况;免疫组织化学染色法检测各组细胞Caspase-3、COX-2和TNF-α的表达变化。结果:PTSS可有效地降低6-OHDA引起的PC12细胞的损伤,增加细胞存活率,减少细胞早期凋亡;降低Caspase-3、COX-2及TNF-α的表达。结论:PTSS对6-OHDA引起的PC12细胞损伤具有明显的保护作用。     

SHP-2通过ERK和JNK通路调节PC12细胞应对NGF的细胞生存和凋亡

目的：探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在神经生长因子(NGF)作用下大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞生存及NGF撤除后细胞凋亡的过程中的作用及机制。方法：SHP-2 抑制剂NSC87877作用于PC12细胞, MTT测定PC12细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率。将pIRES-GFP空载体、pIRES-GFP-SHP-2野生型和pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体通过脂质体方法转染PC12细胞;加入NGF作用１h和撤除NGF 5 h后分别用Western blotting方法检测细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化ERK（p-ERK）、c-Jun氨基末端激酶(JNK)及磷酸化JNK (p-JNK)表达变化。结果：MTT和流式细胞仪检测表明SHP-2 可以促进PC12细胞生存,抑制细胞凋亡。Western blotting结果显示无SHP-2抑制剂组和转染pIRES-SHP-2野生型组p-ERK表达在加入NGF的过程中升高;撤除NGF后,各组p-ERK表达均降低,pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体组和pIRES-GFP组p-ERK表达明显低于pIRES-GFP-SHP-2野生型组, NGF去除+ SHP-2抑制剂组的表达水平明显低于NGF去除对照组; NGF去除+SHP-2抑制剂组p-JNK表达高于NGF去除对照组;pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体组高于pIRES-GFP空载体组,pIRES-GFP-SHP-2野生型组低于pIRES-GFP空载体组。结论：SHP-2可能通过对ERK的正向激活,抑制JNK的激活,增强NGF作用下PC12细胞生存及抑制NGF撤除后所致细胞凋亡,从而在NGF的信号转导中起到一个中心环节的作用。     

二苯乙烯苷通过抑制ROS减轻6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡

目的:探讨2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-o-β-D-葡萄糖苷(2,3,5,4'-tetrahydroxystibene-2-o-β-D-glucoside,TSG)对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导的PC12细胞凋亡的影响及其可能的机制.方法:4-甲基偶氮唑蓝(MTT)检测...     

NGF诱导PC12细胞分化机制的研究进展

神经生长因子诱导 PC12细胞分化是一个复杂的信号调节过程 ,其中有诸多因子和信号传导途径参与NGF可通过不同信号途径诱导 PC12细胞分化。本文在 Ras/ MAPK途径、PI- 3K信号途径及细胞周期等方面的研究作一综述     

肿瘤特异性凋亡基因诱导人淋巴瘤细胞凋亡的机制

目的:研究肿瘤特异性凋亡基因(apoptingene)在诱导人淋巴瘤细胞U937凋亡时,cJun氨基末端激酶(JNK)信号通路的作用。方法:用含有apoptin基因的真核表达载体,瞬时转染体外培养的人淋巴瘤细胞U937。采用流式细胞仪、Westernblot、台盼蓝染色及RTPCR等研究其在不同时间条件下诱导U937细胞凋亡的作用。结果:Apopin基因瞬时转染U937细胞48h,可出现明显的凋亡;而且凋亡细胞的数量与apoptin基因的转染时间有关。诱导后24h,U937细胞中出现磷酸化的JNK蛋白的表达,诱导后48h达高峰;而非磷酸化的JNK蛋白表达无明显变化。结论:Apoptin基因具有诱导U937细胞凋亡的作用。JNK信号通路的激活,可能在apoptin基因诱导肿瘤细胞凋亡过程中发挥着重要作用。     

肿瘤特异性凋亡基因诱导人黑色素瘤细胞凋亡机制的研究

目的研究肿瘤特异性凋亡基因(Apoptin gene)在诱导人黑色素瘤细胞A375发生凋亡时,c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在细胞发生凋亡中的作用。方法用含有肿瘤特异性凋亡(Apoptin)基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑色素瘤细胞A375;采用流式细胞仪、免疫印迹法(W estern b lot)、台盼蓝染色法及RT-PCR等方法研究其在不同时间条件下对人黑色素瘤细胞A375诱导凋亡的作用。结果Apoptin基因瞬间转染的人黑色素瘤A375细胞出现明显的细胞凋亡,凋亡细胞的数量随Apoptin转染时间延长而增多,磷酸化型JNK蛋白在转染Apoptin 24 h开始表达,48h和72h过表达,而非磷酸化型JNK蛋白表达无明显变化。结论Apoptin基因具有诱导人黑色素瘤细胞A375凋亡的作用,JNK信号通路的激活可能在Apoptin诱导肿瘤细胞凋亡过程中发挥作用。     

