维生素A酸对小鼠囊胚TGF-β1蛋白表达的影响

目的:探讨TGF-β1细胞因子对着床前胚胎发育的作用,从而探讨ATRA对着床前期胚胎发育毒性作用,为其致畸机理提供实验依据。方法:通过促超排卵,获取妊娠3.5d小鼠囊胚,随机分成三组,即对照组(空白)、实验1组(含1μmol/L的ATRA)和实验2组(含10μmol/L的ATRA),分别培养在含0、1μmol/L和10μmol/L的ATRA的M199培养基中,培养24h,然后再吸出囊胚。用免疫组织化学S-P法,分别检测不同剂量组ATRA对小鼠囊胚TGF—β1蛋白表达的状况,利用HPIAS-2000图像分析系统测定TGF-β1蛋白在以上三组中表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果:TGF-β1蛋白在囊胚细胞中的表达,实验1组与对照组囊胚TGF-β1蛋白表达的阳性面积率及平均光密度有显著性差异(P<0.01);实验2组与空白组和实验1组相比均存在显著性差异(P<0.01)。结论:细胞因子TGF-β1在胚胎发育的调节中发挥了重要作用。     

维生素E对高脂血症小鼠血管内皮细胞凋亡相关蛋白基因表达的影响

目的研究维生素E对高脂血症小鼠血管内皮细胞凋亡相关蛋白基因表达的影响。方法选择性成熟雄性ICR小鼠50只,随机分为A、B、C、D、E组,每组10只,A、B、C、D组高脂饲料喂养,其中B、C、D组同时灌胃不同浓度维生素E,E组普通饲料喂养,连续喂养4周后处死小鼠,取主动脉内皮细胞测定凋亡相关蛋白基因的表达及静脉血脂的浓度。结果 B、C、D组中动脉血管内皮细胞中Bax蛋白基因mRNA水平的表达量明显低于A组（P〈0.05）,但高于E组（P〈0.05）;B、C、D组中Bcl-2蛋白基因mRNA水平的表达量明显高于A组（P〈0.05）,但低于E组（P〈0.05）;Bax与Bcl-2基因mRNA水平的表达量之间为负相关;B、C、D组中静脉血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）明显低于A组（P〈0.05）,除D组TC外均高于E组（P〈0.05）。结论维生素E能抑制高脂血症所导致的血管内皮细胞凋亡相关基因的表达并升高抗凋亡基因的表达,同时降低血脂。     

HPLC法测定复合维生素制剂中全反式维生素A棕榈酸酯的含量

摘 要 目的：建立复合维生素制剂中全反式维生素A棕榈酸酯的含量测定方法。方法: 采用HPLC法,色谱柱：Apollo Silica (250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相：正己烷 异丙醇（999.5∶0.5）;流速：1.0 ml·min^-1;柱温：30 ℃;检测波长：325 nm;进样量：100 μl。结果: 全反式维生素A棕榈酸酯的线性范围为0.2260～0.6780IU·ml^-1（相当于0.1243～0.3729 μg·ml^-1,r=0.999 9）,平均回收率为99.86%,RSD为0.64%（n=9）。结论: 本法简便、准确、灵敏度高、重复性好、通用性强,可用于复合维生素制剂中全反式维生素A棕榈酸酯的含量测定。     

维生素A缺乏及补充对小鼠子代发育的影响

目的通过建立小鼠维生素A缺乏模型,研究维生素A对小鼠胎仔发育的影响。方法对维生素A缺乏之孕鼠分不同阶段补充维生素A,观察胎鼠发育情况。结果维生素A缺乏使胎鼠的体重、身长、尾长明显小于正常对照组(P＜0.05),囟门矢义冠内0.268cm×0.228cm,明显大于对照组的0.206cm×0.078cm;骨异常率为33.33％,对照组仅为7.32％,胸骨异常率为48.72％,对照组为2.44％,差异均有显著性明显大于正常对照组,胎仔骨骼发育异常,神经反射发育迟缓,且出现脑膨出及细小肾等畸形。交配后第7天补充组明显好于缺乏组,但与正常对照组相比仍有差异。交配后第0天补充组与正常对照组无差异。结论揭示维生素A对胚胎的生长发育十分重要。     

国内维A酸制剂研究进展

维A酸又称维甲酸、全反式维A酸,是体内维生素A的中间代谢产物,主要影响骨的生长和上皮代谢,促进表皮细胞增生、分化、角质溶解、抑制肿瘤等[1].维A酸为一多烯酸结构的化合物,几乎不溶于水,遇光、空气和氧化剂等不稳定,易发生异构化反应,维A酸的这些特点,给制剂带来一定困难.为了增加维A酸制剂疗效,减少不良反应,提高生物利用度,本文对维A酸制剂研究情况综述如下.     

