葡茶多酚对尿酸诱导的肾小管上皮细胞TGF-β1表达的影响

目的研究葡茶多酚对尿酸诱导的肾小管上皮细胞TGF-β1表达的影响。方法培养分离肾小管上皮细胞,分对照组、尿酸组、葡茶多酚组（在尿酸干预基础上,分别加入终浓度为0．2、0．4、0．8mg／L的葡茶多酚）共5组,MTT法测细胞增生率、TUNEI。测凋亡率、ELISA测TGF-β1分泌,RT-PCR测TGF-β1mRNA表达。结果与尿酸组相比,加入葡茶多酚干预后,肾小管上皮细胞增生率明显增高（P〈0．01）,葡茶多酚干预浓度愈高,肾小管上皮细胞增生率则愈高;葡茶多酚各浓度组在任一时间点凋亡率均明显低于尿酸组,差异有显著意义;葡茶多酚各浓度组之间相比,浓度愈高,则培养细胞凋亡率愈低,差异有显著意义,尿酸作用时间愈长,则培养细胞凋亡率愈高;葡茶多酚各浓度组在任一时间点培养上清TGF-β1浓度均明显降低,差异有显著意义;葡茶多酚各浓度组之间相比,浓度愈高,则培养上清TGF-β1浓度愈低,差异有显著意义,尿酸作用时间愈长,则培养上清TGF-β1浓度愈高;葡茶多酚各浓度组在任一时间点培养上清TGF-β1mRNA表达均明显降低,差异有显著意义;葡茶多酚各浓度组之间相比,浓度愈高,则培养上清TGF-β1mRNA表达愈低,但0．2mg／L葡茶多酚组与0．4mg／L葡茶多酚组、0．4mg／L葡茶多酚组与0．8mg／L葡茶多酚组差异无显著意义,0．2mg／L葡茶多酚组与0．8mg／L葡茶多酚组之间差异有显著意义,尿酸作用时间愈长,则TGF-β1mRNA表达愈高。结论高尿酸能抑制肾小管上皮细胞的增生,减少肾小管上皮细胞的凋亡及TGF-β1的表达与分泌。     

加味当归补血汤对肾小管上皮细胞TGF-β1／SMADs信号转导通路的影响

目的：观察加味当归补血汤对转化生长因子β1（TGF-β1）刺激的小鼠肾小管上皮细胞Smad3、Smad4、Smad7信号通路的影响，探讨该方防治肾间质纤维化的细胞分子生物学机制。方法：原代培养BalB／C小鼠肾小管上皮细胞．用TGF-β（1ng／ml）刺激24h，加味当归补血汤及洛汀新含药血清干预。共分6组：正常组、模型组、加味当归补血汤低中高剂量组（含药血清浓度分别为2．5％、5％、10％）、洛汀新组，观察各组细胞形态学变化，检测细胞Smad3、Smad4、Smad7的mRNA和蛋白质表达情况（PT—PCR、Western-Blotting）。结果：（1）TGF-β1刺激后，肾小管上皮细胞部分形态发生变大，伸长，呈梭形，经中药加味当归补血汤和洛汀新干预后，细胞形态又恢复正常；（2）TGF-β1刺激肾小管上皮细胞后，Smad3、Smad4 mRNA和蛋白质表达显著增加，Smad7 mRNA和蛋白质则显著减少（P〈0、05～0、01）；（3）各浓度加味当归补血汤能显著下调异常增高的Smad3，上调Smad7的基因和蛋白质表达水平（P〈0．05～0．01），能显著下调Smad4基因表达。结论：加味当归补血汤防治肾间质纤维化可能与调控肾小管上皮细胞TGF-β1／Smads信号转导途径相关。     