CEPO对6-OHDA诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨氨甲酰化促红细胞生成素(CEPO)对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导PC12细胞损伤及凋亡的保护作用及其可能机制。方法借助CCK8、流式细胞(Flow cytometry,FCM)、Western-blotting和逆转录PCR(RT-PCR)技术检测PC12模型细胞相关指标的变化,实验数据以SPSS15软件统计分析。结果 CCK8结果显示6-O-HDA处理能够显著降低PC12模型细胞的存活率,而CEPO处理对其变化显示抑制作用;FCM技术探察结果显示,6-OHDA处理能够明显诱导PC12模型细胞的损伤与凋亡,而CEPO预处理能够减轻PC12模型细胞的损伤与凋亡(P<0.05);借助Western-blotting技术探察显示6-OHDA+CEPO处理组的PC12细胞的Cleaved caspase-3蛋白表达量显著低于6-OHDA处理组(P<0.05);RT-PCR结果显示,6-OHDA处理明显降低PC12模型细胞的Bcl-2 mRNA的表达(P<0.05)以及上调PC12模型细胞的Bax mRNA的表达(P<0.01),而CEPO处理明显上调Bcl-2 mRNA的表达水平(P<0.05)以及抑制Bax mRNA的表达(P<0.05)。结论CEPO处理能够显著抑制6-OHDA所诱导的PC12细胞的损伤及凋亡,其作用机制可能与其上调Bcl-2,并下调Bax和Caspase-3的表达有关。     

ERK在NGF诱导PC12 细胞分化中的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK)在NGF。诱导的PC12细胞分化中的作用机制。方法以NGF处理PC12细胞建立分化模型,运用免疫印迹检测不同浓度不同作用时间时NGF对ERK1／2蛋白和磷酸化ERK1／2蛋白水平的影响,并观察MAPK／ERK激酶(MEK)抑制剂U0126对NGF诱导的细胞形态学改变的影响。结果ERK1／2蛋白的磷酸化呈现NGF剂量和时间依赖性。NGF作用细胞5min即可观察到明显的ERK1／2蛋白磷酸化,持续1h左右,2h时降低到初始水平,而细胞形态的改变出现在NCF作用12h以后。倒置相差显微镜观察可见PC12细胞分化的程度与ERK1／2活化持续的时间正相关,U0126可完全即时抑制ERK1／2的活化,而ERK1／2活化的抑制可完全阻断。NGF诱导的PC12细胞分化。结论ERK1／2的活化是PC12细胞发生分化的必需事件,其活化时间的长短对分化具有决定作用。     

Roscovitine促进增殖期PC12细胞凋亡

目的探讨细胞周期蛋白依赖激酶（CDK）抑制剂Roscovitine导致增殖期PC12细胞死亡的性质和CDK调控的细胞周期与细胞凋亡的关系。方法利用培养的增殖期PC12细胞模型，进行MTT细胞活性检测、Hoechst 33342胞核荧光染色和倒置显微镜观察。结果分别用5、10、20、50和100μmol／L浓度的Roscovitine溶液处理细胞12h，细胞存活率呈剂量依赖性下降；另外，50μmol／L浓度的Roscovitine分别处理细胞4、12、24和48h，细胞死亡也呈现时间依赖性。细胞死亡的形态学表现是细胞皱缩、核染色体固缩和核碎片形成。结论Roscotivine导致的增殖期PC12细胞凋亡与CDK调控的细胞周期蛋白有关。     

一氧化氮和caspase-3在多巴胺诱导PC12细胞

目的：探讨一氧化氮（NO）和半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）在多巴胺诱导PC12细胞凋亡中的可能作用。方法：流式细胞仪定量检测PC12细胞的凋亡率,原位末端标记法（TUNEL）观察凋亡细胞的形态,Griess法测定NO₂^-的浓度,荧光分光光度计法检测caspase-3的活力,半定量RT-PCR法检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA的表达水平。结果：多巴胺（0.15-0.60 mmol/L）可剂量依赖性地诱导PC12细胞凋亡,表现为凋亡细胞的TUNEL染色阳性;iNOS mRNA的表达、NO的合成及caspase-3的活力均有明显的增加（P<0.01）;特异性的iNOS抑制剂aminoguanidine和caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO通过减少NO的生成和抑制caspase-3的激活阻断PC12细胞凋亡。结论：NO的生成可能是多巴胺诱导PC12细胞凋亡的触发因子,caspase-3的激活是其中的效应因子。     

