miR125a对胆管癌细胞株QBC939增殖、凋亡影响及可能机制

目的探讨miR125a对胆管癌细胞株QBC939细胞增殖及凋亡的影响及可能机制。方法实时荧光定量PCR检测52例经手术和病理证实的肝外胆管癌,31例癌旁组织及10例正常胆管组织标本miR125a的表达,免疫组化检测MMP-9蛋白表达。miR125a转染胆管癌细胞株QBC939,MTT法检测细胞增殖,流式细胞分析法检测细胞周期,Caspase-3试剂盒检测凋亡,Western blot检测MMP-9蛋白表达。结果胆管癌组织miR125a表达明显下调,低于正常胆管组织(P<0.05),MMP-9明显高于正常胆管组织(P<0.05)。与对照质粒组比较,转染miR125a胆管癌细胞QBC939增殖受到抑制,流式细胞分析法表明转染miR125a的胆管癌细胞QBC939导致G1阻滞,Caspase-3试剂盒检测显示凋亡增加,Western blot分析表明转染miR125a的胆管癌细胞QBC939中MMP-9的表达出现明显的下调。结论miR125a在肝外胆管癌中低表达,它们可能与胆管癌的发生有关。胆管癌细胞株QBC939 miR125a表达上调,能够抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡和G1阻滞,miR125a的作用可能与MMP-9的表达相关。     

RhoC基因转染对胆管癌QBC939细胞生物学行为的影响

目的将人RhoC正义、反义基因真核表达载体转染胆管癌QBC939细胞株,研究RhoC基因对胆管癌QBC939细胞株增殖和侵袭能力的影响。方法以脂质体将包含正义、反义RhoC cDNA真核表达载体,分别转染人胆管癌QBC939细胞。应用克隆形成试验检测细胞增殖活性的变化,流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化,Boyden小室侵袭实验检测侵袭及运动能力的变化。结果正义RhoC基因能促进胆管癌QBC939细胞增殖,流式细胞仪分析结果显示,转染后细胞出现G1期细胞减少;侵袭实验显示,转染后细胞侵袭能力较转染前有显著加强。反义RhoC基因能抑制胆管癌QBC939细胞增殖,流式细胞仪分析结果显示,转染后细胞出现G1期细胞增加;侵袭实验显示,转染后细胞侵袭能力较转染前有显著减弱。结论RhoC基因能够促进胆管癌QBC939细胞株的体外增殖和侵袭能力,反义RhoC基因可抑制胆管癌QBC939细胞的增殖和侵袭能力。     

姜黄素抑制NF-κB信号对人肝癌HepG_2细胞株增殖的影响

目的探讨姜黄素对Hep G2细胞株增殖的影响及其机制。方法不同浓度的姜黄素(0、1.0、3.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0μmol·L-1)处理Hep G2细胞株不同时间后,MTT法检测肝癌细胞株增殖情况;RT-PCR检测NF-κBp65和h TERT m RNA表达;Western blot检测h TERT蛋白表达,细胞免疫荧光法检测Hep G2肝癌细胞株中NF-κB活性。结果姜黄素能明显抑制Hep G2细胞的增殖,且呈时间与浓度依赖性;姜黄素能显著抑制NF-κBp65 m RNA表达及活性,同时伴有h TERT m RNA及蛋白表达降低。结论姜黄素抑制肝癌细胞株增殖,可能通过抑制NF-κBp65调控h TERT表达,进而下调端粒酶活性有关。     

姜黄素诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的 研究姜黄素对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖抑制和诱导凋亡作用.方法 MTT法检测姜黄素对MCF-7细胞的增殖抑制作用;流式细胞术(FCM)PI单染检测细胞周期;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 姜黄素对MCF-7细胞生长有明显抑制作用,并呈剂量、时间依赖性;姜黄素能使MCF-7细胞阻滞在G1/S期,可以诱导细胞凋亡,Bax蛋白表达上调,而Bcl-2的表达减少.结论 姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖具有显著的抑制作用并可诱导细胞凋亡.其分子作用机制可能与其上调Bax基因表达水平的同时下调Bcl-2基因表达水平,从而诱导细胞凋亡有关.     