AngⅡ对人肾小管上皮细胞TSP1、TGF-β1表达的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ（angiotensin-Ⅱ,AngⅡ）对人肾小管上皮细胞（HK-2）血小板反应蛋白1（TSP1）、转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响及其机制。方法①以AngⅡ零浓度作为空白对照,观察低、中、高浓度（终浓度分别为10^-8、10^-7、10^-6mol／L）的AngⅡ对HK-2 TSP1、TGF-β1 mRNA和蛋白表达的影响;②以0h为空白对照,观察AngⅡ（10^-7mol／L）在0、3、6、12、24h对HK-2 TSP1、TGF-β1 mRNA及蛋白表达的影响;③观察TSP1抑制剂G肽对AngⅡ刺激的HK-2总TGF-β1和活性TGF-β1表达的影响。采用Real Time PCR法检测TSP1和TGF-β1的mRNA表达;采用Western blot检测TSP1和TGF-β1的蛋白表达;采用ELISA法检测各组总TGF-β1、活性TGF-β1表达。结果与对照组比,低、中、高浓度AngⅡ均增加了HK-2细胞TSP1 mRNA表达和TGF-β1 mRNA表达,同时伴有TSP1蛋白和TGF-β1蛋白表达的增加。终浓度为10^-7mol／L的AngⅡ以时间依赖的方式促进HK-2细胞TSP1、TGF-β1 mRNA表达,同时伴TSP1和TGF-β1的蛋白表达增加,其中TSP1的表达峰值在6h,TGF-β1的表达峰值在12h。与对照组比较,10^-7mol／L的AngⅡ上调总TGF-β1、活性TGF-β1表达,10μmol／L的G肽仅下调活性TGF-β1表达,对总TGF-β1表达无影响。结论AngⅡ能促进人肾小管上皮细胞TSP1、TGF-β1表达。TSP1依赖的TGF-β1活化可能是AngⅡ诱导的肾小管上皮细胞TGF-β1活化的重要途径。     

转化生长因子β1对肾小管上皮细胞中结缔组织生长因子基因启动子活性的影响

目的探讨转化生长因子[β1（TCF-β1）对人近端肾小管上皮细胞系HK-2中结缔组织生长因子（CTGF）基因启动子活性的调控作用，以及丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）途径对该生长因子作用的影响。方法构建含有人类CTGF基因启动子的报告基因pCTGF-luc，将其瞬时转染HK-2细胞。通过检测荧光素酶的活性观察TGF-β1和MAPK途径抑制剂对CTGF基因启动子活性的影响。结果TGF-β1以剂量和时间依赖方式上调HK-2中CTGF基因启动子的活性。最佳刺激浓度是5ng／ml，最佳刺激时间为12h，荧光素酶相对活性分别为对照组的1．82倍和2．10倍（P〈0．05）。应用PD98059、SB203580和SP600125分别特异性抑制MAPK途径的胞外信号调节蛋白激酶（ERK）、蛋白激酶p38（p38MAPK）和c-Jun-氨基末端激酶（JNK）通路，对TGF-β1上调CTGF启动子活性的作用有不同影响。PD98059显著增加HK-2中pCTGF-luc的基础活性．并在一定浓度范围内（0．5～10μmol／L）促进TGF-β1的上调作用。SB203580对pCTGF-luc基础活性无影响，但以剂量依赖方式显著抑制TGF-β1的激活效应。而SP600125对基础状态和TGF-β1刺激下CTGF基因启动子活性无影响。结论TGF-β1以剂量和时间依赖方式上调HK-2中CTGF基因启动子活性，在转录水平调节CTGF表达。MAPK途径的ERK和p38MAPK通路可影响TGF-β1的这一调控作用。     

结缔组织生长因子介导转化生长因子促肾小管上皮细胞转分化

目的 探讨结缔组织生长因子(CTGF)在体外能否够促进肾小管上皮细胞的表型转化，以及这一作用与转化生长因子β(TGF—β)的关系。方法 将NRK52E肾小管上皮细胞株细胞分组处理，采用RT—PCR和Western印迹的方法检测CTGF mRNA水平和蛋白水平的表达；Western印迹和流式细胞仪观察α—SMA的表达。结果 正常体外培养的NRK52E肾小管上皮细胞表达少量的CTGF，加入TGF—β1 10ng／ml刺激48h后，CTGFmRNA和蛋白水平的表达都显著升高，α—SMA蛋白表达和荧光强度也明显增加；同时加入TGF—β1中和抗体后，CTGF和α—SMA的表达都显著降低。经过反义寡核苷酸处理48h，几乎检测不到CTGF mRNA和蛋白的表达，并且CTGF反义寡核苷酸可以基本消除TGF—β1引起的细胞α—SMA表达增强，而相同时间和剂量的CTGF正义寡核苷酸不能引起相应的改变。结论 CTGF和TGF—β1都可以促使体外培养的肾小管上皮细胞α-SMA表达增强，并且CTGF作为TGF—β1的下游效应介质而起作用，提示CTGF参与了肾小管上皮细胞的转分化。     