去氢骆驼蓬碱诱导HepG2细胞凋亡并增强其对5-氟尿嘧啶和顺铂的敏感性

 目的:研究去氢骆驼蓬碱体外诱导HepG2细胞凋亡过程中c-Jun N末端激酶（JNK）途径的作用,并观察其联合化疗药物对HepG2细胞的影响。方法:CCK-8法检测联合或不联合使用JNK特异性抑制剂SP600125对细胞增殖的抑制作用;克隆形成实验观察不同浓度药物对细胞克隆形成的影响;Hoechst 33258染色法观察细胞形态变化;PI单染检测细胞亚二倍体率;Annexin V-PI双染测定细胞早期凋亡水平;Western blotting检测细胞聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）、JNK和p-JNK蛋白表达的改变;联合5-氟尿嘧啶（5-FU）或顺铂(DDP)观察细胞对化疗药物的敏感性。结果:去氢骆驼蓬碱随药物浓度的升高而抑制作用增强,48 h后IC50为9.80 mg/L;去氢骆驼蓬碱能显著抑制细胞克隆形成,并且导致细胞凋亡形态学变化;PI单染检测发现细胞周期的G1期前有亚二倍体凋亡峰,Annexin V-PI 双染检测细胞出现明显的早期凋亡细胞群;Western blotting检测到随着去氢骆驼蓬碱浓度增加PARP及p-JNK蛋白表达增加,JNK蛋白表达减少;联合使用SP600125对细胞增殖的抑制作用减弱;联合5-FU或顺铂明显增强化疗药物对肿瘤细胞的抑制作用,增敏倍数分别为1.47和5.78倍。结论: 去氢骆驼蓬碱对HepG2细胞有增殖抑制作用,并诱导其凋亡,激活JNK信号通路可能是其主要机制之一;同时去氢骆驼蓬碱可以增强HepG2细胞对5-FU和顺铂的敏感性。     

槲皮素抑制鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡

目的: 探讨槲皮素对鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡的影响及其作用机制。方法: 运用鱼藤酮诱导损伤PC12细胞,经300 μmol/L槲皮素预处理后,观察细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测Bax和Bcl-2蛋白的表达,JC-1染色检测细胞线粒体膜电位,比较各组的差异。结果: 与鱼藤酮组相比,槲皮素加鱼藤酮处理组细胞形态明显改善,凋亡率降至6.3%(P<0.01),Bcl-2表达增加(P<0.01),Bax表达降低(P<0.01),线粒体膜电位上升(P<0.01)。结论: 槲皮素对鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡具有抑制作用,上调Bcl-2和下调Bax蛋白的表达,维持线粒体膜电位可能是其作用的机制之一。     

Adhesive proteins linked with focal adhesion kinase regulate neurite outgrowth of PC12 cells

Adhesive proteins existing in the extracellular matrix (ECM) play important roles in the regulation of neuronal cell behavior, including cell adhesion, motility and neurite outgrowth. Herein we show the effects of a series of adhesive proteins on the neurite outgrowth of PC12 cells and elucidate that this is closely related to the activation of focal adhesion kinase (FAK). For this we prepared culture substrates by coating tissue culture plastic with either collagen (Col), fibronectin (FN) or laminin (LN) and investigated the neurite outgrowth behavior. The results demonstrated that neurite outgrowth was highly dependent on the particular type of adhesive protein. While neurite number was comparable on all the coated surfaces, the length of neurites was greater on the FN- and LN-coated ones (greatest on the LN-coated one). In particular, FAK expression was highly up-regulated in the FN- and LN-coated surfaces, as revealed by Western blot analysis. A knock-down experiment further supported the idea that neurite outgrowth was largely suppressed in cells transfected with a FAK knock-down gene. Taken together, the neurite outgrowth of PC12 cells was greatly affected by adhesive proteins of the ECM, particularly FN and LN, and this is considered to be closely related to FAK intracellular signaling. This study may be useful in the consideration and design of nerve guidance and three-dimensional scaffolds which are appropriate to promote neuronal growth and nerve tissue regeneration.     