黄芩苷通过调控c-Myc介导的细胞周期抑制胆管癌细胞增殖

目的　探究黄芩苷（BC）对人胆管癌（CCA）细胞QBC939和RBE增殖的影响及其潜在机制。方法　取对数生长期QBC939和RBE细胞，不同浓度的BC处理细胞24 h后，采用CCK-8法分别检测BC对CCA细胞增殖及敲低原癌基因蛋白质（c-Myc）后对BC引起细胞增殖活性改变的影响；高倍显微镜观察BC对细胞生长状态的影响；流式细胞术检测BC对CCA细胞周期的影响；蛋白免疫印迹（Western blot）实验分别检测BC及小干扰RNA（siRNA）敲低CCA细胞中c-Myc后对周期相关蛋白周期素依赖激酶抑制剂（p27）、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）及c-Myc表达的影响。结果　与0 μmol/L组相比，BC明显抑制QBC939和RBE细胞的增殖活性（P＜0.01），且高倍显微镜下观察到细胞生长减缓；BC可将QBC939细胞周期阻滞于S期（P＜0.05）；随着BC浓度的增加，p27的蛋白水平明显上调，而Cyclin D1则显著降低（P＜0.01）；BC可下调c-Myc的蛋白表达，且敲低c-Myc后p27和Cyclin D1蛋白表达的变化趋势与BC处理时一致（P＜0.05）；单独敲低c-Myc后可明显抑制QBC939和RBE细胞的存活率（P＜0.01），并能进一步增强BC的抑制作用。结论　BC通过抑制c-Myc信号通路阻滞细胞周期，进而抑制CCA细胞的增殖。     

姜黄素对Saos-2细胞增殖和凋亡的影响

目的观察姜黄素对人骨肉瘤细胞系Saos-2增殖和凋亡的影响及其对Fas蛋白表达的调控。方法体外培养人骨肉瘤细胞系Saos-2,MTT法检测不同浓度姜黄素对骨肉瘤细胞系Saos-2的生长抑制作用,Annexin V/PI染色,流式细胞术检测细胞凋亡,Hoechst 33258染色,显微镜下观察细胞凋亡的形态学变化,Western blot法检测Saos-2细胞Fas蛋白表达情况。结果 MTT检测显示姜黄素可抑制人骨肉瘤Saos-2细胞增殖,并具有时间和剂量依赖性,在姜黄素浓度为20μmol·L-1时,对细胞生长的抑制作用明显增强;流式细胞检测显示姜黄素可明显诱导骨肉瘤细胞凋亡;Hoechst33258染色可见凋亡小体;Western blot分析显示经姜黄素作用后的骨肉瘤细胞系Saos-2表达Fas较用药前明显增强。结论姜黄素对骨肉瘤细胞系Saos-2的增殖有抑制作用,并可诱导其发生凋亡,其可能通过上调Fas的表达,启动细胞凋亡程序,发挥其抗肿瘤作用。     

紫草素衍生物Z7对Burkitts淋巴瘤CA-46细胞的作用

目的 本研究探讨紫草素衍生物Z7对Burkitts淋巴瘤细胞株CA-46增殖及凋亡的作用.方法 运用MTT比色法检测紫草素衍生物Z7对细胞增殖的抑制作用,DNA片段化、Caspase-3酶活性检测细胞凋亡,Western blot检测Caspase家族蛋白表达变化.结果 紫草素衍生物Z7能明显抑制CA-46细胞株的增殖,作用48 h后的IC50为(0.835±0.086 3)μmol/L;高浓度组可见到典型的DNA凋亡梯带;药物组的Caspase-3活性显著升高;Western blot可见Caspase-9、Caspase-3蛋白表达下调,PARP蛋白上调.结论 紫草素衍生物Z7对CA-46具有抑制增殖及诱导凋亡的作用,其作用机制可能与激活线粒体通路有关.     

康莱特注射液(薏苡仁)对人肝癌细胞株SMMC7721自噬和凋亡的影响

目的 探讨康莱特注射液对人肝癌细胞株SMMC7721自噬和凋亡的影响.方法 使用康莱特注射液处理人肝癌细胞株SMMC7721,用CCK-8法检测人肝癌细胞株SMMC7721的增殖,流式细胞仪检测凋亡率,通过Western blot检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-II等表达情况.结果 与对照组比较,随着药物作用时间的延长,康莱特注射液对细胞的抑制程度逐步增加,细胞株在加药后96h表现出较好的抑制率,实验组人肝癌细胞株SMMC7721凋亡显著增加,自噬相关基因Beclin-1、LC3的mRNA与蛋白表达上调.结论 康莱特注射液可能通过上调Beclin-1、LC3 mRNA水平以及蛋白表达水平,促进人肝癌细胞SMMC7721自噬,抑制其增殖,并诱导肿瘤细胞凋亡,从而抑制肿瘤生长.     