Numb基因在大鼠肾小管上皮细胞转分化过程中的作用

目的 探讨Numb在大鼠肾小管上皮细胞转分化过程中的作用。 方法 重组人转化生长因子β1（TGF-β1）刺激大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E细胞),不同浓度TGF-β1 （0、1、5、10、15、20 μg/L）作用48 h与TGF-β1 10 μg/L作用不同时间(0、24、48、72 h)后,采用RT-PCR、Western印迹和免疫荧光染色分别检测NRK52E细胞内E钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Numb 的表达。采用RNA干扰技术下调Numb表达,Western印迹观察改变Numb水平对E-cadherin、α-SMA蛋白水平的影响。 结果 TGF-β1以剂量及时间依赖的方式诱导NRK52E细胞E-cadherin 蛋白表达下调,α-SMA 蛋白表达增高。Numb蛋白的表达随TGF-β1浓度的增加而增高,在5、10、15和20 μg/L时分别为0 μg/L时的1.33倍（P = 0.024)、1.39倍（P = 0.035）、1.45倍（P = 0.025）和1.51倍（P = 0.000)。而Numb蛋白和mRNA的表达亦随TGF-β1作用时间的延长而增高,作用24 h、48 h、72 h,Numb蛋白分别为0 h的1.48倍（P = 0.046)、1.54倍（P = 0.011）、1.79倍（P = 0.028）,Numb mRNA分别为0 h的1.56倍（P = 0.012)、1.82倍（P = 0.008）、1.82倍（P = 0.002）;同时Numb的分布也发生了改变,大量聚集在胞质中。下调Numb表达可以显著抑制TGF-β1诱导的α-SMA表达上调（为Numb表达正常时的18.1%,P = 0.004）、E-cadherin表达下调（为Numb表达正常时的2.19倍,P = 0.004）。 结论 Numb可以促进肾小管上皮细胞发生转分化。     

PPARγ活化对TGF-β1诱导肾小管上皮细胞趋化因子表达的干预作用

目的：观察PPARγ活化对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导的肾小管上皮细胞炎症相关趋化因子表达的影响,探讨其在肾脏纤维化中的干预作用。方法：体外培养肾小管上皮细胞HK-2,LDH法检测15d-PGJ2和TGL对HK-2的细胞毒性,应用不同浓度的15d-PGJ2和TGL作用于TGF-β1诱导下的HK-2细胞,应用实时荧光定量PCR技术和ELISA方法检测趋化因子单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、白细胞介素-8（IL-8）表达的变化。结果：5μmol/L15d-PGJ2和2.5μmol/LTGL不影响HK-2细胞MCP-1和IL-8mRNA基础表达和蛋白分泌。TGF-β1作用24h时,2.5μmol/L和5μmol/L15d-PGJ2及2.5μmol/LTGL均能有效干预TGF-β1诱导的MCP-1mRNA表达和蛋白的分泌（P〈0.05）。IL-8的表达与MCP-1相似,2.5μmol/L和5μmol/L15d-PGJ2能显著抑制TGF-β1诱导的IL-8表达,TGF-β1诱导24h时2.5μmol/LTGL能显著抑制IL-8mRNA表达（P〈0.05）。结论：PPARγ激动剂15d-PGJ2和TGL作用均能有效干预TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞趋化因子MCP-1和IL-8的表达,可能具有有效干预肾间质炎症作用。     

激活蛋白1诱饵寡核苷酸对肾小管上皮细胞转化生长因子β1和白介素1β基因及蛋白表达的影响

核转录因子激活蛋白1（AP-1）在肾小管上皮细胞的活化、炎症介质产生的信号转导中起着重要作用。诱饵（decoy）核酸技术作为一个新的基因治疗策略．可特异性地阻断核转录因子的活性而抑制下游基因的表达．也极可能成为有效治疗肾脏疾病的新方法。本研究借助阳离子脂质体介导的基因转染技术，     

转化生长因子-β_1诱导人肾小管上皮细胞增殖的实验研究

目的：通过观察转化生长因子-β1（TGF-β1）对人肾小管上皮细胞（HK-2）增殖的影响,探讨TGF-β1在肾间质纤维化形成方面的作用。方法：将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12（1∶1）培养基培养;实验分为空白对照组、TGF-β1诱导组（TGF-β11、3、5、8、10ng/ml）。在倒置显微镜下观察各组细胞形态的改变,并通过MTT法检测TGF-β1对细胞增殖的影响。结果：TGF-β1能显著诱导人肾小管上皮细胞增殖,刺激细胞纤维样改变,与空白对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）,其作用随着药物浓度增大、处理时间延长而呈现一定的上升趋势。结论：TGF-β1能够诱导人肾小管上皮细胞增殖,具有促进肾间质纤维化形成的作用。     