全反式维A酸对小鼠胚胎腭间充质细胞成骨分化的抑制作用及其机制

目的探讨全反式维A酸(atRA)对小鼠胚胎腭间充质细胞(MEPM)成骨分化的影响及其机制。方法分离培养MEPM细胞,在成骨诱导(OM)培养基中分别加入atRA 0.1和1.0μmol·L-1,分别于培养1,3,5,7和9 d用MTT法测定细胞存活率,化学比色法检测碱性磷酸酶(ALP)活性。培养21 d后,Von-Kossa染色观察矿化面积比。培养9 d后,逆转录PCR(RT-PCR)检测成骨相关基因Runx2、骨桥蛋白以及骨形态发生蛋白受体(Bmpr)1b,Bmpr2和Smad5 mRNA的表达水平。结果培养9 d后,与正常对照组相比,OM及OM+atRA 0.1和1.0μmol·L-1组细胞存活率明显降低(P<0.05);OM组细胞ALP活性最高,OM+atRA 1.0μmol·L-1组ALP活性明显低于OM组(P<0.05)。培养21 d后,Von-Kossa染色结果显示,OM+atRA 1μmol·L-1组矿化结节面积比为(3.56±1.24)%,明显低于OM组(10.33±2.29)%(P<0.05)。培养9 d后,OM组的Runx2相对表达各组内最高,OM+atRA 1.0μmol·L-1组与其相比约下调20%(P<0.05)。与正常对照组相比,OM组、OM+atRA 0.1和1.0μmol·L-1组骨桥蛋白mRNA表达明显升高(P<0.05)。OM组的Bmpr1b mRNA表达水平为正常对照组的1.6倍,OM+atRA 1.0μmol·L-1组的相对表达仅为OM组的33%(P<0.05)。OM+atRA 1.0μmol·L-1组Smad5 mRNA的表达水平明显低于OM组(P<0.05)。结论atRA能抑制MEPM的成骨分化,其作用机制可能与其下调Bmpr1b影响BMPR信号有关。     

抑制基因表达的维生素A酸

本文从维A酸的生物学作用、药理学作用、新维A酸类化合物的研制、维A酸类基因表达的抑制，维A酸类受体的发现，受体一基因复合物的形成诸方面阐述了维A酸及维A酸类化合物对细胞增殖分化的影响，介绍了近年来的研究进展，并探讨了维A酸类化合物的作用机理。     

大黄酸对脑出血大鼠神经损伤和细胞凋亡的影响

目的探讨大黄酸对脑出血（ICH）大鼠神经损伤和细胞凋亡的影响。方法在成年Sprague-Dawley大鼠尾状核注入collagenaseⅣ（0．05U／0．5uL）诱导ICH,假手术大鼠在相同位置注入相同剂量的氯化钠注射液。大鼠术后分别在3h．6h、12h腹腔注射大黄酸注射液（70mg／kg）或相同剂量的氯化钠注射液。Western blot法测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）活性,TUNEL标记凋亡细胞,阿朴吗啡诱导的旋转行为评价神经功能缺损。结果大鼠脑出血后3h和6h给予大黄酸注射液明显抑制casepase-3的激活（P〈0．001）,减少TUNEL阳性细胞数（P〈0．05）,减少阿朴吗啡诱导的旋转次数（P〈0．05）;脑出血后12h给药无效。结论脑出血后早期给予大黄酸,可能通过阻断凋亡通路起到神经保护作用。     

维生素C联合顺铂对肺癌A549细胞增殖、侵袭与凋亡的影响

目的探讨维生素C（VC）联合顺铂（DDP）对肺癌A549细胞增殖、侵袭与凋亡的影响。方法体外培养肺癌A549细胞,给予不同浓度（0.025、0.25、2.5 m M）VC联合5.0 mg·L^-1 DDP处理,采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）检测A549细胞的增殖情况,采用Transwell实验检测A549细胞的侵袭能力,采用碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（FCM）检测A549细胞的凋亡率。结果 VC与DDP联合用药可显著抑制A549细胞增殖,并呈浓度和时间依赖性,经VC与DDP联合处理的A549细胞,发生侵袭的细胞数目显著减少,细胞凋亡率显著升高。结论 VC与DDP联合用药可抑制肺癌A549细胞的增殖和侵袭能力,诱导细胞凋亡。     

Apoptosis induced by atRA in MEPM cells is mediated through activation of caspase and RAR.

