γ刀照射后胶质瘤细胞抑癌基因p16表达的变化

目的:观察γ刀对体外培养的胶质瘤C6细胞照射后,凋亡细胞中抑癌基因产物P16蛋白表达水平的变化.方法:体外培养胶质瘤C6细胞,经Leksell γ刀照射,体外培养48 h,应用免疫组化S-P法及计算机图像分析检测γ刀照射前后C6细胞P16蛋白表达水平.结果:5.00、6.22 Gy组γ刀照射后,培养48 h的C6细胞P16蛋白表达水平明显升高(细胞灰度值分别为155.4±2.0、124.9±7.1),与对照组(细胞灰度值为167.1±6.2)比较,差异有显著性(P<0.01).结论:γ刀诱导C6细胞凋亡的机理可能与激活P16蛋白表达水平有关.     

PTEN基因转染对胶质瘤细胞粘附力的影响

目的：观察转入正常PTEN基因的胶质瘤细胞体外粘附力改变，探索PTEN基因对胶质瘤细胞影响方式。方法：构建携带正常PTEN基因的pcDNA3．1／Hygro(-)真核质粒载体。并用之转染PTEN失活的U251细胞系，采用层粘连蛋白、纤粘连蛋白粘附模型，观察转染前后的细胞的粘附力的改变。结果：转染PTEN基因可以明显抑制U251细胞的粘附力。结论：PTEN基因可通过抑制胶质瘤细胞本身的粘附力而达到抑制肿瘤生长     

脑胶质瘤p16基因转染对细胞生长及放射敏感性的影响

探索ｐ１７基因在脑胶质瘤发生发展过程中的作用及ｐ１６基因与肿瘤细胞放射敏感性间的关系。方法将外源野生型ｐ１６基因导入胶质瘤细胞珠Ｕ２５１、Ｃ６，筛选阳性克 时以空载体质粒ｐＣＤＮＡ３为对照，免疫组化检测ｐ１６基因表达，用ＭＴＴ法测定细胞生长曲线及肿瘤杀伤率。结果转染Ｐ１６基因的Ｕ２５１、Ｃ６细胞有外源Ｐ２１６基因的整合及表达，克隆形成率减少，生长速度明显减慢，对辐射的敏感性增强。结论导入外源野生型     

脑胶质瘤p16基因转染对细胞生长及放射敏感性的影响

目的　探索p16基因在脑胶质瘤发生发展过程中的作用及p16基因与肿瘤细胞放射敏感性间的关系。方法　将外源野生型p16基因导入胶质瘤细胞株U251、C6,筛选阳性克隆。同时以空载体质粒pCDNA3为对照,免疫组化检测p16基因表达,用MTT法测定细胞生长曲线及肿瘤杀伤率。结果　转染p16基因的U251、C6细胞有外源p16基因的整合及表达,克隆形成率减少,生长速度明显减慢,对辐射的敏感性增强。结论　导入外源野生型p16基因可抑制胶质瘤细胞恶性增殖,提高胶质瘤细胞对辐射的敏感性。     

PTEN基因在脑胶质瘤中的表达

目的探讨抑癌基因PTEN在脑胶质瘤组织中的表达情况及其临床意义。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测45例胶质瘤组织与23例正常脑组织PTEN基因外显子1-9、5-8 mRNA表达情况。结果在45例脑胶质瘤组织中,外显子1-9 PTEN mRNA相对表达量为0.40±0.19,外显子5-8 PTEN mRNA相对表达量为0.38±0.16。在正常脑组织中,外显子1-9 PTEN mRNA相对表达量为0.58±0.21,外显子5-8 PTENmRNA相对表达量为0.64±0.17。脑胶质瘤组织和正常脑组织中PTEN mRNA表达水平有显著性差异(t=3.61、6.21,P<0.01)。PTEN mRNA的表达水平与病人性别、年龄无关(t或t′=0.18~0.70,P>0.05)。但随着临床分期的增高其表达水平明显降低(t或t′=4.16、4.69,P<0.01)。结论PTEN mRNA表达水平的异常在脑胶质瘤的发生和发展过程中起着重要作用。     

PTEN基因转染对人膀胱癌细胞BIU-87凋亡的影响

目的：研究外源性抑癌基因PTEN转染对人膀胱癌细胞系BIU-87凋亡的影响,探索膀胱癌基因治疗的新途径.方法：将携有PTEN基因的真核表达载体体外转染BIU-87细胞,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,用逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）检测PTEN的表达情况,应用细胞原位凋亡检测试剂盒和流式细胞仪分别研究PTEN基因转染前、后膀胱癌细胞凋亡的变化.结果：转染PTEN基因的膀胱癌细胞系BIU-87中PTEN mRNA能稳定表达,肿瘤细胞凋亡明显增多,与对照组比较有显著性差异.结论：转染外源性PTEN基因能显著诱导膀胱癌细胞凋亡,从而达到抑制肿瘤发生、发展的目的.     