游离脂肪酸对培养肾小管上皮细胞增殖和转化生长因子-β1分泌的影响

目的:探讨游离脂肪酸(FFAs)在肾小管间质纤维化中的作用.方法:以去脂牛血清白蛋白(d-BSA)为油酸(OA)载体,用不同浓度OA刺激培养肾小管上皮细胞(RTECs),以不加d-BSA及只加普通培养液的细胞作对照组,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测RTECs增殖能力,反转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测RTECs TGF-β1 mRNA的表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测培养上清TGF-β1水平.结果:d-BSA组与空白对照组RTECs的增殖、TGF-β1 mRNA表达及蛋白分泌比较无统计学差异(P＞0.05),而不同浓度OA组与空白对照组比较有统计学差异(P＜0.05),且随差OA浓度增加,对RTECs的增殖抑制以及对TGF-β1 mRNA表达及蛋白分泌的促进作用有增强趋势.结论:FFAs可能通过抑制RTECs的生长并促进其TGF-β1的表达和分泌从而在肾小管间质纤维化(RTF)的发生发展中起着一定的作用.     

低氧对肾上管上皮细胞转化生长因子β1表达及增殖的影响

目的 探讨低氧在肾脏疾病进展中的作用机制。方法 将肾小管上皮细胞MDCK分别置于低氧3％和正常氧18％条件下，培养24，48，72和96h。应用台盼蓝排除法计数活细胞，观察细胞增殖；应用流式细胞仪观察细胞周期；以及半定量RT－PCR检测MDCK细胞TGF－β1mRNA的表达。结果 低氧可促进MDCK细胞增殖，G0－G1期细胞细胞减少，G2－M期细胞比例增多。低氧可促进TGF－β1 mRNA的表达，而且呈一定时间相关性。结论 慢性低氧致肾间质纤维化的机制与低氧引起的细胞增殖和细胞周期的改变有关，而这些改变又可能与低氧引起的细胞分泌生长因子改变有关。     

游离脂肪酸对培养肾小管上皮细胞增殖和转化生长因子-β_1分泌的影响

目的:探讨游离脂肪酸(FFAs)在肾小管间质纤维化中的作用。方法:以去脂牛血清白蛋白(d-BSA)为油酸(OA)载体,用不同浓度OA刺激培养肾小管上皮细胞(RTECs),以不加d-BSA及只加普通培养液的细胞作对照组,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测RTECs增殖能力,反转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测RTECs TGF-β1mRNA的表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测培养上清TGF-β1水平。结果:d-BSA组与空白对照组RTECs的增殖、TGF-β1mRNA表达及蛋白分泌比较无统计学差异(P>0.05),而不同浓度OA组与空白对照组比较有统计学差异(P<0.05),且随差OA浓度增加,对RTECs的增殖抑制以及对TGF-β1mRNA表达及蛋白分泌的促进作用有增强趋势。结论:FFAs可能通过抑制RTECs的生长并促进其TGF-β1的表达和分泌从而在肾小管间质纤维化(RTF)的发生发展中起着一定的作用。     

黄芪对人肾小管上皮细胞细胞外基质分泌的影响及其机制探讨

目的：探讨黄芪对人肾小管上皮细胞细胞外基质分泌的影响及甚可能机制。方法：将体外培养的人肾小管上皮（HK-2）细胞株转板至细胞融合并同步后,分为空白对照组、转化生长因子-β（TGF-β1）刺激组（5ng／ml）、TGF-β1加黄芪100μg／ml组、TGF-β1加黄芪1mg／ml组。作用24h后半定量逆转录多聚酶链反应（RT—PCR）检测纤维连接蛋白（FN）及纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）mRNA;酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测上清液中FN的含量;westernblot检测PAI-1的表达。结果：（1）HK-2细胞表达少量FN和PAI-1;（2）HK-2细胞在5ng／ml TGF-β1．刺激下分泌FN、PAI—1mRNA及FN、PAI-1蛋白表达明显增加,与空白对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）;（3）HK-2细胞在TGF-β1和不同浓度的黄芪作用后,可使FN、PAI-1mRNA及蛋白表达减少,与TGF-β1组比较差异有统计学意义（P〈0．01）,尤以黄芪1mg／mi组为甚。结论：TGF—β1可促进HK-2细胞分泌FN和PAI—1,黄芪可部分拮抗TGF-β1的上述效应。这可能是黄芪预防或改善肾小管间质病变的作用机制之一。     