We have previously demonstrated that all-trans retinoic (atRA) induced growth inhibition and apoptosis in mouse embryonic palate mesenchymal cells (MEPM). In the present study, we investigated the molecular mechanisms of atRA-induced apoptosis and its putative action pathway. atRA-induced apoptosis is associated with activation of the initiator caspase-9 and the effector caspase-3, but not of the effector caspase-8. A broad caspase inhibitor (z-VAD-fmk), caspase-9 inhibitor z-LEHD-fmk and caspase-3 inhibitor (z-DEVD-fmk) blocked atRA-induced DNA fragmentation and sub-G1 fraction, but not caspase-8 inhibitor z-IETD-fmk. We further showed that atRA dose-dependently promoted mRNA expression of retinoic acid receptor beta (RAR-beta) and gamma. A weaker increase in RAR-alpha mRNA was seen only at the highest concentration of atRA (5 muM). The pan RAR antagonist, BMS493, completely abrogated atRA-induced DNA fragmentation, Sub-G1 fraction, and caspase-3 activation. Taken together, these findings show that caspase-mediated induction of apoptosis by atRA is an RAR-dependent signaling pathway.     

抗坏血酸联合全反式维甲酸建立斑马鱼新药早期评价模型的研究

目的 以抗坏血酸和全反式维甲酸为工具药,建立斑马鱼药物早期评价模型,为药物毒性的早期筛查提供实验方法。方法 以斑马鱼胚胎培养用水为空白对照,二甲基亚砜为助溶剂,抗坏血酸为阴性药物,全反式维甲酸为阳性药物,对脱膜斑马鱼受精卵连续染毒5 d后,检测受精卵和幼鱼的死亡率,及幼鱼自由活动度、全身组织器官形态发育和骨骼发育情况。结果 0.5%二甲基亚砜和10 mg·L^-1抗坏血酸对斑马鱼致死作用较弱,且无明显发育毒性作用,可分别用作常规助溶剂和质量控制标志药;全反式维甲酸随给药浓度升高,致畸效应加强,很好地呈现了自主活动缓慢到丧失、形态发育轻微异常到全身各组织器官严重畸形、骨骼矿化正常到抑制的全效应谱,为药物毒性的评价提供了很好的参照,其中7.5 μg·L^-1可作为药物评价中阳性对照选用浓度。结论 用抗坏血酸和全反式维甲酸建立的斑马鱼模型设计合理,可用于药物毒性的早期评价。     

维甲酸固体脂质纳米粒冷冻干燥工艺研究

选用不同辅料作为冻干保护剂，制备维甲酸固体脂质纳米粒冻干品，并考察不同制品的外观、粒径、包封率。以冻干品外观、再分散后的粒径和包封率为评价指标，筛选保护剂的优化处方。结果表明，选择蔗糖、蔗糖＋海藻糖、甘露醇＋海藻糖、甘露醇＋蔗糖为冻干保护剂，冻干纳米粒再分散后粒径减小，包封率与冻干前相比有所降低，含海藻糖处方可大大加快纳米粒的再分散速率，4℃和20℃放置3个月稳定性良好。     

Retinoic acid influences the embryoid body formation in mouse embryonic stem cells by induction of caspase and p38 MAPK/JNK‐mediated apoptosis

Although all‐trans retinoic acid (RA), the oxidative metabolite of vitamin A, is essential for normal development, high levels are teratogenic in many species. RA results in immediate effects on the preimplantation embryo and on blastocyst development in vitro and in vivo. To further elucidate the cellular mechanisms of early postimplantation embryo development induced by RA, we present an embryonic cell line, B5, as a candidate system for the investigation of these processes. We used undifferentiated ES cells as the model, which is from the undifferentiated status to differentiated status [embryoid body (EB) formation] mimicking postimplantation embryo development (egg‐cylinder stage of embryo formation) to clarify the cellular mechanism of action of RA in the implanted blastocysts and cell apoptosis following the series of exposures to differing RA concentrations. Using an in vitro model, we identified the impact of RA on undifferentiated embryonic stem (ES) cells, including inhibition of cell proliferation and induction of cell apoptosis. JNK, P‐38 and caspase activation were shown in the nature of RA‐triggered apoptotic signaling in ES cells. The carry‐on influences of RA on the ES cell were shown in the formation of EB from the pretreated ES cells. RA resulted in apparent impact on undifferentiated ES cells in vitro, with increased numbers of apoptotic cells initially and inhibited cell proliferation, which led to decreased size of EB. The process of EB formation (mimicking the early postimplantation embryo development) is regulated by RA‐induced apoptosis through the activation of caspase and P38 MAPK/JNK pathway. © 2011 Wiley Periodicals, Inc. Environ Toxicol, 2013.     