脑胶质瘤放射敏感性基因研究的进展

脑胶质瘤是颅内常见的恶性肿瘤之一.在脑胶质瘤的综合治疗方法中,放射治疗与手术治疗一样占有重要地位.脑胶质瘤对放射线的敏感程度直接影响放射治疗疗效.脑胶质瘤内在的放射敏感性基因及其引起的细胞凋亡、细胞周期的变化和放射线导致的DNA损伤修复等,都与脑胶质瘤的放射敏感性密切相关.与细胞凋亡相关基因和DNA修复相关基因相关的脑胶质瘤放射敏感性基因,正逐渐成为人们研究的热点,还有其他的一些脑胶质瘤放射敏感性基因也受到人们的关注.现就脑胶质瘤放射敏感性基因研究的现状和进展作一综述.     

PTEN基因与胶质瘤关系的研究进展

PTEN基因作为第一个具有磷酸酯酶活性的抑癌基因 ,在胶质瘤、子宫内膜癌和前列腺癌等多种人类肿瘤发生和发展中发挥重要生物学意义。笔者从其抑癌机制和基因变异方式两方面着重介绍 PTEN基因在胶质瘤发病机理、分子病理分类、治疗及预后等方面的最新进展。1　 PTEN基因结构和功能PTEN基因 ,又称 MMAC1或 TEP1 ,位于染色体 1 0 q2 3.3,全长 2 0 0 kb,有 9个外显子和 8个内含子组成 ,编码产物为 40 3个氨基酸组成的 PTEN蛋白 ,分子量为 471 66Da。 PTEN蛋白具有蛋白酪氨酸磷酸酶及双特异性磷酸酯酶 ( DSP)活性 ,能对酪氨酸和丝 …     

脑胶质瘤组织PTEN基因异常及其蛋白表达

目的:研究不同级别脑胶质瘤中PTEN基因第7外显子缺失,突变及PTEN蛋白的表达,分析PTEN基因与脑胶质瘤发生发展的关系.方法:64例胶质瘤标本中病理分化为高分化组(Ⅰ,Ⅱ级)29例,低分化组(Ⅲ,Ⅳ级)35例.采用双重PCR,PCR-SSCP,DNA测序对PTEN基因第7外显子的异常进行分析;采用免疫组化技术对PTEN蛋白表达进行分析.结果:PTEN基因第7外显子总的缺失和突变率为52%.高分化组14%,低分化组83%,2组差异显著(P＜0.05).PTEN 蛋白的表达率为48%.高分化组66%,低分化组34%,2组差异显著(P＜0.05).PTEN蛋白表达在PTEN基因异常组阳性表达率3%,低于PTEN基因正常组的97%,2组差异显著(P＜0.05).结论:PTEN基因缺失和突变是胶质瘤发生的晚期事件,与其蛋白阳性表达率呈负相关.PTEN蛋白阳性表达随胶质瘤恶性程度的增加有不同程度的减少.     

PTEN基因对胶质瘤细胞增殖及侵袭性影响的体外研究

目的探讨PTEN基因转染人胶质瘤U251细胞后对其增殖及侵袭性的影响。方法应用脂质体转染技术,将含PTEN基因重组表达质粒转染U251细胞系,Western blot鉴定其蛋白表达;应用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法观察对细胞株生长的影响;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;应用免疫组化检测转染PTEN的U251细胞基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)和金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1、TIMP-2)的表达变化。结果 PTEN质粒成功转染U251细胞并有PTEN蛋白的表达。与对照组、空载体组相比,转染组细胞生长抑制率下降达52.46%;细胞周期改变,细胞从G1期到S期发生阻滞;转染组MMP-2、MMP-9表达显著下降,而TIMP-1、TIMP-2表达显著上升,两者呈负相关(r=-0.506,P<0.05)。结论 PTEN转染人胶质瘤细胞系U251后,可抑制其增殖、促进凋亡;并可能通过抑制MMPs和促进TIMPs来抑制细胞侵袭性。     

腺病毒介导PTEN基因对胶质瘤血管生成和肿瘤生长的影响

目的 :探讨 PTEN 对人脑胶质瘤血管生成和肿瘤生长的抑制作用。 方法 :用含 PTEN基因的重组腺病毒载体Ad PTEN,体外转染人胶质瘤细胞 U87,Western印迹分析检测其表达 ,采用鸡胚绒毛尿囊膜实验检测其对血管生成的作用 ,体内实验检测腺病毒对肿瘤体积的影响 ,同时以免疫组化法检测 因子相关抗原和基质金属蛋白酶 (MMP- 2 )的表达 ,并与U87组 (不予任何处理 )和 Ad X- gal转染组相比较。结果 :U87转染 Ad PTEN腺病毒后 PTEN表达上调 ,U87组的血管指数、体内肿瘤体积、 因子相关抗原和 MMP- 2的表达病理指数均显著多于 Ad X- gal和 Ad PTEN组 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1 )。结论 :PTEN可抑制肿瘤血管生成 ,并抑制体内肿瘤的生长。提示 PTEN可作为有效的抗胶质瘤血管生成与肿瘤生长治疗基因     