低氧对肾小管上皮细胞转化生长因子β1表达及增殖的影响

目的探讨低氧在肾脏疾病进展中的作用机制.方法将肾小管上皮细胞MDCK分别置于低氧3%和正常氧18%条件下,培养24,48,72和96 h.应用台盼蓝排除法计数活细胞,观察细胞增殖;应用流式细胞仪观察细胞周期;以及半定量RT-PCR检测MDCK细胞TGF-β1mRNA的表达.结果低氧可促进MDCK细胞增殖,G0-G1期细胞比例减少,G0-M期细胞比例增多.低氧可促进TGF-β1 mRNA的表达,而且呈一定时间相关性.结论慢性低氧致肾间质纤维化的机制与低氧引起的细胞增殖和细胞周期的改变有关,而这些改变又可能与低氧引起的细胞分泌生长因子改变有关.     

Lefty蛋白拮抗人肾小管上皮细胞凋亡的研究

目的 探讨Lefty蛋白对转化生长因子β1（TGF-β1）介导的人肾小管上皮细胞（HK-2）凋亡的影响。方法采用脂质体将人Lefty质粒转染入离体培养的HK-2细胞,使其稳定表达Lefty蛋白。对正常对照组（A组）和Lefty转染组（B组）细胞给予10ng／mlTGF-β1刺激后,采用Westernblot法检测各组细胞第6、12、24、48小时磷酸化Smad2／3（p-Smad2／3）表达水平,并同时采用流式细胞术检测各组细胞凋亡程度。结果TGF131刺激后,A组p-Smad2／3表达水平和细胞凋亡程度较刺激前升高（P〈0．05）,而B组上述指标均低于A组（P〈0.05）。结论Lefty蛋白可拮抗TGF-19J／Smad信号转导通路,减轻TGF-β1介导的人肾小管上皮细胞凋亡。     

TGF-β1诱导鼠肝细胞凋亡信号转导机制的研究

目的本研究旨在明确TGF-β1诱导鼠肝细胞凋亡与Caspase-3及Caspase-8的关系。方法通过50％CCl4腹腔注射，用8周时间诱发BALB／c小鼠形成肝硬化模型。应用改良的胶原酶原位灌注法分离小鼠的肝细胞。为检测TGF-β1(5ng／ml)诱导凋亡，利用1．5％的琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带，应用DNA荧光染料Hoechst 33342对正常肝细胞进行染色，并在荧光显微镜下观察比较Caspase-3和Caspase-8在TGF-β1诱导的凋亡中的作用。结果胶原酶原位二步灌流法分离肝细胞活率为95．2％。正常肝细胞予以TGF-β1处理后，应用1．5％的琼脂糖凝胶电泳可以发现具有凋亡特征的梯形条带。硬化肝细胞则很少出现梯形条带。经TGF-β1处理的鼠正常肝细胞应用Hoechst染色发现，其凋亡率明显高于未处理组，分别为58．76％和18．03％，两组具有明显的差别。但凋亡可以被Caspase-3和Caspase-8抑制剂阻止。结论硬化肝细胞不能象正常肝细胞那样发生TGF-β1诱导的凋亡，提示硬化肝细胞的抑制性生长调控机制已受损。TGF-β1通过Caspase-3和Caspase-8的活化诱导鼠肝细细胞产生凋亡。     

整合素连锁激酶介导转化生长因子β1上调肾小管上皮细胞表达纤连蛋白的研究

目的 研究转化生长因子β1（TGF-β1）诱导肾小管上皮细胞合成纤连蛋白（FN）与整合素连锁激酶（ILK）表达的关系.方法 培养人肾小管上皮细胞（HKC）,用蛋白印迹方法检测TGF-β1诱导HKC合成FN和表达ILK的作用.通过基因转染的方法,将含人野生型ILK基因的表达质粒pCMV-wtILK和无激酶活力的人ILK基因表达质粒pCMV-kdILK转染HKC细胞,观察ILK过度表达和抑制ILK活力对TGF-β1诱导的HKC合成FN的影响.结果 TGF-β1能够刺激HKC合成FN,其作用呈剂量依赖性.TGF-β1刺激8 h即可上调HKC细胞ILK的表达,与TGF-β1所致的FN合成的增加相一致.转染pCMV-wtILK质粒的HKC细胞,其FN的表达呈增加趋势.转染pCMV-kdILK抑制ILK的活力能够显著拮抗TGF-β1刺激HKC表达FN的作用.结论 TGF-β1刺激肾小管上皮细胞FN合成与其所致的ILK表达密切相关.抑制ILK的活力能够拮抗TGF-β1导致的FN合成.     