姜黄素对人肝癌Bel-7402细胞的抑制作用研究

目的 研究姜黄素对人肝癌Bel-7402细胞的抑制作用,并探讨其作用机制.方法 实验分为4组,分别为对照组和10、20和40 μmol/L姜黄素组.采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的活性;流式细胞术结合Annexin V-FITC/PI双染检测Bel-7402细胞的凋亡情况;RT-PCR法检测Bax和Bcl-2的mRNA的表达,Western blot检测细胞色素C和Caspase-3蛋白的表达.结果 姜黄素显著抑制Bel-7402细胞的活性(P＜0.01).姜黄素处理后,Bel-7402细胞的凋亡率明显增加,与对照组相比具有统计学差异(P＜0.05),且具有剂量依赖性.另外,姜黄素使Bax的mRNA表达上升,Bcl-2的mRNA表达下降,Bax/Bcl-2比值明显上升(P＜0.05).同时,细胞色素C和Caspase-3蛋白的表达均显著上调(P＜0.01).结论 姜黄素可以抑制Bel-7402细胞的活性和增殖,促进Bel-7402细胞的凋亡,其机制可能与与姜黄素激活Bel-7402细胞线粒体凋亡途径有关.     

姜黄素对人食管癌细胞BAG-1表达的影响

目的观察姜黄素对人食管癌细胞抗凋亡基因BAG-1表达的影响,并探讨姜黄素抗癌分子机制。方法应用浓度为40～80μmol/L姜黄素处理人食管癌EC-9706细胞株12h后,Western blot检测BAG-1的表达。结果经不同浓度的姜黄素干预后,BAG-1表达随着姜黄素浓度的增加有逐渐减弱的趋势。结论姜黄素能够有效抑制抗凋亡基因BAG-1的高表达。     

膜联蛋白A1基因的表达与胆囊癌临床病理的关系及调控信号转导与转录因子3信号通路对胆囊癌细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨膜联蛋白A1(ANXA1)基因的表达与胆囊癌临床病理的关系及调控信号转导与转录因子3(STAT3)信号通路对胆囊癌细胞增殖凋亡的影响及其机制.方法 应用免疫组化法检测100例胆囊癌组织中ANXA1基因的阳性表达,分析其与临床病理特征的关系.培养人胆囊癌GBC-SD细胞,分别将ANXA1小干扰RNA(ANXA1-siRNA)和阴性对照(siRNA-NC)转染细胞,以空脂质体转染的细胞作为对照组,蛋白质印迹法(Western blot)检测转染效果;细胞转染后培养48 h,细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白质印迹法检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、STAT3、磷酸化的信号转导与转录因子3(p-STAT3)蛋白表达.结果 ANXA1基因在胆囊癌中的阳性表达率显著高于癌旁组织(69.0%比7.5%,χ2=43.261,P<0.01);ANXA1在胆囊癌中的表达与性别和年龄不相关(P>0.05),与肿瘤的分化程度、临床分期、淋巴转移显著相关(P<0.01).siRNA-NC组中ANXA1、Cleaved caspase3、STAT3、p-STAT3蛋白表达、细胞存活率、细胞凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);ANXA1-siRNA组ANXA1蛋白表达、细胞存活率及p-STAT3蛋白表达显著低于对照组(P<0.01),细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于对照组(P<0.01),STAT3蛋白表达在三个组之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 ANXA1基因的表达参与了胆囊癌的生长、分化和迁移过程,下调ANXA1的表达能抑制人胆囊癌GBC-SD细胞的增殖,并通过下调Cleaved caspase3蛋白促进细胞凋亡,其机制与STAT3信号通路的调控有关.     

阿伐他汀诱导人胆管癌QBC939细胞凋亡的研究

目的 观察阿伐他汀(ATV)对人胆管癌QBC939细胞增殖及凋亡的影响.方法 应用细胞培养技术培养QBC939细胞,经不同浓度的阿伐他汀处理后,以MTT法检测QBC939细胞的存活率,通过光镜、倒置显微镜及琼脂糖凝胶电泳检测胆管癌细胞凋亡的形态学特征、生化学特征.结果 在阿伐他汀的作用下,QBC939细胞的生长、增殖变的相对缓慢,凋亡的细胞出现膜小泡、凋亡小体等特征性改变;DNA电泳呈现典型的梯状条带.结论 阿伐他汀可抑制胆管癌细胞的生长、增殖,并可诱导细胞发生凋亡,且其作用呈剂量效应关系.     