Notch通路及维甲酸与肾纤维化研究进展

摘要：维甲酸（retinoic acid,RA）对肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)存在着重要的影响,Notch信号途径在肾纤维化中发挥了关键作用,本文就维甲酸对肾纤维化与Notch通路的影响做综述,探索维甲酸干预Notch途径能否成为新的抗肾纤维化策略。     

全反式维甲酸诱导小鼠间充质干细胞C3H10T1/2表达碱性磷酸酶

目的分析全反式维甲酸对小鼠间充质干细胞C3H10T1/2表达碱性磷酸酶的影响。方法全反式维甲酸（10-6M）、维甲酸核受体RAR的激动剂Ch55与MAPK信号通路的阻滞剂处理C3H10T1/2细胞,钙钴染色检测碱性磷酸酶活性,定量RT-PCR方法检测量效关系以及时相分布;采用萤光素酶报告基因检测碱性磷酸酶的启动子是否接受维甲酸的调控。结果维甲酸处理C3H10T1/2细胞24h即能够明显上调ALP的活性,具有明显的剂量依赖特性,与RAR有关,无MAPK信号通路的参与,在其转录起始位点上游-512bp的范围内检测到核受体RAR的调控位点。结论维甲酸能够通过核受体RAR直接上调碱性磷酸酶的转录水平。     

白藓碱单用及联合全反式维甲酸对急性髓性白血病细胞的分化治疗作用

目的探索白藓碱单用及联合全反式维甲酸(ATRA)对急性髓性白血病细胞(AML)的分化治疗作用。方法不同浓度的白藓碱单独或联合ATRA作用于3株不同AML亚型的细胞株(NB4、U937和HL60),利用细胞计数考察细胞增殖抑制情况;通过PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡;检测细胞表面抗原CD11b和细胞核形态考察细胞分化;RT-PCR和Western blotting法观察细胞分化相关转录因子CEBPβ和PU.1的m RNA和蛋白水平。结果白藓碱单用及联合ATRA均能明显诱导AML细胞发生分化,表现为抑制细胞增殖、增加细胞表面CD11b的表达,使细胞核形态出现马蹄形甚至分叶形;白藓碱单用及联合ATRA均能在m RNA水平和蛋白水平上增加分化相关转录因子CEBPβ和PU.1的表达。结论白藓碱能够单独或协同ATRA诱导不同AML亚型细胞发生分化,并且其诱导分化作用可能是通过调控分化相关转录因子CEBPβ和PU.1引起的。     

维甲酸受体功能及其在肿瘤治疗中的应用

目的对维甲酸受体功能、分子机制及其在肿瘤治疗中的应用进行综述,为以维甲酸受体为靶点的肿瘤治疗和新药研发提供参考。方法检索近年来国内外有关维甲酸受体的研究文献,针对其功能、分子机制以及肿瘤治疗方面的应用,进行分析和总结。结果维甲酸受体通过转录调节、翻译调节和磷酸化调节与其他多条信号通路相互联系、共同调节。维甲酸受体在肿瘤治疗中起到非常重要的作用,维甲酸类似物在诱导多种肿瘤细胞分化、逆转肿瘤细胞的恶性表型方面效果显著。结论维甲酸受体的调节过程极为复杂,因此在肿瘤发生发展及治疗中的作用还有待进一步的研究。     

Microbial Biotransformation of Retinoic Acid by Cunninghamella echinulata and Cunninghamella blakesleeana

Vitamin A (retinol) is needed by higher animals for the maintenance of normal epithelium and growth, and retinoic acid (1) has been proposed to be the active metabolite. Microbial models are useful for the study of mammalian metabolism of xenobiotics. Two species of the fungal genus Cunninghamella afforded products of greater polarity than 1 when fed 1 in a two-stage fermentation procedure. The products obtained were principally the result of oxidation of the trimethylcyclohexenyl ring. Although most of the isolated metabolites of 1 have been previously seen in mammalian studies, two novel compounds, 2-hydroxyretinoic acid (2) and 2,3-dehydro-4-oxoretinoic acid (4), were isolated.