FHIT、PTEN在人脑胶质瘤中的表达和意义

目的 检测人脑胶质细胞瘤中脆性组氨酸三联体基因（FHIT）、第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因（PTEN）的表达情况.方法 采用S-P免疫组织化学法.结果 FHIT和PTEN阳性染色定位于细胞浆,52例胶质瘤标本中,有39例FHIT呈阳性表达,低度恶性肿瘤（Ⅰ～Ⅱ级）的阳性表达率明显高于高度恶性（Ⅲ～Ⅳ级）肿瘤（P 〈0.05）;而有37例PTEN呈阳性表达,低度恶性肿瘤的阳性表达率明显高于高度恶性肿瘤（P〈0.05）.FHIT与PTEN在脑胶质瘤细胞中的表达呈正相关.结论 FHIT与PTEN的表达与脑胶质瘤的发生、发展密切相关,联合检测FHIT、PTEN在胶质瘤中的表达有助于对肿瘤细胞增殖能力、分化程度做出正确评价.     

PTEN基因与肿瘤关系的研究

PTEN基因是新近发现的一个具有双特异性的抑癌基因 ,其突变失活与人类多种肿瘤的发生、发展密切相关。PTEN蛋白在细胞的生长发育、信号转导和细胞凋亡过程中起重要作用。以下就PTEN基因与肿瘤的关系作一综述。一、PTEN基因的基础研究(一 )PTEN基因的结构及生物学功能　 1 997年 ,Steck等 3个研究小组先后发现了一个肿瘤抑制基因 ,分别命名为PTEN(phosphataseandtensinhomologuedeletedonchromosome 1 0 )、MMAC1(mutatedinmultipleadvancedcancers)和TEP1(TGF β regulatedandepithelialcellenrichedphos phatase) ,这三者为…     

PTEN基因诱导人脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡及bcl-2表达下调

目的 探讨PTEN基因对人脑胶质瘤SHG－44细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2表达的影响，阐明PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法PTEN基因体外转染SHG－44细胞，筛选阳性细胞克隆，以原位杂、免疫组化方法检测PTEN基因的表达情况；采用透射电镜、流式细胞仪和核DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞的凋亡情况；以免疫荧光法检测bcl-2基因的表达。结果 PTEN基因转染的SHG－44细胞有PTEN蛋白的表达。透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞质浓缩、核破裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表现；流式细胞仪显示细胞周期从G1期到S期发生抑制，并且在G1期峰前出现一明显的凋亡峰（15．9％）；细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡细胞特有的梯状条带；bcl-2的表达也显著下调。结论 PTEN基因可诱导SHG－44细胞凋亡，并下调bcl-2蛋白的表达，这可能是PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的分子机制之一。     

体外转染PTEN基因对人结肠癌细胞生长的影响

目的 探讨野生型PTEN基因表达对结肠癌细胞体外生长的影响.方法 应用脂质体转导技术,将含野生型PTEN基因重组真核表达质粒pBp-PTEN转染Lovo细胞并稳定表达.Western blotting鉴定后,观察Lovo细胞转染前后生长、细胞周期、凋亡的改变.结果 转染后细胞生长曲线提示转染组曲线平缓,无明显对数生长期,生长速度较对照组明显降低(P《0.01);细胞周期测定显示转染组细胞G1期比例上升,提示PTEN可能对G1/S期转换点起阻滞作用;转染组细胞凋亡比率增高(P《0.01),尤其是早期凋亡.结论 外源性PTEN基因的转染可以抑制结肠癌细胞的体外生长.     