大黄素对人胆管癌多药耐药细胞QBC_（939）/ADM的耐药逆转作用

目的探讨大黄素（Emodin,EM）对人胆管癌多药耐药细胞QBC939/ADM的耐药逆转作用。方法细胞生长周期、凋亡率采用流式细胞术（FCM）,多药耐药P糖蛋白（P-gP）以免疫组织化学（SP）法检测。结果阿霉素（ADM）、紫杉醇分别与EM联合作用于人胆管癌多药耐药细胞QBC939/ADM的凋亡率比单独作用有显著提高。细胞周期分布显示：ADM、紫杉醇分别与EM联合作用于人胆管癌多药耐药细胞QBC939/ADM,使QBC939/ADM阻滞于G2/M期的细胞数明显增加。EM和紫杉醇联合作用后,人胆管癌多药耐药细胞QBC939/ADM中多药耐药P糖蛋白（P-gP）的表达由72.00%降低到46.00%（P〈0.01）。结论EM对QBC939/ADM细胞的多药耐药性有逆转作用。其作用机理可能与人胆管癌细胞P-gP的表达有关,通过与化疗药物竞争性结合P-gP的结合位点发挥疗效。     

TSA对胆道癌细胞系生长的影响

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂在体外和体内对胆囊癌细胞系和肝外胆管癌细胞系生长的影响,并探讨其临床应用价值。方法:用组蛋白去乙酰化酶抑制剂-曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)作用于胆囊癌细胞系(Mz-ChA-1)和肝外胆管癌细胞系(QBC939、KMBC、OZ),用MTT法检测TSA对这些细胞系生长的影响。将Mz-ChA-1接种裸鼠皮下建立胆囊癌裸鼠种植模型,观察TSA处理前后体内种植瘤生长的变化。结果:TSA可以抑制Mz-ChA-1和QBC939、KMBC、OZ的增殖,以上作用与药物浓度在一定范围内呈正相关。成功建立胆囊癌裸鼠体内种植模型,TSA处理后裸鼠体内种植瘤生长受抑制。结论:TSA在体外能抑制胆囊癌细胞系和肝外胆管癌细胞系的增殖;TSA在体内能抑制胆囊癌细胞系的增殖。     

HMGB1对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响及其作用机制

目的 观察HMGB1对人宫颈癌HeLa细胞生长及凋亡的影响并研究其可能的作用机制.方法 构建HMGB1高表达质粒和RNA干扰质粒,将HMGB1高表达质粒与RNA干扰质粒分别转染到HeLa细胞中,采用MTT实验、PI单染流式细胞术和Annexin V-PI双标法流式细胞术检测HeLa细胞的增殖活性、细胞周期和凋亡情况.采用RT-PCR和western blot法检测HMGB1基因沉默对Caspase-3、bcl-2 和细胞色素C表达的影响.结果 HMGB1高表达载体(pEGFP-N1-HMGB1)与阴性对照质粒分别转染到HeLa细胞,RT-PCR和Western blot结果显示HMGB1重组质粒转染HeLa后可明显增加HMGB1的mRNA 及蛋白表达(P＜0.05).HMGB1干扰病毒载体(HMGB1 SiRNA)与空白病毒载体分别转染到HeLa细胞中,RT-PCR和Western blot结果显示HMGB1 SiRNA转染HeLa后可明显抑制HMGB1的mRNA及蛋白表达(P＜0.05).MTT法检测HMGB1高表达及基因沉默后HeLa的细胞生长曲线,结果显示HMGB1高表达可明显提高HeLa的细胞生长速度(P＜0.05),HMGB1沉默后HeLa的细胞生长明显受到抑制(P＜0.05).PI 染色流式细胞仪结果显示:HMGB1过表达后,细胞正常增殖周期被加速(P＜0.05);HMGB1沉默后,细胞增殖周期被抑制(P＜0.05).Annexin V-PI双标法流式细胞仪结果显示,HMGB1过表达后,HeLa细胞凋亡率明显下降(P＜0.05);HMGB1沉默后,HeLa细胞凋亡率明显上升(P＜0.05).RT-PCR方法检测不同细胞组Caspase-3和bcl-2 mRNA的表达,结果显示:HMGB1基因沉默后,Caspase-3 mRNA的表达明显增加(P＜0.05),bcl-2 mRNA的表达明显减少(P＜0.05).Western blot结果显示:HMGB1 基因沉默后,细胞色素C和Caspase-3蛋白表达水平增加,bcl-2蛋白表达水平减少(P＜0.05).结论 HMGB1可提高HeLa细胞生长速度、增殖周期,抑制HeLa细胞凋亡.HMGB1基因沉默可抑制Hela细胞增殖,促进其凋亡.影响Caspase-3—细胞色素C途径及调节bcl-2的表达可能是其主要作用机制.     