抑制JNK信号通路对致痫后海马神经元损伤的保护作用

目的：探讨抑制C—Jun氨基末端激酶通路（JNK）对减轻癫痫持续状态（SE）大鼠海马神经元损伤的作用和机制。方法：建立氯化锂-匹罗卡品SE模型,其中24只鼠为单纯模型组;另24只鼠为抑制组,即在注射氯化锂-匹罗卡品之前,预先用特异抑制剂SP600125作侧脑室注射。另用6只鼠作正常对照,不制模,用生理盐水代替氯化锂一匹罗卡品,用二甲基亚砜（DMS0）溶液代替SP6001250。3组都在不同时间点用免疫组化法检测海马CA1区磷酸化JNK（P—JNK）的表达,并将抑制组与模型组、对照组相比较,观察组织病理学改变。结果：正常对照组JNK极少活化;模型组在SE后30min时点JNK在海马神经元强烈激活,2h时达到高峰,6h后明显减少;抑制剂组JNK激活明显减少。模型组海马CA1区可见到神经元发生变性和坏死,抑制剂组这种变化则较轻。结论：SE后JNK信号转导（transduction）通路被激活,并可致发作后海马神经元损伤;抑制剂SP600125则抑制JNK信号转导通路,对海马神经元起一定保护作用。     

Protective effect of trihexyphenidyl on hydrogen peroxide-induced oxidative damage in PC12 cells

The protective effect of trihexyphenidyl (THY) on hydrogen peroxide-induced oxidative damage was investigated in the rat pheochromocytoma line PC12 cells. Following the exposure of PC12 cells to H(2)O(2), there was a reduction in cell survival, activities of superoxide dismutase (SOD) and mitochondria membrane potential (MMP), in contrast, the increased levels in Lactate dehydrogenase (LDH) release, malondialdehyde (MDA) production and intracellular reactive oxygen species (ROS), as well as intracellular [Ca(2+)]i level were observed. However, preincubation of cells with THY prior to H(2)O(2) exposure attenuated all the changes mentioned above, THY exhibited protective effect against H(2)O(2)-induced toxicity in PC12 cells, indicating that the compound may be a potential therapeutic agent for the diseases influenced by oxidative damage.     

JAK-STAT信号通路、IL-1β和IL-6在X射线辐照诱导PC12细胞损伤中的调控作用

目的:探究JAK-STAT信号通路及炎症因子IL-1β、IL-6是否参与X射线诱导的PC12细胞辐射损伤。方法:采用X射线分别以2、4和8 Gy剂量照射PC12细胞,照射后24 h通过酶联免疫法检测IL-1β和IL-6的表达水平;Western blot检测p-JAK1、p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3和p-STAT5的蛋白水平。结果:与正常对照组相比,细胞经不同剂量X射线照射24 h后,IL-1β和IL-6的表达水平均升高,且与辐照剂量呈剂量依赖性;p-JAK1、pJAK2、p-STAT1、p-STAT3和p-STAT5的蛋白水平均升高,且上调程度与辐照剂量呈剂量依赖性。结论:JAK-STAT信号通路、IL-1β和IL-6可能参与X射线照射诱导PC12细胞的损伤调控。     

Effects of berberine on 6-hydroxydopamine-induced neurotoxicity in PC12 cells and a rat model of Parkinson's disease

Protoberberine isoquinoline alkaloids including berberine inhibit dopamine biosynthesis and aggravate l-DOPA-induced cytotoxicity in PC12 cells. In this study, the effects of berberine on 6-hydroxydopamine (6-OHDA)-induced cytotoxicity in PC12 cells and on unilateral 6-OHDA-lesioned rats were investigated. In PC12 cells, berberine at 10 and 30 μM associated with 6-OHDA (10, 20, and 50 μM) enhanced cytotoxicity at 48 h compared to 6-OHDA alone, indicated by an increase in apoptotic cell death. In addition, treatment with berberine (5 and 30 mg/kg, i.p.) for 21 days in 6-OHDA-lesioned rats markedly depleted tyrosine hydroxylase-immunopositive cells in the substantia nigra as compared to berberine-untreated rats. Further, the levels of dopamine and norepinephrine were also significantly decreased by berberine administration (5 and 30 mg/kg) in the striatal regions of 6-OHDA-lesioned rats. These results suggested that berberine aggravated 6-OHDA-induced cytotoxicity in PC12 cells, and led to the degeneration of dopaminergic neuronal cells in the substantia nigra of 6-OHDA-lesioned rats. It is, therefore, suggested that the use of long-term l-DOPA therapy with isoquinoline derivatives including berberine may need to be examined for the presence of adverse symptoms.