MG-132对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化与凋亡的影响

目的：探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对体外培养的人近端肾小管上皮细胞（HK-2）转分化和凋亡的影响及其机制。方法：体外培养HK-2细胞,随机分组：对照组,TGF-β1刺激组（5ug／L）,MG-132组（2．5μmol／L）,MG-132＋TGF-融组（MG-132 2.5μmol／L孵育30min后再加TGF-β1 5μg／L）。培养24h后收集细胞,RT-PCR法检测Smurf1、Smurf2和Smad7 mRNA的表达;Western免疫印迹检测Smurf1、Smurf2、Smad7和P-IκB-α和IκB-α蛋白表达;免疫组织化学检测胞浆中Fn和α-SMA的表达;Hoechst 33258染色免疫荧光检测细胞凋亡形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：TGF-β1刺激组HK-2 Smurf1、Smurf2 mRNA及蛋白表达水平较对照组高（P〈0．05）,但Smad7 mRNA及蛋白表达水平较对照组低（P〈0．05）,且胞浆中FN和α-SMA水平较对照组高（P〈0．05）。MG-132＋TGF-β1组与TGF-β1刺激组比较,Smurf1、Smurf2 mRNA表达降低（P〈0．05）,Smad7 mRNA略升高（P〉0．05）,而Srnad7蛋白明显升高（P〈0．05）,胞浆中Fn和α-SMA表达减少。MG-132组、MG-132＋TGF-β1组分别与对照组及TGF-β1组比较,P-IκB-α和IκB-α蛋白浓度升高,细胞凋亡率增加,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：MG-132可抑制TGF-132诱导的HK-2 Smurf1、Smurf2的表达,促进Smad7表达,抑制其降解,减轻FN和α-SMA的表达,从而抑制HK-2转分化;另-方面,MG132可能通过抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞NF-κB活化促进HK-2细胞凋亡。     

MG132对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞Smad泛素化调节因子2和Smad7的影响

近来发现在肾纤维化模型（UUO）中Smad泛素化调节因子2（Smad ubiquitin regulatory factor2，Smurf2）表达增强，Smad7蛋白表达明显降低，Smurf2能通过泛素蛋白酶体途径增加Smad7降解。Smad7是TGF-β信号转导途径中的主要抑制性调控蛋白，因此阻断Smurf2的表达，有可能会起到抗纤维化的作用。MG132是一种有效、可逆的醛基肽类特异性蛋白酶体抑制剂，能阻断泛素蛋白酶体通路。我们主要研究MG132对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞（HKC）表达Smurf2、Smad7及Ⅳ型胶原的影响，为肾纤维化的防治寻找新的靶点。     

TGF-β1诱导鼠肝细胞凋亡信号转导机制的研究

目的　本研究旨在明确TGF β1诱导鼠肝细胞凋亡与Caspase 3及Caspase 8的关系。方法　通过 5 0 ?l4腹腔注射 ,用 8周时间诱发BALB/c小鼠形成肝硬化模型。应用改良的胶原酶原位灌注法分离小鼠的肝细胞。为检测TGF β1(5ng/ml)诱导凋亡 ,利用 1.5 %的琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带 ,应用DNA荧光染料Hoechst 33342对正常肝细胞进行染色 ,并在荧光显微镜下观察比较Caspase 3和Caspase 8在TGF β1诱导的凋亡中的作用。 结果　胶原酶原位二步灌流法分离肝细胞活率为 95 .2 %。正常肝细胞予以TGF β1处理后 ,应用 1.5 %的琼脂糖凝胶电泳可以发现具有凋亡特征的梯形条带。硬化肝细胞则很少出现梯形条带。经TGF β1处理的鼠正常肝细胞应用Hoechst染色发现 ,其凋亡率明显高于未处理组 ,分别为 5 8.76 %和 18.0 3% ,两组具有明显的差别。但凋亡可以被Caspase 3和Caspase 8抑制剂阻止。 结论　硬化肝细胞不能象正常肝细胞那样发生TGF β1诱导的凋亡 ,提示硬化肝细胞的抑制性生长调控机制已受损。TGF β1通过Caspase 3和Cas pase 8的活化诱导鼠肝细细胞产生凋亡。