五味子甲素协同吉西他滨抑制肝癌细胞HepG2增殖

目的探究五味子甲素(deoxyschizandrin)联合吉西他滨(gemcitabin,GEM)对肝癌细胞HepG2增殖的影响及其可能的作用机制。方法CCK8法和克隆平板实验检测五味子甲素单药、GEM单药及联合用药对肝癌细胞HepG2增殖能力的影响;流式细胞术检测单药组及联合用药组中HepG2细胞的凋亡比例;Western blot法检测各组细胞中BCL2、BAX、pro-caspase3、cleaved-caspase3、pro-caspase9、cleaved-caspase9、β-catenin和TCF-4的表达。结果五味子甲素、GEM及联合用药对细胞HepG2的增殖均具有抑制作用,促进其凋亡,且联合用药组对HepG2细胞的作用明显强于单药组(P<0.05);Western blot结果表明,与对照组相比,五味子甲素、GEM和联合用药对pro-caspase3、pro-caspase9表达无明显影响,显著减少BCL2、β-catenin及TCF-4蛋白的表达(P<0.05),上调BAX、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白的表达(P<0.05)。其中,联合用药比单药更为显著(P<0.05)。结论五味子甲素协同GEM抑制肝癌细胞HepG2中β-catenin/TCF-4通路,进而减少细胞增殖,诱导其凋亡。     

木犀草素对K562细胞增殖与凋亡的影响及其机制

目的　探讨木犀草素对K562细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法　取对数生长期K562细胞分别加入0、10、25、50、100 μmol/L木犀草素培养24 h、48 h、72 h,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率;K562细胞分别加入0、25、50 μmol/L木犀草素培养48 h,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;K562细胞分别加入0、10、50、100 μmol/L木犀草素培养48 h,采用Westem blot检测B细胞淋巴瘤2蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、多聚ADP核糖聚合酶（PARP）、Cleaved-PARP、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase3）、Cleaved-Caspase3、蛋白激酶B（AKT）、磷酸化AKT（p-AKT）、断裂点簇集区蛋白（BCR）、c-abl癌基因1（c-ABL）BCR-ABL蛋白表达。结果　CCK-8检测结果显示,随木犀草素浓度增加及作用时间的延长,K562细胞增殖抑制率均呈增长趋势（P＜0.05）。流式细胞仪检测结果显示,木犀草素0、25、50 μmol/L组K562细胞的凋亡率依次升高（分别为8.21%±0.55%、23.43%±1.50%和40.47%±2.97%）。Western blot结果显示,Bax、Cleaved-PARP、Cleaved-Caspase3表达水平随木犀草素浓度的增加而升高（P＜0.05）。木犀草素0、10、50 μmol/L组PARP蛋白表达水平依次升高（P＜0.05）,100 μmol/L组与50 μmol/L组差异无统计学意义。100 μmol/L组Caspase3、Bcl-2蛋白表达水平均低于其余组（P＜0.05）。50、100 μmol/L组p-AKT蛋白表达水平低于0、10 μmol/L组,100 μmol/L组低于50 μmol/L组。50 μmol/L组BCR-ABL融合蛋白表达水平高于0 μmol/L组,100 μmol/L组低于0、50 μmol/L组（P＜0.05）。结论　木犀草素可抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与调控BCR-ABL蛋白表达及PI3K/AKT信号通路有关。     

生长抑素类似物抑制胆管癌细胞增殖的研究

目的探讨生长抑素类似物奥曲肽(OCT)对人胆管癌细胞细胞株QBC939的抑制作用及可能的作用机制。方法四氮唑蓝(MTT)法检测OCT对人胆管癌细胞株QBC939增殖的影响,流式细胞仪检测OCT对细胞周期变化的作用,免疫组织化学法研究OCT对人胆管癌细胞株QBC939P27KIP1蛋白表达变化的影响。建立胆管癌裸鼠模型,进一步探讨生长抑素的作用。结果MTT法检测不同浓度OCT(5、0.5、0.05、0.005mg/L)作用于QBC93948h后,实验组0.5、5mg/L组和对照组吸光度(A)值比较差异有统计学意义(P<0.05)。细胞生长率分别为83.80%,80.28%,77.53%,65.32%。流式细胞仪分析显示不同浓度OCT作用于QBC93948h后,G0/G1期细胞明显增多(P<0.05)。免疫组织化学P27KIP1蛋白表达随OCT浓度的增加而增强(P<0.05)。建立胆管癌裸鼠模型后,OCT干预21d后实验组瘤重明显小于对照组(P<0.05)。结论OCT可抑制人胆管癌细胞的增殖。在一定范围内呈剂量依赖性,其抗肿瘤作用机制主要是通过细胞周期阻滞来实现的,而这一作用的实现可能与P27KIP1蛋白表达的上调有关。