转染TNFα基因对胶质瘤细胞致瘤性的影响

目的 研究转染肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）基因的胶质瘤的致瘤性。方法 运用ＭｏＭＬＶ逆转录病毒载体,将ＴＮＦα基因转导至人胶质瘤细胞ＳＨＧ－４４,用Ｇ４１８筛选出阳性细胞克隆,以细胞培养检测细胞生长抑制,以裸鼠接种研究其致瘤性。结果 转染细胞培养上清液中ＴＮＦα含量分别为（５１９８．７±３７５７．４）和（３２１７．４±１１８０．６）ｐｇ／ｍｌ（Ｐ〈０．０５）,其生物活性达３２０．０ｕ／ｍｌ。运用ＲＴ     

脑胶质瘤组织PTEN mRNA表达及其基因突变SSCP分析

目的：探讨PTEN基因表达水平及其基因突变与脑胶质瘤的发生及恶性进展的关联性。方法：选取脑胶质瘤组织15例,以4例非胶质瘤脑组织为对照,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测脑胶质瘤组织PTEN mRNA表达水平,采用单链构象多态性分析法（SSCP analysis）快速筛查脑胶质瘤组织PTEN基因突变状况。结果：RT-PCR结果,脑胶质瘤组织PTEN mRNA表达水平(0.063±0.006)较对照组(0.126±0.015)明显降低（P<0.05）。经单链构象多态性分析, 脑胶质瘤组织PTEN基因外显子8、9未检测到突变,但其中1例PTEN基因外显子5的聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示电泳带飘移,考虑可能为杂合子突变。结论：PTEN基因低表达及基因突变可能对胶质瘤发生、发展有促进作用。     

Clusterin基因沉默对脑胶质瘤U87细胞放射敏感性的影响

目的：研究通过慢病毒介导的RNA干扰技术沉默簇集蛋白（clusterin,CLU）基因表达对人脑胶质瘤U87细胞放射敏感性的影响。方法：设计和合成靶向CLU的短发夹RNA（short hairprin RNA,shRNA）序列（CLU shRNA1,CLU shRNA2）,并构建到慢病毒的载体plentilox 3.7,以不针对任何基因的shRNA序列作为对照（对照 shRNA）。包被能成功表达各种shRNA载体的慢病毒。将慢病毒感染人脑胶质瘤U87细胞,Real-time PCR法和Western blot法测定CLU mRNA表达和蛋白质表达水平,证实干扰效果。给予不同放射剂量（2、4、6 Gy）处理后,通过四甲基偶氮唑盐（thiazolyl blue tetrazolium bxomide,MTT）法及流式细胞仪Annexin V/PI法检测脑胶质瘤U87细胞的存活率及凋亡率。Western blot方法筛选多个凋亡相关信号分子的改变。结果：靶向CLU基因的shRNA特异性地抑制了CLU mRNA和蛋白质的表达。MTT实验结果显示实验干扰组细胞在不同放射剂量下的脑胶质瘤实验U87细胞的存活率与对照组比较明显下降,差异具有统计学意义（4 Gy时,对照 shRNA vs. CLU shRNA1：P=0.000,对照 shRNA vs. CLU shRNA2：P=0.00３;6 Gy时,对照 shRNA vs. CLU shRNA1：P=0.000,对照 shRNA vs. CLU shRNA2：P=0.000）。流式细胞仪Annexin V/PI法检测结果表明：4 Gy放疗后2个实验组细胞凋亡率均明显增加,最高达（35.54±0.95）%,较对照组高2倍多,差异具有明显统计学意义（对照 shRNA vs. CLU shRNA1：P=0.000;对照 shRNA vs. CLU shRNA2：P=0.000）。Western blot 法发现CLU沉默可以显著上调促凋亡分子Bax蛋白水平。结论：CLU基因沉默可能通过调控Bax蛋白的表达,明显增强脑胶质瘤U87细胞对放射的敏感性,有望成为增加脑胶质瘤放射敏感性的新靶点。     

PTEN基因转染对卵巢癌SKOV3细胞生长抑制和诱导凋亡的研究

目的研究外源性PTEN基因转染对人卵巢癌SKOV3细胞生长增殖抑制和凋亡诱导作用,探索卵巢癌的新治疗方法。方法将携带PTEN基因的真核表达载体pBP-PTEN和不含该基因的空载体pBP转染卵巢癌SKOV3细胞,实验分组为pBP-PTEN、pBP和SKOV3组,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察对SKOV3细胞的生长抑制作用,Annexin V/PI双标记流式细胞术检测转染后对SKOV3细胞的凋亡诱导作用,Annexin V/PI双染荧光显微镜观察细胞凋亡形态。结果MTT检测,0.1、0.2和0.3μg/孔PTEN质粒DNA转染SKOV3细胞48 h,生长抑制率分别为13.31%、27.67%、42.25%,不同时间点(24、48和72 h)检测,细胞生长抑制率存在剂量-时间依赖关系。光镜观察,转染24 h后即可见明显的形态学改变。流式细胞术检测,4μg/孔PTEN质粒DNA转染SKOV3细胞24和48 h后,细胞凋亡率分别达38.08%和65.60%(P<0.01)。Annexin V/PI双染荧光显微镜观察,细胞凋亡率存在时间-剂量以来关系。结论PTEN基因转染抑制人卵巢癌细胞增殖并显著诱导细胞凋亡。